没食子酰芍药苷通过激活Nrf2信号通路减轻PM2.5诱导的血管内皮细胞损伤

目的探讨没食子酰芍药苷(GPF)减轻PM2.5对人微血管内皮细胞损伤的作用及机制。方法培养人微血管内皮细胞,分为空白对照组、PM2.5(25μg/cm^2处理24 h)、GPF组(100μmol/L处理24 h)和PM2.5+GPF组(PM2.525μg/cm^2和GPF100μmol/L共同处理24 h)。4-甲基偶氮唑蓝(MTT)检测人血管内皮细胞(HMEC)-1活性,比色法检测HMEC-1细胞中丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性;Western印迹检测核因子E2相关因子(Nrf)2的蛋白表达。结果与空白对照组相比,PM2.5组HMEC活力明显下降,细胞内MDA含量增加(P<0.05),SOD活性下降(P<0.05)。GPF组HMEC活力明显高于PM2.5组,MDA含量显著低于PM2.5组,GPF可通过激活Nrf2减轻PM2.5引起的血管内皮细胞损伤。结论GPF通过激活Nrf2信号通路,抑制PM2.5诱导的氧化应激从而减轻血管内皮细胞损伤。

没食子酰芍药苷对白细胞介素8诱导的人脐静脉血管内皮细胞增殖和迁移的影响

目的研究没食子酰芍药苷(GPF)对白细胞介素8(IL-8)诱导的人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)增殖和迁移的影响及潜在分子机制。方法用100、200和400μmol/L GPF分别处理100μg/L IL-8诱导的HUVECs,实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)和蛋白质印迹法(Western blotting)分别检测HUVECs细胞中miR-212-3p、激活转录因子2(ATF2)、增殖细胞核抗原(PCNA)和基质金属蛋白酶-2(MMP-2)的表达,四氮唑蓝(MTT)和Transwell实验分别测定HUVECs细胞存活率和细胞迁移,双荧光素酶报告系统验证miR-212-3p与ATF2的调控关系。结果与对照0μmol/L组相比,100μmol/L、200μmol/L和400μmol/L的GPF可抑制IL-8诱导的HUVECs增殖和迁移,促进miR-212-3p表达,抑制ATF2表达,呈剂量依赖趋势;低表达miR-212-3p可逆转400μmol/L GPF对IL-8诱导的HUVECs细胞增殖和迁移的抑制作用;miR-212-3p靶向ATF2,调控ATF2的表达;低表达ATF2可部分逆转低表达miR-212-3p对GPF处理的IL-8诱导的HUVECs细胞增殖和迁移的作用。结论GPF通过miR-212-3p/ATF2途径抑制IL-8诱导的HUVECs细胞增殖和迁移。

没食子酰芍药苷在脑缺血再灌注后神经保护作用和机制

Wistar大鼠通过线栓法建立脑缺血再灌注模型,给予不同剂量没食子酸芍药苷治疗。结果显示,没食子酰芍药苷治疗使大鼠脑梗死体积明显减小,神经功能评分降低,并诱导大鼠脑组织中氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶活性、谷胱甘肽含量以及Nrf2/HO-1表达明显升高,而半胱天冬酶3活性、丙二醛含量、肿瘤坏死因子α和白介素1β的表达以及Tunel染色阳性细胞数明显降低。结果表明:没食子酰芍药苷可激活Nrf2/HO-1通路,减轻脑缺血再灌注后氧化应激和炎症反应,从而起到神经保护作用。

牡丹皮中牡丹苷A～E和没食子酰羟基芍药苷的结构和自由基清除作用

在对中草药生物活性成分的研究中发现牡丹皮的甲醇提取物具有清除1,1-二苯基-2-苦基偕腙肼(DPPH)自由基的作用。其作用成分集中在乙酸乙酯溶解部分和水溶部分经XAD-2柱的甲醇洗脱液中。已报道从乙酸乙酯液中分离得到2种新的萜类化合物牡丹酮(paeonisuffrone)和牡丹缩酮(paeonisuffral)。

产地加工炮制一体化与传统川白芍饮片化学成分含量比较

测定产地加工炮制一体化与传统川白芍化学成分的含量,探索提高川白芍饮片质量的方法。采用HPLC法测定加工炮制一体化与传统方法生产川白芍饮片中芍药苷、苯甲酰芍药苷、没食子酰芍药苷、芍药内酯苷和儿茶素的含量,并对这些成分进行比较。结果表明:通过比较上述5种成分质量百分数的总和发现,产地加工炮制一体化与传统方法饮片分别为5.679%和3.646%。产地加工炮制一体化白芍饮片优于传统加工的饮片,该方法简化了生产工艺,值得推广。

白芍总苷中4个活性成分在正常和四氯化碳诱导的急性肝损伤大鼠体内药动学比较研究

目的研究白芍总苷中4个活性成分(芍药苷、芍药内酯苷、没食子酰芍药苷和苯甲酰芍药苷)在正常和四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl_(4))诱导急性肝损伤大鼠体内的药动学过程,并比较其差异。方法参照临床给药剂量给SD大鼠ig白芍总苷后,采集不同时间点大鼠血清,建立LC-MS方法测定血药浓度,采用WinNonlin5.3药动学软件计算各成分药动学参数,并进行统计学分析。结果没食子酰芍药苷和苯甲酰芍药苷的入血浓度较低,可能大部分迅速代谢为中间产物芍药苷。肝损伤使主要成分芍药苷、芍药内酯苷在大鼠体内的半衰期(t_(1/2))和平均滞留时间(MRT)显著延长(P<0.05、0.01),药时曲线下面积(AUC)显著增加(P<0.05、0.01),清除率(CL/F)显著降低(P<0.05、0.01);没食子酰芍药苷在2组大鼠体内的药动学参数无显著性差异,但其在肝损伤大鼠体内的药-时曲线出现双峰现象;苯甲酰芍药苷在2组大鼠体内的t_(1/2)和MRT_(0~∞)无显著变化,但肝损伤使其AUC显著增加(P<0.01)。结论为进一步探究白芍总苷多成分协同的保肝作用机制提供实验基础,同时为该中药的临床合理用药提供指导参考。

白芍非药用部位芍头中单萜苷类有效部位的制备工艺研究

目的优化白芍Paeonia lactiflora非药用部位芍头中单萜苷类有效部位的提取及纯化工艺。方法以芍药苷、芍药内酯苷等单萜苷类成分以及非单萜苷类成分苯甲酸、没食子酸的含量为指标,采用归一化处理得到总评归一值(overall desirability,OD);以提取时间、料液比、乙醇体积分数作为乙醇提取的关键工艺参数,运用星点设计-效应面法建立OD与工艺参数之间的数学模型,推算芍头回流提取的最佳工艺,并进行验证。在单因素试验确定大孔树脂型号的基础上,以上样体积流量、上样液质量浓度、柱径高比、洗脱体积流量作为纯化的关键工艺参数,采用可考察交互作用的正交设计实验优化提取液纯化工艺,并进行验证。结果芍头回流提取的优选工艺为加12倍量50%乙醇提取2次,每次80 min;3次工艺验证的OD为2.61、2.49、2.57,RSD为2.5%。以D-101型大孔吸附树脂纯化,0.25 g/mL药液上样,上样体积流量为0.5 mL/min,径高比为1∶4,最大上样量为3 BV,2 BV去离子水除杂,4 BV 50%乙醇以1 mL/min体积流量洗脱。3次纯化工艺验证综合评分分别为0.7333、0.7024、0.7297,RSD为2.3%;单萜苷总转移率为74.17%,纯化物中单萜苷质量分数为59.85%。结论得到的提取和纯化工艺高效且稳定,可除去芍头中大部分非单萜苷成分,获得单萜苷类有效部位。

基于药材-饮片-标准汤剂质量传递过程的白芍质量标志物研究

目的通过建立白芍药材、饮片、标准汤剂HPLC特征图谱对白芍生产过程的共有峰进行定性分析,结合白芍药材-饮片-标准汤剂质量传递过程筛选白芍质量标志物(Q-Marker)。方法采集10批白芍鲜药材,制备为药材、饮片和标准汤剂,采用HPLC建立白芍药材-饮片-标准汤剂特征图谱,结合相似度评价及正交偏最小二乘-判别分析(orthogonal partial least squares-discriminant analysis,OPLS-DA)等分析初步确定的指标成分在药材-饮片-标准汤剂过程的含量及转移率,探究白芍生产过程中的质量传递规律,综合筛选白芍Q-Marker。结果白芍药材、饮片、标准汤剂特征图谱的共有峰有9个,组内相似度较高,OPLS-DA结果显示,9号共有峰不能稳定传递;白芍药材-饮片传递过程中,没食子酸、氧化芍药苷、儿茶素、芍药内酯苷、芍药苷、没食子酰芍药苷、1,2,3,4,6-O-五没食子酰葡萄糖、苯甲酰芍药苷8种成分转移率大于70%,可以传递稳定;饮片-标准汤剂传递过程中,芍药苷、芍药内酯苷、没食子酰芍药苷、氧化芍药苷、苯甲酰芍药苷等单萜及其苷类成分含量稳定且转移率大于60%,可以传递稳定;没食子酸转移率大于200%,未能充分体现白芍饮片中没食子酸的传递情况;儿茶素和1,2,3,4,6-O-五没食子酰葡萄糖2种成分转移率小于25%。结论结合白芍药材、饮片和标准汤剂中特征图谱、含量及转移率变化等,综合筛选确定氧化芍药苷、芍药内酯苷、芍药苷、没食子酰芍药苷、苯甲酰芍药苷5种成分作为白芍Q-Marker。

基于指纹图谱与化学计量学的白芍酒炙前后差异性标志物研究

目的基于HPLC指纹图谱与化学计量学探究白芍Paeoniae Radix Alba酒炙前后化学成分的差异性,筛选差异性标志物,为探究白芍酒炙前后炮制机制及建立质量控制标准提供参考。方法采用HPLC建立白芍饮片酒炙前后指纹图谱,标定共有峰并进行指认与相似度评价,以白芍饮片酒炙前后共有峰峰面积为指标,运用层次聚类分析(hierarchical cluster analysis,HCA)、主成分分析(principal component analysis,PCA)和正交偏最小二乘-判别分析(orthogonal partial least squares-discriminant analysis,OPLS-DA)等方法对白芍酒炙前后进行区分,并筛选出差异性标志物进行定量分析。结果生白芍与酒白芍HPLC指纹图谱相似度较高,但其酒炙前后峰面积有所差异;HCA与PCA可明显把生白芍与酒白芍分为2类,表明白芍酒炙前后化学成分存在一定差异;根据OPLS-DA分析筛选出峰1(没食子酸)、2(氧化芍药苷)、3、7(芍药苷)、8(没食子酰芍药苷)为酒炙前后主要差异性标志物;对其中可指认且含量较高的3个差异性标志物进行定量研究,结果显示,白芍经酒炙后没食子酸含量显著性增加,芍药苷、没食子酰芍药苷含量显著性减少,HCA可明显把白芍与酒白芍分为2类,进一步证实了选择该3种成分作为白芍酒炙前后差异性标志物的合理性。结论白芍酒炙前后差异性标志物的研究可以为完善白芍与酒白芍饮片的质量控制和品质评价提供参考。

基于“质-量”双标的白芍质量分析方法研究

目的建立以对照药材为基准物质的定性和不依赖多种对照品定量的白芍Paeoniae Radix Alba药材“质-量”双标控制方法。方法采用HPLC技术建立白芍对照药材的特征图谱,将其与供试药材图谱进行比对来辨别药材的真伪,即“质”;采用内标物质对特征峰化学成分进行相对定量来区分药材的优劣,即“量”。结果建立的白芍药材“质-量”分析方法符合方法学考察要求,各供试药材与对照药材的相似度均大于0.90;规定了白芍药材特征峰化学成分相对含量下限。结论该方法简便、快捷、准确,可以弥补目前白芍药材质量控制的不足,达到全面控制白芍药材的目的。

基于色度-化学成分关联的蜜糠炒白芍质量控制研究

目的 建立30批白芍和蜜糠炒白芍的指纹图谱,研究白芍经蜜糠炒制后颜色的变化与内在成分的关联性,并构建相关的人工神经网络(artificialneuralnetwork,ANN)模型。方法 利用色差仪对白芍及蜜糠炒白芍色度进行测定,通过HPLC建立白芍及蜜糠炒白芍的HPLC指纹图谱,结合多元统计学方法对白芍及蜜糠炒白芍样品色度值与共有成分进行关联分析。以色度和相关成分建立ANN模型。结果 白芍经蜜糠炒制后,饮片粉末的L^(*)、a^(*)、b^(*)值呈上升趋势;相关分析结果表明没食子酸(峰1)、芍药苷(峰6)、没食子酰芍药苷(峰7)、五没食子酰葡萄糖(峰8)、苯甲酸(峰9)、苯甲酰芍药苷(峰10)与色度值存在显著相关;当隐含层神经元个数为8时,ANN模型的均方根误差最低(RMSE=0.124 0),R^(2)最高(R^(2)=0.9835),模型整体拟合程度最好。因此选择4个输入层、8个隐含层和6个输出层组成ANN模型为最佳拓扑结构。结论 色度与成分结合能更加全面科学地评价蜜糠炒白芍整体质量,可将色度指标纳入蜜糠炒白芍饮片质量评价体系中,为蜜糠炒白芍饮片在线质量控制提供参考。

基于指纹图谱结合化学模式识别法对不同种质白芍质量评价

目的 采用指纹图谱与化学模式识别方法,以质量标志物(quality marker,Q-Marker)为指标,评价不同种质白芍Paeoniae lactiflora的质量。方法 采用HPLC法,以乙腈-0.1%磷酸水溶液为流动相进行梯度洗脱,柱温30℃,体积流量1m L/min,检测波长230 nm;绘制40批白芍样品的指纹图谱,结合相似度分析、聚类分析(cluster analysis,HCA)、主成分分析(principal component analysis,PCA)和正交偏最小二乘法(orthogonal partial least square,OPLS-DA)等化学模式识别技术,对不同种质的白芍样品进行质量评价。结果 从质量传递与溯源,植物亲缘性及化学成分的特有性、有效性及可测性等方面对白芍Q-Marker的选择进行了分析,推测白芍中芍药苷、氧化芍药苷、苯甲酰芍药苷、芍药内酯苷、儿茶素、没食子酰芍药苷、1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖和没食子酸可作为白芍的Q-Marker。以40批白芍HPLC指纹图谱标定白芍的Q-Marker,相似度在0.892~1.000;聚类分析初步区分出了不同种质的白芍,四川中江、浙江杭州和河北安国的白芍样品质量较为相近;PCA和OPLS-DA结果显示,筛选出的Q-Marker可作为不同种质白芍的特征化学成分;对Q-Marker进行含量测定,结果不同种质样品间差异较大;TOPSIS分析结果表明山西运城的白芍质量排名最高,人工培育的杂花白芍质量排名最低。结论 通过指纹图谱结合化学模式识别技术,以白芍Q-Marker为评价指标能较为全面地反映白芍的质量,可以为白芍优质种质资源的选育和育种提供参考。