小泛素样修饰物特异性蛋白酶3通过调节脂滴水平体外促进HepG2细胞丙型肝炎病毒复制

目的探究丙型肝炎病毒(HCV)感染细胞小泛素样修饰物特异性蛋白酶3(SENP3)对脂滴水平的调节及其对HCV复制的影响。方法以感染性HCV病毒颗粒感染人HepG2细胞,采用Western blot法检测感染前后SENP3蛋白表达水平。采用脂质体法转染SENP3-siRNA至HepG2细胞,在感染HCV后采用Western blot法检测HCV核心蛋白表达量,采用qRT-PCR法检测HCV RNA水平,采用油红O染色观察细胞脂滴水平。以软脂酸处理敲低SENP3后的HepG2细胞,采用qRT-PCR法检测感染HCV后HCV RNA水平。结果在HCV感染HepG2细胞后1 d、3 d和6 d,HCV核心蛋白相对表达量分别为0.01±0.00、0.17±0.02和0.43±0.04,SENP3蛋白相对表达量分别为0.23±0.04、0.42±0.03和0.46±0.04,差异显著(P<0.05);转染SENP3-siRNA可有效降低SENP3表达并降低HCV感染后细胞HCV核心蛋白表达水平;SENP3敲低细胞HCV RNA相对水平为54.2±11.4%,较转染非特异性siRNA细胞显著降低(P<0.01);敲低SENP3蛋白表达后细胞脂滴数量显著减少;敲低SENP3的HepG2细胞感染HCV后HCV RNA相对水平为58.2±5.2%,较转染非特异性siRNA细胞显著降低(P<0.01),而以软脂酸处理敲低SENP3的HepG2细胞,在感染HCV后HCV RNA相对水平为74.6±6.4%,较未经软脂酸处理细胞显著升高(P<0.01)。结论在HCV感染肝细胞时SENP3可通过调节脂滴代谢促进HCV复制。

含patatin样磷脂酶结构域蛋白7通过过氧化物酶体增殖物激活受体γ促进巨噬细胞M2型极化

溶血磷脂酰胆碱(LPC)在免疫反应、组织炎症和重塑中调控巨噬细胞极化的动态和整体过程。含patatin样磷脂酶结构域蛋白7(PNPLA7)是近年发现的优先水解LPC的溶血磷脂酶。然而,直到现在仍不清楚PNPLA7在巨噬细胞极化中的表达和作用。本研究发现,PNPLA7在白细胞介素4(IL-4)刺激的巨噬细胞向替代激活(M2)表型的极化过程中上调(P<0.05)。本文发现,PNPLA7的敲低和过表达分别降低和增加了M2标记基因,包括精氨酸酶1(Arg1)和类几丁质酶3(Ym1)的表达(P<0.05)。进一步的研究表明,PNPLA7在M2极化过程中调节过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)在mRNA和蛋白质水平上的表达(P<0.05)。然而,信号转导和转录激活因子6(STAT6)的磷酸化不受PNPLA7的影响。这些发现表明,PNPLA7通过PPARγ相关机制促进巨噬细胞抗炎M2型极化。

人过氧化物酶体增殖物激活受体γ-胰高血糖素样肽-1表达载体的构建

胰岛素抵抗和胰岛素分泌缺陷在2型糖尿病发病过程中占据着重要地位。针对既能减轻胰岛素抵抗、又可增加胰岛素分泌的药物研究对于2型糖尿病及其并发症的治疗具有非常重要的意义。

抗小泛素样修饰物激活酶抗体阳性结缔组织病患者临床特征

目的探究抗小泛素样修饰物激活酶(small ubiquitin-like modifier activating enzyme,SAE)抗体阳性结缔组织病患者的临床特征。方法回顾性选择2015年1月1日—2021年5月30日于四川大学华西医院就诊的完善了肌炎自身抗体筛查的患者,筛选出抗SAE抗体阳性的患者。根据抗SAE抗体阳性患者的临床资料分为以下几组:(1)合并肿瘤组、未合并肿瘤组;(2)合并ILD组、未合并ILD组;(3)炎性肌病组、非炎性肌病组。收集上述患者的临床症状、体征、实验室检查、影像学检查等临床资料。结果共筛选接受肌炎自身抗体检查患者1594例,其中抗SAE抗体阳性56例,阳性率为3.5%。在56例患者中,32.1%皮肤受累、35.7%肌肉受累、12.5%关节受累、5.4%吞咽困难、5.4%体重下降、58.9%合并间质性肺疾病(interstitial lung disease,ILD)以及12.5%存在肿瘤病史。合并肿瘤组和未合并肿瘤组在年龄、性别、以及是否有皮肤受累、肌肉受累、关节受累、呼吸系统受累方面进行比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。除年龄、肌肉受累频率、抗Ro-52抗体的阳性率外,其余指标在合并ILD组和未合并ILD组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。除ILD阳性率、皮肤受累频率、肌肉受累频率、肌酸激酶和羟丁酸脱氢酶水平外(P<0.05),其余指标在非炎性肌病组和炎性肌病组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论抗SAE抗体阳性患者主要表现为皮肤及肌肉症状,容易出现ILD、可合并恶性肿瘤、吞咽困难等。抗SAE抗体阳性合并ILD的患者,年龄更高,肌肉损伤更少,抗Ro-52抗体的阳性率更高。抗SAE抗体不仅出现于炎性肌病患者,亦可出现于非炎性肌病患者中,常合并较高频率ILD及较少肌肉累及。

基于UBA2/PTEN/PI3K/Akt通路探讨蔓荆子黄素对结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的 基于泛素样修饰激活酶2(UBA2)/磷酸酶及张力蛋白同源物(PTEN)/磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)通路探究蔓荆子黄素对结直肠癌SW480细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法 取对数生长期的SW480细胞,对照组细胞常规培养,蔓荆子黄素组细胞加入10μmol/L蔓荆子黄素培养,UBA2抑制剂组细胞加入0.5μmol/L UBA2抑制剂培养,蔓荆子黄素+UBA2抑制剂组细胞加入10μmol/L蔓荆子黄素和0.5μmol/L UBA2抑制剂共培养。CCK-8实验检测细胞增殖情况,克隆形成实验观察细胞的单克隆形成能力,划痕实验观察细胞的迁移能力,Transwell实验观察细胞的侵袭能力,Western blot法检测细胞中UBA2/PTEN/PI3K/Akt通路相关蛋白表达情况。结果 CCK-8实验和克隆形成实验显示,UBA2抑制剂组和蔓荆子黄素+UBA2抑制剂组培养72 h后的细胞增殖吸光度OD值明显低于蔓荆子黄素组(P均<0.05),细胞克隆形成数量均明显少于蔓荆子黄素组(P均<0.05),UBA2抑制剂组和蔓荆子黄素+UBA2抑制剂组培养不同时间的细胞增殖吸光度OD值和细胞克隆形成数量比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。划痕实验和Transwell实验显示,UBA2抑制剂组和蔓荆子黄素+UBA2抑制剂组划痕间距均明显宽于蔓荆子黄素组(P均<0.05),穿膜细胞数量均明显少于蔓荆子黄素组(P均<0.05),UBA2抑制剂组和蔓荆子黄素+UBA2抑制剂组比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。蔓荆子黄素组、UBA2抑制剂组和蔓荆子黄素+UBA2抑制剂组细胞中PTEN蛋白相对表达量均明显高于对照组(P均<0.05),UBA2、p-PI3K、p-Akt蛋白相对表达量均明显低于对照组(P均<0.05);UBA2抑制剂组和蔓荆子黄素+UBA2抑制剂组细胞中PTEN蛋白相对表达量均明显高于蔓荆子黄素组(P均<0.05),UBA2、p-PI3K、p-Akt蛋白相对表达量均明显低于蔓荆子黄素组(P均<0.05),UBA2抑制剂组和蔓荆子黄素+UBA2抑制剂组UBA2、PTEN、p-PI3K、p-Akt蛋白相对表达量比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论 蔓荆子黄素可能通过抑制UBA2/PTEN/PI3K/Akt信号通路发挥抗结直肠癌SW480细胞增殖、迁移和侵袭的能力。

过氧化物酶体增殖物激活受体γ的小泛素样修饰在糖尿病易化动脉粥样硬化中的作用

目的探讨内皮细胞和血管组织过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)的小泛素样修饰在糖尿病加速动脉粥样硬化中的作用。方法2014年9月至2017年1月选取14周龄雄性健康Sprague-Dawley大鼠(SD大鼠)32只,按随机数字表法分为对照假手术组、对照动脉损伤组、糖尿病动脉损伤组和泛素结合酶9(UBC9)转染组,每组8只。制备1型糖尿病大鼠模型,各组均有1只大鼠造模失败被排除。采用超声仪检测损伤侧颈总侧动脉和健侧颈总动脉收缩期和舒张期内径、动脉内膜厚度,计算标化颈总动脉舒张期直径(sCADD);采用HE染色和免疫组织化学染色检测内膜增殖情况,在中膜面积相当的情况下计算内膜面积与中膜面积比值。人脐静脉内皮细胞(HUVEC)在高糖中培养24 h后采用实时反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测白细胞介素(IL)-8和IL-1βmRNA表达水平,蛋白质印迹法检测动脉组织UBC9的表达水平,小泛素样修饰试剂盒检测PPARγ小泛素样修饰水平。体外培养HUVEC,检测在不同浓度和不同时间的高糖刺激下PPARγ小泛素样修饰水平。在体内和体外利用慢病毒过表达UBC9,再检测PPARγ小泛素样修饰水平。结果对照假手术组、对照动脉损伤组和糖尿病动脉损伤组颈总动脉损伤8周后动脉内膜厚度、内膜增殖面积和内膜面积与中膜面积比值逐渐增加[(0.026±0.018)、(0.084±0.007)和(0.264±0.022)mm,(0.18±0.09)×10^(6)、(0.32±0.06)×10^(6)和(1.64±0.22)×10^(6)μm2,0.345±0.073、0.570±0.080和2.710±0.220],sCADD逐渐降低(0.903±0.084、0.800±0.071和0.330±0.036),差异有统计学意义(F=10.40、9.40、8.20和8.60,P<0.05)。高糖培养HUVEC 24 h后,糖浓度10、20和40 mmol/L时IL-8 mRNA分别为1.00±0.11、3.57±0.22和4.07±0.40,IL-1βmRNA分别为1.00±0.07、3.32±0.29和5.13±0.19,差异有统计学意义(F=73.05和205.80,P<0.05)。糖尿病动脉损伤组动脉组织PPARγ小泛素样修饰水平和UBC9表达水平明显低于对照动脉损伤组(0.46±0.25比1.00±0.21和0.45±0.02比1.00±0.07),差异有统计学意义(P<0.05);两组PPARγ表达水平比较差异无统计学意义(0.94±0.07比1.00±0.04,P>0.05)。糖浓度10、20和40 mmol/L时UBC9表达水平和PPARγ小泛素样修饰水平逐渐降低(0.99±0.05、0.80±0.06和0.62±0.05,1.00±0.05、0.57±0.13和0.55±0.08),差异有统计学意义(F=21.02和14.31,P<0.05),PPARγ表达水平比较差异无统计学意义(1.00±0.03、0.90±0.04和0.91±0.05,F=3.11,P>0.05)。对HUVEC进行0、6、12、24、48 h的20 mmol/L高糖刺激后,UBC9表达水平和PPARγ小泛素样修饰水平逐渐下调(1.00±0.09、0.75±0.05、0.70±0.08、0.38±0.04和0.35±0.03,1.00±0.03、0.86±0.01、0.59±0.01、0.51±0.11和0.35±0.08),差异有统计学意义(F=36.06和33.13,P<0.05),但PPARγ表达水平比较差异无统计学意义(1.00±0.03、1.14±0.02、1.18±0.17、0.98±0.01和1.04±0.05,F=1.90,P>0.05)。在糖尿病大鼠动脉中过表达UBC9后,组织学分析结果显示,对照动脉损伤组、糖尿病动脉损伤组和UBC9转染组UBC9相对表达水平分别为1.53±0.18、1.00±0.22和3.62±0.35,三组比较差异有统计学意义(F=5.64,P<0.05)。超声检测结果显示,对照动脉损伤组、糖尿病动脉损伤组和UBC9转染组颈动脉内膜厚度逐渐增厚[(0.077±0.015)、(0.216±0.007)和(0.125±0.014)mm],差异有统计学意义(F=27.18,P<0.05)。组织学分析结果显示,对照动脉损伤组、糖尿病动脉损伤组和UBC9转染组颈动脉损伤后内膜增殖面积分别为(0.335±0.066)×10^(6)、(1.053±0.103)×10^(6)和(0.544±0.040)×10^(6)μm2,内膜面积与中膜面积比值分别为0.630±0.063、2.030±0.052和0.930±0.100,三组比较差异均有统计学意义(F=13.58和53.96,P<0.05)。结论高血糖下调HUVEC和大鼠动脉组织UBC9表达水平及抑制PPARγ小泛素样修饰的作用,揭示高血糖下调的UBC9和PPARγ小泛素样修饰水平是糖尿病加速动脉粥样硬化的重要机制。

PPARγ1的SUMO化修饰对巨噬细胞M2极化的抑制作用

目的·探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ1(peroxisome proliferator activated receptorγ1,PPARγ1)的SUMO化修饰在白介素4(interleukin-4,IL-4)诱导巨噬细胞M2极化过程中的作用和机制。方法·在HEK293T细胞中共转染FLAG-PPARγ1-WT/突变体质粒、HA-SUMO1质粒,使用标签FLAG及HA的抗体分别进行免疫共沉淀后进行蛋白质印迹分析,确认PPARγ1的SUMO化修饰和修饰位点。过表达FLAG-PPARγ1-WT、HA-SUMO1及野生型RGS-SENP1以及去SUMO化修饰酶活缺失的突变体RGSSENP1mut,证明SENP1是PPARγ1的去SUMO化修饰酶。用IL-4刺激小鼠巨噬细胞系RAW264.7和体外分离的原代小鼠腹腔巨噬细胞,使其向M2型活化,使用PPARγ及SUMO1的抗体进行免疫共沉淀,明确内源性PPARγ1的SUMO化修饰在M2极化过程中的变化。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测IL-4刺激后的PPARγ1野生型及突变型稳转细胞系RAW264.7中M2相关基因的m RNA水平。用染色质免疫共沉淀实验比较PPARγ1 WT及突变体结合于精氨酸酶Ⅰ(arginaseⅠ,Arg1)启动子的能力。结果·PPARγ1蛋白第77位赖氨酸(K77R)能被SUMO化修饰,并能被SENP1去SUMO化。在IL-4诱导巨噬细胞M2型极化时,PPARγ1的SUMO化水平降低。稳定表达SUMO化位点突变体PPARγ1-K77R的RAW264.7细胞,Arg1 mRNA水平升高;PPARγ1-K77R与Arg1的启动子结合能力增强,促进Arg1表达。结论·PPARγ1通过去SUMO化促进下游Arg1基因的表达从而参与调控巨噬细胞M2型极化。

鲍温样丘疹病患者组织中PPAR-γ、COX-2的表达情况及其相关性分析

目的 探讨鲍温样丘疹病(Bowenold papulosis,BP)患者组织中过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(Peroxisome proliferators activate receptors-γ,PPAR-γ)、环氧化酶2(Cyclooxygenase 2,COX-2)的表达情况及其相关性。方法选择2020年1月至2021年11月期间秦皇岛市第一医院皮肤性病科活检的45例外阴病变皮肤组织作为观察组,另外选择于同期接受检查的40例正常外阴病变皮肤组织作为对照组。采用SP法对PPAR-γ、COX-2表达情况进行检测分析,并对二者相关性进行分析。结果 (1)观察组组织中PPAR-γ表达评分与阳性率为(2.12±0.57)分与66.67%均分别显著高于对照组[(分别为1.03±0.34)分与17.50%](P均<0.05);(2)观察组组织中COX-2表达评分与阳性率分别为(2.49±0.65)分与71.11%,均分别显著高于对照组[分别为(0.95±0.18)分与7.50%](P均<0.05);(3)PPAR-γ与COX-2在BP组织阳性表达呈正相关性(P<0.05),但是在正常组织中的表达二者不呈相关性(P>0.05)。结论 BP组织中PPAR-γ、COX-2均呈过表达特点,且二者在BP组织中的表达情况呈显著的正相关性。

MuRF2、PPAR γ1和Ub重组质粒的构建及鉴定

目的 构建过氧化物酶体增殖物激活受体γ亚型1(peroxisome proliferator-activated receptor gamma isoform 1,PPAR γ1)、泛素连接酶肌肉环指状蛋白2(ubiquitin ligase muscle ring finger protein 2,MuRF2)和泛素(ubiquitin,Ub)的重组质粒并进行鉴定。方法 根据MuRF2、PPAR γ1和Ub的cDNA序列及GV146和GV417载体质粒上的多克隆位点设计目的基因克隆引物。XhoI/EcoRI内切酶分别双酶切PPAR γ1目的DNA与GV146载体;NheI/BamHI内切酶分别双酶切MuRF2和Ub目的 DNA与GV417载体。用连接酶连接双酶切后的目的 DNA和载体,导入大肠杆菌经筛选获得重组质粒。PCR鉴定重组克隆后进行DNA测序。转染HEK 293T细胞后,于荧光显微镜下观察转染效率;免疫共沉淀实验后用Western blot检测蛋白的表达及蛋白质相互作用。结果 以合成的PPAR γ1、Ub、MuRF2的引物分别对PPAR γ1、Ub和MuRF2的菌落进行PCR扩增,产物大小分别为943、451和1 154 bp,与预期结果一致。测序结果与目的基因序列进行比对分析,证实成功构建出PPAR γ1、Ub和MuRF2的重组质粒。在HEK 293T细胞中共转染His-MuRF2、HA-Ub、PPAR γ1重组质粒,荧光显微镜观察结果提示重组质粒成功转染。免疫共沉淀试验后用Western blot检测可见PPAR γ1、MuRF2和Ub蛋白的有效表达,且验证了MuRF2介导PPAR γ1发生泛素化修饰反应。结论成功构建PPAR γ1、MuRF2和Ub的重组质粒,且三种质粒在HEK 293T细胞中有效表达,验证了MuRF2介导PPAR γ1发生泛素化修饰反应。

在DF1鸡胚成纤维细胞过表达KLF2对鸡PPARγ和C/EBPα启动子活性的调控

目的研究过表达Krüppel样因子2(KLF2)对鸡过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)和CCAAT/增强子结合蛋白α(C/EBPα)启动子活性的影响。方法以DF1鸡胚成纤维细胞为材料,通过细胞培养和荧光素酶报告基因技术研究过表达KLF2对鸡PPARγ基因6个不同长度启动子和鸡C/EBPα基因5个不同长度启动子活性的影响。结果过表达KLF2显著抑制鸡PPARγ启动子(-1978/-82、-1513/-82、-1254/-82和-1019/-82)的活性,但对PPARγ启动子(-513/-82和-320/-82)的活性无显著影响。过表达KLF2对PPARγ启动子(-1513/-82和-1254/-82)活性的抑制能力显著强于对PPARγ启动子(-1978/-82和-1019/-82)活性的抑制能力。过表达KLF2抑制C/EBPα启动子(-1863/+332)活性,促进C/EBPα启动子(-1318/+332、-891/+332、-538/+332和-123/+332)的活性,并且过表达KLF2对C/EBPα启动子(-1318/+332、-891/+332、-538/+332和-123/+332)活性的促进能力无显著差异。结论过表达KLF2对鸡不同长度PPARγ启动子和C/EBPα启动子的调控作用不完全相同。

已上市降糖药物对非酒精性脂肪性肝病的治疗前景

非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)是代谢综合征在肝脏的表现,与糖脂代谢紊乱密切关联且互为因果,胰岛素抵抗是共同的发病机制。约3/4的肥胖和2型糖尿病患者患有NAFLD,目前指南建议将减少代谢危险因素和治疗代谢综合征作为NAFLD患者的主要治疗目标。虽然目前尚无针对非酒精性脂肪性肝炎的治疗药物,但是已经上市的降糖药物在降低血糖的同时可使NAFLD不同程度的获益。评述了已上市降糖药(噻唑烷二酮类、肠促胰素受体激动剂、钠-葡萄糖共转运体-2抑制剂)对NAFLD的治疗前景。

皮肌炎自身特异性抗体与皮肌炎相关性恶性肿瘤的研究进展

皮肌炎是一种自身免疫性疾病,且常伴发恶性肿瘤。超过50%的皮肌炎患者体内存在肌炎自身特异性抗体。皮肌炎自身特异性抗体[抗迁移抑制因子(migration inhibitory factor,Mi)-2抗体、抗核小体蛋白(nuclear matrix protein,NXP)-2抗体、抗转录中介因子(transcription intermediary factor,TIF)1-γ抗体、抗小泛素样修饰物激活酶(small ubiquitin-like modifier activating enzyme,SAE)抗体]在皮肌炎相关性恶性肿瘤的发病机制中扮演着重要角色。揭示皮肌炎自身特异性抗体在皮肌炎并发恶性肿瘤中的作用,可为准确评估皮肌炎患者发展为恶性肿瘤的风险提供重要依据,也可为临床诊断皮肌炎和精准的个体化治疗提供新思路。

蔓荆子黄素对结直肠癌细胞增殖、周期和凋亡的影响及其可能的调控机制

目的探讨蔓荆子黄素对结直肠癌细胞增殖、周期和凋亡的影响及其可能的调控机制。方法(1)体外培养SW480细胞,采用不同浓度(0、10、20、40μmol/L)的蔓荆子黄素处理后,检测细胞活力、细胞周期和凋亡情况,以及细胞周期蛋白(p21、c-myc)、凋亡相关蛋白[B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)蛋白、Bcl-2相关X蛋白(Bax)]表达水平。同时检测经0μmol/L、40μmol/L的蔓荆子黄素处理后的SW480细胞的泛素样修饰物激活酶2(UBA2)蛋白和mRNA表达水平。(2)另取SW480细胞,分别转染阴性对照小干扰RNA(siRNA)(si-NC组)、UBA2 siRNA转染(si-UBA2组);另取SW480细胞,分别转染空载质粒载体(蔓荆子黄素+vector组)和UBA2过表达质粒载体(蔓荆子黄素+UBA2组)6 h后,加入40μmol/L蔓荆子黄素处理24 h。检测各组细胞活力、细胞周期和凋亡情况,以及细胞周期蛋白、凋亡相关蛋白、UBA2蛋白表达水平。结果(1)与0μmol/L蔓荆子黄素相比,其他浓度蔓荆子黄素干预后,SW480细胞的活力、S期细胞比例下降,细胞凋亡率、G_(0)/G_(1)期细胞比例增加,p21、Bax蛋白相对表达水平上调,c-myc、Bcl-2蛋白相对表达水平下调(均P<0.05)。与0μmol/L蔓荆子黄素相比,40μmol/L蔓荆子黄素干预后SW480细胞中的UBA2 mRNA和蛋白表达均下调(均P<0.05)。(2)与si-N C组相比,si-UBA2组的细胞活力、S期细胞比例降低,凋亡率、G_(0)/G_(1)期细胞比例增加,c-myc蛋白、Bcl-2蛋白、UBA2蛋白相对表达水平下调,p21蛋白和Bax蛋白相对表达水平上调(均P<0.05)。而转染UBA2过表达质粒载体后给予蔓荆子黄素干预,蔓荆子黄素+UBA2组SW480细胞中上述指标均逆转(均P<0.05)。结论蔓荆子黄素可以抑制结直肠癌细胞的增殖,阻滞细胞周期,并促进细胞凋亡,其作用机制可能与下调UBA2有关。

Exenatide对KKAy糖尿病小鼠血糖水平的影响及机制探讨

目的观察Exenatide对KKAy糖尿病小鼠血糖水平的影响,并探讨其作用机制。方法将SPF级KKAy小鼠16只,随机分为糖尿病模型组(DM组),Exenatide治疗组(EX组),并选8只C57BL/6J小鼠作为正常对照组(NC组)。EX组予Exenatide 2μg/kg腹腔注射,2次/d,DM组与NC组腹腔注射相同剂量的生理盐水,共8周。8周后测定三组小鼠血清空腹血糖(FPG)、空腹胰岛素(FINS)并计算胰岛素敏感指数(ISI)、血清甘油三酯(TG)、血清胆固醇(TC);采用RT-PCR法测定三组小鼠肝脏组织中的过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPAR-γ)mRNA及葡萄糖转运蛋白2(GluT-2)mRNA。结果与NC组比较,DM组小鼠血清FPG、TG、TC明显升高,ISI明显降低,肝脏组织中PPAR-γ、GluT-2 mRNA的相对表达量明显降低(P均<0.05);与DM组比较,EX组小鼠血清FPG、TG、TC明显降低,ISI明显升高,肝脏组织中PPAR-γ、GluT-2 mRNA的相对表达量明显升高(P均<0.05)。结论 Ex-enatide可降低KKAy糖尿病小鼠血糖水平,可能通过上调小鼠肝脏组织中PPAR-γ、GluT-2 mRNA的表达,改善肝脏对胰岛素的敏感性。

SUMO化反应在肾脏疾病中的作用探索

小泛素相关修饰物(SUMO)与靶蛋白的共价结合是一种真核基因表达的翻译后加工形式。SU-MO化能够使蛋白质更加稳定,进而调节许多关键的细胞活动,如核运输、信号传递、凋亡、细胞周期调控以及基因表达的调控等。此外SUMO化还可通过过氧化物酶体增殖物激活受体-γ、核转录因子-κB及转化生长因子-β依赖的途径参与抗炎和致纤维化过程,本文就这一机制可能在肾脏疾病中发挥的作用作一综述。

IGF-1对SD大鼠骨髓间充质干细胞成骨成脂方向分化的影响

目的：观察胰岛素样生长因子-1（IGF-1）作用于骨髓间充质干细胞后核心结合因子α1（CBFα1）和过氧化物酶增殖物激活受体γ2（PPARγ2）基因表达情况,探讨其对骨髓间充质干细胞成脂方向分化的影响。方法：用贴壁法筛选分离纯化SD大鼠骨髓基质干细胞并传代培养,取第4代SD大鼠骨髓间充质干细胞作为实验样本,随机分为空白对照组、低剂量IGF-1（10μg/L）组与高剂量IGF-1（20μg/L）组进行干预培养12 h,采用RT-PCR法检测各组CBFα1和PPARγ2 mRNA的表达。结果：IGF-1高剂量组及低剂量组均可以提高大鼠骨髓间充质干细胞CBFα1的mRNA以及下调PPARγ2的mRNA表达,高、低剂量组与空白对照组差异均有统计学意义（P均〈0.05）,但是这种剂量-效应在IGF-1干预浓度介于10~20μg/L的情况下并不明显。结论：IGF-1使骨髓间充质干细胞PPARγ2基因表达水平降低,阻碍骨髓间充质干细胞向成脂方向分化;使CBFα1基因表达水平增高,促进BMSCs成骨方向分化。IGF-1可能参与骨髓间充质干细胞成骨成脂方向分化的调节,并有利于成骨方向分化。

新型降糖药治疗非酒精性脂肪性肝病研究进展

非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)与2型糖尿病密切相关,两者互为危险因素,胰岛素抵抗可能是两者共同的发病机制。研究发现,PPAR激动剂、SGLT2抑制剂和GLP-1R激动剂等已上市新型降糖药除有效改善血糖外,对脂肪肝也有很好的疗效。Saroglitazar是一款PPARα/γ双重激动剂,2020年被印度药品管理总局批准用于治疗2型糖尿病和NAFLD。达格列净、Semaglutide在Ⅱ期临床研究中可显著改善NAFLD患者肝脏脂质沉积和炎症反应,目前正处于治疗NAFLD的Ⅲ期临床研究阶段,未来可能成为治疗2型糖尿病合并NAFLD的基础药物。现就新型降糖药治疗NAFLD作一综述,以期对后续NAFLD新药开发和临床合理用药提供参考。