泛素化蛋白酶体途径及其在子宫内膜癌中的生物学功能研究进展

子宫内膜癌是女性生殖系统常见的恶性肿瘤,发病率逐年上升且发病年龄逐渐年轻化,研究探索新靶点成为实现子宫内膜癌精准治疗的重要环节。泛素-蛋白酶体系统(UPS)是一种翻译后修饰机制,是蛋白质降解的主要途径之一,参与80%~90%的细胞内蛋白质的降解,以此来调节细胞过程,包括转录、有丝分裂、细胞周期、增殖、凋亡、基因组稳定性和信号传导途径等。研究发现泛素化蛋白与子宫内膜癌的发生、发展密切相关。本文就UPS在子宫内膜癌发生、发展中的生物学功能及机制展开述评,加深对子宫内膜癌发病机制的了解,为子宫内膜癌的防治、预后提供新思路、新靶点。

乙型肝炎表面抗原泛素化修饰的研究进展

慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)患者体内存在的大量亚病毒颗粒可以诱导免疫耐受,导致乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)的持续感染.患者要实现功能性治愈的目标,则需要获得血清乙型肝炎表面抗原(hepatitis B surface antigen,HBsAg)的消失,但目前临床上尚缺乏有效抑制HBV共价闭合环状DNA的有效药物,因此HBsAg很难被清除.蛋白质的泛素化修饰是HBsAg降解的一条潜在路径,这将有可能改变HBV的生存和免疫环境.本文重点对有关HBsAg的泛素化,包括类泛素化和去泛素化的研究进行综述,以期为CHB抗病毒治疗探索新的途径提供参考.

泛素化在调控铁死亡中的作用

铁死亡是一种由脂质过氧化驱动的铁依赖性的新的细胞死亡方式,越来越多的证据表明,铁死亡与各种病理状态有关,如神经退行性疾病、糖尿病肾病、癌症等,脂质过氧化驱动的铁死亡可能促进或抑制这些疾病的发生发展,细胞中抗氧化系统通过抑制脂质过氧化在抵抗铁死亡过程中发挥着重要作用。铁死亡的关键通路有以SLC7A11-GPX4为关键分子的氨基酸代谢通路、以铁蛋白或转铁蛋白为主的铁代谢通路,以及脂质代谢通路。铁死亡的发生受到细胞内蛋白质的调节,这些蛋白质会发生各种翻译后修饰,包括泛素化修饰。泛素-蛋白酶体系统(ubiquitin-proteasome system,UPS)是细胞内主要降解系统之一,通过酶促级联反应催化泛素分子标记待降解蛋白,随后由蛋白酶体识别并降解目标蛋白质。UPS根据其降解底物的不同在调节铁死亡的反应中发挥双重作用。UPS通过促进铁死亡关键分子(如SLC7A11、GPX4、GSH)以及抗氧化系统成分(如NRF2)的泛素化降解从而促进铁死亡,也可以通过促进脂质代谢通路中相关分子(如ACSL4、ALOX15)的泛素化降解从而抑制铁死亡。本综述介绍泛素化修饰在调控铁死亡进程中作用的最新研究进展,总结了已发表的关于E3泛素连接酶和去泛素酶调控铁死亡的研究,归纳了泛素连接酶、去泛素酶调控铁死亡的作用靶点,有助于确定人类疾病中新的预后指标,为这些疾病提供潜在的治疗策略。

去泛素化酶调控骨改建相关信号通路的研究进展

去泛素化酶通过去除蛋白连接的泛素链,在维持细胞蛋白质的功能和稳定性中发挥关键作用。近年来不断有研究发现去泛素化酶参与调节生长发育进程中的骨改建过程。骨改建达到功能平衡需要多种信号通路参与其中,如成骨相关的Wnt/β-catenin、BMP信号通路,骨吸收相关的NF-κB、RANKL/RANK信号通路等。本文简要介绍了泛素-去泛素化过程,并且就去泛素化酶通过调控成骨、破骨信号通路蛋白的功能和稳定性参与骨改建进行综述。

蛋白泛素化修饰在脓毒症中的作用研究进展

脓毒症是指由于感染反应失调引起的多器官功能障碍。泛素化是指泛素分子在多种泛素化相关酶的作用下对靶蛋白进行特异性修饰的过程。近年来,有研究发现泛素化-蛋白酶体系统与脓毒症的病理生理过程存在密切关系。随着泛素化与炎症之间的病理生理机制的研究逐渐深入,选择泛素化过程作为脓毒症的治疗靶点将成为一个新的研究方向。

铁死亡通路泛素化调控的研究进展

铁死亡与多种疾病的进程密切相关。细胞内存在着系列抗铁死亡系统,其主要功能为清除脂质过氧化物,抑制铁死亡的发生。泛素化是蛋白翻译后修饰的一种关键类型,能够影响底物蛋白的降解、细胞内定位及功能。泛素化修饰在对诸如SLC7A11、GPX4、FSP1、铁代谢相关蛋白等铁死亡通路关键蛋白的调控中发挥重要作用。该文综述了与铁死亡通路关键蛋白的泛素化修饰相关的研究进展,以明确泛素化调控在铁死亡通路中的具体作用。

多梳抑制性去泛素化酶复合物的结构与功能及其在血液肿瘤发生发展中的作用

多梳抑制性去泛素化酶(polycomb repressive deubiquitinase,PR-DUB)复合物是多梳蛋白家族的成员之一,通过调节组蛋白修饰参与染色体的表观遗传修饰。多梳抑制性复合物1(polycomb repressive complex 1,PRC1)和PR-DUB复合物通过对H2AK119Ub泛素化与去泛素化修饰调控平衡,保护活性基因免受异常沉默,去泛素化功能与促进基因活化和建立转录允许的染色质状态有关,除此之外还激活增强子并促进双链断裂处DNA损伤修复。附加性梳样1(additional sex comb-like1,ASXL1)作为表观遗传支架组装染色质修饰复合物和转录因子参与表观遗传调控。BRCA1相关蛋白1(BRCA1-associated protein 1,BAP1)作为去泛素化酶去除底物的泛素化修饰。PR-DUB复合物由核心二聚体和其他辅助因子组成,BAP1与ASXL1形成核心二聚体,其他亚基相互作用调节PR-DUB复合物靶向和功能。ASXL1和BAP1是与PR-DUB复合物去泛素化功能最相关的2个亚基,ASXL1的DEUBAD结构域激活BAP1发挥去泛素化作用水解H2AK119Ub1。了解ASXL1和BAP1的结构以及相互作用机制对研究PR-DUB复合物特异性去泛素化作用的机制至关重要。在人类中,PR-DUB复合物成分的突变经常引起多种血液肿瘤。ASXL 1基因突变常导致蛋白质翻译提前结束,大部分是由于C末端PHD结构域缺失导致。目前认为,PR-DUB复合物中突变的ASXL1或BAP1、表观遗传因子以及Akt/mTOR等靶点或信号通路相互作用是促进血液肿瘤发生发展的可能机制。这对于针对潜在的治疗靶点研究开发新的特异性靶向治疗药物至关重要。本文将介绍PR-DUB复合物的结构与功能、作用机制及其在血液肿瘤疾病中的发生,重点就ASXL1和BAP1进行综述,并系统总结了潜在的靶向治疗药物,以期为PR-DUB复合物在血液疾病防治中的研究提供科学参考。

胞质TGM2依赖GTP抑制TRIM21介导的STAT1泛素化降解促进胃癌恶性进展

背景与目的既往研究提示谷氨酰胺转胺酶2(transglutaminase 2,TGM2)是多种肿瘤的潜在治疗靶点,但其在胃癌中的作用及机制尚未明确。本研究中,我们试图揭示TGM2在胃癌中的作用和相关机制。方法分析TGM2在胃癌细胞和组织中的表达水平,并通过一系列体内外实验分析TGM2在胃癌中的功能,包括蛋白质印迹、免疫组化、CCK8、集落形成实验、transwell实验、异种移植瘤模型和转移瘤模型。通过基因富集分析、定量PCR和蛋白质印迹筛选TGM2在胃癌中潜在的作用靶标。通过功能损益实验和挽救实验验证TGM2对STAT1的调控作用。通过免疫共沉淀、质谱分析、定量PCR和蛋白质印迹筛选STAT1互作蛋白,并阐明其调控机制。最后,通过突变TGM2和使用TGM2的酶活性调节剂(ZM39923和A23187)以明确TGM2通过何种酶活性促进胃癌恶性进展,并阐明其潜在机制。结果研究结果表明TGM2在胃癌组织中高表达,与病理分级密切相关,其高表达预示患者不良预后。TGM2过表达/敲低能够促进/抑制胃癌细胞增殖、迁移和侵袭。而敲低/过表达STAT1能够逆转TGM2在胃癌细胞中的作用。进一步分析提示TGM2通过抑制STAT1泛素化/降解促进胃癌恶性进展。TRIM21被鉴定为胃癌中STAT1的E3泛素连接酶。TGM2通过与GTP结合的酶活性促进TRIM21和STAT1解离。A23187能够抑制TGM2对STAT1的作用,并在体外和体内实验中逆转TGM2的促肿瘤作用。结论本研究揭示了在胃癌中TGM2调控STAT1的作用和机制,提示TGM2可作为胃癌治疗的潜在靶点,了解TGM2与GTP结合的酶活性有助于开发靶向药物,优化现有治疗策略。

Lnc-PCIR通过调控PABPC4的泛素化促进喉癌细胞的增殖和迁移

目的:探究LncRNA RP11-214F16.8(Lnc-PCIR)通过调控多腺苷酸结合蛋白质4[poly(A)-binding protein cytoplasmic 4,PABPC4]的泛素化对喉癌细胞增殖、迁移的影响。方法:利用Human Protein Atlas、GEPIA数据库分析Lnc-PCIR、PABPC4在头颈鳞状细胞癌组织中的水平及患者的总体生存期。选取我院130例喉癌患者的癌及癌旁组织标本,RT-qPCR、Western blot检测组织Lnc-PCIR、PABPC4 mRNA和蛋白水平,并分析Lnc-PCIR水平与患者临床病理参数的关系。将HEP-2、TU212细胞进行不同转染,分为si-Lnc-NC组、si-Lnc-PCIR组、Lnc-NC组、Lnc-PCIR组、si-Lnc-PCIR+NC组、si-Lnc-PCIR+PABPC4组。CCK-8实验、EdU染色和Transwell实验检测细胞增殖和迁移能力;RT-qPCR检测细胞Lnc-PCIR、PABPC4 mRNA水平;HEP-2、TU212细胞分别经放线菌酮(cycloheximide,CHX)、MG132、ML364处理后,Western blot检测细胞PABPC4蛋白水平。20只裸鼠经皮下注射已转染的HEP-2细胞悬液,分为si-Lnc-NC组、si-Lnc-PCIR组;1个月后,测定移植瘤体积、质量和Lnc-PCIR、PABPC4蛋白水平。结果:数据库显示头颈鳞状细胞癌组织中Lnc-PCIR、PABPC4水平高于正常组织,且Lnc-PCIR、PABPC4水平与总体生存期呈负相关(均P<0.05)。与正常组织相比,患者喉癌组织中Lnc-PCIR、PABPC4 mRNA和蛋白水平升高,且Lnc-PCIR水平与患者性别、TNM分期、肿瘤分化程度、淋巴结转移相关(均P<0.05)。敲低Lnc-PCIR后,细胞Lnc-PCIR、PABPC4蛋白水平降低;细胞培养1 d、2 d、3 d后的OD值、EdU阳性率降低,细胞迁移数减少。而过表达PABPC4能部分逆转敲低Lnc-PCIR对细胞增殖和迁移的影响(均P<0.05);过表达Lnc-PCIR能降低细胞PABPC4泛素化水平(P<0.05)。敲低Lnc-PCIR能抑制小鼠移植瘤生长(P<0.05)。结论:Lnc-PCIR通过调控PABPC4的泛素化促进喉癌细胞的增殖和迁移。

SCF^(β-TrCP)泛素化降解TFAP4抑制结直肠癌上皮间质转化的分子机制研究

目的 探究SCF^(β-TrCP)泛素化降解转录因子激活增强子结合蛋白4(transcription factor-activated enhancer-binding protein 4, TFAP4)对结直肠癌上皮间质转化的影响。方法 体外培养人结肠腺癌细胞SW480,分别用不同浓度的MLN4924处理24h,然后采用Western blot法检测内源性TFAP4蛋白水平变化。在MLN4924处理的基础上,加入CHX分别干预不同时间,检测TFAP4的蛋白半衰期和泛素化水平差异。在CHX干预的SW480细胞中过表达带FLAG标签的TrCP-1,探究β-TrCP对TFAP4表达的影响,通过免疫共沉淀(co-immunoprecipitation, Co-IP)实验检测过表达或敲低β-TrCP不是因为影响了其他信号通路而改变TFAP4的水平。将TFAP4上135位的E突变为A,139位的S突变为A,然后在CHX干预的SW480细胞中转染结构域突变的TFAP4,测定TFAP4半衰期和泛素化水平变化。CK1/CK2/GSK3磷酸化关键酶抑制剂对SW480细胞进行干预,Western blot法检测TFAP4水平,随后检测CK2抑制剂对TFAP4泛素化水平的影响,通过划痕实验分析细胞迁移能力,通过Transwell实验分析细胞侵袭能力。结果 TFAP4随着MLN4924处理浓度变化呈剂量依赖式增加,MLN4924处理能够显著延长内源TFAP4蛋白的半衰期,TFAP4和CK2存在相互作用,CK2抑制剂能降低TFAP4泛素化水平,蛋白的半衰期得到明显延长,敲低β-TrCP引起TFAP4的降解受到明显抑制,β-TrCP与TFAP4直接相互作用,并促进其被泛素化,TFAP4中E135A和S139A位点突变延长其半衰期,沉默β-TrCP能促进细胞增殖和迁移。结论 SCF^(β-TrCP)可能通过泛素化修饰降解TFAP4,从而抑制结直肠上皮间质转化的发生,进而抑制肿瘤的浸润、转移,可为结直肠癌治疗提供新的思路。

去泛素化酶USP20与胆固醇结石

胆固醇结石作为胆囊结石中发生率最高的一种结石,其形成机制可能与胆固醇代谢相关。泛素化是一种能够调控蛋白及蛋白底物,以及介导蛋白降解的蛋白修饰作用,对细胞具有重要的生理学作用,而去泛素化酶(DUBs)是一种去除泛素化以达到影响蛋白质功能的酶,目前泛素特异性蛋白酶20(USP20)作为一种去泛素化酶,可以通过对脂代谢关键限速酶起到去泛素化作用而影响血中胆固醇的含量。本文主要对胆固醇结石的形成、DUBs及泛素特异性蛋白酶(USPs)与疾病的关联进行综述,并探讨USP20对胆固醇的影响及其与胆固醇结石之间可能存在的关联。

Parkin泛素化调节线粒体稳态在心血管疾病中的研究进展

线粒体不仅为细胞提供能量,还参与细胞钙稳态、细胞信息传递、细胞凋亡、细胞生长和分化等过程。因此,维持线粒体稳态对机体的正常生命活动至关重要。泛素化是一种蛋白质翻译后修饰方式,通过调节线粒体稳态过程进而参与细胞的多种生理病理过程。但目前还未对泛素化调节线粒体稳态的机制进行总结性阐述,特别是Parkin蛋白对心血管疾病影响的机制。该文主要通过对Parkin蛋白泛素化调节线粒体稳态的具体机制进行讨论,同时将线粒体稳态失衡对心血管疾病的影响进行综述,以期对心血管疾病的临床治疗提供潜在的治疗策略。

高温胁迫下水稻胚乳磷酸化与泛素化蛋白质组学联合分析

水稻胚乳的代谢依赖于多个翻译后修饰信号网络的精确调控,包括磷酸化和泛素化修饰。本研究通过磷酸化与泛素化蛋白质组学的联合分析,发现水稻胚乳中有143个蛋白质同时具有磷酸化和泛素化位点,这为研究磷酸化和泛素化修饰之间的串扰机制提供了组学基础。一方面,磷酸化修饰通过影响泛素-蛋白酶体系统中的关键蛋白来调控泛素化修饰;另一方面,泛素化修饰通过影响蛋白激酶和蛋白磷酸酶来间接调控植物体内的磷酸化信号网络。高温胁迫下,磷酸化和泛素化修饰协同调控酚类化合物的合成通路,并最终影响酚类化合物清除活性氧的能力以及植物在逆境中的抗性。多种淀粉代谢相关酶同时具有磷酸化和泛素化修饰,并且有18对具有不同修饰类型的位点出现在同一蛋白质的相邻位置,揭示了不同修饰之间的串扰机制以及高温胁迫中磷酸化与泛素化修饰对淀粉代谢的协同调节作用。

泛素化修饰关键酶在植物抗逆反应中的功能研究进展

泛素化修饰是植物蛋白质翻译后修饰的重要组成部分,通过对蛋白质的选择性降解,参与调控植物生长发育和多种逆境胁迫反应。泛素化修饰反应由3种关键酶协同作用完成。泛素分子通过与泛素激活酶的巯基酯键连接从而被激活,被激活的泛素分子再与泛素结合酶形成复合体,最后在泛素连接酶的作用下完成与靶蛋白的结合。随着蛋白质组学测序技术的不断发展,人们对泛素化修饰的研究更加普遍和深入。大量被泛素化修饰的蛋白及其修饰位点被鉴定出来,有助于深入了解蛋白质的调控机制,进一步解析蛋白质的功能。本文介绍了泛素-蛋白酶体系统的反应过程,泛素化修饰关键酶的结构、数量及分类,并重点围绕泛素激活酶、泛素结合酶和泛素连接酶在植物应对非生物及生物胁迫中的功能研究开展论述,同时也对植物泛素化修饰关键酶的功能研究所面临的问题进行总结,并对泛素化修饰与其他修饰之间的串扰进行了讨论与展望,对于泛素化修饰在植物逆境胁迫领域的深入研究具有重要意义。

基于酵母双杂交文库鉴定鸡PGCs形成过程中的关键泛素化修饰酶

试验拟筛选与C2EIP互作的蛋白,构建调节PGCs形成过程的泛素化E3连接酶复合体。通过逆转录和同源重组等方法构建鸡PGCs酵母文库;将C2EIP连入诱饵空载体pGBKT7中,并转化酵母感受态细胞进行诱饵载体(C2EIP-pGBKT7)的毒性和自激活检测;将酵母文库与诱饵载体菌液共培养后,通过涂板筛选阳性克隆并进行测序和生物信息学分析筛选互作蛋白。结果显示:成功构建了鸡PGCs酵母文库,其滴度为3.0×10^(6)cfu/mL,总库容为1.5×10^(7)cfu,且重组率为100%,符合筛库要求。成功构建无毒性和不能自激活的C2EIP-pGBKT7诱饵载体,能够用于后续的文库筛选。C2EIP-pGBKT7诱饵载体菌液与酵母文库共培养后,通过PCR测序与蛋白序列分析后共筛选了36个C2EIP的互作蛋白,其中RCJMBM04和CCDC174蛋白功能域分析发现分别具有典型的RING功能域和PPXY基序,进行的生物信息学分析发现WWP1和WWP2具有典型的WW功能域,能够与CCDC174结合。研究表明,试验成功鉴定了C2EIP/RCJMB04/CCDC174/WWP泛素化E3连接酶复合体,为后续研究泛素化修饰调控鸡PGCs形成机制奠定理论基础。

泛素化修饰及其调控果实胁迫响应的研究进展

简要介绍泛素化修饰在果实抵御外界逆境胁迫中的重要调控作用,总结泛素化修饰体系,特别是能特异性识别靶蛋白的E3泛素连接酶和具有蛋白酶水解活性的26S蛋白酶体的组成及该体系对靶蛋白的修饰过程。在此基础上,重点阐述以E3泛素连接酶为核心的泛素化修饰在果实应对包括干旱、盐、寒冷、重金属和衰老在内的非生物胁迫,以及病原菌侵染等生物胁迫中的调控作用及其可能的机制。最后指出目前果实中泛素化修饰研究中仍然存在包括泛素化基因和酶功能的鉴定不足、泛素化修饰存在时空调控与去泛素化现象、泛素化修饰位点鉴定手段的缺乏等问题,并提出解决这些问题的技术与方法,以期为深入解析泛素化修饰在果实品质形成和保持中的作用及其机制提供参考。

去泛素化酶USP22在多囊卵巢综合征发病过程中的作用研究

目的 探索去泛素化酶USP22在多囊卵巢综合征(PCOS)发病过程中的作用及机制。方法 利用脱氢表雄酮(DHEA)诱导建立小鼠PCOS模型,免疫组化及Western blot检测USP22在PCOS模型小鼠及对照小鼠卵巢组织中的表达变化;在卵巢颗粒细胞系(KGN)细胞中加入500 nmol/L双氢睾酮(DHT)模拟PCOS颗粒细胞中的高雄状态,并构建靶向USP22的siRNA,敲低KGN细胞中USP22的表达,对照组加入空白siRNA,CCK-8检测各组细胞的增殖变化,RT-PCR检测细胞周期相关分子的mRNA表达水平,Western blot检测细胞周期相关蛋白及信号通路相关蛋白表达情况。结果 USP22蛋白主要定位于卵巢颗粒细胞的细胞核,且在PCOS小鼠卵巢组织中USP22表达显著低于正常小鼠(P<0.05)。细胞实验结果表明:敲低USP22后,KGN细胞的增殖能力显著下降(P<0.05),RT-PCR及Western Blot结果显示细胞周期相关蛋白Cyclin B1、Cyclin D1、Cyclin E1的mRNA及蛋白表达水平均显著下降(P<0.05);而在KGN细胞中敲低USP22的同时加入DHT,KGN细胞增殖能力及相关分子表达下降更为显著(P<0.05);另外,敲低USP22后,KGN细胞中信号通路相关蛋白p-PI3K和p-AKT的表达水平显著下降(P<0.05)。结论 去泛素化酶USP22可通过PI3K/AKT信号通路调控KGN细胞的增殖,从而影响PCOS的发病。

雷公藤多苷调控miR-496表达对高糖诱导的人肾足细胞泛素化通路的影响

目的探究雷公藤多苷调控miR-496表达对高糖诱导的人肾足细胞泛素化通路的影响。方法将人肾足细胞分为NC组、HG组、TWP-L组、TWP-M组、TWP-H组、miR-496组、miR-NC组、TWP-H+anti-miR-496组。CCK-8检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡;蛋白质印迹检测细胞中p53、COP1、caspase-3、nephrin、podocin蛋白表达;qRT-PCR检测细胞中miR-496表达。结果与NC组比较,HG组细胞存活率、细胞中miR-496表达(0.23±0.04)和COP1(0.43±0.05)、nephrin(0.24±0.03)、podocin(0.31±0.04)蛋白表达均明显降低,细胞凋亡率(23.94±2.46)、细胞中p53(1.26±0.15)、caspase-3(0.61±0.08)蛋白表达均明显增加(P<0.05);与HG组比较,TWP-L组、TWP-M组、TWP-H组细胞存活率、细胞中miR-496表达和COP1、neph-rin、podocin蛋白表达均明显增加,细胞凋亡率、细胞中p53、caspase-3蛋白表达均明显降低(P<0.05);与miR-NC组相比,miR-496组细胞存活率、细胞中miR-496表达(0.87±0.10)和COP1(0.80±0.09)、nephrin(0.58±0.06)、podocin(0.75±0.08)蛋白表达明显增加,细胞凋亡率(10.61±1.17)、细胞中p53(0.32±0.04)、caspase-3(0.25±0.03)蛋白表达明显降低(P<0.05);与TWP-H组相比,TWP-H+ant-miR-496组细胞存活率、细胞中miR-496表达(0.18±0.02)和COP1(0.46±0.06)、nephrin(0.31±0.04)、podocin(0.34±0.04)蛋白表达明显降低,细胞凋亡率(20.36±2.18)、细胞中p53(1.19±0.13)、caspase-3(0.57±0.06)蛋白表达明显升高(P<0.05)。结论雷公藤多苷可能通过促进miR-496表达,对高糖诱导的人足细胞泛素化蛋白酶通路的活化发挥促进作用,对足细胞的凋亡发挥抑制作用。

去泛素化酶ABRO1对李斯特菌感染单核巨噬细胞IL-1β释放的影响及其机制

目的观察去泛素化酶Abraxas兄弟蛋白(ABRO1)对李斯特菌(LM)感染的小鼠单核巨噬细胞J774A.1白细胞介素(IL)-1β释放的影响,并探讨相关机制。方法培养J774A.1细胞,分别感染有李斯特菌溶血素O(LLO)的野生型LM菌株(野生型组)、敲除LLO的hly基因缺失(Δhly)LM菌株(基因缺失组)及Δhly株回补hly基因的LM菌株(回补株组),采用Western blotting法检测ABRO1蛋白,ELISA法检测细胞培养液上清中的IL-1β。将J774A.1细胞分为NI组(未感染LM菌株)、WT组(感染WT LM菌株)与Δhly组(感染Δhly LM菌株),各组分别转染NC si RNA、ABRO1 si RNA,采用ELISA法检测细胞培养液上清中的IL-1β,采用Western blotting法检测炎症小体相关分子Caspase-1、p20(Caspase-1活化形式)、IL-1β、p17。结果随着感染时间延长,野生型组、回补株组ABRO1表达、IL-1β水平逐渐增高,在感染120 min达到最高、均高于基因缺失组(P均<0.05);基因缺失组不同时点ABRO1表达、IL-1β水平无明显变化。WT组转染ABRO1 si RNA的细胞培养液上清中IL-1β水平及p20、p17表达低于转染NC si RNA的细胞(P均<0.05);WT组转染NC si RNA的细胞培养液上清中IL-1β水平及p20、p17表达高于NI组(P均<0.05);Δhly组转染NC si RNA的细胞培养液上清中IL-1β水平及p20、p17表达低于WT组(P均<0.05)。结论李斯特菌感染的J774A.1细胞中ABRO1表达增高,下调ABRO1表达后,J774A.1细胞中IL-1β释放减少;LLO可能通过激活炎症小体从而促进LM感染诱导的IL-1β释放。

壮医经筋推拿对神经病理性疼痛大鼠去泛素化酶BRCC3介导NLRP3去泛素化修饰的影响及镇痛机制

目的 探讨壮医经筋推拿对神经病理性疼痛大鼠去泛素化酶BRCC3介导NOD样受体家族热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)去泛素化修饰的影响及其镇痛分子学机制。方法 将45只雌性SD大鼠随机分为5组,每组9只。模型组、假手术组、壮医经筋推拿组采用L5脊神经结扎的方法建立神经病理性疼痛模型。于术后第1天开始,假推拿组对大鼠双侧后肢进行轻轻抚摸,壮医经筋推拿组采用按摩推拿手法模拟仪刺激大鼠脊神经结扎节段相应体表部位及所结扎神经支配区域并进行推拿,连续干预14 d;其余3组不予干预,观察14 d。于术前及术后1 d、3 d、14 d测定各组大鼠机械性痛觉阈值和热痛觉阈值;术后14 d,采用qPCR技术检测脊髓背角中BRCC3和NLRP3 mRNA表达情况,采用ELISA法检测血清白细胞介素-1β(IL-1β)水平。结果 术后1 d、3 d,各手术组大鼠的机械性痛觉阈值和热痛觉阈值均明显低于正常组(P均<0.05);术后14 d,壮医经筋推拿组大鼠的机械性痛觉阈值和热痛觉阈值均明显高于模型组和假推拿组(P均<0.05)。术后14 d,模型组和假推拿组大鼠脊髓背角中BRCC3、NLRP3mRNA相对表达量及血清IL-1β水平均明显高于正常组(P均<0.05),壮医经筋推拿组大鼠脊髓背角中BRCC3、NLRP3mRNA相对表达量及血清IL-1β水平均明显低于模型组和假推拿组(P均<0.05)。结论 壮医经筋推拿可减轻神经病理性疼痛大鼠痛敏反应,其机制与下调脊髓背角中去泛素化酶BRCC3表达,以抑制NLRP3的去泛素化修饰,从而阻止NLRP3的活化,阻碍IL-1β成熟和分泌,阻断其介导的免疫炎症反应有关。