没食子酸脱羧酶及酶法制备焦性没食子酸研究进展

对没食子酸脱羧酶及酶法制备焦性没食子酸研究进展进行了介绍和综述,重点介绍了产没食子酸脱羧酶的微生物种类、发酵时间、底物浓度、pH值、温度、金属离子,氮源及接种量等对微生物发酵产高活性没食子酸脱羧酶的影响因素,并简述了酶法制备焦性没食子酸的方法,指出了今后的研究方向。

产没食子酸脱羧酶的菌种筛选及其酶活研究

为了筛选产没食子酸脱羧酶的菌种并对其相应的酶活性质进行研究,文中首先利用底物诱导对可以产没食子酸脱羧酶的不同菌种进行了筛选,初步研究了没食子酸脱羧酶的专一性及影响其酶活的因素,由结果可知:待筛选的5株菌种均能降解没食子酸生成焦性没食子酸,其降解效果由强到弱为弗式柠檬酸杆菌(Citrobacter freandii)CICC 22001、阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae)CICC 10017、肠杆菌属(Enterobacter spp.)CICC 23468、阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae)CICC 20772、阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae)CICC 20804;没食子酸脱羧酶(GAD)对没食子酸具有较强的专一性,在粗酶液5.0 m L,没食子酸0.4 mg/m L,发酵温度35℃,磷酸盐缓冲溶液pH=6.0对其酶活的促进作用最强,而金属离子的促进作用强弱为Mg^(2+)>Sn^(2+)>Cu^(2+)>Zn^(2+)>K+>Ca^(2+)>Fe^(2+),添加剂的抑制作用强弱为EDTA>SDS>Triton X-100>Tween 20。

没食子酸脱羧酶的分离与纯化

本实验研究了没食子酸脱羧酶（Gallicaciddecarboxylase，GAD）的提取、分离、分析及结构表征。建立了考马斯亮蓝法（Y=4．8748X-0．0255，帮=0．9922）和双缩脲法（Y=0．2476X＋0．0003，R2=0．9993）测定GAD蛋白含量的线性方程。对GAD粗酶液，先采用pH为6，60％／70％的（NH。）2S0。盐沉淀32h；然后，利用35kD透析膜处理料液12—16h；再将透析液经二乙氨基乙基（DiethylAminoethanol，DEAE）纤维素树脂，在pH为6．5时饱和吸附量可达2．838mg／g，采用0．4mol／LNaCl溶液进行洗脱的洗脱液经过G-100葡聚糖凝胶纯化。采用SDS．PAGE聚丙烯酰胺电泳分离得到蛋白样品条带，MALDI-TOF-MS进行结构表征，得到的蛋白分子质量45．62kD，等电点5．19，与已知蛋白质gi／334732950匹配度为53，说明两者具有相似性，但匹配到的序列组仅占蛋白全序列的3％，初步推测GAD可能是一种新的酶。

产焦性没食子酸菌株筛选及其培养条件优化

研究了肠杆菌、短乳杆菌和植物乳杆菌3种菌种催化底物没食子酸降解产焦性没食子酸的能力,其中产焦性没食子酸效果较好的是肠杆菌和植物乳杆菌。对不同温度、底物浓度、pH值、离子浓度等反应条件对肠杆菌和植物乳杆菌没食子酸脱羧酶酶活的影响进行分析,并确定了这两株菌降解没食子酸的培养条件。结果表明:在培养温度为28℃、没食子酸浓度为30 mmol/L,(NH_4)_2SO_4浓度8 mmol/L,MgSO_4浓度为80 mmol/L,初始培养基pH值6.0,培养48 h时,肠杆菌催化没食子酸产焦性没食子酸58.11%;在培养温度为37℃、底物浓度为10 mmol/L,(NH_4)_2SO_4浓度为8 mmol/L,MgSO_4浓度为20 mmol/L,初始培养基pH值6.5,培养48 h时,植物乳杆菌催化没食子酸产焦性没食子酸83.31%。

微生物降解没食子酸生产焦性没食子酸的研究进展

焦性没食子酸是一种用途广泛的化工原料和试剂,多以化学法由没食子酸脱羧制备。文章针对该方法导致的严重环境污染和设备腐蚀等问题,从微生物转化的角度,重点综述降解没食子酸生产焦性没食子酸的微生物菌株及其相关工艺研究,如碳源、底物浓度、p H、发酵时间对焦性没食子酸得率的影响。同时也介绍了影响没食子酸脱羧酶(GAD)活性和产量的相关因素,如p H、温度、金属离子、添加剂等。然后,文章简要概括了利用微生物处理没食子单宁加工生产过程中的废水等问题。最后,文章通过展望了今后焦性没食子酸的生产制备工艺,作出了思考,为微生物转化法生产焦性没食子酸的工业化生产提供指导和参考。