蜥蜴源黏质沙雷氏菌的分离鉴定与药敏试验

为弄清西北农林科技大学博览园1只观赏蜥蜴突发全身皮肤化脓溃烂、尾巴坏死脱落的病原,采集患病蜥蜴的坏死病灶及血液病料进行细菌分离纯化、生理生化试验、动物致病性试验、16S rRNA基因测序鉴定。结果显示,从病料中分离并纯化出1株菌株,该分离菌株的生理生化特性与黏质沙雷氏菌相符,且该菌对实验小鼠有致病性,其16S rRNA基因序列与NCBI中黏质沙雷氏菌的参考序列同源性为98%。结果表明,所分离到的菌株为黏质沙雷氏菌。药敏试验结果显示,分离菌株对诺氟沙星、丁胺卡那、头孢曲松、氧氟沙星、头孢噻肟等5种抗菌药物高度敏感,对复方新诺明中度敏感,对环丙沙星、头孢噻吩、庆大霉素、头孢氨苄、苯唑西林、多黏菌素B、林可霉素、四环素、氨苄西林等9种抗菌药物耐药。研究结果为筛选有效治疗药物提供了参考依据。

山羊肺源肠外致病型大肠杆菌和粘质沙雷氏菌混合感染的病原分离鉴定、毒力因子基因检测和耐药性分析

为了确定1例成年山羊突然急性死亡的原因,本试验采用病史调查、病理剖检、病原菌分离和鉴定明确细菌性病原,对分离菌进行致病性试验和药敏试验,并根据药敏试验结果对其余未发病山羊进行给药预防;对分离到的大肠杆菌进一步进行系统进化群分析和毒力因子基因检测。结果显示,死亡山羊剖检可见部分结肠肠段严重出血,心内膜有散在出血斑,瘤胃黏膜局部充血;从肺组织中分离获得大肠杆菌和粘质沙雷氏菌;致病性试验结果显示,大肠杆菌对小鼠的致死率为90%,粘质沙雷氏菌对小鼠无致病性;药敏试验结果显示,大肠杆菌对头孢曲松和丁胺卡那敏感,粘质沙雷氏菌对恩诺沙星、丁胺卡那、庆大霉素和磷霉素中度敏感;使用头孢噻呋钠和恩诺沙星注射液对其余未发病山羊进行预防性注射给药后,未再出现发病死亡。系统进化群分析显示,分离获得的大肠杆菌属于A群;毒力因子基因检测结果显示,该大肠杆菌携带2种毒力标记基因(afa和iutA),因此属于肠外致病型大肠杆菌,该菌还携带其他毒力因子基因(ompA、ompT、traT、iss、iroN、iucD、fimH和gafD);本试验结果可为山羊大肠杆菌和粘质沙雷氏菌混合感染的诊断和治疗提供参考。

亚洲玉米螟越冬后幼虫致病细菌——黏质沙雷氏菌的分离鉴定及杀虫活性评价

本研究从新疆伊犁河谷新源县春播玉米田越冬后自然罹病亚洲玉米螟幼虫上分离获得1株细菌菌株ACB3014,通过形态学观察、生理生化特性及16S rDNA序列分析对该菌株进行了鉴定,并采用饲喂法测定了该菌株对亚洲玉米螟3龄幼虫的致病性。结果表明菌株ACB3014为黏质沙雷氏菌Serratia marcescens。菌株ACB3014对亚洲玉米螟3龄幼虫的累积校正死亡率随菌悬液浓度的升高而增加。饲喂ACB3014菌悬液后第7 d,在浓度2×10^(4)~2×10^(8)cfu/mL下,亚洲玉米螟3龄幼虫的累积校正死亡率为27.78%~77.78%。接种第13 d,亚洲玉米螟3龄幼虫LC_(50)为3.79×10^(3)cfu/mL,当浓度达2×10^(8)cfu/mL时,LT_(50)为3.93 d。且染病后的亚洲玉米螟体色为暗红色和黑色,虫体呈脓状溃烂,散发出强烈异味。综上,黏质沙雷氏菌ACB3014菌株对亚洲玉米螟幼虫有很好的杀虫活性,具有很高的防治潜力,可用作亚洲玉米螟的绿色生物防治资源。

扬子鳄源粘质沙雷氏菌XCYZE株的分离鉴定及其致病性分析

目的查明一例源于安徽省扬子鳄管理中心的幼鳄死因。方法从幼鳄脑部组织坏死灶采集病料,进行细菌分离与鉴定,并对其致病性进行分析。结果菌落在血琼脂平板上生长呈红色的革兰氏阴性菌;生理生化试验显示该菌在葡萄糖、甘露醇、乳糖、柠檬酸盐和硫化氢等中均呈阳性;PCR扩增其16S rDNA基因,其大小约1500 bp,经遗传进化树分析,与已报道的粘质沙雷氏菌GRD1株在同一分支;其致病性试验可导致实验鼠在36 h内全部死亡,出现严重肺出血、肝脏肿大、脾脏肿大、腹水现象等。结论从扬子鳄脑内分离的病原是粘质沙雷氏菌,具有较强的致病性,且对多种抗菌药具有一定的耐药性。本试验为野生动物或者人类感染粘质沙雷氏菌的诊断和治疗提供参考意见。

植物乳杆菌SCB2505代谢物对液化沙雷氏菌的抑菌机理

液化沙雷氏菌是畜产食品在低温贮藏中的一种常见致腐菌和食源性病原菌。该实验通过最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)和生长曲线分析植物乳杆菌SCB2505代谢物对液化沙雷氏菌的抑菌活性,并通过高温、过氧化氢酶及蛋白酶、pH处理和乳酸排除实验分析抑菌物质组成,再通过生物被膜抑制率、细胞壁和细胞膜完整性、菌体形态变化的研究来分析其抑菌机理。结果表明,植物乳杆菌SCB2505代谢物对液化沙雷氏菌的MIC为8 mg/mL,其抑菌物质的高温耐受性较好,pH越低其抑菌效果越好,但相同pH的乳酸溶液不具有抑菌活性,过氧化氢酶和蛋白酶对其抑菌圈大小有显著影响,推测抑菌物质可能为乳酸盐、细菌素与过氧化氢的复合物。植物乳杆菌SCB2505代谢物能明显抑制液化沙雷氏菌生物被膜合成,破坏细胞壁和细胞膜的完整性,使得菌体皱缩凹陷,甚至裂解死亡。该研究结果说明植物乳杆菌SCB2505代谢物作为天然防腐剂在动物食品防腐领域具有较好的应用前景。

耐盐好氧反硝化菌黏质沙雷氏菌HL4的分离鉴定及脱氮性能

【目的】分离鉴定一株耐盐好氧反硝化细菌,以开发高效脱氮菌种,加强海水及咸淡水养殖尾水脱氮技术研究。【方法】采集花鲈(Lateolabrax maculatus)池塘原位底泥,采用稀释涂布法初步分离一株脱氮功能最佳的菌株HL4,通过16s rDNA测序以及生理生化实验鉴定菌株,通过设置不同碳源、碳氮质量比(m_(C)/m_(N))、pH、温度、盐度等条件探明其最适培养条件及脱氮性能。通过攻毒试验[以健康斑马鱼(Danio rerio)为受试生物],检验菌株的环境安全性。【结果】经鉴定,菌株HL4为黏质沙雷氏菌(Serratia marcescens),命名为S.marcescens HL4。以葡萄糖或琥珀酸钠为碳源,菌株HL4在m_(C)/m_(N)=20、pH=6.0~7.0、温度30℃的条件下具有较强脱氮能力,48 h TN去除率为81.83%~87.17%;该菌株在0~30的盐度环境下均可生长,在0~10盐度范围内72 h的总氮(TN)去除率为68.76%~76.59%,在20~30盐度范围内72 h的TN去除率为23.84%~53.94%;在NH_(4)^(+)-N质量浓度为0~100 mg·L^(-1)时,72 h NH_(4)^(+)-N去除率皆在90%以上,在NH_(4)^(+)-N质量浓度为500 mg·L^(-1)时,72 h NH_(4)^(+)-N去除率高达73.52%。健康斑马鱼在含1×10^(6)CFU·mL^(-1)菌株HL4的水体中15 d后,成活率100%。【结论】菌株HL4生物及环境安全性较高,在处理中高浓度铵废水以及治理咸淡水、低盐度海水养殖尾水等领域具有潜在的应用价值。

共存离子对粘质沙雷氏菌吸附钇的影响

本研究以粘质沙雷氏菌为吸附剂,以水溶液中的钇离子对吸附对象,研究了钇溶液中存在铝、铁、锌和镁离子对粘质沙雷氏菌吸附钇的影响。结果表明,铝离子严重抑制粘质沙雷氏菌对钇的吸附,铁、锌和镁离子对吸附的抑制较弱,多种离子共存对粘质沙雷氏菌吸附钇的抑制程度依次为:锌+铁+铝>铝+铁>锌+铁>锌+铝。共存离子对粘质沙雷氏菌吸附钇都有抑制作用,这可能是由于它们和钇离子竞争吸附在粘质沙雷氏菌表面吸附,吸附的抑制程度不同应该是因为粘质沙雷氏菌吸附这些共存离子的活性基团不同。红外光谱分析结果证实了粘质沙雷氏菌的羧基、氨基和羟基是吸附铁、镁和锌离子的主要官能团,而羧基和羟基是吸附铝离子的主要官能团。

1株分离自蛹虫草小麦培养基的粘质沙雷氏菌的鉴定及初步研究

从蛹虫草小麦培养基中筛选出1株产红色素的菌株,划线分离、纯化后命名为CD1,对其进行了16S rDNA ITS序列分析。同时将其接种于正常的蛹虫草小麦培养基上,接种后在蛹虫草子实体生长早期、中期、后期分别进行子实体湿质量、干质量、几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶活性等生理生化指标测定,结果表明该菌为粘质沙雷氏菌,接种小麦培养基后可以显著提高蛹虫草子实体产量。

粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens)发酵培养基优化的研究

采用单因素试验和正交试验，对从山东东营海岸湿地盐碱滩地土壤中筛选出的一株海洋菌种——粘质沙雷氏菌（Serratia marcescens）的发酵培养基进行优化，并进行100L发酵罐中试放大试验的研究。确定粘质沙雷氏菌的最佳培养基配方为葡萄糖10g／L，硫酸铵5g／L，麸皮50g／L，柠檬酸三钠1．0g／L，K2HPO4·3H2O0．3g／L，FeSO4·7H2O 0．05g／L，MgSO4·7H2O 0．5g／L，PH7．2～7．7。发酵最适温度为30℃。通过测定粘质沙雷氏菌在发酵罐中培养的生长曲线，确定发酵时间以28～30h为宜，发酵结束后发酵液中的活菌数约为50×10^8个／mL。将所筛选到的粘质沙雷氏菌应用于农作物的病害防治，效果非常显著，表明是一株高活性的生物防治拮抗菌。此研究结果为高效率、低成本和工业化生产具有生物防治作用的海洋菌种制剂提供了科学依据，也为海岸湿地盐碱土的可持续开发利用提供了技术支撑。

沙雷氏菌(Serratia marcescens)Yj1的分离鉴定及菌体有机磷降解酶的分离纯化

从大豆土壤中分离纯化得到一株具有卵磷脂和乐果降解能力的菌株Yj1,对该菌株进行鉴定、生长条件优化、酶活性鉴定以及有机磷降解酶的分离纯化。结果表明,Yj1与Serratia marcescens WW4(CP003959.1)的16S r DNA相似度为99%。正交试验对所需培养基进行优化,得到该菌株的最佳生长条件为甘露糖、蛋白胨和p H 8的组合。Yj1菌株在两种磷源条件下,菌株生长量均很低,但72 h内以大豆卵磷脂为磷源时的菌体生长情况优于乐果。以大豆卵磷脂为磷源时酸性磷酸酶、碱性磷酸酶与有机磷降解酶活性明显高于以乐果为磷源时的酶活,且72 h内碱性磷酸酶活性一直都高于酸性磷酸酶和有机磷降解酶。硫酸铵沉淀法结合阳离子交换层析成功从Yj1菌体中分离纯化了有机磷降解酶,SDS-PAGE结果显示纯化的蛋白为单一条带。且阳离子交换层析的提纯倍数是硫酸氨沉淀的5.303倍,硫酸氨沉淀为粗酶的1.416倍。

无花果沙雷氏菌(Serratia ficaria)CH-0203产壳聚糖酶发酵条件的研究

研究了无花果沙雷氏菌(Serratiaficaria)CH-0203发酵生产壳聚糖酶的条件。研究表明,该菌株的最适产酶条件为以0.5%壳聚糖(脱乙酰度99.8%)为唯一碳源和氮源,培养基初始pH6.5,培养温度为30℃,装液量40mL(250mL三角瓶),接种量5mL,接种龄24h,添加0.05%吐温80。在上述培养条件下,该菌株发酵产酶的最高酶活达到5.4U/mL。

粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens)的研究Ⅰ—Serratia marcescens9-2菌株分离、分类鉴定和形态特征

9-2菌株为革兰氏阴性短杆菌,周生鞭毛,菌落红色,经自动微生物鉴定系统(VITECK-AMS-CC2)鉴定9-2菌株为粘质沙雷氏菌(Serratiamarcescens),鉴定为99%;9-2菌株对丁氨卡那、强力霉素、复方新诺明、氟哌酸和庆大霉素敏感,对卡那霉素中敏,对呋喃唑酮、头孢唑啉、氯霉素、链霉素、呋喃妥因、红霉素、青霉素G、氨苄青霉素和四环素不敏感;能产生灵杆菌素.

一株产灵菌红素菌株黏质沙雷氏菌H04的分离鉴定及发酵条件优化

灵菌红素具有抗氧化、抗肿瘤等生物活性和潜在的医用价值,大规模生产对其研究和开发具有重要意义。从槐树根际土壤中筛选出1株产红色素菌株H04,根据16S rDNA系统发育树鉴定该菌株为黏质沙雷氏菌Serratia marcesence。其合成的红色素经UV、HPLC-MS分析,确定为灵菌红素。利用单因素试验和正交试验优化发酵条件,以提高色素产量。最佳发酵条件为:培养基使用15 g/L蔗糖为碳源、0.5 g/L酵母浸粉和0.5 g/L(NH_(4))_(2)SO_(4)为氮源、5 g/L NaCl、0.75 g/L KCl、10 g/L脯氨酸、0.5 g/L CaCO_(3);接种量3%(体积分数)、温度25℃、转速180 r/min、培养时间24 h。优化后发酵得灵菌红素提取物4.5 g/L,与正交优化前相比产量提高了2.3倍。

粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens)研究Ⅱ——营养基质和不同色光对粘质沙雷氏菌生长的影响

粘质沙雷氏菌(Serratiamarcescens)9-1、9-2、16-13菌株,在牛肉膏蛋白胨培养基上生长很好,产生红色菌落.它们都利用乳糖、D-半乳糖、L-(+)阿拉伯糖、鼠李糖、葡萄糖、蔗糖、D-山梨醇,生长良好并产生红色色素;在硫酸铵、L-赖氨酸、尿素、酪蛋白水解物、DL-天门冬酰胺、胰蛋白胨为氮源的培养基上生长得好并产生红色色素,而在硝酸铵、硝酸钠为氮源的培养基上则生长差和产生粉红色色素;Na+、K+、PO3-4、Ca2+、Mg2+等元素对这3菌株的生长和产生红色色素有一些影响;白色光有促进生长和红色色素的产生,绿色光和黄色光对生长和红色色素产生则有不良影响.

普城沙雷氏菌ACCC 02146产灵菌红素调控基因的鉴定

【目的】鉴定影响普城沙雷氏菌ACCC 02146产灵菌红素能力的基因,构建ACCC 02146的转座子突变体文库,为进一步研究普城沙雷氏菌ACCC 02146灵菌红素合成机制奠定基础。【方法】采用平板划线法从菌种保藏中心购买菌株和实验室保藏菌株中获得15株产灵菌红素的菌株。采用16S rRNA基因测序法鉴定各菌株,邻接建树将其分类,并比较不同类别菌株灵菌红素合成基因簇启动子序列差异,观察各菌株产色能力。对16S rDNA序列和灵菌红素合成基因簇启动子序列均有异于其他菌株的普城沙雷氏菌ACCC 02146合成灵菌红素的调控基因展开研究。构建ACCC 02146的转座子突变体文库,筛选出产色能力明显改变的克隆子并鉴定出对应的转座子插入突变基因。【结果】该突变体文库中有74个突变体表现出产灵菌红素能力的变化。其中25个突变体转座子插入发生在pigA、pigB、pigC、pigD和pigH等5个灵菌红素合成簇基因上,49个突变体转座子插入基因为灵菌红素合成基因簇之外的基因。在鉴定到的产色能力改变的突变体中,麦芽糖O-乙酰基转移酶基因突变菌株有6个,二氢乳清酸脱氢酶基因突变菌株有4个,MarR家族转录因子SlyA基因突变体有3个,winged helix家族的双组分转录调控因子RstA基因突变体有3个,H-醌氧化还原酶亚基I基因突变菌株有3个,NADH-醌氧化还原酶G链基因突变菌株有3个,肽基脯氨酰异构酶B基因突变菌株有3个,其他突变基因对应的克隆子数量为1~2个。【结论】在沙雷氏菌中,除了灵菌红素合成簇基因调控灵菌红素合成,推测灵菌红素合成簇外编码相关酶、转录调控因子和一些结构蛋白的基因通过直接或间接途径在不同程度上调控了灵菌红素的合成。

黏质沙雷氏菌AHPC29对松树萎蔫病的防治效果及其增菌条件

【目的】从松材线虫的媒介天牛蛹室及其气管中获得的黏质沙雷氏菌Serratia marcescens AHPC29对松材线虫具有致病能力,本研究旨在探究黏质沙雷氏菌AHPC29对松材线虫引起的松树萎蔫病的防治效果以及该菌株在实验室的增菌条件。【方法】通过对温室内人工感染松材线虫的松树灌溉菌剂,分析黏质沙雷氏菌AHPC29对松树萎蔫病的作用效果;通过单组分筛选和正交实验确定培养基组分和培养条件对其生长的影响,探究黏质沙雷氏菌AHPC29的最佳增菌条件。【结果】对于感染松材线虫的松树,灌溉黏质沙雷氏菌AHPC29菌液的处理组生长状态优于对照组,并且树内松材线虫含量显著降低;黏质沙雷氏菌AHPC29增菌的最佳培养基配比为0.1%乳糖、0.5%复合氨基酸、0.5%KNO_(3)、1.5%MgSO_(4),其中影响最大的组分为氮源;培养时其菌液最佳接种量为7%,最佳装液量为40%,最佳转速为180 r·min^(-1),最佳温度为30℃,最适培养时长为36 h。【结论】本研究获得了黏质沙雷氏菌AHPC29的最佳增菌条件,并证实该菌具有良好的松树萎蔫病防治应用潜力,为其作为生防菌的应用提供了理论基础。

黏质沙雷氏菌H04的有机磷降解活性及促生能力

通过解磷圈法(定性)和钼锑抗比色法(定量)评价黏质沙雷氏菌H04对有机磷源的解磷能力,并初步研究其对绿豆、小麦早期生长的影响。结果表明,H04对有机磷源(卵磷脂和植酸钙)均具有良好的解磷能力,溶磷量分别为(2.89±0.12)和(22.99±0.45) mg/L。黏质沙雷氏菌H04能产生酸性磷酸酶、碱性磷酸酶和植酸酶,活性分别为(17.07±0.14)、(35.20±0.46)、(1 417.01±48.38) U/L,并且通过分泌碱性磷酸酶降解卵磷脂、分泌植酸酶利用植酸钙。对轮作作物种子促生试验结果表明,接种黏质沙雷氏菌H04的绿豆和小麦种子显著提高了发芽率和幼苗早期发育,尤其对绿豆的促进作用更显著,根长提高了162%,根系活力提高212%,为高效微生物菌剂开发提供了优良候选菌株。

粘质沙雷氏菌的生防作用

粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens)是一种广泛存在于自然界中的革兰氏阴性菌,能够在植物根际、植物体和昆虫体内定殖,对害虫、虫媒传染病病原物、植物病原物、杂草等具有一定的生物防治功效,由于粘质沙雷氏菌能在松墨天牛(Monochamus alternatus Hope)与松树体内富集,因而在松材线虫病防治方面具有很好的潜力。粘质沙雷氏菌还具有促进植物生长,净化环境等作用有待探讨。本文基于国内外研究进展,系统论述了粘质沙雷氏菌在生物防治方面的研究,为未来粘质沙雷氏菌微生物农药的进一步开发利用提供参考。

黏质沙雷氏菌Serratia marcescens Ha1对玉米田杂草的室内除草活性测定

为了寻找高效安全的微生物除草剂,本研究以天然存在的黏质沙雷氏菌Ha1菌株为试验材料,采用发酵液喷施法和颗粒剂封闭法(填埋法和撒施法)对玉米田常见杂草进行了室内活性测定。发酵液喷施法、颗粒剂填埋法和撒施法对杂草的鲜重防效分别为47.88%,70.63%和76.82%。发酵液喷施法和颗粒剂封闭法均能有效防除杂草,颗粒剂封闭法优于发酵液喷施法,颗粒剂撒施法优于填埋法。

液化沙雷氏菌ZS6脂肪酶的重组表达及功能分析

脂肪酶(E.C.3.1.1.3)在日常生活及工业生产中涉及油脂处理的方面有着广泛应用。课题组前期从舟山海域石油污泥中筛选出1株分泌脂肪酶的菌株,经分子鉴定后确定为液化沙雷氏菌,将其命名为液化沙雷氏菌ZS6。ZS6菌株脂肪酶分泌量较低,因此采用大肠杆菌表达体系对ZS6脂肪酶进行重组表达。使用pET28a质粒作为重组蛋白表达载体,通过IPTG诱导大肠杆菌表达脂肪酶蛋白。表达产物经纯化—复性—冻干处理后得到脂肪酶结晶,经分光光度法测得活性达到1400 U·mg^(-1)。该研究结果可以应用于固定化脂肪酶的制备以及脂肪酶的工业化生产。