基于UBA2/PTEN/PI3K/Akt通路探讨蔓荆子黄素对结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的 基于泛素样修饰激活酶2(UBA2)/磷酸酶及张力蛋白同源物(PTEN)/磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)通路探究蔓荆子黄素对结直肠癌SW480细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法 取对数生长期的SW480细胞,对照组细胞常规培养,蔓荆子黄素组细胞加入10μmol/L蔓荆子黄素培养,UBA2抑制剂组细胞加入0.5μmol/L UBA2抑制剂培养,蔓荆子黄素+UBA2抑制剂组细胞加入10μmol/L蔓荆子黄素和0.5μmol/L UBA2抑制剂共培养。CCK-8实验检测细胞增殖情况,克隆形成实验观察细胞的单克隆形成能力,划痕实验观察细胞的迁移能力,Transwell实验观察细胞的侵袭能力,Western blot法检测细胞中UBA2/PTEN/PI3K/Akt通路相关蛋白表达情况。结果 CCK-8实验和克隆形成实验显示,UBA2抑制剂组和蔓荆子黄素+UBA2抑制剂组培养72 h后的细胞增殖吸光度OD值明显低于蔓荆子黄素组(P均<0.05),细胞克隆形成数量均明显少于蔓荆子黄素组(P均<0.05),UBA2抑制剂组和蔓荆子黄素+UBA2抑制剂组培养不同时间的细胞增殖吸光度OD值和细胞克隆形成数量比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。划痕实验和Transwell实验显示,UBA2抑制剂组和蔓荆子黄素+UBA2抑制剂组划痕间距均明显宽于蔓荆子黄素组(P均<0.05),穿膜细胞数量均明显少于蔓荆子黄素组(P均<0.05),UBA2抑制剂组和蔓荆子黄素+UBA2抑制剂组比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。蔓荆子黄素组、UBA2抑制剂组和蔓荆子黄素+UBA2抑制剂组细胞中PTEN蛋白相对表达量均明显高于对照组(P均<0.05),UBA2、p-PI3K、p-Akt蛋白相对表达量均明显低于对照组(P均<0.05);UBA2抑制剂组和蔓荆子黄素+UBA2抑制剂组细胞中PTEN蛋白相对表达量均明显高于蔓荆子黄素组(P均<0.05),UBA2、p-PI3K、p-Akt蛋白相对表达量均明显低于蔓荆子黄素组(P均<0.05),UBA2抑制剂组和蔓荆子黄素+UBA2抑制剂组UBA2、PTEN、p-PI3K、p-Akt蛋白相对表达量比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论 蔓荆子黄素可能通过抑制UBA2/PTEN/PI3K/Akt信号通路发挥抗结直肠癌SW480细胞增殖、迁移和侵袭的能力。

蔓荆子黄素对结直肠癌细胞增殖、周期和凋亡的影响及其可能的调控机制

目的探讨蔓荆子黄素对结直肠癌细胞增殖、周期和凋亡的影响及其可能的调控机制。方法(1)体外培养SW480细胞,采用不同浓度(0、10、20、40μmol/L)的蔓荆子黄素处理后,检测细胞活力、细胞周期和凋亡情况,以及细胞周期蛋白(p21、c-myc)、凋亡相关蛋白[B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)蛋白、Bcl-2相关X蛋白(Bax)]表达水平。同时检测经0μmol/L、40μmol/L的蔓荆子黄素处理后的SW480细胞的泛素样修饰物激活酶2(UBA2)蛋白和mRNA表达水平。(2)另取SW480细胞,分别转染阴性对照小干扰RNA(siRNA)(si-NC组)、UBA2 siRNA转染(si-UBA2组);另取SW480细胞,分别转染空载质粒载体(蔓荆子黄素+vector组)和UBA2过表达质粒载体(蔓荆子黄素+UBA2组)6 h后,加入40μmol/L蔓荆子黄素处理24 h。检测各组细胞活力、细胞周期和凋亡情况,以及细胞周期蛋白、凋亡相关蛋白、UBA2蛋白表达水平。结果(1)与0μmol/L蔓荆子黄素相比,其他浓度蔓荆子黄素干预后,SW480细胞的活力、S期细胞比例下降,细胞凋亡率、G_(0)/G_(1)期细胞比例增加,p21、Bax蛋白相对表达水平上调,c-myc、Bcl-2蛋白相对表达水平下调(均P<0.05)。与0μmol/L蔓荆子黄素相比,40μmol/L蔓荆子黄素干预后SW480细胞中的UBA2 mRNA和蛋白表达均下调(均P<0.05)。(2)与si-N C组相比,si-UBA2组的细胞活力、S期细胞比例降低,凋亡率、G_(0)/G_(1)期细胞比例增加,c-myc蛋白、Bcl-2蛋白、UBA2蛋白相对表达水平下调,p21蛋白和Bax蛋白相对表达水平上调(均P<0.05)。而转染UBA2过表达质粒载体后给予蔓荆子黄素干预,蔓荆子黄素+UBA2组SW480细胞中上述指标均逆转(均P<0.05)。结论蔓荆子黄素可以抑制结直肠癌细胞的增殖,阻滞细胞周期,并促进细胞凋亡,其作用机制可能与下调UBA2有关。