猫泛白细胞减少症病毒A91S变异株对猫的致病性及基因组特征研究

猫泛白细胞减少症病毒(feline panleukopenia virus, FPV)是一种对猫危害严重的病原。近年来,一种VP2 91位氨基酸残基由A突变为S的FPV变异株(FPV A91S变异株)已经在国内广泛流行,但目前还未见该变异株对猫致病性的报道,本试验旨在探究FPV A91S变异株对猫的感染特性及其分子特征。利用F81细胞分离FPV A91S变异株,并研究其血凝特性、对猫的致病性及其基因组特征。成功分离到一株FPV A91S变异株,纯化后病毒滴度为10~(4.6 )TCID_(50)·mL^(-1);该毒株能在pH 6.0~6.5、4和37℃条件下有效凝集猪红细胞;分离株经口服成功感染幼猫,引起呕吐、腹泻、白细胞急剧降低、眼睑脓性分泌物等症状,并在5 d内导致猫死亡;大体和组织病理变化发现严重的肠道和肺出血。获得该毒株近乎全长的基因组序列,其VP2蛋白的关键位点氨基酸符合典型FPV特征。除了VP2 A91S的突变外,其NS1蛋白也有3个独特的氨基酸突变(D23N、I443V和H596Q),这些特征导致FPV A91S毒株在进化树中单独聚为一支,具有独特的遗传进化趋势。本研究首次探究了FPV A91S变异株的血凝性和对猫的致病性,为进一步了解FPV的生物学特性和遗传变异提供参考。

辽宁沈阳株猫泛白细胞减少症病毒VP2基因扩增及生物信息学分析

【目的】通过生物信息学方法分析1株2022年辽宁沈阳地区猫泛白细胞减少症病毒(Feline panleukopenia virus, FPV)LN3株VP2蛋白的分子特征。【方法】利用FPV胶体金试纸条对临床上表现呕吐、腹泻等症状的患病猫粪便进行检测,提取该病猫粪便的病毒DNA进行FPV VP2基因PCR扩增及测序,使用Seqman软件对序列进行拼接。将所获序列与NCBI数据库中FPV和犬细小病毒(Canine parvovirus, CPV)的VP2基因进行相似性比对及遗传进化分析。使用生物信息学软件对该毒株VP2蛋白进行预测,包括理化性质、亲/疏水性、跨膜区、糖基化位点、亚细胞定位、二级结构、三级结构等。【结果】FPV LN3株VP2基因全长1 755 bp,编码584个氨基酸;与GenBank上登录的15株FPV同属一个大分支,相似性为98.9%~99.7%;与CPV处于不同分支上。生物信息学软件预测显示,FPV LN3株VP2蛋白为亲水性蛋白,无跨膜结构;含有7个潜在N-糖基化位点、86个O-糖基化位点和50个磷酸化位点;VP2蛋白在细胞质、细胞核、线粒体中的可能性分别为43.5%、34.8%和21.7%;VP2蛋白二级结构中无规则卷曲、α-螺旋、延伸链、β-转角分别占61.82%、8.90%、24.32%及4.97%,三级结构预测结果与其一致;VP2蛋白共有20个抗原表位。【结论】VP2是FPV遗传变异的关键基因,FPV LN3株VP2蛋白属于亲水性、非跨膜稳定蛋白,共存在20个抗原表位。试验结果为进一步研究FPV VP2蛋白功能及研发新型疫苗提供理论依据。

猫泛白细胞减少症病毒分离鉴定及VP2基因的遗传变异分析

为分析北京地区猫泛白细胞减少症病毒(Feline panleukopenia virus,FPV)的流行毒株及其VP2基因遗传变异情况,对FPV胶体金试纸条检测结果为阳性的病死猫组织进行病毒分离,通过细胞病变、荧光定量PCR、间接免疫荧光和全基因组测序等试验,分离鉴定到1株FPV,命名为FPVBJ-CP/2022株。对决定病毒宿主范围和抗原性的VP2基因系统进化树分析表明,分离株与FPVJF-3株、FPVBeijing-01/2018聚为一支,与FPV疫苗株、CPV群亲缘关系较远。VP2蛋白主要功能位点分析结果显示,VP2蛋白中决定病毒抗原性和宿主嗜性的10个关键位点氨基酸均未发生突变,但该分离株的VP2蛋白序列与GenBank其他FPV毒株的VP2蛋白相比,91位氨基酸由丙氨酸(A)突变为丝氨酸(S),505位氨基酸由天冬酰胺(N)突变为天冬氨酸(D),该突变是否对FPVBJ-CP/2022株VP2蛋白的功能和生物学特性造成改变,有待于进一步研究。论文通过对毒株的遗传变异分析,为更好地预防和控制FPV感染提供了研究基础。

猫泛白细胞减少症病毒YX01株的分离鉴定及致病性分析

用F81细胞从疑似感染猫泛白细胞减少症病毒(FPV)猫的组织样本中分离出1株FPV毒株,命名为FPV YX01株,通过电镜观察、血凝试验以及化学试剂(20%乙醚和0.1 mol/L HCl)处理,分析了FPV YX01株的生物学特性;基于VP2基因序列,分析了FPV YX01株的遗传进化,通过动物回归试验评价了该分离毒株的致病力。结果显示,FPV YX01毒株感染F81细胞后,细胞出现萎缩拉丝、脱落、生长缓慢等典型病变;电镜观察可见FPV YX01病毒粒子呈圆形,表面无囊膜结构,直径约25 nm,可被FPV特异性抗体识别;遗传进化分析发现,YX01毒株VP2蛋白中决定FPV血凝活性和毒力的关键氨基酸位点未发生突变,且YX01毒株与意大利EU498695毒株高度同源;动物回归试验显示,感染YX01毒株可引起猫出现食欲减退、腹泻、体温双相热、肠胀气、肝脏出血以及白细胞数量急剧减少等猫泛白细胞减少症的典型临床症状,同时病理切片可见肝脏和肠组织出血、炎性细胞浸润等现象。研究结果分离到1株具有较强致病力的FPV毒株YX01株,为FPV调查、检测、试剂研发及抗体制备提供了物质基础。

北京部分地区猫泛白细胞减少症病毒、疱疹病毒和杯状病毒流行病学调查分析

为了解北京地区猫泛白细胞减少症病毒(FPV)、疱疹病毒(FHV)和杯状病毒(FCV)的流行情况,并统计分析年龄和疫苗免疫与FPV、FHV和FCV阳性率的相关性,本调查于2021年1月—2023年6月收集北京地区多家宠物医院疑似感染FPV(313份)、FHV(1869份)或FCV(1638份)和体检动物样本,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)进行检测,并对结果进行统计分析。结果显示,FPV、FHV和FCV阳性率分别为57.51%、39.43%和42.31%;0~6月龄猫FPV阳性率显著高于>1~9岁和>9岁猫(P<0.05),说明0~6月龄猫更易感染FPV;0~6月龄猫FHV阳性率显著高于>6~12月龄、>1~9岁和>9岁猫(P<0.05),说明0~6月龄猫更易感染FHV;0~6月龄和>6~12月龄猫FCV阳性率显著高于>1~9岁和>9岁猫(P<0.05),说明0~12月龄猫更易感染FCV;免疫猫FPV、FHV和FCV阳性率极显著低于未免疫猫(P<0.01),说明疫苗免疫与FPV、FHV和FCV阳性率呈强相关性,进一步表明疫苗免疫可有效降低FPV、FHV和FCV阳性率。因此,建议在0~6月龄及时进行猫三联疫苗免疫,可有效降低猫感染FPV、FHV和FCV的风险,更有利于宠物健康。

2021—2023年唐山地区猫泛白细胞减少症的流行病学调查

为了解唐山地区猫泛白细胞减少症的流行情况,采用临床检查、血常规检测和胶体金试纸条检测等方法对唐山地区10家宠物医院的1546例猫泛白细胞减少症疑似病例进行调查分析。结果显示:2023年猫泛白细胞减少症阳性率最低,为10.40%。3~8月龄猫的猫泛白细胞减少症阳性率最高,且7月龄以下患猫出现严重的昏睡、发烧、厌食的症状更为明显。该调查分析为唐山地区猫泛白细胞减少症的防治提供参考依据。

一例幼猫泛白细胞减少症的诊断与治疗

猫泛白细胞减少症是危害猫科动物最严重的传染病之一,发病率和死亡率均较高,其多发于幼猫。总结一例幼猫泛白细胞减少症病例的临床诊断和治疗方案,为该病的诊疗提供参考。

F81细胞无血清悬浮驯化后培养猫泛白细胞减少症病毒的研究

为解决国内猫泛白细胞减少症生物制品短缺的问题,筛选出适用于猫泛白细胞减少症病毒增殖的猫肾细胞系(F81),通过对贴壁F81进行降血清悬浮驯化培养,得到了无血清全悬浮培养F81细胞系。研究建立的F81细胞系在初始传代细胞密度为1×10^(6)cells/mL时,培养48 h后细胞密度可达到7.02×10^(6)cells/mL。对培养猫泛白细胞减少症病毒工艺进行摸索,确定最佳接毒工艺为同步接毒法,初始接毒细胞密度为1×10^(6)cells/mL、MOI为3.5×10^(-2),培养72 h后收毒,病毒滴度可达到10^(7.25)TCID_(50)/0.1 mL。该方法使用同源细胞系且未添加动物血清,为猫泛白细胞减少症生物制品生产降低了下游生产纯化难度,同时降低了生产成本,可显著提高产品核心竞争力。研究结果可为其他猫用生物制品相关研究提供参考。

猫泛白细胞减少症病毒YB-1株的分离鉴定及其与疫苗株的差异性分析

为了解我国吉林省猫泛白细胞减少症病毒(FPV)VP2基因的特征及其与疫苗株的差异,本研究采集吉林省疑似患有猫泛白细胞减少症的猫肛门拭子样品,经PCR检测后将FPV阳性样品接种F81细胞,连续盲传至出现显著细胞病变(CPE),经电镜观察可见直径约20 nm~24 nm的病毒粒子,与FPV形态一致,表明分离出一株FPV,命名为YB-1。经PCR扩增FPV YB-1株VP2全长基因,测序后比对分析并构建进化树,结果显示,该病毒株的VP2蛋白氨基酸序列与GenBank中选取的其他参考株的同源性为96.8%~99.8%;分离株与来自匈牙利的病毒株(933/07,EU360958)处于同一进化分支,与两个疫苗株(EU498681、EU498680)的遗传距离较远。进一步比对该分离株与GenBank中FPV疫苗株的VP2氨基酸序列差异性,发现存在3个氨基酸位点的突变:A^(91)S、I^(232)V、L^(562)V,其中有2个位点A^(91)S、I^(232)V正位于抗原位点结构位置,推测是该病毒株在本地区自然环境、动物宿主内环境中自然选择下逐渐出现的变异,这可能是疫苗造成免疫失败的原因之一。本研究在国内首次对FPV分离株与商品化疫苗株之间的基因差异进行了分析,丰富了国内FPV的资料,为后续FPV疫苗的研发以及风险防控提供了数据支持。

北京地区猫泛白细胞减少症病毒VP2基因的遗传进化分析

猫泛白细胞减少症病毒(FPV)对猫科动物危害较大,病毒VP2基因在决定其抗原性和宿主范围中起重要作用。为了解FPV的流行状况及其VP2基因遗传变异和进化方向,本研究对北京地区宠物医院疑似感染FPV的猫采样,共采集到16份粪便样品;对FPV VP2基因进行PCR扩增和测序,得到12条长度1755 bp的VP2序列;利用软件将获得的VP2基因序列与国内外报道的流行株进行同源性比对、遗传进化分析,结果显示,12条VP2序列均属于G1基因群,与参考株M38246相比亲缘关系较远。本研究为北京地区猫泛白细胞减少症的有效防控提供理论依据。

猫泛白细胞减少症病毒研究进展

猫泛白细胞减少症病毒(Feline panleukopenia virus,FPLV),又称为猫瘟病毒、猫细小病毒(Feline parvovirus,FPV)或猫传染性肠炎病毒,具有很强的传播性,变异快,分布广,会导致猫科和部分其他科的动物突然发病并且精神沉郁、体温上升、出血性肠炎、腹泻、呕吐、白细胞显著减少等。各年龄的猫都能感染猫细小病毒,其中幼龄猫最为易感。猫瘟可以发生在各个季节,其中秋冬季节更常见。该病会造成猫养殖行业的严重经济损失。近年来,由于猫细小病毒导致严重疫情的相关报道越来越多,猫细小病毒也越发引起大家的关注。本文从病原学特征、流行病学、临床特征、病理特征、临床检测方法、治疗和预防等方面对FPV进行了综述,以期为猫泛白细胞减少症病毒疫苗的研制提供理论基础。

猫泛白细胞减少症病毒、猫杯状病毒和猫疱疹病毒1型三重TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立与应用

为建立一种能够快速检测猫泛白细胞减少症病毒(FPV)、猫杯状病毒(FCV)和猫疱疹病毒1型(FHV-1)的三重荧光定量RT-PCR方法,本研究根据FPV VP2基因、FCV ORF2基因和FHV-1 TK基因分别设计引物与探针,采用上述引物经PCR分别扩增上述3种病原的目的基因并克隆至pMD18-T载体中,构建重组质粒标准品pMD18-T-FPV、pMD18-T-FCV和pMD18-T-FHV-1,并均经PCR和测序鉴定。将3种重组质粒标准品稀释到同一浓度1×10^(8)拷贝/μL,按体积比1∶1∶1混合后作为模板,采用方阵法优化各反应条件后,建立了检测上述病原的三重TaqMan荧光定量RT-PCR方法。以FPV、FCV、FHV-1、猫博卡病毒、猫冠状病毒、猫支原体、猫白血病病毒、猫星状病毒的基因组为模板采用本研究建立的方法检测,评估该方法的特异性,结果显示,该方法仅能检测到FPV、FCV、FHV-1,而其他病原的检测结果均为阴性。选取1×10^(0)拷贝/μL~1×10^(6)拷贝/μL的混合质粒标准品和10^(-0.5) TCID_(50)/mL~10^(5.5) TCID_(50)/mL的混合病毒液分别作为模板,采用本研究建立的方法检测,评估该方法检测重组质粒和病毒的敏感性,结果显示,该方法对重组质粒标准品pMD18-T-FPV、pMD18-T-FCV和pMD18-T-FHV-1的检测限均为1.0×10^(1)拷贝/μL,对3种病毒的检测限均约为10^(0.5) TCID_(50)/mL;以1×10^(7)拷贝/μL、1×10^(5)拷贝/μL、1×10^(3)拷贝/μL质粒标准品混合物作为模板分别进行组内和组间的重复性试验,结果显示,组内和组间重复性试验的变异系数(CV)均低于3%。利用建立的该三重荧光定量RT-PCR和常规PCR对81份临床样品(77份猫的眼、鼻、咽、肛混合拭子样品和4份组织病料样品)分别检测,结果显示三重荧光定量RT-PCR检测出47份FPV、13份FCV和13份FHV-1阳性样品,而常规PCR分别检测出39份FPV、9份FCV和6份FHV-1阳性样品,该三重荧光定量RT-PCR与FPV、FCV、FHV-1常规PCR的总符合率分别为90.12%、95.06%、92.59%。本研究建立的三重TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法特异性强、敏感性高、重复性好,为FPV、FCV、FHV-1临床样品的快速鉴别检测提供了有力技术支持。

猫泛白细胞减少症主要病原研究进展

猫泛白细胞减少症(FPL)是一种常见的猫科动物接触性传染病,主要由猫细小病毒(FPV)和一些犬细小病毒2型(CPV-2)的变异株导致。近期,我国FPL的临床病例数量呈现增多趋势。本文将对FPV和CPV-2在分子生物学方面的研究进展,以及目前FPL的流行病学、致病机制、临床症状、病理表现、诊疗手段和疫苗研究现状进行综述,以期为该病的诊疗和防治提供思路。

38例猫泛白细胞减少症的临床病例分析

研究旨在了解猫泛白细胞减少症的临床病例情况,以2021年上海市松江区3家动物医院收治的38例患有猫泛白细胞减少症病例为研究对象,进行回顾性调查研究,从患病季节、患病动物的性别、品种、年龄、免疫情况等基本信息和临床症状等方面分析各因素对猫泛白细胞减少症的影响。结果显示:冬季猫泛白细胞减少症的发病率最高,为42.11%;各品种中英国短毛猫发病率最高,为31.58%,其次是布偶猫和中华田园猫。38例猫泛白细胞减少症病例中,2月龄的猫发病率最高,为34.21%;从未注射疫苗和首次免疫的发病率较高,均超过30%。临床检查时患猫可能会出现精神不振、食欲减退、发热、呕吐及腹泻等症状。38例病例中出现发热症状的14例,占36.84%;无发热情况的病例24例,占63.16%。研究表明,冬季为猫泛白细胞减少症的多发季节,英国短毛猫、布偶猫和中华田园猫患病率较高,幼龄猫和未接种疫苗的猫感染率较高,临床症状比较多样。

一例猫泛白细胞减少症的诊疗

1只雄性猫在送医后出现精神沉郁、呕吐、腹泻和发热等症状,经临床检查、血常规检查、快速诊断试纸检测后确诊为猫泛白细胞减少症。经过1周的特异性和对症治疗,患猫渡过危险期。后期检查显示,该患猫出现了贫血、肝功能减退和弥散性血管内凝血(DIC),对其进行输血和保肝治疗后,患猫大部分指标恢复正常,精神、食欲良好,皮下出血和黄疸等临床症状消失,预后良好,顺利出院。

一例幼龄猫泛白细胞减少症的诊断和治疗

本诊所近期接诊一例未打疫苗,感染猫泛白细胞减少症病毒的幼猫,通过体格检查,血液学,抗原学诊断,确诊为猫泛白细胞减少症病毒感染;通过5 d的输液治疗和对因治疗,症状改善明显,第7 d出院。故总结此病例,希望对宠物诊疗方面提供力所能及的帮助。

猫泛白细胞减少症的诊断与预防

猫泛白细胞减少症是一种猫及猫科动物的高度接触性致死性传染病。通过对猫泛白细胞减少症的流行特点、临床症状、诊断及预防等进行概述,以期为该病在临床的诊断和预防提供参考。

猫泛白细胞减少症的临床症状、诊断和防治

猫泛白细胞减少症是由猫细小病毒病引起以高热、呕吐、脱水、白细胞严重减少、出血性肠炎为主要特征的传染病。该病传播速度快、感染性极强、对幼猫致死率高,是当前最主要的猫传染病之一。对猫泛白细胞减少症的病原特性、流行病学特点、致病机理、临床诊断、防治措施等方面进行介绍,为猫泛白细胞减少症防治提供参考。

猫科动物猫泛白细胞减少症血清抗体调查

Feline panleukopenia virus (FPV),belonging to the genus Parvovirus within the family Parvoviridae, infects and causes disease in carnivore species throughout the world. However, few epidemiological studies of this virus have been done in wildlife in China. The aims of this study were to determine the infection rate of FPV in captive tigers, lions and domestic cats. Serum samples were obtained from 207 tigers and 4 lions between 2002 and 2006 in different wildlife zoos of China,and 23 domestic cats, and further tested for antibodies against FPV by serum neutralization(SN) assay and hemagglutination-inhibition (HI) assay, whose results are consistent. A seropositive rate of 53.1% was found in tigers,25% in lions and 26% in cats. These results indicated that most of the felines had been infected with feline panleukopenia virus, and the virus may cause disease in carnivore species in China.

虎源猫泛白细胞减少症病毒的分离鉴定

利用细胞培养方法从中国某虎园送检的腹泻虎肠内容物中分离出1株细小病毒(TPV/HT-69),经系统的形态学、理化学、血清学试验、人工感染试验、PCR扩增和VP2基因序列分析,符合猫泛白细胞减少症病毒特征,证明该毒株为猫泛白细胞减少症病毒强毒。