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人源蛋白酶体α亚基6的酵母表面展示及表达优化(英文)
1
作者
唐语谦
林影
+1 位作者
韩双艳
梁世中
《陕西科技大学学报(自然科学版)》
2007年第6期1-6,共6页
为构建人源蛋白酶体α亚基6(hPSA6)的酵母表面展示体系用于抗体表位分析和研究泛素-蛋白酶体途径,并优化hPSA6的展示表达,将基因PSA6_HUMAN克隆于表达载体pICAS-H,该载体带有His.tag标签可检测表达水平.经过重组酵母的培养,用抗His.tag...
为构建人源蛋白酶体α亚基6(hPSA6)的酵母表面展示体系用于抗体表位分析和研究泛素-蛋白酶体途径,并优化hPSA6的展示表达,将基因PSA6_HUMAN克隆于表达载体pICAS-H,该载体带有His.tag标签可检测表达水平.经过重组酵母的培养,用抗His.tag或抗hPSA6的单克隆抗体和荧光二抗进行免疫荧光染色,通过流式细胞仪和荧光显微镜检测到hPSA6已经成功地展示于酿酒酵母表面.通过对培养基中不同初始浓度的葡萄糖和酸水解酪素的诱导培养,发现hPSA6呈现出不同的展示水平,与对照相比,对His.tag进行免疫荧光检测观测到3%酸水解酪素诱导培养可获得超过70%的展示表达率,3%葡萄糖诱导培养可达到50%以上表达率,2%葡萄糖诱导也有接近40%表达率.考虑到葡萄糖效应和灭菌过程中高浓度的葡萄糖易碳化,采用2%葡萄糖进行诱导表达较3%更适合于hPSA6的展示表达.
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关键词
泛素α蛋白酶体途径
蛋白酶体
α亚基6
酵母表面展示
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职称材料
题名
人源蛋白酶体α亚基6的酵母表面展示及表达优化(英文)
1
作者
唐语谦
林影
韩双艳
梁世中
机构
华南理工大学生物科学与工程学院
出处
《陕西科技大学学报(自然科学版)》
2007年第6期1-6,共6页
基金
国家科技攻关计划项目(2004BA711A20)
文摘
为构建人源蛋白酶体α亚基6(hPSA6)的酵母表面展示体系用于抗体表位分析和研究泛素-蛋白酶体途径,并优化hPSA6的展示表达,将基因PSA6_HUMAN克隆于表达载体pICAS-H,该载体带有His.tag标签可检测表达水平.经过重组酵母的培养,用抗His.tag或抗hPSA6的单克隆抗体和荧光二抗进行免疫荧光染色,通过流式细胞仪和荧光显微镜检测到hPSA6已经成功地展示于酿酒酵母表面.通过对培养基中不同初始浓度的葡萄糖和酸水解酪素的诱导培养,发现hPSA6呈现出不同的展示水平,与对照相比,对His.tag进行免疫荧光检测观测到3%酸水解酪素诱导培养可获得超过70%的展示表达率,3%葡萄糖诱导培养可达到50%以上表达率,2%葡萄糖诱导也有接近40%表达率.考虑到葡萄糖效应和灭菌过程中高浓度的葡萄糖易碳化,采用2%葡萄糖进行诱导表达较3%更适合于hPSA6的展示表达.
关键词
泛素α蛋白酶体途径
蛋白酶体
α亚基6
酵母表面展示
Keywords
ubiquitin-proteasome pathway
proteasome subunit alpha 6
yeast surface display
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
人源蛋白酶体α亚基6的酵母表面展示及表达优化(英文)
唐语谦
林影
韩双艳
梁世中
《陕西科技大学学报(自然科学版)》
2007
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