泄殖腔棉拭子检测禽白血病病毒p27抗原作为净化指标的评估

为了彻底消灭禽白血病病毒(ALV)感染,北京市华都峪口禽业有限责任公司在2009~2016年期间对京红和京粉两个蛋鸡品种原种鸡群的6个配套系开展了全面检测和净化,蛋清、胎粪和泄殖腔棉拭子样品ALV p27抗原检测及血浆病毒分离率数据表明,在实施净化前,部分配套系在蛋清、胎粪的ALV p27抗原检测及血浆病毒分离三项指标上都出现一定的阳性率,但随着净化的实施,这三项指标的阳性率迅速下降,并在最近5年稳定保持在零检出。在此期间,泄殖腔棉拭子p27阳性率仅从12.1%缓慢下降,维持在3.5%~5.4%。在其他三项指标已连续多年维持在零检出时,泄殖腔棉拭子p27的检测阳性率极大可能为假阳性。比较不同采样人员、采样部位、样品处理方法对ALV p27抗原检测的影响表明,不同人员采集的泄殖腔棉拭子样品p27抗原阳性检出率不稳定;不同部位采集的棉拭子样品p27抗原检出率不同,泄殖腔棉拭子样品p27抗原阳性率比阴道棉拭子样品高31%;样品的处理方式对检测结果也有不同程度的影响,如p27抗原的检出率随样品稀释液用量的增加而降低,冻融样品阳性率显著高于未冻融样品的阳性率。综合以上结果表明泄殖腔棉拭子ALV p27抗原检测不适合作为禽白血病净化的检测指标。

不同类型鸡泄殖腔棉拭子禽白血病病毒p27抗原检测与病毒分离的相关性分析

为探讨泄殖腔棉拭子或种蛋中禽白血病病毒(ALV)-p27抗原检测与病毒分离检测之间的相关性,对不同类型鸡编号后分别对应采集泄殖腔棉拭子或蛋清后以ALV-p27抗原检测试剂盒检测,同时无菌采集抗凝血接种DF-1细胞进行ALV的分离鉴定。结果显示,人工感染A亚群ALV的SPF鸡群泄殖腔棉拭子ALV-p27抗原检测与病毒分离有很高的吻合率,相对于病毒分离法,119次泄殖腔棉拭子ALV-p27抗原检测中出现有1例假阳性和3例假阴性;从美国进口的200只祖代肉鸡3次采血DF1细胞分离病毒结果均为阴性,而泄殖腔棉拭子ALV-p27抗原阳性率依次为4.00%(8/200),2.97%(5/168)和2.61%(4/153),假阳性率为3.30%。相对于病毒分离法,正在实施ALV净化的不同遗传背景地方品系鸡泄殖腔棉拭子ALV-p27抗原检测的假阳性率高达93.20%~100.00%,还有一定比例假阴性(1/9,1/4,1/3)。本研究大量对应比较的数据表明,相对于血浆病毒分离法,不同类型鸡的泄殖腔棉拭子ALVp27抗原检测法不仅有很高的假阳性率,还有一定比例的漏检率。在种鸡场的ALV净化过程中考虑到成本,不建议以泄殖腔棉拭子作为检测材料。本试验为我国鸡群禽白血病净化检测和临床鉴别诊断提供参考依据。

4种ELISA试剂盒检测禽白血病病毒效率比较

对采集鸡蛋清、泄殖腔肛拭子以及蛋清或泄殖腔肛拭子检测阳性的鸡只之血清接种DF-1细胞的上清液,分别采用A、B、C、D 4种ELISA试剂盒进行ALV-P27抗原的3次试验检测。结果显示,A试剂盒的蛋清和病毒分离的敏感度最高,B试剂盒对肛拭敏感性最高。A试剂盒的3次试验检测的符合率都在87%以上,并且较稳定,结果可信度高;C试剂盒的符合率在79%以上,相对稳定;B和D试剂盒的符合率都不稳定。

美国中东部水生野生鸟类禽冠状病毒的鉴定

冠状病毒(CoVs)因其具有广泛的遗传多样性、传代时间短及突变率高等特征而呈全球分布,其传染性很强,难以控制。本研究报道了水生野生鸟类冠状病毒的遗传多样性,水生野生鸟类可能是禽冠状病毒潜在的储存器及突变和重组病毒的宿主,从而导致产生新的血清型或属。本试验从禽流感阴性的美国水生野生鸟类的700份蛋样本和303份直接泄殖腔拭子样本中检测到133份混合样品。从冷冻样品分离RNA,并利用已发布的1对通用冠状病毒引物进行RT-PCR。测试的样本中,1份来自翻石鹬的样本为冠状病毒阳性,与鸭冠状病毒(DK/CH/HN/ZZ2004)具有核苷酸序列相似性。这些数据表明冠状病毒可能在美国东半部水生野生鸟类中呈低流行态势。

基因芯片和ELISA检测临床样品中禽白血病的比较研究

为了鉴定实验室建立的禽白血病基因芯片检测方法与商品化ELISA方法的符合情况,试验从北京市某种鸡场挑选疑似禽白血病的蛋鸡13只,分别采集蛋清、血清、全血及泄殖腔棉拭子样品,利用基因芯片方法和商品化ELISA试剂盒进行检测比较。结果表明:基因芯片方法检测全血和泄殖腔棉拭子的阳性率均为69.23%;ELISA试剂盒检测蛋清和泄殖腔棉拭子样品中p27抗原的阳性率为23.08%。说明利用基因芯片方法检测全血和泄殖腔棉拭子样品的阳性检出率较高。

禽白血病病毒研究新进展

英国康普顿动物保健研究所的研究人员,10前年从肉用型种鸡中分离到一种新的禽白血病病毒(ALV)。因其外层囊膜的特性既不同于已知的5种鸡ALVs(ANE亚群),也不同于分离自观赏鸟的4种ALVs(F—I亚群),故而定为ALV-J亚群,原始分离株称为HPRS-103。经分子病毒学的研究证实,ALV-J是一种ALV与鸡肉源性反转录病毒科(EAV)的囊膜样遗传序列(envelope-tike ge-