油松枯梢病菌分生孢子器诱导方法探索

采用机械损伤、铺玻璃纸、放置已灭菌3次的健康或发病寄主松针等不同组合处理方法,诱导油松枯梢病菌Sphaeropsis sapinea产生分生孢子器。结果表明:不铺玻璃纸的菌丝上直接放置已灭菌3次发病松针,不论是否经过机械损伤,均可诱导分生孢子器快速大量产生,培养第8 d,经机械损伤和非机械损伤处理后分生孢子器产生数量分别为127.20和121.43个/松针;铺玻璃纸的菌丝上放置松针后,获得的分生孢子器极为干净,利于后续处理和分生孢子的获得。其中放置发病松针、不铺玻璃纸的处理下分生孢子器萌发率最高,在机械损伤和未机械损伤的情况下萌发率分别为87.1%、85.4%。

油松内生细菌的分离及拮抗菌的筛选

采用组织分离法,从健康油松Pinus tabulaeformis 1 a生松针,2 a生松针,1 a生松枝韧皮部、木质部,2 a生松枝韧皮部、木质部,根等7类部位共分离出40株内生细菌。通过平板对峙法对所得菌株的拮抗性进行了初筛和复筛,得到3株对油松枯梢病拮抗作用较强的菌株。其中AM-5菌株抑菌效果最强,菌体的抑制率达66.95%,其发酵液的抑制率为27.89%;菌体对病原菌孢子萌发也有显著的抑制作用。结合形态特征、生理生化及16S rDNA同源性分析,将AM-5菌株鉴定为枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis。盆栽试验结果表明,AM-5菌株对油松枯梢病的防治效果显著,在预防实验中,明显降低了油松枯梢病的发病率,预防效果为64.26%;在防治试验中,防效为53.32%。