浙江省麻疹病毒分离株的基因特性与免疫原性研究

为了研究浙江省1999～2003年麻疹病毒分离株的抗原性变化以及基因特性,阐明其基因特性与麻疹流行的关系,以及抗原性变化对疫苗免疫效果的影响。我们从麻疹患者含漱液中分离麻疹病毒株,制备大鼠免疫血清,与疫苗株沪191和Edmonston株等进行交叉中和试验,测定各毒株之间抗原比;并采集儿童麻疹疫苗免疫前后血清,分别测定其对不同毒株的中和抗体滴度;采用RT-PCR法扩增麻疹毒株血凝素蛋白(H)及核蛋白(N)基因,进行核苷酸序列测定。结果浙江99-1和浙江02-2株与沪191株之间的抗原比分别为3.0和7.3;儿童免疫后血清对浙江02-2株的麻疹中和抗体平均几何滴度(GMT)为15.03,明显低于沪191疫苗株(GMT为68.12);浙江省1999～2003年麻疹分离株之间,H基因氨基酸同源性为99.8%,N基因氨基酸同源性为98.5%～100.0%;与沪191疫苗株的H基因和N基因相比较,分离株与其在氨基酸水平上同源性分别为95.5%～95.7%和95.9%～96.3%。从基因进化树显示,1999～2003年浙江省分离到的麻疹毒株属于H1基因型,但与疫苗株沪191在抗原性和基因特性上已存在明显的差异。

麻疹病毒疫苗株沪_(191)和宁波麻疹病毒流行株血清交叉中和试验结果分析

目的分析麻疹病毒疫苗株[上海(沪)191,Shanghai191;S191]的免疫保护性,为探讨有效预防控制麻疹的措施提供参考。方法用微量中和试验测定不同人群血清对麻疹病毒疫苗株(S191)和浙江省宁波市麻疹病毒流行株(Ningbo2008-06)的中和抗体(Neutralizing Antibody,NA)水平。结果 S191株麻疹减毒活疫苗(Measles Attenuated Live Vaccine,MV)初次免疫(初免)血清,有MV免疫史麻疹患者急性期血清,麻疹患者恢复期血清,应急接种MV前、后血清,对疫苗株的NA几何平均滴度(Geometric MeanTiter,GMT)分别为1∶35.23、1∶4.16、1∶231.74、1∶37.81、1∶61.03;对麻疹病毒流行株的NAGMT分别1∶19.04、1∶2.21、1∶596.62、1∶32.25和1∶67.54。初免血清及有免疫史麻疹患者急性期血清,对疫苗株的NAGMT分别是流行株的1.85倍(t=2.537,P<0.05)和1.88倍(t=-2.696,P<0.05);麻疹患者恢复期血清对流行株的NAGMT是疫苗株的2.57倍(t=-3.054,P<0.05);而应急接种后血清中和疫苗株和流行株的NAGMT差异无统计学意义。小月龄婴儿血清随着月龄增长对疫苗株和流行株的NAGMT均下降,6月龄和8月龄婴儿对流行株的NAGMT分别为1∶2.60和1∶1.24。结论 S191株MV能中和宁波麻疹病毒流行株,只是中和能力略有下降;应急接种能显著增加麻疹NA水平;母传麻疹抗体6月龄后几乎无保护作用;有必要对现行MV免疫策略进行调整。

沪_(191)株麻疹疫苗的流行病学效果评价

为了评价沪1 91 株麻疹疫苗 (MV)的流行病学效果 ,1991年 10月在荆州市荆州区川店镇建立了MV免疫效果观察点 ,以 5 0 3名MV初免儿童 (其中 10 1名于 1年后进行了复种 )作为观察对象 ,1992～ 1999年连续对观察点所有发热、出疹性疾病病人进行监测 ,,并采集血清标本 ,作麻疹和风疹血清学鉴别诊断。结果显示 :1992年和 1993年各发生 1例麻疹 ,1999年发生一起麻疹和风疹混合流行 ,查 15 0例病人中的 91例血清 ,麻疹抗体阳性 5 6例 ,其中 2 6例风疹IgM抗体同时阳性。所有发热、出疹性疾病病例中 ,仅 1例为MV观察对象 ,该儿童初免未成功 ,属原发性免疫失败。流行后期 ,检测 19名MV观察对象麻疹IgG抗体 ,隐性感染率为 94 74% (18/ 19)。表明沪1 91

麻疹病毒分离及现行疫苗免疫效果分析

目的 分离麻疹流行病毒，与现用麻疹减毒活疫苗（Measles Vaccine，Live；MV）株病毒进行基因比较和交叉中和试验，以分析现行MV的免疫保护性。方法由江苏省疾病预防控制中心提供2005年麻疹局部流行时急性期病人的咽拭子标本，用Vero／Slam细胞分离病毒，同时提取分离病毒和疫苗病毒核糖核酸，用逆转录-聚合酶链反应扩增血凝素蛋白（H）和核蛋白（N）基因，并进行核苷酸测序分析；另用MV免疫者的血清和麻疹病人的恢复期血清与分离野毒株和疫苗株进行交叉中和试验。结果一次成功分离到4株麻疹野病毒，对其中1株（JS／26-05）作基因测序，N基因进化树分析为H。基因型；与疫苗株病毒基因比较，H基因核苷酸同源性为94．8％，氨基酸同源性为95．1％；N基因核苷酸同源性为94．4％，氨基酸同源性为96．2％，但碳末端150个氨基酸的同源性为90．0％。疫苗免疫者产生的中和抗体水平低于自然感染者，两者的抗体几何平均滴度分别为：针对野毒株1：9．56和1：22．40，针对疫苗株1：40．05和1：65．41，相差2．9～4．2倍；疫苗免疫产生的抗体中和野毒株的能力平均低于疫苗株4．2倍。结论2005年江苏省局部地区麻疹流行时分离的病毒为H1基因型，麻疹分离株与现用疫苗株在基因水平上的差异明显，现用MV的免疫保护作用有所减弱，可能已影响到MV的免疫持久性。

表达2型登革病毒NS1重组麻疹病毒的拯救及鉴定

以麻疹病毒沪-191疫苗株(MVS191)为载体构建表达2型登革病毒非结构蛋白NS1(DENV2NS1)的重组麻疹病毒。将编码DENV2NS1 6×His蛋白的核酸序列用Bsi WI和BssHII酶切位点插入至载体pT7-MVF23ATU上,然后构建载体pT7F123DENV2NS1 6×His,最后构建获得插入了外源基因DENV2 NS1 6×His的载体pT7MVS191-DENV2NS1 6×His。质粒pT7MVS191-DENV2NS1 6×His与表达麻疹病毒N、P、L蛋白的辅助质粒共转染BSRT7细胞完成病毒包装后,在Vero细胞内增殖,完成重组病毒的拯救。重组病毒在Vero细胞上传至第4代,基因测序证明重组病毒中成功插入了外源基因DENV2NS1 6×His;Western Blot、原位免疫荧光反应可检测到重组病毒中麻疹病毒N蛋白及外源抗原DENV2NS1 6×His的表达;重组病毒增值特性与疫苗株MVS191相似;P1至P4代的重组病毒滴度稳定在6log10CCID50/mL～6.5log10CCID50/mL之间;P4代重组病毒免疫家兔,兔抗血清中麻疹病毒中和抗体效价大于1∶160;Western Blot可检测到免疫兔血清中DENV2NS1的抗体。本文成功构建了以麻疹病毒为载体,表达外源抗原DENV2NS1的重组病毒,为以麻疹病毒为载体的登革疫苗研发奠定基础。