尿感方对尿道致病性大肠杆菌毒力特征的影响

目的探讨尿感方对尿道致病性大肠杆菌毒力特征的影响。方法以CFT073作为实验菌株,通过细菌生长培养,观察尿感方含药尿液对CFT073生长的影响。分别采用体外持留模型、微孔板法、平板法、ELISA法和RT-PCR法检测尿感方含药尿液对CFT073持留能力、生物膜形成、泳动能力、内毒素释放水平、侵袭力和毒力相关基因(fur、chuA、iha、fyuA、gltS、gltP、fimH和LexA)的影响。结果与未经干预的CFT073比较,经空白尿液干预后的CFT073生长能力、持留能力、生物膜形成、泳动能力、侵袭力、内毒素释放水平和毒力相关基因mRNA表达均无明显差异(P>0.05);与经90%空白尿液干预后的CFT073比较,经90%尿感方含药尿液干预后的CFT073生长受到抑制(P<0.05);与经60%空白尿液干预后的CFT073比较,经60%尿感方含药尿液干预后的CFT073持留能力、生物膜形成、泳动能力、侵袭力和内毒素释放水平降低(P<0.05,P<0.01),毒力相关基因fur、chuA、iha、fyuA、gltS、gltP、fimH、LexAmRNA表达下调(P<0.05,P<0.01)。结论尿感方可降低CFT073的持留能力、泳动能力和侵袭力,抑制生物膜的形成和内毒素的释放,下调毒力相关基因fur、chuA、iha、fyuA、gltS、gltP、fimH、LexAmRNA表达,影响CFT073的毒力特征。

尿感方清除受感染膀胱上皮细胞胞内尿道致病性大肠杆菌的作用

目的观察尿感方(马齿苋、蒲公英)清除受感染膀胱上皮细胞胞内尿道致病性大肠杆菌(uropathogenic Escheriehia coli,UPEC)的作用,并探讨其作用机制。方法通过UPEC感染人膀胱癌细胞5637(human bladder cancer cell 5637,HTB-9)细胞模型,观察尿感方含药尿液清除受感染膀胱上皮细胞胞内UPEC的作用;同时采用分子生物学技术,观察其对TLR4/cAMP信号传导通路的主要环节Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)、腺苷酸环化酶3(adenylate cyclase 3,AC3)、环磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate,cAMP)、蛋白激酶A(protien kinase A,PKA)、肌球蛋白Ⅶa和Rab蛋白相互作用蛋白(MyosinⅦA and Rab interacting protein,MyRIP)、Rab27b和小窝蛋白1(Caveolin-1)的影响。结果与大鼠空白尿液高剂量组比较,尿感方大鼠含药尿液高剂量组的细菌胞吐率增加。与大鼠空白尿液高剂量组比较,尿感方大鼠含药尿液高剂量组增加TLR4、AC3蛋白的表达及胞内cAMP的水平,促进PKA活化,增加TLR4、AC3、MyRIP、Rab27b和Caveolin-1蛋白的表达。结论尿感方具有一定的清除受感染膀胱上皮细胞胞内UPEC的作用,其作用机制与TLR4/cAMP信号传导通路的环节有关。

尿道致病性大肠杆菌HEC4株和禽源致病性大肠杆菌E058株毒力相关特性的比较(英文)

对人尿道致病性大肠杆菌(uropathogenic Escherichia coli,UPEC)HEC4株和禽致病性大肠杆菌(avian pathogen-ic Escherichia coli,APEC)E058株进行毒力基因和其他相关特性的比较,结果显示,它们具有一些共同的毒力基因,包括一些存在于APEC中一个大的可传递质粒上的基因;同时,它们也具有一些相似的生化特性。对SPF鸡的致病性试验显示,这两株分离株具有相似的致病力。因此,对于APEC和UPEC的相关性,以及APEC是否有可能导致人尿道感染或者成为UPEC的毒力基因贮主,有待进一步研究。

应用DNA芯片技术筛选禽致病性大肠杆菌和尿道致病性大肠杆菌的差异表达基因

为研究禽致病性大肠杆菌强毒株E058的毒力相关基因在鸡体内、体外表达情况以及E058和尿道致病性大肠杆菌HEC4在LB和尿液中培养的表达情况,本研究分别提取E058株在SPF鸡体内及E058株和HEC4株在LB和尿液中静置培养的总RNA,与构建的DNA芯片杂交,检测和分析RNA的差异表达情况。芯片的检测结果表明:E058株在鸡体内和LB中培养差异表达基因共有9个,上调基因为5个,分别为neuC、iutA、cvaC、aes-15和iucCD;下调基因为4个,分别为aes-8、gyrB、aec-30和mdh。另外,芯片检测结果也显示E058株和HEC4株在LB和尿液中静置培养,具有相似的基因表达情况。

尿道致病性大肠杆菌血清群和毒力因子及其临床意义

尿道致病性大肠杆菌是引起尿道感染及脓毒尿症的主要病原菌,分子生物学术技术扩大了对其毒力因子的检测范围,本文对近年来这方面的研究情况作了概述。

尿道致病性大肠杆菌黏附人尿路膀胱癌细胞的实验研究

目的检测尿道致病性大肠杆菌(UPEC)菌株毒力基因,并将人膀胱癌细胞系EJ细胞应用于UPEC的黏附作用研究。方法利用PCR和复合PCR方法检测UPEC132菌株毒力基因pap C,hly和cnf1;制备EJ的单层细胞爬片用于UPEC和阴性对照菌株E.coli K-12p678-54的黏附试验;分别于不同作用时间观察黏附细胞形态学变化,并计算黏附率和黏附指数。结果PCR检测显示UPEC132菌株具有毒力基因pap C,hly和cnf1,将其作用于EJ细胞后,15 min细菌开始黏附,120 min达到高峰。而阴性对照组结果均为阴性。经光镜镜检,UPEC黏附EJ细胞后使其产生明显的形态学变化。结论 EJ细胞可用于UPEC的黏附试验,为建立UPEC细胞感染模型和深入探究UPEC的致病机制奠定基础。

尿道致病性大肠杆菌临床分离株种系分型、毒力基因型及生物被膜表型分析

目的分析尿道致病性大肠杆菌(UPEC)临床分离菌株的种系分型、毒力基因型及生物被膜形成能力。方法采集临床尿路感染患者尿样进行细菌培养,对菌落计数大于10^(5)CFU/mL的样品再进行挑选,将选出的疑似大肠杆菌的菌落用微生物及蛋白快速鉴定质谱仪(MALDI Biotyper)鉴定出UPEC分离株。利用多重聚合酶链反应(PCR)检测UPEC分离株种系分型基因chuA、yjaA以及DNA片段TSPE4.C2;利用PCR检测UPEC分离株中9种毒力基因(fimH、tonB、ireA、fyuA、cnf-1、vat、hlyD、ompR和phoU)的分布情况;通过结晶紫染色法定量检测UPEC分离株生物被膜形成能力。结果共选取UPEC分离株42株,其种系分型以B2型和D型为主,分别占40.5%和31.0%。对9种毒力基因进行检测发现,Ⅰ型菌毛编码基因fimH检出率最高,为92.9%;摄铁相关基因tonB、ireA和fyuA的检出率分别为90.5%、66.7%和76.2%;受检的3种毒素相关基因中,编码细胞坏死因子的cnf-1基因检出率最高(52.4%),溶血素基因hlyD和空泡化毒素基因vat的检出率分别为21.4%和28.6%;其余毒力基因ompR和phoU的检出率均低于30.0%。所有受检菌株均能形成生物被膜,其中16株(占38.1%)具有强生物被膜形成能力,15株(占35.7%)具有中等生物被膜形成能力,其余11株菌株具有弱生物被膜形成能力。进一步分析发现,强生物被膜形成菌株大多属于B2型,且其携带毒力基因数量高于弱生物被膜菌株,差异有统计学意义(P<0.05)。结论UPEC临床分离株生物被膜形成能力与其种系分型和毒力基因分布具有一定关联性,进一步了解UPEC临床分离株的生物学特征尤其是生物被膜形成能力和毒力基因分布情况,可为尿路感染防控提供重要参考依据。

尿道致病性大肠杆菌毒力因子与其抗生素耐药性之间的 关系

目的:探讨细胞毒性坏死因子1(CNF1)、溶血素A(HlyA)和菌毛蛋白FimH 3种毒力因子在尿道致病性大肠杆菌(UPEC)中的表达与其抗生素耐药性之间的关系。方法:选取天津市第一中心医院84例尿道感染(UTI)患者尿液样本中分离的UPEC,通过PCR实验检测其毒力因子基因的表达,并通过药物敏感性实验分析其耐药性,进一步探索UPEC毒力因子的表达与其抗生素耐药性之间的关系。结果:本研究通过PCR实验在71例(84.52%)UPEC分离株中检测到毒力基因的表达,其中cnf1^(+)UPEC菌株10例(11.90%),hlyA^(+)UPEC菌株9例(10.71%),fimH^(+)UPEC菌株69例(82.14%)。观察到45例(53.57%)UPEC为超广谱β-内酰胺酶(ESBL)阳性。cnf1^(+)UPEC菌株中ESBL阳性为6例(60.00%),hlyA^(+)UPEC菌株中ESBL阳性为7例(77.78%),fimH^(+)UPEC菌株中ESBL阳性为38例(55.07%),ESBL阳性率均高于其相应的阴性菌株。表达毒力因子CNF1、HlyA、FimH的UPEC分离株对多种抗生素的耐药率均高于其阴性分离株。结论:毒力因子的表达与UPEC对多种抗生素的高耐药性之间存在相关性。

基于毒力因子FimH探讨尿感方抗尿道致病性大肠杆菌的作用机制

目的观察尿感方对尿道致病性大肠杆菌(UPEC)毒力因子FimH的作用和UPEC侵袭力的影响,并探讨其作用机制。方法UPEC分别经含空白尿液、尿感方含药尿液的培养基和空白培养基预处理后,观察UPEC毒力因子FimH表达的情况,并通过UPEC感染细胞模型,评价其侵袭力,同时采用Western blot、ELISA、RT-qPCR法检测整合素α3(integrinα3)、integrinβ1、p-FAK、p-Src、p-PI3K、p-αPAK蛋白表达,Rc1、Cdc42活性和三磷酸肌醇(IP3)水平,integrinα3、integrinβ1和细胞骨架蛋白[纽蛋白(vinculin)、踝蛋白(talin)、桩蛋白(paxillin)、F-肌动蛋白(F-actin)、α-辅助肌动蛋白(α-actinin)]mRNA表达。结果大鼠空白尿液和健康人空白尿液对UPEC FimH mRNA表达和UPEC入侵率无明显影响(P>0.05),对integrinα3、integrinβ1 mRNA和蛋白表达,p-FAK、p-Src、p-PI3K、p-αPAK蛋白表达,Rc1、Cdc42活性,IP3水平,细胞骨架蛋白mRNA表达均无明显影响(P>0.05)。大鼠含药尿液和健康人含药尿液降低了FimH mRNA表达,UPEC入侵率,integrinα3、integrinβ1 mRNA和蛋白表达,p-FAK、p-Src、p-PI3K、p-αPAK蛋白表达,Rc1、Cdc42活性,IP3水平,细胞骨架蛋白mRNA表达(P<0.05,P<0.01)。结论尿感方能影响UPEC FimH表达,减弱UPEC侵袭力,其作用机制与FimH/integrinα3、β1/FAK信号传导通路有关。

泌尿道致病性大肠埃希菌PapG重组蛋白对小鼠尿道上行感染的免疫保护作用

目的探讨泌尿道致病性大肠埃希菌(UPEC)P菌毛粘附素PapG重组融合蛋白对小鼠尿道上行感染的免疫保护作用。方法纯化蛋白按一定程序免疫BALB/c雌性小鼠,末次免疫后第7天用UPEC临床分离株进行尿道上行攻击;攻击后第5天检测尿液和肾脏培养菌,同时测定血清抗体效价。结果经GST-PapG重组蛋白和GST纯化蛋白免疫的小鼠体内均产生了相应的抗体,而仅经重组蛋白免疫的小鼠具有一定的抵抗毒株上行感染的能力,表现为肾脏培养菌量均明显减少。结论PapG粘附素与GST构成的重组融合蛋白对小鼠尿道上行感染具有一定的免疫保护作用。

猪肠外致病性大肠杆菌对氟喹诺酮类耐药机制研究

肠外致病性大肠杆菌是一类定殖于肠道外组织并引起严重感染的大肠杆菌，临床上可引起人的泌尿系统感染、新生儿脑膜炎、败血症、肺炎、心内膜炎，家禽的腹膜炎、肉芽肿，猪的败血症、肺炎、脑膜炎。我国猪源肠外致病性大肠杆菌（ExPEC）在兽医临床上的分离率和对动物的危害逐年增加。国内外对猪源普通大肠杆菌耐药性及耐药机理的研究较多，

尿道致病性大肠杆菌的研究进展

大肠杆菌性泌尿系感染,过去认为是条件致病菌所致的非特异性感染。随着对致病性大肠杆菌的研究,近年来确认大肠杆菌的某些血清型,对泌尿器官具有亲嗜性。从而,将那些致泌尿器官感染的大肠杆菌,称为尿道致病性大肠杆菌(Uropathogenic E.Coli,UPEC)。本文仅从UPEC 的血清型、粘附素及检测方法等方面的研究进展作一介绍。常见UPEC 血清型及粘附素目前所知UPEC 的大多数血清型属于02、04、06、011、015、021、022、025、075及083血清群。另外,050、070、086、

一株鸡源致病性大肠杆菌的分离鉴定及耐药性检测

大肠埃希菌(E.coli)俗称大肠杆菌,为埃希菌属的代表菌。大肠杆菌在肠道菌鉴别培养基,如麦康凯琼脂培养基上生长,因发酵乳糖产酸,使指示剂变红,形成红色菌落。大肠杆菌对多种消毒药敏感,对各种广谱抗菌药也敏感,但易产生耐药性。多数大肠杆菌为人和动物肠道内的正常菌群成员之一,少数为致病性细菌。致病性大肠杆菌对动物具有致病性,能引发人和动物的败血症、腹泻、肺炎、心内膜炎、泌尿道感染、幼畜或幼儿腹膜炎、脑炎等。笔者在学校兽医实验室分离鉴定了一株致病性鸡源大肠杆菌,并进行耐药性检测,现予以介绍。

大肠杆菌致病因子研究进展

禽致病性大肠杆菌和尿道致病性大肠杆菌是引起禽类和人肠道外感染的主要病原菌,这两种病原菌的毒力因子,致病机理及其相关性的研究现已成为热点。本文对近年来这些方面的研究进展进行概述。

氨基酸代谢变化引起的c-di-GMP稳态波动对大肠杆菌致病过程中菌毛合成的影响

[目的]细菌能够合成多种信号分子,调控自身在各种营养状态或应激条件下的生长代谢及毒力发挥。第二信使环二鸟苷酸(c-di-GMP)在致病菌感应氨基酸饥饿(AAS)的过程中发挥重要作用,调控多种生理活动并显著影响其毒力发挥。本文旨在研究c-di-GMP在尿道致病性大肠杆菌(UPEC)尿道定殖及毒力发挥过程中的作用。[方法]采用尿液培养UPEC,结合转座子突变技术筛选氨基酸代谢相关生长缺陷基因,采用基因敲除技术、特定氨基酸回补及小鼠尿道感染模型验证尿液生长及尿道定殖缺陷表型;借助表达谱数据、RT-qPCR及β-半乳糖苷酶活性测定法筛选并鉴定受氨基酸饥饿影响的毒力基因及c-di-GMP相关基因;通过多基因敲除及回补技术、凝胶阻滞试验(EMSA)鉴定c-di-GMP对毒力基因的调控机制。[结果]精氨酸、异亮氨酸及蛋氨酸代谢失衡引起UPEC在尿液中生长缺陷,尿道定殖能力显著下降及局部c-di-GMP稳态破坏;YciR及YcgF相关c-di-GMP体系失衡显著下调菌毛基因簇表达;YciR通过调节子MlrA直接调控P菌毛基因簇表达;YcgF通过下游配对调节子YcgE直接调控P菌毛基因簇表达。[结论]c-di-GMP感应尿道定殖过程中的特定氨基酸饥饿,调控菌毛等黏附因子合成,促进UPEC完整毒力发挥。

禽大肠杆菌致病因子的研究

禽致病性大肠杆菌和尿道致病性大肠杆菌是引起禽类和人肠道外感染的主要病原菌,这两种病原菌的毒力因子、致病机理及其相关性的研究现已成为热点。

泌尿道感染病原菌的变迁及抗生素敏感性研究

目的监测四年来泌尿道感染病原菌的菌群分布和耐药性变迁,指导临床合理应用抗生素. 方法回顾性分析2000～2003年门诊及住院泌尿道感染患者病原菌的菌群分布和耐药性变迁.结果大肠埃希菌是引发泌尿道感染的主要病原菌,占 50 %左右,其次是凝固酶阴性葡萄球菌、肠球菌、念珠菌.四年相比,凝固酶阴性葡萄球菌、肠球菌和念珠菌检出率明显增多.大肠埃希菌对头孢菌素一代、二代耐药性较强,达到了 50 % 左右,对头孢菌素三代、四代的敏感性较高.耐苯唑西林的凝固酶阴性葡萄球菌分离率由2000年的 63.6 % 增加到2003年的 78.8 %;万古霉素的耐药率为0%.肠球菌对喹诺酮类抗生素的耐药率都达到 50 %以上,对万古霉素的耐药率稳中有升,从2000年的 2.3 % 增加到2003年的 6.1 %.结论近年来泌尿道感染病原菌的菌群分布和耐药性发生变化,临床医师必须密切关注本院流行病学变化、病原菌分布及耐药性变迁,合理应用抗生素,减少耐药菌播散.

尿路致病性大肠埃希菌生物膜形成与耐药性的关系

目的研究50株临床分离的尿路致病性大肠埃希菌(UPEC)形成生物膜情况及其对抗菌药物敏感性的影响。方法采用结晶紫染色法检测生物膜阳性菌株,K-B纸片扩散法分析UPEC对8种抗菌药物的敏感性,再通过统计学方法分析细菌耐药性与生物膜形成之间的关系。结果 50株UPEC中,生物膜阳性34株,占68.00%。UPEC对8种抗菌药物均有不同程度耐药性;经统计学分析,生物膜阳性菌株对氨苄西林和庆大霉素耐药率(76.47%和55.88%)明显高于生物膜阴性菌株(43.75%和18.75%),差异有统计学意义(P<0.05)。结论 UPEC产生物膜现象较普遍,生物膜形成与其对氨苄两林和庆大霉素的耐药性具有相关性。

儿童泌尿系大肠埃希菌感染的耐药性及产ESBLs大肠埃希菌感染危险因素分析

目的探讨儿童泌尿系大肠埃希菌感染的现状及耐药性,分析儿童产超广谱β内酰胺酶(expendedspectrumβ-lactamase,ESBLs)大肠埃希菌感染的危险因素。方法回顾性分析我院2016年7月—2018年9月收治的280例泌尿系感染患儿尿液标本,观察大肠埃希菌检出及耐药情况,并进一步通过回顾产ESBLs大肠埃希菌感染患儿和非产ESBLs大肠埃希菌感染患儿的临床资料,寻找产ESBLs大肠埃希菌感染的危险因素。结果280例尿液标本中共检出大肠埃希菌128株,检出率为45.71%,其中产ESBLs菌株48株,非产ESBLs菌株80株。128株大肠埃希菌对大部分常用抗菌药物耐药,产ESBLs大肠埃希菌对氨苄西林完全耐药,对厄他培南、美罗培南不耐药,非产ESBLs大肠埃希菌对氨苄西林耐药率较高;产ESBLs大肠埃希菌对氨苄西林、氨苄西林钠-舒巴坦钠、氨曲南、环丙沙星、头孢曲松、头孢唑林、头孢吡肟、左氧氟沙星、头孢呋辛、头孢他啶、妥布霉素的耐药率均高于非产ESBLs大肠埃希菌(P<0.05或P<0.01)。多因素logistic回归分析结果显示:尿路梗阻、留置导尿管及近1个月抗菌药物应用史是泌尿系产ESBLs大肠埃希菌感染的独立危险因素。结论儿童泌尿系大肠埃希菌对氨苄西林耐药率最高,对多数头孢菌素类抗菌药物耐药,对碳青霉烯类抗菌药物耐药率较低。儿童泌尿系大肠埃希菌耐药以产ESBLs大肠埃希菌耐药为主,碳青霉烯类抗菌药物治疗产ESBLs大肠埃希菌感染效果最佳。对有尿路梗阻、留置导尿管及近1个月抗菌药物应用史的患儿应警惕泌尿系产ESBLs大肠埃希菌感染。

尿感方对尿道致病性大肠杆菌感染膀胱上皮细胞感染早期分泌IL-6、IL-8的影响

目的:观察尿感方对尿道致病性大肠杆菌(UPEC)感染人膀胱上皮细胞(BECs)感染早期分泌白介素(IL)-6、IL-8的影响。方法:通过UPEC感染HTB-9细胞模型,采用酶联免疫吸附法,观察尿感方(原药、大鼠含药尿液、健康人含药尿液)对感染早期膀胱上皮细胞分泌IL-6、IL-8的影响。结果:UPEC感染BECs 1h后,与模型组比较,尿感方原药组受感染BECs分泌的IL-6、IL-8均显著增多(P<0.01,P<0.05);与模型组和大鼠空白尿液组比较,尿感方大鼠含药尿液组受感染BECs分泌的IL-6、IL-8均显著增多(P<0.01);与模型组和健康人空白尿液组比较,尿感方健康人含药尿液组受感染BECs分泌的IL-6、IL-8均显著增多(P<0.01)。结论:尿感方能促进UPEC感染早期的BECs分泌IL-6和IL-8。