法尼醇类受体基因在胆囊中的表达

目的:探讨法尼醇类受体基因(FXR)的表达与胆囊的关系。方法:采用含17000cDNA克隆的基因微矩阵,与2例正常胆囊之cDNA杂交,发现FXR基因信号后,进一步进行RT-PCR和测序验证。结果:基因芯片能够检测出FXR在正常胆囊中的表达,其平均灰度值为16.80。在进一步的RT-PCR实验中,扩增出FXR的特异性片段,为352碱基。该PCR片段经测序后,其结果在GENEBANK数据库经BLAST比对,证实其同源性与FXR一致。结论:FXR在胆囊中表达,提示该基因可能还有新的未知功能。

一个新型的代谢综合征调控靶点——类法尼醇X受体

类法尼醇X受体(farnesoid X receptor,FXR)是一种胆汁酸的核受体,在胆汁酸、血脂和糖代谢中具有重要调节作用,从而与代谢综合征密切相关,可能成为一个新型的治疗代谢综合征的调控靶点。本文将就FXR与胆汁酸代谢和糖脂代谢的研究进展进行详细论述。

激活类法尼醇X核内受体(FXR)可下调载脂蛋白M在HepG2细胞中的表达

类法尼醇X核内受体(farnesoid Xreceptor,FXR)和载脂蛋白M(ApoM)在动脉粥样硬化中发挥重要作用.为研究FXR激动剂鹅脱氧胆酸(chenodexycholic acid,CDCA)和拮抗剂Guggulsterones在人肝癌细胞株HepG2和人胎肝细胞株L02中对载脂蛋白M(apolipoprotein M,ApoM)表达的影响.本研究应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法和Western印迹法检测CDCA和CDCA加Guggulsterones处理后HepG2和L02细胞中ApoM的mRNA水平和HepG2细胞中ApoM的蛋白水平.实验结果显示:FXR天然配体CDCA以剂量依赖的方式显著降低HepG2细胞中ApoM分子(mRNA和蛋白水平)的表达,L02细胞中ApoM分子mRNA水平的表达;FXR抑制剂Guggulsterones不仅能明显阻止CDCA对ApoM表达的下调,而且可引起ApoM表达显著增加.本研究提示,FXR抑制剂Guggulsterones在抗动脉粥样硬化过程中可能发挥重要作用.

类法尼醇X受体在巨噬细胞中下调单核细胞趋化蛋白1的表达

目的研究小鼠巨噬细胞株ANA-1中类法尼醇X受体的表达情况,并进一步研究类法尼醇X受体天然配体鹅脱氧胆酸在ANA-1中对单核细胞趋化蛋白1表达的影响,以探讨类法尼醇X受体在动脉粥样硬化发生发展中的作用。方法应用逆转录聚合酶链反应检测类法尼醇X受体在ANA-1细胞中的表达,及鹅脱氧胆酸处理后单核细胞趋化蛋白1的转录水平,Westernblot检测类法尼醇X受体的表达及其激活后对自身蛋白表达的调节,以及单核细胞趋化蛋白1蛋白的表达水平。结果类法尼醇X受体在ANA-1中表达,并依赖鹅脱氧胆酸浓度自我上调,鹅脱氧胆酸能显著下调单核细胞趋化蛋白1的表达水平(P<0.05)。结论类法尼醇X受体在小鼠巨噬细胞株ANA-1中组成型表达并呈配体浓度依赖性自我上调,类法尼醇X受体激活后可通过直接或间接方式下调单核细胞趋化蛋白1的表达。

类法尼醇X受体α基因的原核表达及多克隆抗体制备

根据NCBI上公布的序列设计引物,从Hep G2细胞系中克隆了FXRα的开放阅读框(ORF),构建原核表达载体p ET-28a-FXRα,转化E.coli BL21(DE3),经1.0 mmol·L-1IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测,成功诱导FXRα蛋白;以镍柱亲和层析纯化获得FXRα蛋白,免疫家兔,制备多克隆抗体。Western Blot分析表明:制备的多克隆抗体能够特异识别重组蛋白,为深入研究此受体的功能及新药发现奠定了基础。

小鼠MCP-1基因启动子的克隆及核受体FXR下调其活性初步分析

目的小鼠单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)启动子的克隆及其活性分析。方法从小鼠巨噬细胞株ANA-1中分别扩增一长一短2个小鼠MCP-1启动子片段,并克隆入虫荧光素酶报告基因载体中。2个不同长度的MCP-1启动子片段重组报告基因质粒分别与类法尼醇X受体(farnesoid X receptor,FXR)真核表达质粒共转染HEK293细胞中,经鹅脱氧胆汁酸(chenodeoxycholic acid,CDCA)处理后,检测荧光素酶活性。结果小鼠MCP-1启动子报告基因载体构建成功。经CDCA处理后,转染FXR表达质粒可下调2个不同长度的MCP-1启动子活性,且下调幅度相当。结论激活FXR可能通过小鼠MCP-1基因启动子-322～+82 bp区域FXR负性结合元件而下调该基因转录活性。

阻塞性胆汁淤积大鼠肝脏胆固醇7α-羟化酶和核受体FXR、SHP表达变化

目的:通过建立梗阻性黄疸动物模型,观察胆固醇7α-羟化酶(cholesterol 7alpha-hydroxylase,CYP7A1)、类法尼醇X受体(farnesoid Xreceptor,FXR)及小异源二聚体伴侣受体(small heterodi mer partner,SHP)的表达变化,并分析CYP7A1和FXR、SHP之间的关系。方法:采用胆总管结扎术制备大鼠梗阻性黄疸模型,分别于术后1、3、14 d麻醉后放血处死。取大鼠肝脏,抽提总RNA,采用实时定量RT-PCR检测CYP7A1 mRNA表达;提取肝细胞核蛋白,采用蛋白质印迹技术检测FXR和SHP蛋白表达。结果:与假手术对照组相比,梗阻性黄疸组大鼠肝细胞CYP7A1 mRNA表达明显增强,FXR和SHP蛋白表达同步降低,差异均有统计学意义(P<0.001,P<0.05)。结论:CYP7A1表达增强可能与FXR、SHP表达减弱有关。

类法尼醇X受体拮抗剂可减轻高脂载脂蛋白E基因敲除小鼠心肌缺血再灌注损伤

目的探讨类法尼醇x受体（FXR）拈抗剂对高脂载脂蛋白E（ApoE）基因敲除（ApoE_-/-）小鼠心肌缺血再灌注（I／R）损伤的影响及其机制。方法取雄性ApoE_-/-小鼠，分为3组：（1）标准ApoE_-/-组（n=18）：予标准鼠料喂养12周后建立心肌I／R模型；（2）高脂ApoE_-/-组（n=22）：予高脂鼠料（含1．25％胆固醇）喂养12周后建立心肌I／R模型；（3）高脂ApoE_-/-＋FXR拮抗剂组（n=17）：予高脂鼠料喂养12周后建立心肌I／R模型，心肌I／R前30min给予FXR拮抗剂Z—guggulsterone（100mg／kg）。荧光实时定量PCR（RT—qPCR）检测FXR基因变化，伊文斯兰及氯化三苯基四氮唑（TFC）双染色法检测心肌梗死面积，TUNEL法检测心肌细胞凋亡情况，酶联免疫吸附试验（ELISA）法测定心肌线粒体细胞色素C释放，荧光底物法检测caspase-9、12、8和3的活性，RT—qPCR检测BAX、BCL-2、CCAAT／增强子结合蛋白同源蛋白（CHOP）、自杀相关因子（Fas）和自杀相关因子配体（FasL）等基因的表达水平。结果高脂ApoE_-/-组小鼠心肌组织FXRmRNA表达水平显著高于标准ApoE_-/-组（P〈0．01）。高脂ApoE_-/-组小鼠心肌I／R诱导心肌梗死面积显著高于标准ApoE_-/-组[（62．1±7．0）％比（33．8±5．8）％，P〈0．01]，心肌细胞凋亡指数亦显著高于标准ApoE_-/-组[（36．8±5．7）％比（17．2±3．8）％，P〈0．01]。高脂ApoE_-/-＋FXR拮抗剂组小鼠心肌梗死面积则显著小于高脂ApoE_-/-组[（24．4±4．7）％比（62．1±7．0）％，P〈0．01]，心肌细胞凋亡指数亦显著低于高脂ApoE_-/-组[（13．8±2．7）％比（36．8±5．7）％，P〈0．01]，细胞凋亡的线粒体通路激活的标志物（线粒体细胞色素c释放、caspase-9以及BAX／BCL-2表达比例）和内质网应激通路的标志物（caspase-12活性以及CHOP表达）均较高脂ApoE_-/-组低（P均〈0．01），而膜受体死亡通路的标志物（caspase．8活性以及Fas、FasL表达）与高脂ApoE_-/-组比较差异均无统计学意义。结论FXR拮抗剂可减轻高脂ApoE_-/-小鼠心肌I／R损伤，其机制与抑制细胞凋亡的线粒体通路和内质网应激通路有关。

阻塞性黄疸患者血脂水平与胆汁酸的相关性分析

目的探讨阻塞性黄疸(OJ)患者血脂水平与总胆汁酸(TBA)的相关性。方法测定83例初诊OJ患者和88例健康体检者血清TBA和血脂水平并分析。结果 OJ患者血清三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、总胆汁酸(TBA)、总胆红素(T-Bil)、直接胆红素(D-Bil)均升高,高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、载脂蛋白AⅠ(apo AⅠ)和脂蛋白(a)[Lp(a)]均降低,P均<0.05;TBA与TG、TC呈正相关(r分别为0.392、0.524),与HDL-C、apo AⅠ和Lp(a)呈负相关(r分别为-0.387、-0.302、-0.348),P均<0.01。用多元逐步回归分析法验证病例组血清TBA与血脂水平的依存关系显示,TG(β=0.353,P<0.05)、TC(β=0.422,P<0.01)、HDL-C(β=-0.246,P<0.05)、apo AⅠ(β=-0.340,P<0.05)和Lp(a)(β=-0.262,P<0.01)进入方程,决定系数(R2)=0.422,校正R2=0.384。结论 OJ患者体内存在不同程度的脂类代谢紊乱,血清TBA可能是引起OJ患者血清血脂代谢紊乱的重要因素之一。

FXR及其在肝脏肿瘤及肝脏再生中的作用

在人体中,受到外界各种损伤后拥有再生能力的组织并不多见,而有完全再生或大部再生潜力的组织及器官更是凤毛麟角。肝脏作为人体内的重要器官,同时也是主要的解毒器官,行使着代谢体内各种毒素和有害物质的相关功能。由于这些被解毒的物质往往具有肝细胞毒性,因此提示肝组织应该具有一定的再生潜力来对抗不断进行的代谢过程。

有机溶质转运体α/β参与胆汁酸代谢的研究进展

肠肝循环是体内胆汁酸代谢过程中至关重要的一环。目前,多个在其中发挥重要功能的胆汁酸转运体已被发现,包括回肠顶端膜刷状缘吸收胆汁酸的顶膜钠离子依赖性胆汁酸转运体(apical sodiumdependent bile acid transporter,ASBT)[1]和肝细胞摄取胆汁酸的钠离子-牛磺胆酸共转运多肽(Na-tauro⁃cholate co-transporting polypeptide,NTCP)[2]等。本世纪初,研究者发现了一种在肠上皮细胞基侧膜控制胆汁酸分泌至门静脉血流的新型胆汁酸转运体,并命名为有机溶质转运体α/β(organic solute trans⁃porterα/β,OSTα/β)。OSTα/β由OSTα和OSTβ两个亚基组成,且只有OSTα和OSTβ同时表达时才能稳定存在并发挥功能[3-5]。小鼠OSTα缺乏会导致肠道绒毛变钝、融合以及胆汁酸吸收不良等表型[6]。

降脂蛋白(a)研究

脂蛋白(a)[Lp(a)]是由载脂蛋白(a)(apo(a))与载脂蛋白B100(apoB100)通过共价键连接的脂蛋白。高血浆水平Lp(a)是心血管疾病的独立风险因子,Lp(a)的血浆水平主要受遗传因素调控,主要有LPA[lipoprotein,Lp(a)]基因的三环结构域kringle IV/2拷贝数和单核苷酸多态性(SNP)。欧洲动脉粥样硬化协会(EAS)和美国心脏病协会(AHA)建议对于高Lp(a)的人群应当考虑降高Lp(a)的治疗。目前已有多种降高Lp(a)的药物和方法,如血浆分离置换法、雌激素治疗、反义核苷酸治疗、类法尼醇X核内受体(farnesoid X receptor,FXR)激动治疗等,但应用于临床的降高Lp(a)的药物和方法依然缺乏。本文拟就降Lp(a)的药物和方法进展情况进行综述。

茵栀黄颗粒对17-α-乙炔雌二醇诱发的肝内胆汁淤积孕大鼠的肝保护作用机制研究

目的研究茵栀黄颗粒(YZH)对雌激素诱发的孕鼠肝内胆汁淤积症(ICP)的保护作用及可能的机制。方法按照体重将妊娠大鼠随机分为4组:正常组、模型组和第1实验组第2实验组,每组10只。大鼠从怀孕的第15天开始,每天四肢后内侧皮下注射17-α-乙炔雌二醇2.5 mL·kg^-1建立ICP大鼠模型。造模的同时,正常组大鼠四肢后内侧皮下注射1,2-丙二醇2.5 mL·kg^-1,第1实验组给予正常大鼠(正常组)灌胃18%茵栀黄颗粒水悬液3.6 g·kg^-1,第2实验组给予模型大鼠(模型组)灌胃18%茵栀黄颗粒水悬液3.6 g·kg^-1,均连续5 d。用化学分析仪测定血清中谷丙转氨酶(GPT)、谷草转氨酶(GOT)和碱性磷酸酶(ALP)活性。用试剂盒法检测胆汁中的总胆汁酸(TBA)水平;以实时定量-PCR技术检测肝中法尼样X受体(FXR)和多耐药相关蛋白2(Mrp2)基因的表达(2-ΔΔCt值)。结果正常组、模型组和第1实验组第2实验组的GPT分别为(48.6±3.7),(114.3±10.2),(40.3±3.9)和(82.0±7.9)U·L^-1;这4组的GOT分别为(60.1±5.8),(156.9±14.3),(62.4±6.0)和(89.7±9.1)U·L^-1;这4组的ALP分别为(62.4±6.4),(289.2±20.3),(72.1±6.2)和(178.3±19.1)U·L^-1;这4组的TBA分别为(1429.1±130.4),(5109.8±489.2),(1388.7±142.3)和(1213.1±130.6)μmol·L^-1;这4组的FXR基因表达分别为100.2±9.9,301.4±28.2,89.7±9.7和124.0±13.1;这4组的Mrp2基因表达分别为100.0±9.8,289.1±27.4,102.3±10.1和120.9±13.1。上述指标:模型组与正常组比较,差异均有统计学意义(均P<0.01);第2实验组与模型组比较,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论茵栀黄介导的对胆汁淤积性肝损伤的保护作用可能依赖于调控FXR和Mrp2的表达。