舌下含服粉尘螨疫苗免疫治疗法对哮喘小鼠树突状细胞及NF-κB的影响

目的通过对哮喘模型小鼠舌下含服粉尘螨疫苗进行治疗,研究治疗前后树突状细胞(dendritic cell,DC)和NF-κB在颌下淋巴结和肺部的变化,比较高剂量疫苗和低剂量疫苗对哮喘小鼠的治疗疗效。方法采用常规方法制备舌下含服粉尘螨疫苗。28只BALB/c小鼠按随机数字表法分为正常组(A组)、哮喘模型组(B组)、粉尘螨高剂量治疗组(C组)、粉尘螨低剂量治疗组(D组),每组7只。检测小鼠气道高反应性,观察支气管肺胞灌洗液(BALF)中细胞计数和分类,肺组织HE染色观察小鼠肺部炎症状况;通过免疫组织化学染色和体视学测量观察各组小鼠肺组织NF-κB阳性细胞的变化和颌下淋巴结33D1阳性DC的表达。结果 C组BALF中嗜酸性细胞计数、肺组织炎症细胞浸润较B组显著减少(P<0.05),气道高反应性下降(P<0.01)。C、D组哮喘小鼠颌下淋巴结33D1阳性DC和肺部NF-κB阳性细胞的数密度、体密度、表面积密度均下降,C组比D组下降更明显(P<0.01)。结论高剂量舌下含服粉尘螨疫苗治疗哮喘小鼠有显著疗效,与DC的免疫耐受和NF-κB的下调密切相关。

南星平喘汤治疗激素抵抗型哮喘大鼠的影响及其机制研究

目的:观察南星平喘汤治疗激素抵抗型哮喘大鼠的疗效及机制研究。方法:采用随机数字表将SPF级70只SD大鼠分为对照组,模型组,氨溴索组,南星平喘汤低(3.5 g/kg)、中(7 g/kg)、高剂量(14 g/kg)组,以及南星平喘汤(7 g/kg)联合氨溴索(氨溴索注射液15μg/g)组(简称联合组),每组10只。建模成功后,对照组及模型组予生理盐水7μL/g灌胃,各药物组以相应药物干预,1次/d,持续14 d。采用大鼠肺功能仪检测用力肺活量(forced vital capacity,FVC)、第三秒用力呼气容积(forced expiratory volume in 0.3 seconds,FEV_(0.3))、呼气峰值流量(peak expiratory flow,PEF);采用瑞氏-吉姆萨染色法检测大鼠肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中白细胞、中性粒细胞、淋巴细胞及嗜酸性粒细胞数目;采用酶联免疫吸附法检测大鼠白细胞介素(interleukin,IL)-10、IL-14、IL-17、干扰素γ(interferon-γ,IFN-γ)的水平;采用苏木精—伊红染色法检测大鼠肺组织病理学形态;采用Western Blot法检测大鼠p38丝裂原活化蛋白激酶(p38-MAPK)、核因子κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)蛋白。结果:与模型组及氨溴索组对比,南星平喘汤低、中剂量组和联合组FEV_(0.3)、FVC、PEF均升高,联合组升高显著,差别有统计学意义(P<0.05);肺泡灌洗液BALF中,南星平喘汤低、中剂量组和联合组炎症细胞数量均降低,以联合组降低显著(P<0.05);南星平喘汤低、中剂量组及联合组大鼠IL-10降低,L-14、IFN-γ水平升高,差别有统计学意义(P<0.05);肺组织p38-MAPK、NF-κB水平降低,南星平喘汤联合氨溴索组改善更显著(P<0.05)。治疗组的肺组织病理学形态较模型组炎症细胞渗出、结构损坏不同程度改善。结论:南星平喘汤可有效降低激素抵抗型哮喘大鼠炎症反应,与抑制激活p38-MAPK、NF-κB信号通路有关,南星平喘汤联合氨溴索疗效较佳。

电针预处理对大鼠脑缺血损伤后脑内炎症反应及NF-κB的影响

目的:探讨电针(EA)预处理对大鼠脑缺血再灌注后脑内炎症反应及NF-κB表达的影响。方法:将64只SD大鼠随机分为假手术(Sham)组、单纯电针(EA)组、缺血(MCAO)组及电针预处理(EA+MCAO)组。制作大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)模型再灌注48h后行神经行为学评分,处死大鼠取脑后分别使用TTC染色、ELISA及Western Blot技术测定脑梗死容积、半暗带脑组织炎症因子水平、髓过氧化物酶(MPO)活性及NF-κB核转位情况。结果:MCAO组大鼠神经行为学评分明显低于Sham组(P<0.05),脑梗死容积百分比增加,脑内促炎因子水平增高而抑炎因子降低,MPO活性升高,NF-κB发生核转位(P<0.05);与MCAO组相比,EA+MCAO大鼠神经行为学评分改善,脑梗死容积降低,脑内促炎因子水平降低而抑炎因子增高,MPO活性降低,同时NF-κB核转位被抑制(P<0.05)。结论:电针预处理通过抑制NF-κB核转位使脑内炎症反应减轻,可有效改善缺血再灌注损伤后的神经功能缺陷。

耐力训练对STZ诱导糖尿病大鼠背根神经节内NF-资B活性的调节作用

目的:研究不同强度耐力训练对糖尿病大鼠背根神经节(DRG)内的核转录因子NF-资B活性的调节作用,为临床糖尿病神经并发症的运动疗法提供分子生物学依据。方法:雄性SD大鼠44只,随机分为糖尿病组(34只)和正常组(10只)。其中糖尿病组大鼠经尾静脉注射链脲霉素,建立糖尿病模型,然后随机分为55%VO2max运动组(E1,n=6)、75%VO2max运动组(E2,n=6)、55%VO2max运动加胰岛素治疗组(EI1,n=6)、75%VO2max运动加胰岛素治疗组(EI2,n=6)、胰岛素治疗非运动组(DI,n=5)、非胰岛素治疗非运动组(D,n=5)。另外10只正常血糖大鼠分为一次力竭运动组(EC,n=5)和非运动组(C,n=5)。耐力训练采用活动平板,胰岛素采用隔日皮下注射,共8周。运用ELISA法测定背根神经节内NF-资B活性。结果:D组DRG内NF-资B活性显著高于EC和C组(P<0.01),也显著高于E1、E2、EI1组(P<0.05)以及EI2和DI组(P<0.01)。结论:糖尿病大鼠更易发生周围神经的氧化应激损伤;耐力训练可以有效地抑制糖尿病大鼠背根神经节NF-资B活性,干预糖尿病神经病变。

慈菇消脂丸对非酒精性脂肪性肝病大鼠NF-κB和iNOS表达的影响

目的:观察慈菇消脂丸对非酒精性脂肪性肝病(nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)大鼠肝组织核转录因子kappaB(nuclear factor-κB,NF-κB)和诱生型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)表达的影响,探讨慈菇消脂丸对NAFLD的作用机制。方法:采用高脂饮食喂饲大鼠建立NAFLD模型。将造模成功后的大鼠随机分为模型对照组,慈菇消脂丸高、中、低剂量组,盐酸吡格列酮片组,另设正常对照组,每组10只。慈菇消脂丸高、中、低剂量组依次灌胃慈菇消脂丸水煎剂6.48,3.24,1.62 g/kg体质量;盐酸吡格列酮片组灌胃盐酸吡格列酮片1.35 g/g体质量;正常对照组和模型对照组每日灌胃等容量的生理盐水。灌胃体积为10μL/g体质量,1 d 1次,连续灌胃6周。采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法测定iNOS mRNA表达,采用Western-Blot法测定NF-κB、iNOS蛋白表达水平。结果:与正常对照组对比,模型对照组大鼠肝组织中iNOS mRNA水平升高(P<0.01),NF-κB、iNOS蛋白表达增强(P<0.01)。与模型对照组对比,慈菇消脂丸高、中、低剂量组及盐酸吡格列酮片组大鼠肝组织iNOS mRNA水平均降低(P<0.01);除慈菇消脂丸低剂量组对iNOS蛋白表达无影响外,其余各药物组NF-κB、iNOS蛋白表达均显著减低(P<0.01)。慈菇消脂丸高剂量组下调NF-κB蛋白表达作用优于盐酸吡格列酮片组(P<0.01)。结论:慈菇消脂丸能够明显改善NAFLD大鼠肝功能及血脂;通过下调NF-κB、iNOS蛋白表达,抑制肝细胞凋亡来治疗NAFLD。

布地奈德对哮喘大鼠气道重塑及气道平滑肌中Toll样受体4表达的影响

目的:探讨布地奈德对哮喘大鼠模型气道重塑及平滑肌中Toll样受体4表达的影响。方法:将30只SPF级SD大鼠随机分为支气管哮喘组(A组)、健康对照组(B组)、布地奈德治疗组(C组)3组,每组10只。制备大鼠肺组织病理切片,HE染色后观察各组气道结构改变情况,并测定支气管壁厚度(WAt/Pi)、支气管壁平滑肌厚度(WAm/Pi)及支气管平滑肌细胞核数(N/Pi),利用Western-Blot方法检测气道平滑肌中TLR4的蛋白表达。结果:光镜下可见A组支气管上皮细胞脱落、管壁炎症细胞浸润、杯状细胞增生、基底膜和平滑肌明显增厚,而C组上述改变较A组明显减轻。与B组比较,A组支气管管壁厚度、平滑肌厚度及平滑肌细胞核数显著升高(P<0.01),与A组比较,C组支气管管壁厚度、平滑肌厚度及支气管平滑肌细胞核数显著降低(P<0.01)。A组的TLR4的蛋白水平明显高于B组及C组(P<0.01)。结论:吸入布地奈德可以防治气道重塑,可能通过抑制TLR4的表达实现。

核因子κB顺式诱饵元件对哮喘大鼠模型治疗作用的观察

目的 探讨核因子κB(NF κB)顺式诱饵元件治疗支气管哮喘的可行性。方法 通过从气道局部给药的方式 ,将NF κB顺式诱饵寡核苷酸 (N ODN)或无序诱饵ODN(S ODN)转染至哮喘大鼠肺部。运用原位组织杂交、反转录PCR、免疫组织化学、酶联免疫吸附试验及肺部病理学检测和气道反应性测定等方法检测NF κB顺式诱饵ODN对哮喘大鼠肺组织白细胞介素 5 (IL 5 )、诱导型一氧化氮合酶 (iNOS)mRNA和蛋白质表达及肺部炎症反应、气道反应性的影响。结果 ODN转染组大鼠肺部均有明显的FITC着色 ,说明此种局部滴入ODN的方法是可行的。经NF κB顺式诱饵ODN转染的哮喘大鼠 (N ODN组 )IL 5、iNOSmRNA表达均较未治疗的哮喘大鼠 (A组 )明显降低 (N ODNvsA ,0 .17±0 .0 3vs 0 .2 4± 0 .0 5 ,0 .2 4± 0 .0 5vs 0 .77± 0 .10 ,P <0 .0 5 ) ;蛋白质表达亦较A组减少 (40 .0± 10 .8vs80 .0± 2 5 .8,0 .19± 0 .0 4vs 0 .37± 0 .0 6 ,P <0 .0 5 ) ;且其肺部嗜酸粒细胞数量显著减少 (10 .0 0± 2 .94vs 16 .2 5± 4 .6 5 ,P <0 .0 5 ) ,气道反应性降低 (PC50 1.4± 0 .4vs0 .4± 0 .3,P <0 .0 5 )。而无序诱饵ODN转染的哮喘大鼠与未治疗的哮喘大鼠相比 ,上述指标差异无显著性 (P值均 >0 .0 5 )。结论 NF κB顺式诱饵元件整体给?

丹参素冰片酯干预TLR4信号通路抗动脉粥样硬化的机制研究

目的:探讨丹参素冰片酯干预TLR4信号通路抗动脉粥样硬化的作用及其机制。方法:选取SD大鼠60只,随机分为空白组(10只)和实验组(50只),实验组建造AS模型,模型成功后随机将实验组分为模型组,辛伐他汀组,丹参素冰片酯高、中、低剂量组。药物干预4周,采用自动生化分析仪测定血脂,通过免疫组化技术检测大鼠腹主动脉中TLR4、MyD88及NF-κB的表达。结果:丹参素冰片酯可显著降低高脂血症大鼠血清TC、TG、LDL-C水平(P<0.05或P<0.01);与模型组相比,辛伐他汀组及各丹参素冰片酯组均能减少TLR4、MyD88、NF-κB的表达(P<0.05或P<0.01),以丹参素冰片酯高剂量组与辛伐他汀组最为明显(P<0.01)。结论:丹参素冰片酯干预能降低血脂、抑制TLR4信号通路中TLR4、MyD88和NF-κB的表达,其抗AS的作用机制与阻断TLR4/MyD88/NF-κB信号传导通路中相关信号分子的过度激活,抑制炎症细胞在动脉管壁集聚有关。

氧化苦参碱防治慢性肾纤维化机理的实验研究

目的:探讨氧化苦参碱(OM)对大鼠慢性肾纤维化的防治作用,并探讨其可能的作用机制,为氧化苦参碱在临床防治肾脏纤维化的应用提供理论依据。方法:采用实验第1d、第21d尾静脉注射阿霉素(2mg/kg)建立慢性肾纤维化大鼠模型,分为模型组、苯那普利治疗组、氧化苦参碱50mg/kg治疗组和氧化苦参碱100mg/kg治疗组。正常对照组予等量生理盐水尾静脉注射。HE染色观察肾脏病理改变,并应用免疫组织化学法检测肾组织内核因子-κB(NF-κB)和抑制性κB(IκB)蛋白的表达。结果:苯那普利治疗组、氧化苦参碱50mg/kg治疗组和氧化苦参碱100mg/kg治疗组的肾脏病理改变均轻于模型组,组织内核因子-κB蛋白的表达均轻于模型组而抑制性κB蛋白的表达均高于模型组;苯那普利治疗组和氧化苦参碱100mg/kg治疗组的各观察指标均优于氧化苦参碱50mg/kg治疗组,但两者之间差异无显著性。结论:OM可能通过干预阿霉素大鼠肾组织中核因子-κB/抑制性κB信号通路而抑制肾纤维化的发生从而起到保护肾脏的作用。氧化苦参碱100mg/kg浓度组在抑制肾纤维化上可达到与苯那普利同样的疗效。

咳喘安胶囊的镇咳祛痰作用及机理研究

目的:观察咳喘安胶囊的镇咳和祛痰作用及对哮喘小鼠肺NF-κB表达的影响,阐述其作用的可能机制。方法:采用小鼠气管酚红排泌实验观察咳喘安胶囊祛痰作用。以氨水诱导的咳嗽实验观察咳喘安胶囊的镇咳作用。采用卵清白蛋白激发小鼠哮喘,然后采用咳喘安胶囊进行干预,免疫组织化学染色方法观察NF-κB在小鼠肺组织中的表达变化。结果:咳喘安胶囊中、高剂量组能显著促进小鼠气管酚红排泌,而低剂量组则没有明显祛痰作用。咳喘安胶囊中、高剂量组对氨水诱导的咳嗽有明显的延长诱导时间和镇咳作用。各哮喘模型对照组小鼠肺支气管壁NF-κB面积及积分光密度值均明显高于正常组(P<0.01),各用药组小鼠支气管壁NF-κB面积及积分光密度值均显著小于模型对照组(P<0.01),且中药高剂量治疗组支气管上皮细胞及肺泡壁炎性细胞胞核阳性的细胞比例显著低于哮喘组(P<0.05)。结论:咳喘安胶囊有很好的镇咳祛痰作用。咳喘安胶囊能显著降低哮喘小鼠气道壁细胞内NF-κB的表达。提示抑制NF-κB的表达是咳喘安胶囊治疗哮喘的可能机制。