油橄榄叶提取物对Botrytis cinerea抑菌效果与机理研究

为研究油橄榄叶提取物对灰葡萄孢(Botrytis cinerea)的抑制作用及机理,本试验采用溶剂浸提法制备油橄榄叶提取物,再与灰葡萄孢作用,通过测定菌落直径、菌丝生物量探究提取物对灰葡萄孢菌体生长的抑制作用,通过测定相对电导率、核酸和蛋白质泄露量考察油橄榄叶提取物对菌体细胞膜完整性的影响;并基于平板培养体系,采用碘化丙啶(PI)染色法研究提取物对灰葡萄孢细胞膜通透性、活性氧(ROS)代谢的影响。结果表明,灰葡萄孢对油橄榄叶90%乙醇提取物具有高敏感性,经油橄榄叶提取物处理后其菌落直径和菌丝生物量分别为对照的20%、8.91%,膜电导率、核酸以及蛋白质泄漏量显著增加;孢内超氧阴离子(O_(2)^(·-))、过氧化氢(H_(2)O_(2))含量显著增加,还原型辅酶Ⅱ氧化酶(NOX)、过氧化氢酶(CAT)、过氧化物酶(POD)活性上升,超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽还原酶(GR)、抗坏血酸过氧化物酶(APX)活性下降。综上,油橄榄叶90%乙醇提取物处理后的灰葡萄孢细胞膜受到损伤,导致细胞内容物外泄,并诱导ROS在胞内积累,加剧了膜脂质过氧化,使丙二醛(MDA)含量增加,进而抑制了菌体的生长。本研究结果为油橄榄叶提取物在果蔬杀菌剂中的应用提供了理论依据。

油橄榄叶抗氧化活性成分及其作用机制研究进展

油橄榄叶是油橄榄种植和橄榄油加工过程中产生的副产物,含有丰富的黄酮、裂环烯醚萜、羟基肉桂酸、简单酚和三萜酸等抗氧化活性物质,具有清除活性氧自由基、抵抗机体氧化应激的作用。本文对油橄榄叶中抗氧化活性成分的提取制备方法、抗氧化活性评价方法及抗氧化作用机制进行全面综述,并对油橄榄叶提取物应用的未来发展方向进行了展望,以期为油橄榄叶资源的综合利用提供参考。

油橄榄叶中总黄酮含量测定方法探讨

建立以芦丁为对照品的油橄榄叶中总黄酮含量的测定方法。采用Al(NO3)3-NaNO2-NaOH和AlCl3两种显色法测定油橄榄叶中总黄酮的含量,并分别考察了两种方法对测定结果的影响。结果表明,AlCl3显色法适宜于油橄榄叶总黄酮的含量测定。该法操作简便,线性关系良好,准确度、重复性和稳定性较好,可用于油橄榄叶总黄酮含量测定,并为中药和天然产物中总黄酮的含量测定提供参考。

UV-Vis光谱差减法测定油橄榄叶中橄榄苦苷含量初探

建立了紫外-可见(UV-Vis)分光光谱测定油橄榄叶中橄榄苦苷含量的方法。以芦丁和橄榄苦苷为对照品,分别采用NaNO2-Al(NO3)3-NaOH络合体系和AlCl3络合体系进行显色。以NaNO2-Al(NO3)3-NaOH体系显色后于510 nm处可测得油橄榄叶中总黄酮和橄榄苦苷的吸光度之和;而以AlCl3体系显色后于415 nm处仅测得总黄酮的吸光度,橄榄苦苷无吸收。利用橄榄苦苷在两种显色体系中的吸收特性差别,通过差减法换算后可间接测定样品中橄榄苦苷的含量。以UV-Vis差减法测得油橄榄叶及其纯化浸膏中橄榄苦苷的平均含量分别为11.6%和63.4%,3次测定的相对标准偏差(RSD)分别为1.5%和1.2%,其结果与高效液相色谱法(HPLC)测定结果的相对误差小于4.0%。该方法可替代HPLC用于油橄榄叶中橄榄苦苷的含量测定,为油橄榄叶及其制品的质量控制提供了一种快速、简便、成本低廉的分析方法。

油橄榄叶中羟基酪醇含量及提取工艺研究

油橄榄含有橄榄苦苷、黄酮类和羟基酪醇等多酚抗氧化物。采用ODS(4.6 mm×200 mm,5μm)色谱柱,紫外检测波长为230 nm,甲醇-0.2%醋酸水溶液6∶94(体积比)为流动相,流速1 mL/min,建立羟基酪醇的HPLC分析方法,对不同品种的油橄榄叶进行含量分析。结果表明:10个品种油橄榄叶中羟基酪醇质量分数范围在0.3%～0.8%之间,小莱星含量最高,配多灵含量最低。通过单因素和正交试验研究了超声波提取油橄榄叶中羟基酪醇的工艺,1 g油橄榄叶粉末正交试验的优化结果为:功率120 W、90%甲醇提取、料液比1∶20(g∶mL)、时间20 min。采用90%甲醇提取油橄榄叶,提取液经AB-8大孔树脂、硅胶柱层析和HPLC制备色谱,分离质量分数95%以上的单体,通过MS、NMR鉴定该化合物为羟基酪醇。

引种阿斯油橄榄叶中橄榄苦苷提取分离及结构鉴定

油橄榄叶主要含有橄榄苦苷、黄酮和多酚等抗氧化物。本研究以引种的希腊油橄榄阿斯为原料,采用乙醇-水(体积比60∶40)对油橄榄叶进行提取,依次用石油醚和乙酸乙酯萃取,乙酸乙酯萃取相经过硅胶柱层析,再用HPLC制备色谱,得质量分数95%以上的单体,通过IR、UV、MS、NMR鉴定该化合物为橄榄苦苷。橄榄苦苷经过酸水解,得到两个主要产物,一个为羟基酪醇,另一个为榄香酸。

佛奥油橄榄叶营养成分测定与分析

采用GC-MS、ICP-AES、杜马斯燃烧法及离子色谱-积分安培检测法等分别测定了佛奥油橄榄叶中的脂溶性成分、矿质元素、蛋白质、氨基酸等营养成分。结果显示,油橄榄叶中酯类占挥发性总成分的26.81%,脂肪酸占18.46%,1-十九碳烯和角鲨烯占1.62%,油酸酰胺占2.00%,维生素E占2.68%,可可碱6.88%,(Z)-9,17-十八碳二烯醛占5.53%;而油橄榄叶中灰分占4.9%,其灰分中Ca质量分数最高,占总灰分的30.5%,其次为K、Mg和P,不含As、Hg和Pb重金属元素。同时研究结果显示油橄榄叶中蛋白质为11.46%,粗脂肪3.0%,粗纤维占15.8%,氨基酸丰富且质量分数较高,氨基酸总量约占干物质的0.991%。尤其富含甘氨酸、组氨酸和缬氨酸,但精氨酸含量甚微。因此,油橄榄叶因其含有诸多动物所需的营养成分可为生物饲料领域提供优质饲料的加工原料。

油橄榄叶提取物干预海洛因依赖小鼠认知和氧化损伤及细胞凋亡的变化（英文）

目的探讨油橄榄叶提取物(OLE)对海洛因依赖小鼠认知和氧化损伤及细胞凋亡的影响。方法 150只小鼠皮下注射海洛因(10 mg/kg)40 d,再分别给予不同剂量的(0、50、100、200 mg/kg)的OLE进行皮下注射治疗,用Morris水迷宫观察空间学习记忆能力的变化,用透射电子显微镜观察海马细胞结构的改变,用比色法检测小鼠海马超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化酶(GPx)、还原型谷胱甘肽(GSH)的活性及丙二醛(MDA)的含量,免疫组织化学和Western blotting检测海马Bax蛋白和Caspase-3的表达。结果模型组小鼠海马神经元核膜不规则,细胞器结构异常或空泡化,小鼠逃避潜伏期和逃避的距离高于正常组,在目标象限探索的时间及游泳距离占总距离的百分比低于正常组(P<0.01),海马组织SOD、CAT、GPx、GSH活性低于正常组,MDA含量高于正常组(P<0.01),海马组织Bax蛋白和caspase-3的表达高于正常组(P<0.01)。OLE治疗组小鼠海马神经元损害程度减轻,小鼠逃避潜伏期和逃避的距离缩短,在目标象限探索的时间及游泳距离占总距离的百分比延长,海马组织SOD、CAT、GPx、GSH活性又升高,MDA含量及Bax蛋白和Caspase-3的表达又显著降低(P<0.05或P<0.01)。结论 OLE对海洛因诱导的脑损伤的神经保护与其具有抗氧化能力。抑制细胞凋亡的特性有一定的关系。

油橄榄叶中羟基酪醇的含量变化规律研究

以90%甲醇-水溶液为提取剂,用超声波提取不同品种、月份和树龄油橄榄叶中羟基酪醇,采用HPLC方法分析5个品种油橄榄叶中羟基酪醇的含量变化规律,同时考察阿斯、莱星等10种油橄榄叶放置3年后其中橄榄苦苷转化为羟基酪醇的趋势。结果表明:油橄榄叶中羟基酪醇含量一年生长期内有1个高峰期和1个低谷期,5～6月份的含量最高;11～12月份最低;不同树龄和品种间含量差异较大,油橄榄叶中羟基酪醇树龄6年以下含量明显高于18年以上的;6年生鄂植8号幼叶中5月份达到0.768%,6年生九峰6号12月份最低,为0.058%;阿斯、莱星等10种18年以上树龄油橄榄叶放置3年后橄榄苦苷明显减少,羟基酪醇的含量增加1倍,因此大量橄榄苦苷在贮存期被降解为羟基酪醇。

HPLC研究油橄榄叶中橄榄苦苷的含量变化规律

研究了油橄榄叶中橄榄苦苷含量的变化规律,以及加工和提取条件对提取得率的影响;采用HPLC法测定橄榄苦苷的含量。对油橄榄叶中橄榄苦苷含量研究表明,一年生长期内有两个高峰期,分别是在2月份和5月份,其中2月份最高,两个低谷期则是在11月份和4月份;品种间差别很大,科拉地17.2%,最低的配多灵仅为1.65%;20年生较3年生的高。超声波辅助提取法较加热法提取得率高,自然阴干较烘干的提取得率高。

响应面法优化油橄榄叶中橄榄苦苷超声辅助提取工艺

目的:研究油橄榄叶中橄榄苦苷超声辅助提取最佳工艺条件。方法:选定甲醇体积分数、料液比和提取时间作为影响因素,以橄榄苦苷提取率为评价指标。在单因素试验的基础上,通过3因素3水平Box-Behnken试验,建立橄榄苦苷提取率的二次多项式回归方程,经响应面回归分析得到优化组合条件。结果:最佳工艺条件为甲醇体积分数93.5%、料液比1:25(g/mL)、提取时间26min。结论:油橄榄叶中橄榄苦苷提取率可达7.83%。

油橄榄叶提取物的抑菌活性研究

以牛津杯扩散法考察油橄榄叶提取物(OLE)对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等8种致病菌的抑菌活性,用稀释法分析OLE对8种细菌生长的影响,并探究最低抑菌质量浓度(MIC)和最低杀菌质量浓度(MBC)。结果表明:以盐酸小檗碱作为对照,OLE对蜡状芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、抗四环素大肠杆菌的抑菌作用优于盐酸小檗碱;OLE对表皮葡萄球菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌的抑菌作用较强(MIC 1 mg/mL,MBC 2 mg/mL)。20 mg/mL的OLE对大肠杆菌的抑制作用最强,为极度敏感(大肠杆菌的d=(25.07±3.02)mm,抗四环素大肠杆菌的d=(24.89±1.58)mm);葡萄球菌次之(表皮葡萄球菌的d=(20.11±1.02)mm,金黄色葡萄球菌的d=(21.35±2.06)mm,金黄色葡萄球菌(SH7)d=(20.01±1.21)mm);而芽孢杆菌处于中度敏感状态。OLE除对铜绿假单胞菌的对数生长期无明显影响外,对其余7种细菌的对数生长期均有延缓作用。OLE具有较强的抑菌活性,可作为一种绿色安全的植物源抑菌制剂。

日粮中不同油橄榄叶添加水平对育肥獭兔肉品质及抗氧化能力的影响

研究日粮中添加不同水平油橄榄叶对育肥期獭兔肉品质及抗氧化能力的影响。选用2月龄生长獭兔在基础日粮中添加不同水平的油橄榄叶(A0、A1、A2和A3)进行实验。结果表明:在初始体质量无显著差异的情况下,日粮中不同油橄榄叶添加水平显著影响獭兔肉品质。添加油橄榄叶对背最长肌的pH值影响不显著,添加10%～15%水平对股二头肌的pH值影响显著(P<0.05),随着贮存时间增加,添加油橄榄叶能延缓pH值下降;A2和A3添加组能增加獭兔肉在贮存24h和48h的持水性(P=0.0413),降低A2和A3组獭兔肉的蒸煮损失(P<0.05);添加15%增加獭兔肉的嫩度;添加10%增加肉的亮度和红色度(P<0.05),降低黄色度;兔肉贮存时间与兔肉色彩变化呈负相关(P<0.05),增强肌肉脂质的稳定性;油橄榄叶添加量对肝脏和肌肉的抗氧化酶活性有影响,添加10%～15%油橄榄叶的影响显著(P<0.05),增强獭兔机体抗氧化能力。

广元地区油橄榄叶多酚提取条件及其抗氧化活性研究

采用乙醇溶剂浸提法提取广元地区油橄榄叶多酚物质。通过单因素和正交试验研究了料液比、乙醇体积分数、浸提温度以及浸提时间对橄榄叶多酚提取量的影响。结果表明:影响橄榄叶多酚提取量的主要因素及顺序为浸提温度>乙醇体积分数>浸提时间>料液比。广元地区油橄榄叶多酚的最佳提取工艺条件为:料液比1∶35(g/mL),乙醇体积分数为60%,浸提温度55℃,浸提时间1.75 h,油橄榄叶多酚提取量为57.22 mg/g,其对DPPH自由基的半清除质量浓度EC50为36.16μg/mL。

油橄榄叶提取物体内外抗氧化活性研究

为评价油橄榄叶提取物的体内和体外抗氧化能力,体外抗氧化活性评价采用DPPH·和·OH清除能力实验,体内抗氧化活性评价采用D-半乳糖连续背部注射制作亚急性衰老小鼠模型,以VE为阳性对照组,油橄榄叶提取物58、116、232 mg/kg BW灌胃30 d,处死后测定MDA含量、SOD和GSH-Px活性,观察肝脏和大脑组织病理形态学的改变。结果表明,衰老小鼠MDA的含量明显升高,血清、肝组织中的SOD、GSH-Px和脑组织中的SOD活性均明显降低,与正常小鼠比较有差异(P<0.05);各剂量的油橄榄叶提取物均能提高衰老小鼠血清、肝组织中的SOD、GSH-Px和脑组织中的SOD活性,并降低MDA的含量;油橄榄叶提取物可明显改善D-gal致衰老小鼠肝脏、大脑皮质和海马神经元的细胞形态和水肿情况。油橄榄叶提取物清除DPPH·和·OH的IC50分别为0.064 mg/m L和0.066 mg/m L。实验结果表明油橄榄叶提取物具有较好的抗氧化活性。

超高压液相色谱-飞行时间质谱法分析国产油橄榄叶中酚类化合物

建立国产油橄榄(Olea europaea L.)叶中酚类化合物的超高压液相色谱-飞行时间质谱(ultra-performance liquidchromatography/quadrupole time-of-flight mass spectrometry,UPLC/Q-TOF-MS)定性分析方法。液相色谱条件为Waters BEH-C18(10.0mm×2.1mm,1.7μm)色谱柱,乙腈和甲酸溶液梯度洗脱,流速0.25mL/min,紫外检测波长280nm;质谱条件为Waters ACQUITY Q-TOF-MS质谱仪,电喷雾电离接口,负离子模式检测。采用该方法得到了国产油橄榄叶提取物的紫外检测的色谱图、负离子监测的总离子流图以及一级质谱图,成功鉴定了国产油橄榄叶中的15种酚类化学成分。

油橄榄叶对断奶獭兔仔兔生长与血液指标的影响

为研究日粮中添加不同水平的油橄榄叶对断奶獭兔仔兔生长性能及血液指标的影响,选取64只35~40日龄断奶仔兔,随机分成4组,对照组饲喂基础日粮＋体重5%的黑麦草,试验组分别在基础日粮基础上添加体重5%、10%、15%的油橄榄叶。预饲期7 d,正试期42 d。结果表明：日粮油橄榄叶添加量对平均日采食量和料重比没有显著影响（P〉0.05）,对日增重有显著影响（P〈0.05）。添加油橄榄叶对细胞数量和血红蛋白含量的影响不显著（P〉0.05）,对白细胞数和中性粒细胞数影响显著（P〈0.05）,白细胞和中性粒细胞数有明显减少的趋势,日粮添加油橄榄叶提高了仔兔免疫力和成活率。

不同菌种对油橄榄叶发酵饲料的影响

以黑曲霉、白地霉、米曲霉、绿色木霉、产朊假丝酵母和热带假丝酵母为固态发酵菌种,考察单菌及混合菌种对油橄榄叶发酵饲料中纤维素酶活(β-葡萄糖苷酶活、羧甲基纤维素酶活及滤纸酶活),蛋白质及总单宁含量的影响。结果表明,单菌发酵效率最高的菌种为黑曲霉,发酵3天时纤维素酶活最高,β-葡萄糖苷酶活10.53 U/m L、羧甲基纤维素(CMC)酶活10.61 U/m L、滤纸(FPA)酶活4.02U/m L,发酵5天时蛋白质最高达14.61%,发酵7天总单宁降解率最高达84.14%;混菌发酵效率最高的为黑曲霉与产朊假丝酵母的组合,其最佳比例为1∶1(体积比),发酵时间5天,纤维素酶活最高,β-葡萄糖苷酶活12.45 U/m L、CMC酶活12.59 U/m L及FPA酶活5.51 U/m L,发酵7天时蛋白质最高可达18.63%,总单宁降解率最高为86.49%。

基于高剪切分散乳化技术提取油橄榄叶中有效成分的样品前处理新方法

本文研究了基于高剪切分散乳化技术(High-Speed Shear Dispersing Emulsification,HSDE)提取油橄榄叶中有效成分的样品前处理新方法。利用HPLC测定橄榄苦苷含量,利用UV(AlCl3显色法)测定总黄酮的含量。通过单因素试验分别考察溶剂、转速、料液比、时间及温度,筛选出最佳条件。以浸膏得率、橄榄苦苷和总黄酮的含量为综合指标进行评价,通过响应面中的中心组合设计,优选出最佳提取参数:温度40℃,料液比1∶51.72,溶剂60%乙醇,转速16000 rpm,提取时间150 s。结果表明高剪切分散乳化技术可以快速高效的提取油橄榄叶中有效成分,是一种较好的样品前处理方法。

油橄榄叶中多酚和黄酮的含量分析

以儿茶素为标准品,采用Folin试剂分光光度法建立油橄榄叶中多酚的分析方法;以芦丁标准品为对照,建立油橄榄叶中黄酮的分析方法,研究不同树龄和干燥方式对油橄榄叶中黄酮和多酚含量的影响。结果表明:3年生油橄榄叶中黄酮和多酚的含量明显高于20年以上树龄的油橄榄叶。高温或阳光能降低黄酮和多酚的含量,采用大孔树脂精制油橄榄叶提取物,可获得多酚含量在80%以上的油橄榄叶提取物。