法尼醇X受体激动剂对非酒精性脂肪性肝炎治疗作用研究进展

代谢相关脂肪性肝病(metabolic dysfunction-associated fatty liver disease,MAFLD)的全球患病率为20%~40%,伴随着沉重的疾病负担和晚期疾病相关的高病死率,目前尚无批准治疗MAFLD的标准药物。法尼醇X受体(farnesoid X receptor,FXR)具有调控糖脂代谢和改善胰岛素抵抗的作用,其中奥贝胆酸作为FXR激动剂,已被多项研究证实可改善MAFLD患者的肝组织学特征。本文主要阐述FXR激动剂的作用机制和研究现状以供临床参考。

FXR激动剂在非酒精性脂肪性肝炎治疗中的研究进展

非酒精性脂肪性肝炎(Non-alcoholic steatohepatitis,NASH),又称代谢性脂肪性肝炎,是病理变化与酒精性肝炎相似但无过量饮酒史的临床综合征,好发于中年特别是超重肥胖个体。非酒精性脂肪性肝炎与肥胖、胰岛素抵抗、2型糖尿病、高脂血症等代谢紊乱关系密切,主要特征为肝细胞大泡性脂肪变伴肝细胞损伤和炎症,严重者可发展为肝硬化,但至今NASH尚无得到批准的治疗方案。在寻找有效的治疗方法时,解决代谢失调、炎症和抗纤维化的新策略不断涌现。法尼类X受体(Farnesoid X receptor,FXR)除了是胆汁酸代谢和肠肝循环的关键调节剂外,还参与调节代谢稳态,使其成为NASH中有吸引力的治疗靶点。本文综述了FXR激动剂对NASH治疗的研究进展。

法尼醇X受体及其激动剂与肝脏疾病

法尼醇X受体(farnesoid X receptor,FXR)又名胆汁酸受体,是一种配体激活转录因子。FXR激动剂作用于FXR后,激活一系列复杂的下游通路,其代谢产物参与调节胆汁酸、糖类、脂质的稳态,进而在肝脏组织炎症、纤维化、再生及癌变过程中起到重要的调节作用,影响肝脏代谢性疾病的发生发展。寻找治疗靶点更精确且高效低毒的FXR激动剂,治疗肝脏代谢性疾病是当前的研究热点。本文将主要围绕FXR对代谢的调节及其与肝脏疾病的关系及其激动剂的研究进展进行讨论。

激活类法尼醇X核内受体(FXR)可下调载脂蛋白M在HepG2细胞中的表达

类法尼醇X核内受体(farnesoid Xreceptor,FXR)和载脂蛋白M(ApoM)在动脉粥样硬化中发挥重要作用.为研究FXR激动剂鹅脱氧胆酸(chenodexycholic acid,CDCA)和拮抗剂Guggulsterones在人肝癌细胞株HepG2和人胎肝细胞株L02中对载脂蛋白M(apolipoprotein M,ApoM)表达的影响.本研究应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法和Western印迹法检测CDCA和CDCA加Guggulsterones处理后HepG2和L02细胞中ApoM的mRNA水平和HepG2细胞中ApoM的蛋白水平.实验结果显示:FXR天然配体CDCA以剂量依赖的方式显著降低HepG2细胞中ApoM分子(mRNA和蛋白水平)的表达,L02细胞中ApoM分子mRNA水平的表达;FXR抑制剂Guggulsterones不仅能明显阻止CDCA对ApoM表达的下调,而且可引起ApoM表达显著增加.本研究提示,FXR抑制剂Guggulsterones在抗动脉粥样硬化过程中可能发挥重要作用.

胆酸对大鼠肝部分切除术后肝细胞脂质代谢及法尼醇X受体表达的影响

目的探讨胆酸对肝细胞脂质代谢、法尼醇X受体(FXR)及肝再生的影响。方法建立部分肝切除大鼠模型,随机分成3组:G1组(正常喂养),G2组(给予0.2%胆酸喂养),G3组(正常饮食中加入50%葡萄糖),每组10只,喂养后7 d切除大鼠70%肝组织,于术后72 h取出肝组织及血液标本,检测相关指标。RT-PCR和Western印迹检测SHP、CYP7A1、BSEP的表达;试剂盒检测肝细胞中甘油三酯、胆固醇的水平。结果与G1相比,G2组小异二聚体伴侣(SHP)、胆盐输出泵(BSEP)表达显著升高(P<0.05),胆固醇7α-羟化醇(CYP7A1)表达显著降低(P<0.05);G3组SHP、BSEP表达略增高(P<0.05),CYP7A1显著升高(P<0.05)。G2组甘油三酯(TG)水平显著降低,胆固醇(TC)含量显著升高,而G3组TG略升高,TC含量降低(均P<0.05)。结论胆酸可促进肝细胞再生,FXR在调控肝细胞代谢中发挥重要作用。

肠道法尼醇X受体对糖脂代谢调节作用的研究进展

法尼醇X受体(farnesol X receptor,FXR),又称为胆汁酸核受体,是配体依赖性的核转录因子,可分布于体内肝脏、肠道等多个组织器官;胆汁酸是其内源性天然配体。近年有研究表明,肠道FXR对于糖脂代谢调节具有不可或缺的作用,肠道特异性FXR激动剂或抑制剂均可参与体内糖脂代谢调节。该文对近年来报道的肠道FXR在糖脂代谢中的作用进行系统的综述。

FXR在肝脏疾病中的作用及其激动剂的研究进展

法尼醇X受体(farnesoid X receptor,FXR),核受体家族成员之一,是重要的配体激活转录因子,其主要分布于肝、肠、肾以及肾上腺等组织器官中,在胆汁酸代谢、糖脂代谢、胰岛素抵抗、肝脏保护等过程中发挥重要的调节作用。本文在调研文献基础上就FXR在肝脏疾病的不同发生阶段具有一定的调节作用进行归纳总结,进一步揭示FXR的功能,也为探寻肝脏疾病的发生机制提供了新的思考方向,并为治疗及预防此类疾病提供了新的靶点。

北京大学基础医学院姜长涛研究团队发现抑制肠法尼醇X受体——鞘磷脂磷酸二酯酶3轴减轻动脉粥样硬化的新机制

2021年5月3日,北京大学基础医学院姜长涛研究团队在The Journal of Clinical Investigation在线发表了题为“Suppressing the intestinal farnesoid X receptor-sphingomyelin phosphodiesterase 3 axis decreases atherosclerosis”的研究论文,系统地报道了肠法尼醇X受体(farnesoid X receptor,FXR)在动脉粥样硬化发生发展中的重要作用,该研究详细阐明了肠FXR通过调控肝胆固醇分解和肠神经酰胺合成加重动脉粥样硬化发生发展的机制,为动脉粥样硬化的临床治疗提供了潜在的分子靶点,为新药的研发提供了潜在的可能。

基于CRISPR/Cas9技术的法尼醇X受体缺失株的构建及其对HeLa细胞增殖的影响

试验旨在利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建法尼醇X受体(FXR)基因稳定敲除细胞株,并考察其对HeLa细胞增殖的影响。根据CRISPR/Cas9靶点设计规则,设计3对特异性识别FXR基因第1外显子相关序列的上下游小向导RNA(small guide RNA,sgRNA),以PX459质粒为载体,构建真核重组表达质粒。酶切和测序鉴定后将重组质粒转染至HeLa细胞中,用嘌呤霉素进行阳性细胞筛选,再用实时荧光定量PCR检测HeLa细胞FXR基因敲除稳定株中FXR的表达量,并用Western blotting方法鉴定HeLa细胞FXR基因敲除效果。最后用结晶紫染色试验检测FXR基因敲除对HeLa细胞增殖的影响。结果显示,经测序后,3对sgRNA位置与方向均正确插入到PX459质粒载体内,成功构建出重组表达质粒PX459-sgRNA;实时荧光定量PCR和Western blotting检测结果显示,转染后筛选出的细胞中FXR蛋白不表达,表明构建出稳定敲除FXR基因的HeLa细胞株;结晶紫试验结果发现,FXR基因敲除的HeLa细胞染色深度明显低于正常HeLa细胞,FXR基因敲除HeLa细胞孔D 595 nm值极显著低于野生型HeLa细胞孔(P<0.01),说明HeLa细胞FXR基因敲除株的增殖能力较正常HeLa细胞显著降低。本试验利用CRISPR/Cas9技术成功获得了内源FXR基因敲除细胞株,且FXR基因敲除对癌细胞增殖具有显著抑制作用,为研究FXR的功能和作用机制提供了细胞模型,并为研究FXR在相关癌症发生发展中的作用奠定了基础。

沙棘熊果酸对酒精性肝损伤大鼠肝FXR信号通路的影响

目的:初步探讨沙棘熊果酸对酒精性肝损伤大鼠肝法尼醇X受体(Farnesoid X receptor,FXR)信号通路关键蛋白表达的影响。方法:6周龄SPF级SD大鼠随机分为4组,每组9只,分别为正常对照组、酒精模型组、熊果酸对照组和熊果酸+酒精组,干预时间为8周。采用苏木精-伊红(H&E)染色法观察大鼠肝组织病理学变化;测定大鼠血清中谷丙转氨酶(Alanine aminotransferase,ALT)、谷草转氨酶(Aspartateaminotransferase,AST)活力和血清总胆汁酸(Total bile acid,TBA)、肝脏甘油三酯(Triglyceride,TG)、总胆固醇(Total cholesterol,TC)含量;酶联免疫吸附(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)法检测血清细胞因子肿瘤坏死因子α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素1β(Interleukin 1β,IL-1β)、白细胞介素10(Interleukin 10,IL-10)含量;免疫印迹法(Western blotting)测定大鼠肝FXR信号通路相关蛋白表达情况。结果:与正常对照组相比,酒精模型组大鼠肝脏存在大小不一的脂肪空泡和大量炎性细胞浸润;血清ALT、AST活力,TNF-ɑ、IL-1β水平,TBA含量和肝脏TG、TC含量均显著升高(P<0.05)、IL-10水平显著下降(P<0.05)。经熊果酸干预后,肝脏脂肪变性得到明显改善,炎性细胞浸润减少;血清ALT、AST活力,TNF-α、IL-1β水平,TBA含量和肝脏TG含量均有不同程度的显著下降(P<0.05),IL-10水平显著提高(P<0.05)。Western blotting结果显示,与正常对照组相比,模型组大鼠肝脏FXR蛋白表达显著降低(P<0.05),CYP7A1和SREBP-1c蛋白表达均显著升高(P<0.05);而经熊果酸干预后,FXR蛋白表达明显提高,CYP7A1及SREBP-1c蛋白表达明显下调,且差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:沙棘熊果酸能够明显改善酒精诱导的肝脏损伤,其作用机制可能与上调肝FXR、抑制CYP7A1和SREBP-1c的蛋白表达,从而维胆汁酸稳态、调节脂质代谢有关。

法尼酯衍生物X受体在2型糖尿病中的研究进展

国际糖尿病联盟(IDF)最新数据表明目前中国糖尿病患者在剧增。糖尿病是以胰岛素分泌相对或和绝对不足导致的慢性高血糖为特征的代谢性疾病,法尼醇X受体(farnesoid X receptor, FXR,NR1H4)是能被胆汁酸激活的转录因子,可以通过多种途径调节血糖。回顾国内外有关法尼醇X受体介导β细胞胆汁酸代谢、影响GLP-1的分泌、抑制肝糖原异生、增加肝糖原储存、增加胰岛素的分泌和增强胰岛素的敏感性等机制发挥调节血糖平衡作用的研究,以及中医药干预FXR对糖脂代谢的相关研究,意在探索FXR与糖尿病的相关性,为糖尿病的发病机制提供新的理论依据。

法尼醇X受体激动剂奥贝胆酸抑制百草枯诱导的肺纤维化机制研究

目的探讨法尼醇X受体激动剂奥贝胆酸抑制百草枯诱导的肺纤维化机制,为其临床应用提供理论依据。方法细胞实验选择人肺成纤维细胞(HFL1细胞),分为空白组、百草枯组、百草枯+奥贝胆酸组,染毒1 d后采用Elisa方法对转化生长因子β1 (TGF-β1),a-平滑肌肌动蛋白(a-SMA)及Smad3、Smad2蛋白的表达进行检测。动物实验选用健康清洁级SD大鼠60只,随机分为空白组、百草枯组、百草枯+奥贝胆酸组,采用Elisa方法对染毒第1、3、7、14、21天大鼠血浆中TGF-β1、a-SMA及Smad3、Smad2蛋白的表达进行检测。采用Western Blotting方法对第21天大鼠肺组织中TGF-β1、a-SMA及Smad3、Smad2蛋白的表达进行检测。HE染色观察第1、3、7、14、21天大鼠肺组织病理变化。结果细胞实验和动物实验中百草枯组均随着中毒时间延长,TGF-β1、a-SMA及Smad3、Smad2蛋白的表达逐渐升高,各时点均明显高于空白组(P<0. 05)。百草枯+奥贝胆酸组TGF-β1、a-SMA及Smad3、Smad2蛋白的表达各时点均明显低于百草枯组,但仍高于空白组,差异有统计学意义(P<0. 05)。结论奥贝胆酸可通过抑制TGF-β1、a-SMA及Smad3、Smad2蛋白的表达来抑制百草枯诱导的肺纤维化。

法尼醇X受体激动剂的研究进展

法尼醇X受体(FXR)作为一种胆汁酸感受器,在体内发挥着重要作用,是治疗血脂异常和脂肪肝的重要靶点。近年来,FXR激动剂的研究由甾体类转向非甾体类化合物,人们通过高通量筛选也发现了许多结构新颖的FXR激动剂。本文对近年来FXR激动剂的研究进行综述。

法尼醇X受体天然激动剂的研究进展

法尼醇X受体(Farnesoid X receptor,FXR),又称胆汁酸受体,因与代谢调节密切相关,FXR激动剂目前成为代谢性疾病治疗的药物研发热点。FXR天然激动剂来源广泛且大部分具有无或低毒副作用的特点,主要分为动物源性激动剂、植物源性激动剂和微生物源性激动剂三大类。动物源性激动剂包括鹅脱氧胆酸、胆酸、脱氧胆酸、石胆酸和熊去氧胆酸等内源性胆汁酸,以及雄甾酮;植物源性激动剂包括植物和植物提取物,如泽泻提取物、咖啡醇、香豆雌酚、葡萄内脂和薯蓣皂苷;微生物源性激动剂包括细格菌素。本文就FXR天然激动剂的研究进展进行综述。

法尼醇X受体(FXR)通过诱导肝脏抗凝血酶Ⅲ的表达抑制小鼠凝血过程

法尼醇X受体(farnesoid X receptor, FXR)已被发现可在凝血系统中发挥重要作用,包括抑制血小板功能、促进纤维蛋白原表达等。然而至今,FXR在凝血系统中的调节机制尚未完全阐明。本研究旨在探讨FXR对抗凝血酶Ⅲ (antithrombin Ⅲ,AT Ⅲ)的调节作用。用FXR特异性激动剂GW4064 (每天30 mg/kg)处理野生型(WT)和FXR基因敲除(FXR KO) C57BL/6小鼠1和3天,结果显示,在WT小鼠上,FXR激动可显著延长凝血酶原时间和活化部分凝血活酶时间,降低活化凝血因子X (activated factor X, FXa)活性,降低活化凝血因子Ⅱ (activated factor Ⅱ, FⅡa)和凝血酶-抗凝血酶复合物(thrombin-antithrombin complex,TAT)浓度,升高血浆AT Ⅲ浓度,使血液处于低凝状态;当FXR敲除时,以上指标全部逆转,血液处于高凝状态。激动FXR后,WT小鼠肝脏AT Ⅲ表达增加;而FXR KO小鼠肝脏中AT Ⅲ表达较WT小鼠明显降低。体外研究结果显示,GW4064和FXR过表达腺病毒均可显著上调小鼠原代肝细胞中AT Ⅲ的表达,相反,siRNA敲减FXR可明显抑制AT Ⅲ表达。AT Ⅲ启动子区含有FXR结合位点,GW4064可显著上调Luc-AT Ⅲ荧光素酶活性并增加FXR与AT Ⅲ启动子区的结合。以上结果提示,FXR可通过直接转录调控AT Ⅲ的表达而抑制凝血过程。本研究揭示了FXR在凝血平衡中的新作用,提示FXR可能成为血液高凝状态相关疾病的潜在治疗靶点。

Vonafexor(EYP001)的合成

以5-溴水杨醛为起始原料,与溴乙酸乙酯通过2步反应环合生成5-溴苯并呋喃-2-甲酸乙酯,再与1-Boc哌嗪反应生成5-(4-叔丁氧羰基哌嗪)苯并呋喃-2-甲酸乙酯;接着经N-氯代丁二酰亚胺(NCS)氯代得到4-氯-5-(4-叔丁氧羰基哌嗪)苯并呋喃-2-甲酸乙酯;最后脱去Boc保护基,与2,6-二氯苯磺酰氯反应得到4-氯-5-[4-(2,6-二氯苯磺酰基)-1-哌嗪基]苯并呋喃-2-甲酸乙酯,水解后得到目标化合物EYP001,总收率为58.3%.

法尼醇X受体与酒精性肝损伤

酒精性肝病(alcoholic liver disease,ALD),又称酒精性肝损伤,是危害人类健康的公共卫生问题之一。ALD不同程度的损伤,主要表现为肝脂肪变性、肝脏炎症反应、肝纤维化,严重者可能出现肝硬化乃至肝癌。在酒精性肝损伤发生时,法尼醇X受体(farnesoid X receptor,FXR)缺乏会加重肝脏的损害程度,而激活FXR会改善酒精性肝损伤。本文就FXR及其在酒精性肝损伤中的作用予以综述,为防治ALD提供新的思路和策略。

基于FXR通路研究獐牙菜调控ANIT诱导的肝损伤大鼠胆汁酸代谢效应机制

目的:研究獐牙菜对α-异硫氰酸萘酯(ANIT)诱导的胆汁淤积型肝损伤大鼠的保护作用。方法:将40只雄性SD大鼠分为正常对照组、模型对照组、熊去氧胆酸100 mg/kg组、獐牙菜194、385 mg/kg组。采用ANIT诱导大鼠急性肝内胆汁淤积型肝损伤模型,以獐牙菜进行干预,熊去氧胆酸为阳性对照,观察大鼠体质量及肝质量变化;测定胆汁流速,检测其血清ALT、AST、ALP、γ-GT活力,DBIL、TBIL、TBA含量;HE染色观察肝组织病理变化;qRT-PCR检测肝组织Fxr、Mrp2、Bsep、Ntcp、Cyp7a1和Shp mRNA的表达。结果:与正常对照组相比,模型对照组大鼠在ANIT干预后状态不佳,体质量逐日下降,胆汁流速显著下降(P<0.01);血清中AST、ALT、ALP、γ-GT、TBA、TBIL、DBIL活力或含量显著增加,肝脏系数显著增加(P<0.01);肝组织病理损伤明显,肝组织Fxr、Mrp2、Bsep、Ntcp和Shp的mRNA表达均明显下调,Cyp7a1的mRNA表达明显上调(P<0.05或P<0.01);与模型对照组相比,獐牙菜各剂量组及熊去氧胆酸100 mg/kg组中肝脏系数显著下降,肝组织病理损伤显著减轻,胆汁流速显著加快,血清中ALT、AST、ALP、γ-GT活力,TBIL、TBA和DBIL含量不同程度降低,Fxr和Bsep的mRNA表达上调,Cyp7a1的mRNA表达下调(P<0.05或P<0.01);獐牙菜385 mg/kg组和熊去氧胆酸100 mg/kg组Mrp2和Ntcp的mRNA表达上调,獐牙菜各组大鼠肝脏中的Shp mRNA表达上调(P<0.05或P<0.01)。结论:獐牙菜具有保护ANIT诱导的胆汁淤积型肝损伤大鼠肝损伤的作用。

FXR与糖尿病相关性研究进展

国际糖尿病联盟(IDF)最新数据表明目前中国糖尿病患者在剧增。糖尿病是以胰岛素分泌相对或和绝对不足导致的慢性高血糖为特征的代谢性疾病,法尼醇X受体(farnesoid X receptor,FXR,NR1H4)是能被胆汁酸激活的转录因子,FXR能对胆汁酸的代谢进行调节,胆汁酸代谢与糖尿病相关,胆汁酸代谢在β细胞的功能是通过FXR介导的,本文回顾国内外有关法尼醇X受体通过抑制肝糖原异生、增加肝糖原储存、影响胰岛素信号、增加胰岛素的分泌和增强胰岛素的敏感性等机制发挥调节血糖平衡作用的研究,意在探索FXR与糖尿病的相关性,为糖尿病的发病机制提供新的理论依据。

非酒精性脂肪性肝病治疗的研究进展

非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）的发病率仍在迅速增长并趋于低龄化，日渐成为危害公众健康的主要问题。NAFLD的临床结局并不限于肝硬化、肝癌等肝脏本身的病变，同时与代谢异常所致的动脉粥样硬化性心血管事件密切相关，需要积极治疗干预。改善生活方式是所有NAFLD患者治疗的基石；严重肥胖患者，可考虑减肥手术；伴有糖尿病、高血压、血脂异常等危险因素的患者还需对代谢综合征进行治疗；对于严格生活方式干预无效的NASH患者，可及时加用二甲双胍及胰岛素增敏剂［二甲双胍、过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPAR-γ）激动剂、PPAR-α/δ激动剂、胰高血糖素样1受体激动剂、法尼醇X受体激动剂］、抗氧化剂；已发展至终末期肝病的患者，除预防处理并发症外，可考虑行肝移植。