T315I基因突变的慢性髓性白血病临床特征及泊那替尼疗效

目的分析伴T315I突变的慢性髓系白血病(CML)的临床特征及不同治疗方法的疗效。方法回顾性分析19例行BCRABL KD突变检测T315I突变的CML患者的临床资料及不同治疗的预后,通过直接测序分析获得用于RTQ-PCR样品的BCRABL KD突变。用Sanger测序法对BCR-ABL KD突变进行测序。复发标准包括血液学复发、细胞遗传学复发和分子生物学复发。结果 19例CML-T315I患者,初诊时73.7%(14/19例)患者处于慢性期(CP),Sokal评分中高危患者占81.2%(13/16例)。19例患者初诊后均行酪氨酸激酶抑制剂(TKI)治疗,病程中78.9%(15/19例)患者有附加染色体畸变,52.6%(10/19例)患者存在多重突变。68.4%(13/19例)的患者在疾病进展后(加速期/急变期)检测出T315I突变,从初诊到检测出T315I突变的中位期为40 m(5～120 m)。突变后12例行泊那替尼治疗(A组),7例选择传统化疗方案(B组)。A、B两组3年总生存率分别是83.3%和14.2%(P=0.001)。结论小样本回顾性研究发现对TKI耐药的CML患者易检出T315I突变,进展期检出率明显高于慢性期。此类患者往往合并附加染色体和多重基因突变,预后较差,即行异基因造血干细胞移植,复发率仍较高。泊纳替尼长期维持治疗,可能会改善预后,延长生存期。

泊那替尼纳米混悬剂冻干粉的制备及其质量评价

目的制备泊那替尼纳米混悬剂冻干粉,并对其冻干保护剂、载药量及稳定性进行考察。方法采用溶剂蒸发技术制备泊那替尼纳米混悬剂冻干粉,利用激光纳米粒度仪、透射电镜对其粒径及形态进行表征,筛选最佳冻干保护剂,利用高效液相色谱法对其载药量和稳定性进行考察。结果泊那替尼纳米混悬剂冻干粉复溶后平均粒径为(92.2±5.6)nm,多分散指数为0.29±0.65,且形态圆整,分布均匀;以10%乳糖为冻干保护剂制得冻干粉的性质最佳;高效液相色谱法测得泊那替尼平均载药量为(16.3±0.8)%,稳定性较好。结论泊那替尼纳米混悬剂冻干粉制备方法简便,有望成为泊那替尼的新型纳米给药系统。

泊那替尼通过Notch通路对T315I突变细胞增殖凋亡的影响

目的探讨泊那替尼对T315I突变细胞株KBM5R增殖和凋亡的影响及对Notch信号通路的影响。方法将KBM5R细胞分为对照组(C组)、泊那替尼组(P组)和泊那替尼+重组人核转录因子-κB(rhNF-κB)组(Pr组),MTT法检测细胞的增殖能力;Hoechst染色检测细胞的凋亡水平;DCFH-DA检测细胞活性氧(ROS)水平;Western blot检测凋亡相关蛋白和Notch通路相关蛋白的表达水平。结果与C组相比,P组细胞的增殖能力降低(P<0.01),凋亡数量增加(P<0.01),ROS水平增加(P<0.01),凋亡蛋白Caspase3表达增加(P<0.01),B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)/Bcl-2相关X蛋白(Bax)降低(P<0.01),Notch1、发状分裂相关增强子1(Hes1)和血管内皮生长因子(VEGF)的表达降低(P<0.01);与P组相比,给予rhNF-κB干预后,Pr组细胞的增殖能力增加(P<0.05),凋亡水平降低(P<0.05),ROS水平降低(P<0.01),Caspase3的表达降低(P<0.01),Bcl-2/Bcl增加(P<0.01),Notch1、Hes1和VEGF的表达增加(P<0.01)。结论泊那替尼可有效抑制T315I突变细胞株KBM5R的增殖,促进细胞凋亡,其机制可能与抑制Notch通路,从而增加细胞内ROS的水平,增加凋亡蛋白的表达有关。

泊那替尼纳米混悬剂的制备及体外释放度考察

目的制备泊那替尼纳米混悬剂,并对其理化性质及体外溶出行为进行表征。方法采用溶剂蒸发技术制备泊那替尼纳米混悬剂,利用激光纳米粒度仪、透射电镜对粒径及形态进行表征,通过透析法研究泊那替尼纳米混悬剂体外释放行为。结果泊那替尼纳米混悬剂平均粒径为(90.215±7.3)nm,多分散指数为(0.297±0.45);泊那替尼纳米混悬剂形态圆整,分布均匀,24 h在质量分数1%吐温-80的PBS释放介质中的体外累积释放率为53%,药物体外释放符合Ritger-Peppas方程,方程式为ln Q=0.284 7lnt+3.128 0,r=0.992 8。结论泊那替尼纳米混悬剂制备方法简便,有望成为泊那替尼的新型纳米给药系统。

犬肾上皮细胞对泊那替尼纳米混悬剂的摄取机制研究

目的 探讨犬肾上皮细胞（MDCK细胞）对泊那替尼纳米混悬剂的摄取机制.方法 采用溶剂蒸发法制备泊那替尼纳米混悬剂.高效液相法检测泊那替尼,评估其专属性、精密度及泊那替尼回收率;检测多药耐药蛋白（MDR）1抑制剂凡德他尼对泊那替尼纳米混悬剂细胞毒性作用的影响;采用高效液相法检测表面活性剂和凡德他尼对MDCK细胞摄取泊那替尼能力的影响.结果 采用高效液相法检测泊那替尼时,细胞溶液对检测无干扰,专属性强;日内和日间相对标准偏差分别为0.9％、1.2％,精密度良好;50、100、200 mg/L泊那替尼标准品回收率分别为101.7％、98.2％、102.4％,回收率高.细胞毒性实验结果表明细胞存活率随着泊那替尼纳米混悬剂浓度增加而降低;各泊那替尼浓度下,细胞存活率均随凡德他尼浓度增加而降低.MDCK细胞对泊那替尼摄取量随泊那替尼纳米混悬剂浓度的增加呈非线性增加.不同泊那替尼浓度下,MDCK细胞对含有表面活性剂的泊那替尼纳米混悬剂中泊那替尼的摄取量均高于对原料药中泊那替尼的摄取量[10 mg/L：（5.2±1.3） μg/mg蛋白比（3.0±0.8）μg/mg蛋白,20 mg/L：（6.6±2.3）μg/mg蛋白比（4.1±1.9） μg/mg蛋白,50 mg/L：（19.1±1.6） μg/mg蛋白比（7.3±1.7） μg/mg蛋白,100 mg/L：（30.3±1.0）μg/mg蛋白比（17.9±1.8） μg/mg蛋白,200 mg/L：（70.7±4.2）μg/mg蛋白比（53.6±5.3） μg/mg蛋白,400 mg/L：（94.7±3.4） μg/mg蛋白比（82.6 ±4.2）μg/mg蛋白]（P＜0.05）.4 mg/L和8 mg/L凡德他尼可明显增加细胞对泊那替尼纳米混悬剂中泊那替尼的摄取量[（4.65±0.11）、（5.70±0.24） μg/mg蛋白比（3.21±0.16） μg/mg蛋白,P＜0.05、P＜0.01].结论 MDCK细胞对泊那替尼纳米混悬剂的摄取可能受MDR1的介导.

泊那替尼固体脂质纳米粒的制备与质量评价

目的制备泊那替尼固体脂质纳米粒(P-SLN)并进行质量评价。方法采用高温乳化-低温固化法制备P-SLN,结合高剪切对制备方法进行优化,以粒径分布、多聚分散指数(PDI)和包封率(EE,%)为考察指标,通过单因素、正交设计优化制备处方,并对新剂型进行质量评价。结果以优化处方和工艺制备的P-SLN在透射电镜下呈圆整、均匀球状微粒,形貌规则完整,粒径(155.1±4.32)nm,PDI为(0.152±0.009),Zeta电位为(-22.0±1.72)mV,包封率(67.7±1.84)%(n=3),5%甘露醇为冻干保护剂冻干前后变化最小,热差分析仪分析新物相已形成,体外缓释效果显著,释药体征拟合Weibull方程。结论优化的高温乳化低温固化法制备的P-SLN形态规则完整,粒径大小分布均匀,包封率较高,体外缓释效果明显,该法适于P-SLN的制备。

泊那替尼原料药两种含量测定方法比较

目的分别建立测定泊那替尼原料药含量的高效液相色谱（HPLC）法与紫外分光光度（UV）法，并进行比较。方法HPLC法中，采用Agilent Zorbax Extend C18色谱柱（250mm×4．6mm，5μm），乙腈-0．2％三乙胺缓冲液（85：15）为流动相，流速为1．0mL／min，检测波长为280nm，柱温为30℃，进样量为20μL。UV法中，供试品溶于无水乙醇中，于280nm波长处检测。结果HPLC法中，泊那替尼进样检测质量浓度线性范围为1～40μg／mL（r：0．9999），加样回收率为100．00％，RSD=0．29％（n=9）；UV法测得泊那替尼检测质量浓度线性范围是0．5—20μg／mL（r=0．9999），加样回收率为99．29％，RSD=0．89％（n=9）。UV法的含量相对误差是HPLC法的1．432～6．102倍。结论HPLC法比UV法测定结果更精确，更适用于泊那替尼原料药的含量分析。

家兔体内泊那替尼固体脂质纳米粒药代动力学研究

目的探讨泊那替尼固体脂质纳米粒(P-SLN)在体内的药代动力学行为。方法将12只新西兰兔随机分为制剂组和对照组,分别给予等剂量P-SLN和泊那替尼对照品溶液,采用高效液相色谱(HPLC)法检测泊那替尼体内血药浓度,并采用DAS 2. 0药代动力学软件对所得血药浓度数据进行拟合,得出对照组和给药组的药代动力学参数。结果 HPLC法适合于检测泊那替尼血药浓度,给药组药时曲线下面积(AUC)及AUMC分别是对照组的3. 39倍和14. 87倍,清除率为0. 29倍,体内平均滞留时间为4. 55倍,半衰期为4. 44倍。结论 P-SLN在体内缓释效果明显,可显著提高泊那替尼的生物利用度,可作为药物的新剂型。

泊那替尼的合成

文中以2-甲基-5-硝基三氟甲苯,3-碘-4-甲基苯甲酸,咪唑并[1,2-b]哒嗪为主要原料通过自由基反应,还原反应,酰化反应及sonogashira偶联反应等合成泊那替尼。最终产物及中间体的结构经1H NMR。

泊那替尼纳米混悬剂的表面活性剂筛选及其稳定性考察

目的:对泊那替尼纳米混悬剂的表面活性剂的筛选及其稳定性研究。方法:采用聚乙烯吡咯烷酮(PVP K30)、泊洛沙姆P188、聚乙烯醇、磷脂和聚山梨酯-80为表面活性剂制备的泊那替尼纳米混悬剂;利用激光纳米粒度仪测定长期放置混悬剂中纳米粒子的平均粒径和多分散系数(PDI),Zeta电位分析仪测定其Zeta电位,高效液相色谱法(HPLC)对不同时间混悬剂中泊那替尼的浓度进行定量测定,绘出其降解曲线。结果:通过形态观察,以PVP K30为表面活性剂制备的混悬剂大小均匀、有乳光,且无针状结晶析出;与溶解状态下的泊那替尼相比,泊那替尼纳米混悬剂的化学稳定性显著改善,有效药物浓度的降解速度明显降低。结论:采用PVP K30为表面活性剂制备的混悬剂稳定性较好,有望成为泊那替尼的新型纳米给药系统。

泊那替尼挽救性治疗allo-HSCT后复发伴T315I突变CML 12例的疗效分析

目的分析泊那替尼挽救性治疗T315I突变慢性髓系白血病(CML-T315I)异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)后复发的疗效。方法12例allo-HSCT后复发的CML-T315I患者(10例为移植前存在T315I突变,2例为移植后复发出现T315I突变)纳入该回顾性分析,泊那替尼应用包括泊那替尼单药或联合化学药物治疗和或供体淋巴细胞输注(DLI)。通过直接测序分析获得的用于RTQ-PCR样品的BCR/ABLKD突变。用Sanger测序法对BCR/ABLKD(氨基酸219-506)突变进行测序。复发标准包括血液学复发、细胞遗传学复发和分子生物学复发。结果12例移植后复发患者中,2例分子学复发患者给予单药泊那替尼治疗,10例血液学复发患者中1例患者给予单药泊那替尼治疗,3例患者给予泊那替尼联合供者淋巴细胞输注(DLI),剩余6例患者使用泊那替尼联合化学药物治疗序贯DLI。泊那替尼治疗后,11例患者获得有效,其中血液学反应为10例患者获得血液学完全缓解(CHR),1例血液学部分缓解(PHR)和1例无效(NR);细胞遗传学反应为10例完全细胞遗传学反应(CCyR)、1例部分细胞遗传学反应(PCyR)和1例无细胞遗传学反应;分子生物学反应为9例患者获得完全分子学反应(CMR),1例主要分子生物学反应MMR和2例无分子生物学反应。获得CHR的时间中位数为36d(29~96)d,获得CCyR的时间中位数为63d(32~127)d,获得CMR的时间中位数为89d(27~152)d。泊那替尼治疗后中位随访时间598d(93~1470)d,9例患者存活,3例死亡,死亡原因包括2例复发,1例治疗无效。12例复发患者使用泊那替尼治疗后2年总存活率和无复发存活率分别为(75.0±12.5)%和(31.7±14.9)%,治疗后生存时间中位数为621d(93~1470)d。结论小样本回顾性研究提示,泊那替尼挽救性治疗allo-HSCT后复发CML-T315I患者有较好的疗效。