荔枝果实中泛变应原profilin基因的克隆及序列分析

目的克隆荔枝果实中泛变应原肌动蛋白抑制蛋白(profilin)同源基因。方法采用生物信息学方法对多个植物泛变应原基因进行序列同源性比对,根据序列保守区域设计并合成简并性引物,通过RT-PCR和3'-RACE技术克隆荔枝果实中泛变应原profilin的全长基因,并进行序列分析。结果获得了一个全长的新基因(689bp)。该基因开放阅读框为396个碱基,编码131个氨基酸残基,经分析该蛋白等电点为4.98,分子量约为14060。此序列已被GenBank收录,登陆号为DQ309464。序列分析结果显示所克隆到的基因与许多水果和花粉的泛变应原profilin基因有很高的同源性(与桦树和橡胶花粉泛变应原profilin的同源性分别为80%和84%,与桃子profilin的同源性为85%),因此认定其为泛变应原基因。结论从荔枝果实中成功地克隆出了一个泛变应原基因,为进一步的蛋白表达奠定了基础。

樟树花粉泛变应原基因的克隆与序列分析

目的从樟树花粉中克隆泛变应原基因。方法通过对多个植物泛变应原基因进行序列同源性比对,根据保守区域序列设计简并性引物,利用RT-PCR结合RACE技术对樟树花粉中的泛变应原基因进行克隆。结果从樟树花粉中克隆到一个新的基因。序列分析显示:所克隆到的基因与其它植物的泛变应原肌动蛋白结合蛋白基因有很高的同源性,因此认为该基因为泛致敏原基因,命名为Cinc1。其在GenBank数据库中的登录号为DQ335252。结论采用简并引物从樟树花粉中克隆到一泛变应原基因,为进一步研究该变应原奠定了理论基础。

2个芹菜品种泛变应原Api g 4基因的克隆与分析

从芹菜(Apium graveolens Linn.)品种‘津南实芹’(‘Jinnanshiqin’)和‘美国西芹’(‘Meiguoxiqin’)中分别克隆获得泛变应原基因Api g 4;2个品种的Api g 4基因均包含1个长度为405 bp的开放阅读框,二者间有3个核苷酸位点的差异。2个品种的Api g 4基因均能编码134个氨基酸,但二者编码的氨基酸序列有2个位点的差异。多重比对以及进化树分析结果均表明:2个芹菜品种Api g 4基因编码的氨基酸序列与其他植物的泛变应原氨基酸序列同源性较高,氨基酸序列高度保守;与同科植物欧芹〔Petroselinum crispum(Miller)Nyman ex A.W.Hill〕和胡萝卜(Daucus carota Linn.)的泛变应原氨基酸序列的同源性均达到90%以上,在进化树上也归为同一支。2个品种的泛变应原Api g 4均为疏水性蛋白,具有相似的三维空间结构,均包含3个α螺旋和7个β折叠。实时定量PCR分析结果显示:Api g 4基因在‘津南实芹’和‘美国西芹’根中的表达水平均最高,在茎和茎尖分生组织中的表达水平相对较低,在叶中的表达水平很弱,且2个品种间同一组织的Api g 4基因表达水平也有差异,表明Api g 4基因的表达具有明显的组织特异性。

大豆泛变应原profilin基因的克隆、序列分析和表位预测

通过生物信息学方法对多种植物性食物和花粉泛变应原proflin基因进行比对,利用其中的高度保守区域设计并合成简并引物,通过RT-PCR克隆得到一个新的大豆profilin基因(396bp,pI为5.21,MW为14,1kD),序列同源性分析发现该基因和已知的多种植物性食物、花粉变应原profilin有较高的同源性(>75%),因此认为其系大豆蛋白泛变应原profilin,命名为Gly m3.02,EMBL/GeneBank数据库登录号为DQ784852,这为进一步重组表达和抗原表位分析等奠定了实验基础。

芒果果实中泛变应原profilin的克隆、表达及免疫学活性鉴定

目的 克隆并表达芒果果实中泛变应原肌动蛋白抑制蛋白（profilin）并了解其免疫学活性。方法 利用RT-PCR结合RACE技术克隆芒果果实中泛变应原profilin的全长基因，并进行序列分析。然后设计带有酶切位点的特异性引物，采用RT-PCR获得整个芒果profilin的开放阅读框，将其与pET-28a载体连接并转化大肠杆菌Escherichia coli B121（DE3）进行诱导表达，通过Ni^2＋亲和层析柱对重组蛋白进行纯化，采用Western blot检测其IgE结合活性。结果 克隆获得了芒果profilin的2个型。每个型的cDNA都包括一个编码131个氨基酸的开放阅读框。序列分析结果显示所克隆到的基因与许多水果和花粉的泛变应原profilin基因有很高的同源性（〉70％）。根据变应原的命名规则，将它们分别命名为Mani3．01和Mani3．02，并将这两个基因提交到GenBank数据库中，其登录号分别为DQ270547和DQ400579。重组芒果profilin在大肠杆菌中高效的表达，进一步经Ni^2＋亲和层析柱纯化后经Western blot检测具有良好的免疫学活性。结论成功地克隆和表达了芒果profilin，并证明与芒果过敏者血清有特异IgE应答。

《中华微生物学和免疫学杂志》2007年27卷关键词索引

说明:(1)本索引关键词按汉语拼音字母顺序排列;(2)冠有阿拉伯数字、西文字母、西文姓氏的关键词,按其后的汉字拼音排序,在汉字相同的情况下,按数字、希文字母顺序先后排列;(3)为了集中同一性质的关键词,采用倒装词,如多糖类,细菌;(4)关键词后括号内数字为起页。