用减毒沙门菌菌苗控制幽门螺杆菌相关疾病

用幽门螺杆菌 ( Hp)抗原加佐剂或用减毒沙门菌传递抗原的新免疫接种策略能成功地保护小鼠免受 Hp感染。口服 1剂表达脲酶的减毒沙门菌菌苗能诱导粘膜和全身抗体应答 ,并能完全保护不同品系小鼠免受 Hp感染。这种高效、高免疫原性、安全且低成本的菌苗是预防人类

口服重组减毒沙门菌TPIN抗小鼠黑色素瘤研究

目的观察重组沙门菌TPIN对小鼠黑色素瘤治疗的作用。方法应用小鼠黑色素瘤B16细胞给16只C57纯系小鼠建立荷黑色素瘤动物模型;将模型组随机分为对照组(PBS组)及治疗组(TPIN),每组各8只。治疗组应用重组减毒沙门菌TPIN菌灌胃,对照组PBS缓冲溶液灌胃,每周1次共4次,在此期间记录瘤体体积。最后1次灌胃1周后,荷瘤小鼠心脏采血后处死,检测CD3+/CD4+、CD3+/CD8+的T淋巴细胞表型的变化,瘤组织γ-干扰素(IFN-γ)含量及各组织脏器CMV的表达水平。结果成功构建了荷瘤小鼠模型,与治疗组比较,对照组肿瘤体积差异有显著性(P<0.01);治疗组血CD3、CD3+/CD8+、肿瘤组织中IFN-γ表达量显著高于对照组(P<0.05,P<0.01),治疗组小鼠的肠、肾、肝、脾、胃、肿瘤组织中均可扩增出与CMV瘤体大小相符的片段而对照组未扩增出相应片段。结论口服DNA疫苗TPIN免疫荷黑色素瘤小鼠可激起小鼠体内有效的免疫反应并能有效抑制瘤体的生长。

减毒沙门菌载体在肿瘤基因治疗中的研究进展

目前基因治疗发展迅速,肿瘤基因治疗方法已经逐步从实验及基础研究过渡到临床试用阶段,理论和技术层次上日趋成熟。然而基因治疗还没达到完全安全、高效、准确的目标,其中基因治疗的载体是最受关注问题之一。合适的载体应具备最大的有效性和最小的毒性,传统生物类载体主要是病毒载体和非病毒载体。目前低毒或无毒的且具有靶向性感染特点的细菌载体在肿瘤基因治疗得到证实,充分说明了细菌载体开辟抗肿瘤治疗的新途径。

沙门菌减毒活菌苗

沙门菌减毒活菌苗是近年来研究比较透彻的疫苗载体。本文在阐明粘膜免疫机理的基础上,重点介绍了重组沙门菌菌苗的设计原则。

含pCMV-IL-2-IRES-NK4质粒减毒沙门菌的制备及其稳定性研究

目的制备含pCMV-IL-2-IRES-NK4质粒减毒沙门菌TPIN并检测其稳定性。方法将pCMV-IL-2-IRES-NK4质粒转进减毒沙门菌Ty21a感受态,制备成重组的减毒沙门菌菌株TPIN;将TPIN在含有氨苄西林(+)和氨苄西林(-)的LB培养板传代培养至第10代、20代、30代和40代时用灭菌的牙签分别挑取含有氨苄西林(+)和氨苄西林(-)LB培养基上的单克隆菌落,质粒提取、PCR扩增酶切鉴定;TPIN转染HepG2细胞后采用RT-PCR检测IL-2和NK4基因表达,ELISA法检测细胞培养上清IL-2和NK4蛋白。结果构建菌株经提取质粒、酶切、PCR扩增获得目的基因IL-2、NK4特异条带;在氨苄西林(+)和氨苄西林(-)LB培养板传代培养40代的TPIN菌株均可扩增并双酶切出目的基因IL-2及NK4;TPIN体外转染HepG2细胞后,IL-2及NK4表达水平均显著升高。结论重组携带IL-2/NK4双基因的减毒沙门菌菌株TPIN可稳定遗传,不受无选择性压力的影响而丢失质粒,且在体外IL-2、NK4基因及蛋白可以稳定高效表达。

携带IL-2和NK4双基因真核共表达载体的减毒沙门菌株的构建

目的构建携带IL-2/NK4双基因真核表达载体的减毒沙门菌菌株。方法利用分子克隆技术将IL-2及NK4基因分别插入PIRES-SEQ质粒IRES序列的上下游中,构建为双基因真核共表达载体pCMV-IL-2-IRES-NK4,将该质粒利用脂质体转染入细胞,采用ELISA及PCR法检测pCMV-IL-2-IRES-NK4转染细胞后IL-2/NK4基因及蛋白表达情况。将所构建质粒以电转化法转化减毒沙门菌菌株Ty21a,从而得到能够表达IL-2/NK4双基因的重组减毒沙门菌菌株。结果 ELISA及PCR法检测该质粒可在细胞中以较高的效率稳定表达IL-2及NK4基因和蛋白;同时表达IL-2/NK4双基因的减毒沙门菌菌株TPIN构建成功。结论本研究成功构建了携带IL-2/NK4双基因的减毒沙门菌菌株。

食品中沙门菌两种增菌液增菌效果的实验观察研究

目的对沙门菌的2种增菌液在纯菌种和混合菌种的条件下进行增菌效果的比较,寻找快速高效的增菌条件,为提高检测效率和准确性提供参考依据。方法通过对纯菌种和混合菌种在不同的时间下进行增菌,在沙门菌显色培养基上划线观察菌落生长情况,验证2种增菌培养基的增菌效果。结果对于纯沙门菌的增菌或污染的样品,SC的增菌效果优于TTB,对于混合菌种的增菌或污染的样品,TTB的增菌效果优于SC。结论沙门菌的检测应由TTB和SC配合增菌,保证检测质量。

肿瘤生物治疗的新技术——靶向基因治疗

目前，恶性肿瘤已经成为影响人类健康和危及生命的主要疾病。传统的肿瘤治疗方法主要有手术、放疗和化疗，尽管能在短时间内取得较好的效果，但是肿瘤细胞自身的毒副作用和残留成分往往会导致肿瘤细胞的转移复发率增加，而且它对于机体自身的正常细胞尤其是造血系统和免疫系统也会造成严重的损害，因此对于已发生肿瘤转移的患者很难达到较好的远期疗效。 Rosenberg 等[1-2]已经于20世纪80年代建立了以生物治疗技术为基础的现代肿瘤理论。随着肿瘤分子机制的进一步发展，基于生物技术的治疗模式已成为当今肿瘤治疗的第4种治疗模式。作为当今发展最快的领域之一，肿瘤生物治疗主要包括基于分子靶向药物、基因、细胞因子和免疫学方法等的治疗[3-9]。由于肿瘤生物治疗具备特异性较高而毒副作用较低的优点，目前已广泛应用于临床工作中。但是治疗基因如何高效特异的向肿瘤组织传递以及如何向临床进行转化就成为目前肿瘤基因治疗迫切需要解决的重大问题，也是当前肿瘤治疗研究的热点。

TPIN对HepG2肝癌细胞生物学特性的影响

目的研究重组减毒沙门菌菌株TPIN对HepG2细胞生物学性能的影响。方法 TPIN转染HepG2细胞36 h时收集细胞表达上清,MTT法检测表达产物对HepG2细胞生长的作用;Transwell迁移实验观察TPIN表达产物对HepG2细胞迁移的影响;将不同剂量表达产物分别加入甲基纤维素小碟,并将小碟小心放入鸡胚绒毛尿囊膜,37.8℃继续孵化3 d,观察IL-2/NK4表达产物体外对鸡胚绒膜尿囊膜血管的效应。结果 TPIN表达上清显著抑制HepG2细胞增殖的活性,且有一定剂量依赖效应;表达产物可明显抑制肿瘤细胞迁移,且明显抑制鸡胚绒膜尿囊膜血管形成。结论 TPIN在体外能高效转染肿瘤细胞,表达目的蛋白IL-2及NK4,且表达产物能够抑制HepG2细胞的增殖和迁移,对鸡胚绒膜尿囊膜血管的形成有抑制效应。