SL7207/PCMV-mtHSP70-IRES-EGFP重组沙门菌的构建及在B16细胞中的表达

目的构建能够稳定表达结核杆菌热休克蛋白70(mycobacterium tuberculosis heat shock protein 70,mtHSP70)与增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluore scent protein,EGFP)双基因的鼠减毒伤寒沙门菌真核共表达载体,探讨其在小鼠黑色素瘤B16肿瘤细胞中的表达。方法将重组质粒PCMV-mtHSP70-IRES-EGFP电穿孔转入减毒沙门氏菌SL7207中,酶切鉴定,并对构建的重组减毒沙门氏菌体外连续传代20代后再酶切鉴定,对其稳定性进行观察;重组菌体外感染B16,荧光显微镜下观察B16细胞荧光表达及蛋白印迹法(Western blot)检测重组菌在B16细胞内mtHSP70蛋白的表达。结果PCMV-mtHSP70-IRES-EGFP成功导入减毒沙门氏菌SL7207中;该重组菌株在体外能稳定地繁殖、生长和传代;重组菌体外感染B16约36h后,B16细胞胞体变圆并高效表达强荧光,重组菌在B16细胞内表达mtHSP70蛋白。结论成功构建能在真核细胞中稳定表达mtHSP70与EGFP双基因的重组减毒沙门氏菌株,为恶性黑色素瘤靶向基因免疫治疗的后续研究奠定了基础。