河鲀毒素——一种具有缓解癌性疼痛潜力的药物

河鲀毒素(tetrodotoxin,TTX)是一种剧毒的生物碱类天然神经毒素,具有选择性阻断钠离子通道作用。人体摄入TTX后会产生致命影响,对人类的致死剂量范围1.5~2.0 mg(血药浓度9μg/L)。但以远低于其半数致死量(LD50)给患者施用TTX时,却可以治疗多种疾病,包括海洛因和可卡因戒断症状、脊髓损伤、脑外伤、肿瘤、神经性疼痛和内脏疼痛等。研究人员经过几十年不懈地探索,在TTX应用于生物医学领域,尤其是治疗癌症相关疼痛方面取得可喜进展,本文着重介绍TTX作为缓解癌性疼痛药物的临床开发、作用的有效性和安全性等最新结果,展示TTX缓解癌性疼痛的前景。

河鲀毒素及其在河鲀体内积累研究进展

河鲀毒素(tetrodotoxin,TTX)神经毒性极高,广泛存在于多种水生生物中。河鲀为含TTX的代表性生物,食用不当存在一定的安全隐患,极大地限制了河鲀产业的发展。随着近年河鲀产业的有条件放开,组学和分析化学等技术的不断进步,关于河鲀TTX来源和认识逐渐深入,为系统研究河鲀积累代谢TTX的调控机制提供了理论基础。本文综述了TTX的特性分布、毒性机制及在河鲀体内的积累等最新资料,总结了TTX在河鲀体内积累代谢分子机制的研究进展,为全面了解河鲀体内TTX积累途径和机制,及防控养殖河鲀食品安全风险提供参考。

河鲀毒素的检测技术与应用

河鲀毒素(tetrodotoxin,TTX)是毒性极强的小分子生物碱类毒素,包括中国在内的亚洲沿海国家因误食TTX污染食品而中毒的事件时有发生,其发病迅速且无特效解毒剂,对环境安全、食品安全与社会安全造成极大的威胁。通过检测食品与环境中的TTX含量可以实现TTX的风险预警,可有效防范TTX中毒事件的发生。本文梳理了4类TTX的检测技术,分析比较了传统的生物检测法、化学检测法、免疫检测法之间的优势、不足与实际应用进展,介绍了基于适配体技术的新型检测技术的兴起、发展与广阔的应用前景,对生物安全领域中TTX风险的管理与控制有现实意义。

水产品中河鲀毒素的高效液相紫外测定法

以鲀科鱼类为研究材料,采用超声波法提取,C18-WCX联用固相萃取纯化,使用高效液相色谱紫外检测方法测定水产品中河鲀毒素含量,通过探索提取方法和色谱条件对检测结果的影响,并确定和优化色谱分离和紫外检测条件,建立了一种高效液相紫外检测测定水产品中河鲀毒素的方法。该检测方法稳定性好,可操作性强,加标回收率在75%～82%之间,相对标准偏差小于15%,检出限达到0.02mg/kg。与现行河鲀毒素检测方法相比,该方法具有对仪器要求低、操作简便的特点,易于推广应用。

荧光微球免疫层析技术定量检测河鲀毒素

建立河鲀毒素的荧光微球免疫层析检测方法。基于抗体亲和位点保护标记方法制备抗河鲀毒素抗体偶联荧光微球,方法简单稳定,所有结合分离步骤均在亲和柱中完成,避免了亲和位点被破坏而且荧光信号更强,将检测灵敏度提高至原来的8倍左右。所建立的河鲀毒素检测方法IC50为18.4 ng/m L,线性范围为2~200 ng/m L(y=-0.15ln x+0.95,R2=0.98)。检测河鲀样本的最低检出限为10μg/kg,平均相对标准偏差小于25%(n=6)。该方法适用于热加工样品的检测,整个检测过程仅需15 min,且无需使用大型设备,为河鲀餐前速测提供了一定技术手段。

新型柱前衍生-高效液相荧光检测法检测水产品中河豚毒素

在稀碱条件下,河鲀毒素（TTX）与次溴酸钠和尿素于一定温度下反应生成具有荧光性能的物质,该反应与已报道的TTX在强碱下生成C-9碱的碱解不同。本研究拟对该衍生反应所需条件进行详细研究,并尝试依据该反应建立鲀一种新型的河毒素荧光检测方法。荧光扫描光谱显示,产物最大激发波长（EX）为233 nm,最大发射波长（EM）为370 nm。该反应对pH要求比较严格,反应最适pH在11.6~11.9之间。对样品进行衍生检测获得最强荧光信号的条件为：次溴酸钠0.036~0.09 mol/L、尿素10~50 g/L、碳酸钠0.2~0.3 mol/L,温度75℃。样品检测结果显示,此衍生反应具有高度专一性,信号强度与 TTX 含量成正比,在0.01~10μg/mL 质量浓度范围内线性方程为y=109.17x＋0.3965,线性相关系数为0.999。依据该衍生反应建立柱前衍生–高效液相色谱荧光检测法检测水产品中河鲀毒素含量,检测限达到20μg/kg,平行样品检测相对标准偏差为0.44%~7.25%,准确度高。对河鲀、虾虎鱼和织纹螺产品检测表明,该反应特异性强,不易出现假阳性,鲀可用于河毒素检测的确证。

河鲀和河鲀毒素之间关系的研究进展

从中国有毒河鲀的种类和分布、河鲀体内的河鲀毒素的来源、河鲀对河鲀毒素的耐受性、人工养殖河鲀的河鲀毒性等四个方面,介绍了当前国内外河鲀与河鲀毒素关系的研究进展情况,并提出了关于河鲀体内的河鲀毒素来源的新观点,认为河鲀体内的河鲀毒素可能是河鲀以细菌产生的河鲀毒素类似物为前体,生物合成而成的。养殖河鲀的毒性控制,需同时考虑食物链和河鲀本身的因素。

超声波提取-固相萃取联用检测河鲀毒素的研究

使用热处理、震摇、超声波等手段改善水产品中的河鲀毒素提取率,利用多种固相萃取柱纯化提取液,采用高效液相色谱-紫外检测法进行检测,重点对河鲀毒素的提取和固相萃取纯化进行了研究。试验发现,结合振荡和加热双重作用的索氏提取法和超声波加热辅助提取法具有较高的提取能力,其中超声波(35kHz,强度100%,60℃)提取10min即可达到最好效果,耗时短,效率更高;比较SCX、PRS、WCX、C18、SAX 5种固相萃取柱对河鲀毒素的吸附作用,SCX、PRS、WCX柱则能够将河鲀毒素完全保留在其上。样品纯化试验结果显示,C18-WCX小柱的组合纯化样品的效果最好,回收率在75%—82%之间,相对标准偏差小于15%。研究结果对河鲀毒素的提取、纯化和检测工作具有重要的参考意义。

河鲀毒素生物传感器的研究

基于河鲀毒素(TTX)对细胞膜Na+通道的阻断作用,建立一种检测TTX的简易组织生物传感器。组织生物传感器由pNa电极、青蛙膀胱膜、电位计等构成。在pNa电极顶端用两层醋酸纤维薄膜包裹,中间夹入青蛙膀胱膜,构成感受器。将电极插入pNa=4的NaCl溶液中,使电极输出信号趋于稳定。将TTX被测液注入感受器系统,测定感受器输出量的抑制值。每次测定只需5min。最低检出限为0.002MU/ml(3.56×10-3μg/ml)。用0.003%Na3N保存,可连续使用250h。以生物传感器和小鼠生物试验法比较,建立了工作曲线,便于在餐饮企业对原料鱼进行检测和应用。

QuEChERS/液相色谱-串联质谱法测定红鳍东方鲀肉中河鲀毒素

建立了快速检测红鳍东方鲀肉中剧毒生物毒素河鲀毒素（Tetrodotoxin,TTX）含量的高效液相色谱-串联质谱（HPLC-MS/MS）确证方法.分析物用1％乙酸-甲醇溶液于50℃超声提取,C18和石墨化碳黑（GCB）混合粉末作为吸附剂QuEChERS净化,高速冷冻离心,上清液经尼龙-聚四氟乙烯复合膜过滤;TSK-gel Amide-80 3 μm色谱柱分离,乙腈-0.15％乙酸（含10 mmol/L乙酸铵）溶液作为流动相梯度洗脱,对滤液进行HPLC-MS/MS分析.外标法质标准曲线定量.

河鲀的营养风味、毒素、贮藏保鲜及加工研究进展

河鲀肉味鲜美,蛋白质、氨基酸、不饱和脂肪酸、矿物质含量高,脂肪含量低,可作为人体优质的膳食来源。早先因其含有剧毒的河鲀毒素而被禁止销售与食用,随着养殖与控毒、祛毒技术的趋于成熟,国内外在逐步开放河鲀的市场,河鲀的经济价值不断提升。本文分析总结了河鲀的营养价值,综述了其风味、毒素、贮藏保鲜及加工研究进展,并展望了河鲀的未来研究方向和发展趋势,以期为我国河鲀的开发利用及产业发展提供科学参考。

鲀毒鱼类中河鲀毒素直接竞争抑制性酶联免疫吸附试验测定方法的研究

为检测毒鱼类中的河毒素 ,建立了用抗河毒素单克隆抗体检测河样品中河毒素的直接竞争抑制性酶联免疫吸附试验 (ELISA)方法。结果表明 ,直接ELISA法较间接ELISA法灵敏 ,最低检出浓度为 0 1ng mL(每检测孔 0 0 1ng) ,线性范围为 5～ 5 0 0ng mL ,方法的加标回收率为73 0 %～ 118 0 %。本法与传统的小鼠生物试验相比 ,两种方法的测定结果之间在统计学上差异无显著性 (配对t检验 ,P >0 1) ,并具有良好的相关性 (r =0 94 4)。对来自江苏省东海和长江水域的河样品的毒力进行了测定 ,结果表明本方法简单、快速、灵敏 。

液质联用快速测定河鲀鱼肝脏中河鲀毒素含量的方法研究

采用高效液相色谱-串联质谱（HPLC-MS/MS）方法进行了河鲀鱼肝脏中河鲀毒素（Tetrodotoxin,TTX）含量的快速检测研究。河鲀鱼肝脏样品用1%乙酸甲醇溶液超声提取2次,正己烷脱脂后用C18和石墨化碳黑（GCB）混合吸附剂净化,冷冻高速离心,上清液经聚四氟乙烯-尼龙复合膜过滤;TSK-gel Amide-80 3μm色谱柱分离,乙腈和0.15%乙酸（含10mmol/L乙酸铵）溶液为流动相梯度洗脱进行HPLC-MS/MS分析。外标法定量测定。方法检出限为40μg/kg,在50～1 000μg/kg范围内线性关系良好。在河鲀鱼肝脏中添加50,75,100μg/kg TTX进行重复性试验,回收率在79.2%～105.3%之间,相对标准偏差（RSD）不大于9.0%（n=6）。本方法准确、灵敏、实用,节约时间和试剂,操作简单,易重现,满足目前对河鲀鱼肝脏中TTX含量快速定量检测的技术要求。

超高效液相色谱-串联质谱法检测河鲀毒素

目的建立准确、快速检测河鲀毒素(tetrodotoxin,TTX)的超高效液相色谱-串联质谱(ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,UPLC-MS/MS)的分析方法,了解市售烤鱼片、鱿鱼干制品和鱼丸中河鲀毒素污染状况。方法样品经2%乙酸/甲醇溶液超声离心提取后,通过MCX固相萃取柱进行净化处理,采用液相色谱串联质谱法进行检测。结果市售的107份样品中,鱿鱼干制品和鱼丸中没有检出TTX;64份烤鱼片样品中检出16份含有TTX,检出率为25.0%。结论部分烤鱼片中TTX呈阳性,建议生产厂家严把原料关,监管部门应加强对市售烤鱼片标签标识的监管。

河鲀毒素的起源及检测技术研究进展

分析了不同学者对河鲀毒素起源的几种解释,从遗传学角度解释河鲀毒素是河鲀在长期进化过程中自然选择的结果的解释较为合理。本文对河豚毒素的检测方法进行了综述。河豚毒素是钠离子通道阻断剂,是一种强海洋神经毒剂,结合国内外研究现状介绍了河鲀毒素的控毒手段以及河鲀毒素作为一种工具药在临床上的应用前景。

河鲀毒素起源及毒理研究进展

分析了不同学者对河鲀毒素起源的几种解释,认为河鲀毒素是河鲀在长期进化过程中自然选择的结果这一从遗传学角度所进行的解释较为合理。阐述了河鲀毒素的致毒机理:河鲀毒素可选择性地抑制可兴奋膜的电压依赖性Na+通道的开放,从而阻止神经冲动的发生和传导,使神经肌肉丧失兴奋性。结合国内外的研究现状,介绍了河鲀毒素的控毒手段以及河鲀毒素作为一种工具药物在临床上的应用前景。

暗纹东方鲀生殖前后性腺中河鲀毒素含量变化的研究

运用荧光检测法测定了暗纹东方鲀生殖前后性腺中河鲀毒素含量变化的情况。研究结果表明：Ⅵ期卵巢中河鲀毒素含量较Ⅴ期卵巢中的含量显著降低；此法不能测出精巢中河鲀毒素的含量情况。

养殖河鲀毒素控制技术研究

随着人们对河鲀毒素及河鲀的逐步认识和利用,养殖河鲀毒素控制技术研究日益成为人们关注的焦点,本文简要总结我们9年来在这方面所开展的一些工作以及日本等国在该领域的最新研究进展。

河鲀毒素提取技术及检测方法的研究进展

河鲀毒素(TTX)具有高效的医用价值,河鲀毒素的提取、分离、提纯以及检测技术已成为当今的研究热点。文章介绍了河鲀毒素的理化性质、提取和提纯技术以及生物测定法、色谱法、色谱质谱联用法等多种检测分析方法,并提出了今后的研究方向。