沼泽绿牛蛙病毒的分离及其细胞感染的初步研究

沼泽绿牛蛙病毒的分离及其细胞感染的初步研究张奇亚，李正秋，江育林，梁绍昌，桂建芳（中国科学院水生生物研究所，武汉４３００７２）关键词沼泽绿牛蛙（美国青蛙），病毒，细胞感染ＰＲＥＬＩＭＩＮＡＲＹＳＴＵＤＩＥＳＯＮＶＩＲＵＳＩＳＯＬＡＴＩＯＮＡＮＤＣＥＬ...

沼泽绿牛蛙的核型及银染研究

沼泽绿牛蛙的核型及银染研究樊连春，杨仲安，魏丽华，梁绍昌，桂建芳（中国科学院水生生物研究所武汉４３００７２）关键词沼泽绿牛蛙，核型，Ａｇ－ＮＯＲｓＡＮＩＮＶＥＳＴＩＧＡＴＩＯＮＯＦＴＨＥＫＡＲＹＯＴＹＰＥＡＮＤＡｇ－ＮＯＲｓＯＦＲＡＮＡＧＲＹＬＩＯ￥...

沼泽绿牛蛙皮肤抗菌肽的分离纯化与活性检测

以沼泽绿牛蛙皮肤分泌液为样品,采用C18反相柱液相色谱,使用线性梯度洗脱方法,参照获得的RP-HPLC图谱,对图谱结果分析,按每峰一管收集洗脱液,得到分离纯化的活性多肽。用纸片法测定每管的抗菌活性,对抗菌活性最强的洗脱液进行氨基酸序列测定,查询数据库并进行序列比对,发现与牛蛙抗菌肽RANATUER IN2、RANATUER IN3有序列相似性,推断其可能是沼泽绿牛蛙皮肤分泌液中的抗菌肽。

沼泽绿牛蛙的核型研究

本文对沼泽绿牛蛙 ( Rana grylio stejneger)的染色体核型进行了研究 .结果证明沼泽绿牛蛙的核型公式为 K( 2 n) =2 6=1 6m+1 0 sm有 5对大型不染色体和 8对小型染色体 ,可以分成 A、B、C3组 .雌雄性个体间没有性染色体的分化 .在第

沼泽绿牛蛙致病细菌的研究

从自然患病死亡的沼泽绿牛蛙 (Ranagryliostejneger)体内分离到 9株细菌 ,对其形态及生理生化特性进行了研究 ,该菌为嗜水气单胞菌嗜水变种 (Aeremonashydrophilasubsp .hydrophila)

敌百虫对沼泽绿牛蛙蝌蚪的急性毒性试验

水温２７．５～２９℃时，敌百虫对沼泽绿牛蛙蝌蚪２４，４８，９６ｈ的ＬＣ５０分别为２５７０，１６．２２，７．９４ｍｇ／Ｌ。估算安全质量浓度为０．７９ｍｇ／Ｌ。敌百虫可作为防治牛蛙某些寄生虫病和敌害生物的药物。

几种常见牛蛙病害的病因及防治方法

牛蛙（Rana catesbeiana），1959年引进我国驯养，1986年开始在我国中部和南部大量饲养，主要品种有：沼泽绿牛蛙、西方牛蛙、印尼牛蛙、非洲牛蛙、非洲大牛蛙等，其体大肉肥，蛙皮还可制革，具有很高的经济价值。近年来，随着养殖面积的逐渐扩大，病害问题也日益突出，现列出几种常见的病害种类及防治方法，供广大养殖户参考。

养牛蛙可致富

项目 牛蛙，原产于北美洲落基山脉一带，1959年我国引进驯养，1986年在我国中部和南部大量饲养．主要品种有沼泽绿牛蛙、西方牛蛙、印尼牛蛙、非洲牛蛙、非洲大牛蛙等。

牛蛙的饲养管理

牛蛙，蛙科（Ranidae，即赤蛙科）动物，学名Ranacares-bejana。独居的水栖蛙，因其叫声大且洪亮酷似牛叫而得名，故名牛蛙，为北美最大的蛙类。原产于美国东部数州，后被引进西部各州和其他国家。主要品种有：沼泽绿牛蛙、西方牛蛙、印尼牛蛙、非洲牛蛙、非洲大牛蛙等。

牛蛙成功养殖的关键环节

牛蛙原产于北美洲，是食用蛙中体型最大的种类。牛蛙生长快，肉味鲜美、营养丰富、蛋白质含量高。国外养殖用的牛蛙有美国牛蛙、沼泽绿牛蛙、春蛙、非洲牛蛙、非洲大牛蛙等。

淡水生态系统中几种大DNA病毒研究概述

淡水生态系统中的大DNA病毒指存在于淡水系统中、基因组大小接近或超过100 kb的DNA病毒,它们通常是感染鱼类、虾类及藻类等水生生物以及两栖类的病原体,影响水产养殖动物的健康及淡水生态平衡。文章以虹彩病毒科(Iridoviridae)的沼泽绿牛蛙病毒(Rana grylio virus, RGV)和大鲵蛙病毒(Andrias davidianus ranavirus, ADRV)、鱼蛙疱疹病毒科(Alloherpesviridae)的鲫疱疹病毒(Crucian carp herpesvirus, CaHV)、线头病毒科(Nimaviridae)的克氏原螯虾病毒(Procambarus clarkii nimavirus, PCV)及肌尾病毒科(Myoviridae)的铜绿微囊藻肌尾噬藻体-滇池株(Microcystis aeruginosa myovirus isolated from Lake Dianchi, MaMV-DC)为主线,对淡水生态系统中几种大DNA病毒代表株的研究现状与文献进行概述,并提出和讨论淡水水生大DNA病毒研究及水生病毒学科发展愿景,以期为相关科研人员提供参考。

三种水生动物细胞系对两株蛙病毒敏感性的比较

利用3个不同物种的水生动物细胞系,包括爪蟾肾细胞系(A6)、大鲵胸腺细胞系(GSTC)和鲤上皮瘤细胞系(EPC),分别用沼泽绿牛蛙蛙病毒(RGV)和大鲵蛙病毒(ADRV)感染,进一步研究细胞病变显微形态、病毒滴度、细胞病变与不同感染时间的相关性等。结果显示,在光镜下可见感染病毒的细胞发生病变,A6和EPC细胞肿胀或破裂;GSTC细胞收缩或聚在一起形成多层。同种水产动物细胞系对不同蛙病毒的敏感性不同,在A6、EPC和GSTC细胞中,RGV的滴度分别为10^(3.6)、10^(5.9)和10^(6.6) TCID_(50)/m L;ADRV的滴度分别为10^(4.3)、10^(5.4)和10^(6.1) TCID_(50)/m L,表明GSTC细胞系对两种蛙病毒都更敏感。研究为后续蛙病毒致病机理提供了有用的信息和重要实验材料。

美国青蛙高效规范养殖技术

美国青蛙学名沼泽绿牛蛙，分类学上属脊椎动物门、两栖纲、无尾目、蛙科、蛙属。美国青蛙的自然繁殖时间一般是5月上下旬至8月初。由于美国青蛙的变态过程长而脆弱，6月中旬及以后繁殖的美国青蛙，一般当年不能完成变态，很大程度上影响了美国青蛙养殖的成活率和最佳上市时间，因而，在生产实践中，种蛙的利用率往往较低。

一株新的重组蛙病毒Δ67R-RGV的构建及基因67R的初步功能鉴定

沼泽绿牛蛙病毒(Rana grylio virus,RGV)属于虹彩病毒科(Iridoviridae),蛙病毒属(Ranavirus),其基因组中含编码尿嘧啶脱氧核糖核苷三磷酸酶(dUTPase)的基因67R。通过构建缺失67R的重组病毒Δ67R-RGV,探讨67R在RGV复制和感染过程中的功能。首先构建携带有作为标记的绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescence protein,EGFP)基因的质粒(pGL3-67RL-p50-EGFP-67RR),然后将该质粒与RGV基因组在67R位点进行同源重组(homologous recombination),并接种到培养的鲤鱼上皮瘤细胞(Epithelioma papulosum cyprinid,EPC)单层细胞中。利用荧光显微观察,判断并筛选有感染性的重组病毒(Δ67R-RGV)。经过十轮挑斑分离,直至在普通显微镜下观察到的细胞病变空斑与荧光显微镜观察到的绿色荧光空斑完全吻合,获得一株新的、纯化的重组蛙病毒Δ67R-RGV。再以野生型蛙病毒(wt-RGV)为对照,分别扩增并提取wt-RGV和Δ67R-RGV的基因组DNA,进行PCR检测。结果显示,在wt-RGV基因组中可检测到67R;但在Δ67R-RGV基因组中仅检测到EGFP,却检测不到67R,证实在构建重组病毒时,EGFP的确按预期插入67R位点。进一步分别测定了wt-RGV与Δ67R-RGV的一步生长曲线,结果无显著差别,表明67R及其编码产物dUTPase的缺失并不影响RGV的正常复制,67R为病毒非必需基因。

蛙病毒同源蛋白RGV-27R和ADRV-85L的表达及其免疫原性分析

沼泽绿牛蛙病毒(Rana grylio virus,RGV)和大鲵蛙病毒(Andrias davidianus ranavirus,ADRV)同属虹彩病毒科(Iridoviridae)蛙病毒属(Ranavirus)成员,是引起水产动物高死亡率的病原。其同源早期蛋白RGV-27R和ADRV-85L与蛙病毒代表株蛙病毒3型(Frog virus 3,FV3)25R基因所编码的大小为31kD的早期蛋白P31K(FV3-P31K)同一性超过99%。我们在观察和比较RGV与ADRV感染大鲵胸腺细胞(Giant salamander thymus cell,GSTC)显微病变的基础上,将ADRV-85L和RGV-27R基因分别克隆到原核表达载体pET-32a与pMAL-p5X中,转化宿主菌E·coli BL21(DE3)并诱导表达,经十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(Sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)检测,对这两种蛋白的原核表达及其产物免疫原性进行分析。结果显示这两种基因在载体pET-32a中的表达效率要显著高于pMAL-p5X。随后,取高效诱导表达的pET-32a-RGV-27R产物,经Ni-NTA His-Bind亲和层析分离提纯,获得浓度为1.2 mg/mL的融合蛋白His-RGV-27R,用其免疫动物,制备了抗体27R-Ab,酶联免疫吸附法(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测抗体的效价为1∶6.25×10~6。用经正常大肠杆菌菌液和正常GSTC细胞悬液吸附处理后的抗体作为一抗,对被RGV或ADRV感染的GSTC细胞悬液进行Western Blot检测,并以重组原核质粒表达的融合蛋白His-RGV-27R和HisADRV-85L作为阳性对照,以正常GSTC细胞悬液为阴性对照,分别从RGV或ADRV感染的GSTC细胞悬液中,检出大小同为31kD的特异性蛋白条带。本研究证实两种蛙病毒同源早期蛋白RGV-27R和ADRV-85L不仅都能在两栖动物细胞中表达,且具有相同的抗原特性,这为深入研究这类病毒蛋白对蛙病毒复制的影响及其与宿主相互作用的分子机制提供了实验材料。

美国青蛙繁殖及高产高效技术应用的研究

美国青蛙学名沼泽绿牛蛙，分类学上属脊椎动物门、两栖纲、无尾目、蛙科、蛙属。在浙北地区，美国青蛙的自然繁殖时间一般是5月上下旬至8月初。由于美国青蛙的变态过程长而脆弱，6月中旬及以后繁殖的美国青蛙，一般当年不能完成变态，很大程度上影响了美国青蛙养殖的成活率和最佳上市时间，因而，在生产实践中，种蛙的利用率往往较低。