油桐尺蠖核型多角体病毒DNA在3株昆虫细胞系中的转染

使用 DNA 磷酸钙共沉淀方法,把油桐尺蠖核型多角体病毒 DNA 导入3株昆虫细胞株。结果表明,同源细胞株的被转染率显著高于非同源细胞株。用间接免疫酶技术检测细胞中病毒多角体蛋白的存在来确定转染率的方法,可在转染21小时后就获得结果,该方法快速、简便。同时,还研究了吸附时间和病毒 DNA 浓度对转染的影响。

油桐尺蠖核型多角体病毒不同分离株的比较

该文对油桐尺蠖核型多角体病毒(Buzura suppressatia nucleopolyd rovirus,BusuNPV)的不同毒株进行了比较研究。毒株LF,SF,WF对2～3龄油桐尺蠖幼虫的LC50分别为4.39×104,6.65×104,1.02×105PIB/mL;LT50分别为5.59,5.69,5.17 d。各分离株均为单粒包埋核型多角体病毒,病毒粒子大小为(0.195～0.246)μm×(0.054～0.072)μm,多角体直径为0.85～1.50μm。对BusuNPV全基因组序列进行单酶解时,除EcoRⅠ外其它内切酶酶解条带均较少,分子量大,不易进行分离株比较。双酶解BusuNPV全基因组序列时,DNA充分被消化,条带较多,但各分离株的酶切条带数目、大小不存在差别。

油桐尺蠖核型多角体病毒的空斑测定

在油桐尺蠖卵巢细胞系上对油桐尺蠖核型多角体病毒(BsNPV)进行了空斑测定。用此方法测定了BsNPV的感染力,并将所得的结果与其TCID_(50)进行比较,结果显示这两种方法在测定病毒感染力时敏感性相似。

油桐尺蠖核型多角体病毒p35基因的克隆及在大肠杆菌中的表达

用PCR技术从油桐尺蠖核型多角体病毒基因组中扩增得到p35基因的DNA序列,把PCR产物克隆到pMD 18载体上,核苷酸序列测定表明此片段与AcNPVp35基因同源性为100%,继而构建了表达质粒pGBp35,诱导后经SDS PAGE检测表明获得了BsNPVp35基因在大肠杆菌BL21中包涵体形式的特异表达。

油桐尺蠖核型多角体病毒杀虫剂生产的新工艺

本工艺的特点是以人工饲料饲养油桐尺蠖幼虫,用昆虫细胞系增殖病毒作为毒源,感染4龄幼虫,收集病死虫,提取多角体,加工制成杀虫剂,产品经安全性检测,并进行田间试验,有较好的杀虫效果。

保存时间对油桐尺蠖核型多角体病毒杀虫剂毒力的影响

以半合成人工饲料饲养的8天龄油桐尺蠖幼虫为供试虫,测定用同一标准方法生产的油桐尺蠖核型多角体病毒杀虫剂的毒力。当年生产的病毒杀虫剂感染幼虫,其死亡率达97.03％,LC50为2.35×10~3PIB/ml。室温保存2年、7年和10年的病毒杀虫剂,其病毒活性分别丧失6.1％,20.6％和90.2％。

油桐尺蠖核型多角体病毒(羊楼洞株)基因组特性

用多种限制性内切酶单酶切、双酶切分析了油桐尺蠖核型多角体病毒（羊楼洞株）基因组DNA，同时用[α－32p）－dATP对几种酶的酶切产物进行末端标记。结果表明，此株病毒基因组约129kb，组成比较单一。与国内其它分离株基因组大小及酶切电泳图谱均有较大差别。

油桐尺蠖核型多角体病毒毒力的生物测定

我们分离的油桐尺蠖(Buzura suppressaria)核型多角体病毒(BsNPV)GW-846是一种极有潜力的生物杀虫剂。本文通过叶片感染,添食饲喂进行其毒力的生物测定,感染剂量与三龄幼虫死亡率的回归直线方程为y=2.23+x。由此计算的LD_(50)为5.91×10~2/cm^2叶片。当感染剂量为1.25和2.0×10~4PB/头虫时,LT_(50)为4.8和4.9d,各龄幼虫均很敏感。五龄幼虫的LT_(50)也只有7.7d。工作中,我们推导了一个计算死亡率的公式,有一定的实用价值。

油桐尺蠖核型多角体病毒感染Bs484细胞的研究

本文报道利用油桐尺蠖核型多角体病毒感染处于不同培养基及不同培养时间的Ｂｓ４８４细胞的部分感染效果和特征。结果表明，细胞培养基的类型和细胞传代后的时间对病毒感染率和多角体产量以及其它感染特征都有比较明显的影响；经过比较，处于Ｇｒａｃｅ培养基组的传代后三天的Ｂｓ４８４细胞是一个理想的ＢｓＮＰＶ感染受试系统。同时发现，健康的油桐尺蠖血淋巴具有提高细胞活性及病毒感染效果的作用。

油桐尺蠖核型多角体病毒增殖及其活性检测

为探索利用油桐尺蠖核型多角体病毒(BuSuNPV)来防控危害桉树的油桐尺蠖的方法,以一定浓度的病毒感染室内人工饲养的油桐尺蠖幼虫,幼虫致死后分离提纯其上病毒并使其增殖,对所用增殖病毒感染的幼虫观测幼虫死亡率,并计算半致死浓度LC50、半致死量LD50、半致死时间LT50。结果表明BuSuNPV专一性强,对危害桉树上的油桐尺蠖幼虫具有较强的浸染力;病毒的增殖量随龄期增加而加大,2~5龄幼虫病毒的增殖量为2.06×105PIB^1×108PIB/虫,所增殖的病毒特异性强,对油桐尺蠖幼虫具有较强的致死性,其LC50=2.15×104PIB/mL,LD50=8.395×103PIB/头,以1×107PIB/mL感染3龄幼虫的LT50为6.7 d。说明用室内人工饲养的油桐尺蠖幼虫来增殖的BuSuNPV具有较高的杀虫活性,可考虑进一步开发利用用于林间防治该害虫。

油桐尺蠖核型多角体病毒在Bs484细胞中的感染特性研究

本文研究了油桐尺蠖核型多角体病毒(简称BsNPV)在油桐尺蠖成虫卵巢细胞系(Bs484)中的以下感染特性:1.病毒接种传代3-4天的细胞时,病毒感染率最高;2.病毒按种量在一定范围内与感染细胞的多角体总产量平行;3.病毒在细胞中连续传代七次后其滴度无明显变化;4,病毒基因组在感染细胞后6小时左右开始合成,并于感染后14小时达到最大。此外,本实验还发展了一种用于检测感染细胞中的病毒核酸的简便方法。

油桐尺蠖核型多角体病毒DNA聚合酶基因的克隆和序列分析

用PCR方法从油桐尺蠖核型多角体病毒 (BusuNPV)中扩增出DNA聚合酶基因片段 ,经pGEM T载体克隆到大肠杆菌DH5α菌株中。经自动序列分析仪测出DNA聚合酶基因 2 379bp长的核苷酸序列 ,推导出 793的氨基酸序列。氨基酸同源性比较显示 ,BusuNPV与HzSNPV的同源性最高 ,达 57% ;与OpMNPV的同源性最低 ,为 39.6 %。

油桐尺蠖核型多角体病毒在同源和异源细胞中复制效果的比较

自从昆虫细胞系建立以后,杆状病毒在体外系统中的复制一直是人们感兴趣的课题。油桐尺蠖核型多角体病毒(Bozura suppressaria Nuclear Polyhedrosis Virus,Bs一NPV)作为一种生物杀虫剂已成功地在茶园、杉木林中大面积使用,并已建立了对该病毒敏感的细胞系。多粒包埋型核多角体病毒(MNPV)在体外复制成功的报道较多。有的MNPV在体外感染的范围较宽,不仅能感染同源的细胞系,亦能感染异源的细胞系。单粒包埋型核多角体病毒(SNPV)在体外复制的报道较少,且大多数SNPV仅在同源细胞系内增殖。BsNPV是一种SNPV。本文用BsNPV接种1种同源细胞和3种异源鳞翅目细胞,比较BsNPV的感染和复制规律的异同。

油桐尺蠖核型多角体病毒杀虫剂的血清学检测

油桐尺蠖是一种暴食性害虫,危害茶树、油桐、漆树、杉木、柑橘等多种经济林木及果树,在国内分布于南方13省市。自70年代末,从茶树自然罹病的油桐尺蠖幼虫,分离到油桐尺蠖核型多角体病毒以来,经过大面积田间应用以及安全性试验,证明该病毒制剂是一种安全、高效的杀虫剂。为了推广这一技术,我们研制以人工饲料饲养幼虫,用组织培养方法提供毒源,感染幼虫,提取多角体,

油桐尺蠖核型多角体病毒感染Bs484细胞的增殖与病理研究

用油桐尺蠖核型多角体病毒（ＢｓＮＰＶ）感染Ｂｓ４８４细胞，对感染后病毒增殖的部分性质及细胞病理变化进行了研究。结果表明：１．病毒子代的增殖在感染后的不同时间具有不同的变化形式，且增殖量与感染剂量具有一定程度的相关，２．病毒感染细胞后１２小时开始在培养物上清检测到明显的胞外病毒粒子；３．就ＢｓＮＰＶ的增殖而言，２４～２６℃是其最佳发育温度；４．病毒感染细胞后的明显病变特征是核内充满多用体，细胞堆积以及细胞体积膨大，同时观察到二类感染细胞，一种核内含较多的多角体，另一种核内则只有几个多用体。

油桐尺蠖核型多角体病毒多角体蛋白的理化性质及二级结构预测

由SDS及梯度胶电泳测得油桐尺蠖核型多角体病毒（BsNPV）多角体蛋白天然状态及亚基分子量分别为363kD与31.5kD，从而推断此蛋白为十二聚体，亚基间无二硫键作用．BsNPV多角体蛋白的远紫外圆二色谱显示，它的二级结构含有31．7％的α螺旋，23．8％的β折叠及44．5％的无规卷曲，与二级结构预测结果相符．通过荧光光谱实验推知，BsNPV多角体蛋白的表面疏水性弱，其色氨酸残基位于蛋白疏水核内部．

油桐尺蠖核型多角体病毒防治油桐尺蠖的研究

油桐尺蠖能被油桐尺蠖核型多角体病毒感染致死。防治试验表明:病毒浓度大时,潜伏期短,死亡快、死亡率大,浓度低时,潜伏期相应延长,死亡率也相应增大;不同的感染方式其致病力不同,死亡时间也不相同;在林地大面积防治效果为95％以上,并有远距离的扩散和后效作用。

甜菜夜蛾核型多角体病毒颗粒剂制备及其抗逆性能评价

甜菜夜蛾核型多角体病毒(SeNPV)具有专一性和高效性,可以有效控制甜菜夜蛾种群,而且对环境和生态安全。为了提高甜菜夜蛾核型多角体病毒的稳定性,以海藻酸钠为包埋材料,通过优化载体用量和进料速率等条件,采用喷雾法制备了病毒颗粒剂,并对其相关性能进行了表征和评价。结果表明:海藻酸钠质量浓度为1%,进料速率为13mL/min时制备的病毒颗粒剂呈不规则形状,颗粒剂产率79.4%,病毒含量1.0×10^(6)PIB/g,D_(50)在130μm左右。经颗粒剂海藻酸钠包埋的甜菜夜蛾核型多角体病毒具有良好的热稳定性和抗紫外性能,同时不会影响其对甜菜夜蛾幼虫的致病力。

灰茶尺蠖核型多角体病毒对两种尺蠖的致病性

灰茶尺蠖核型多角体病毒(Ectropis grisescens Nucleopolyhedrovirus,EgNPV)是灰茶尺蠖幼虫的重要病原微生物。为明确其对茶树重要害虫尺蠖类的两个近缘种灰茶尺蠖Ectropis grisescens Warren和茶尺蠖E.obliqua Prout的致病性,进行了一系列的生物测定。结果表明,EgNPV对2龄灰茶尺蠖和茶尺蠖幼虫的剂量对数-死亡机率值回归方程和LC50分别为y=0.943x+0.3582,LC50=8.3×10^(4) PIB/mL;y=0.663x+1.614,LC50=1.3×10^(5) PIB/mL。当使用不同浓度EgNPV处理不同龄期灰茶尺蠖和茶尺蠖幼虫时发现,两种幼虫致死率趋势大致相同;在虫龄一致时,达到相同的致病率,灰茶尺蠖所需的时间比茶尺蠖平均短一天。使用2×106 PIB/mL浓度处理不同代别灰茶尺蠖和茶尺蠖2龄幼虫,在第1、2和第6代,EgNPV对两种幼虫的致死率均大于80%。上述结果表明灰茶尺蠖核型多角体病毒对灰茶尺蠖、茶尺蠖的幼虫都比较敏感,具有致死能力。这为灰茶尺蠖核型多角体病毒的合理应用提供理论基础。