泛素特异性加工酶2-69在乳腺导管原位癌中的表达及意义

研究泛素特异性加工酶2-69(USP2-69)在乳腺导管原位癌中的表达及意义。2016年2月—2018年12月,乳腺导管原位癌患者50例,分别采集乳腺导管原位癌组织以及癌旁正常组织,以免疫组织化学法检测USP2-69、Ki-67、PI3Kp110α表达情况并进行对比。通过ROC曲线分析USP2-69、Ki-67、PI3Kp110α诊断乳腺导管原位癌的能效。结果显示,乳腺导管原位癌组织USP2-69阳性率高于癌旁正常组织(96.00%比12.00%,P<0.05)。乳腺导管原位癌组织Ki-67阳性率高于癌旁正常组织(94.00%比10.00%,P<0.05)。乳腺导管原位癌组织PI3Kp110α阳性率高于癌旁正常组织(86.00%比34.00,P<0.05)。ROC曲线联合检测USP2-69、Ki-67、PI3Kp110α表达情况诊断乳腺导管原位癌的曲线下面积、敏感度、特异度高于上述两项指标单独检测(均P<0.05)。结果表明,USP2-69、Ki-67、PI3Kp110α在乳腺导管原位癌组织中存在明显高表达,联合检测上述指标有助于早期诊断乳腺导管原位癌。

泛素特异性修饰酶2-69对大鼠系膜细胞内饰胶蛋白聚糖表达和泛素化降解的调节

目的研究泛素特异性修饰酶2-69(USP2-69)对系膜细胞(MC)内饰胶蛋白聚糖(DCN)表达和泛素化的调节作用。方法 1培养MC细胞,采用Western blot法检测大鼠肾MC内USP2-69的表达;2采用免疫共沉淀、激光共聚焦和免疫荧光法,检测MC内USP2-69是否与DCN结合,并观察两者在MC内的定位;3将pRK5-USP2-69-HA质粒瞬时转染MC后,用Western blot法检测HA、USP2-69和DCN的蛋白表达,用免疫共沉淀法检测DCN的泛素化水平;4采用USP2-69siRNA处理MC,用PCR检测USP2-69和DCN的mRNA表达,用time-course Western blot法检测DCN的半衰期,Western blot法检测DCN的下游效应分子(TGF-β1和ColⅣ)的蛋白表达。结果 1 USP2-69在MC、肝细胞(BRL-3A)和足细胞(GEC)内均有表达,其在MC内的基础蛋白表达水平显著高于BRL-3A和GEC[MCs:(0.27±0.05),BRL-3A:(0.035±0.009),GEC:(0.012±0.004),P<0.01]。2 MC总蛋白经DCN抗体免疫沉淀后,可检测到USP2-69的表达;经USP2-69抗体免疫沉淀后,可检测到DCN表达;且在MC胞质内,代表USP2-69蛋白的荧光与代表DCN蛋白的荧光存在共定位。3转染pRK5-USP2-69-HA质粒的MC内可检测到代表外源性USP2-69表达的HA蛋白,USP2-69和DCN蛋白表达的升高,同时DCN的泛素化水平明显降低。4经USP2-69 RNA干扰的MC内DCN的mRNA水平没有明显改变,但其半衰期明显缩短(3 h),且TGF-β1和ColⅣ的蛋白表达均明显升高。结论大鼠肾MC内USP2-69可与DCN相结合,及两者在胞质内共定位,USP2-69能够降低MC内DCN的泛素化水平及提高DCN蛋白总量并促进其功能。

泛素特异性加工酶2的研究进展

泛素特异性加工酶2(ubiquitin-specific protease 2,USP2)是一种重要的去泛素化酶,通过特异性识别靶蛋白,使靶蛋白去泛素化并阻碍其降解,以调控细胞内靶蛋白数量和活性,从而参与细胞功能的调节。USP2-45及USP2-69是USP2基因选择性剪接而形成的两种不同亚型,在不同组织、细胞和不同发育阶段均有表达,且与细胞周期调控,骨骼肌纵向生长、肌细胞分化、离子通道、生精作用及生物钟调控等关系密切。本文结合当前研究进展,系统阐述USP2的两种亚型的结构、分布及功能,为进一步研究USP2与疾病的关系打下理论基础。

泛素特异性蛋白酶2a的原核表达纯化及酶活性分析

目的为了探讨泛素特异性蛋白酶2a(USP2a)在肿瘤发生发展中的催化机制,构建USP2a C末端催化结构域原核表达质粒p ET28a-USP2a-C,分析USP2a C末端催化结构域的活性情况。方法利用荧光检测方法测定USP2a-C的酶促动力常数,并采用液相色谱-质谱联用技术(LC-MS/MS)分析USP2a的肽酶和异肽酶活性。结果结果表明获得了可溶性表达的USP2a-C融合蛋白,酶促动力学分析USP2a-C水解底物Ub-AMC的催化效率Kcat/Km=2.53×105mol/(L·s);LC-MS/MS分析结果表明USP2a-C能有效分解Di-Ub和Ub-V77两种不同性质的底物,并且两者之间的催化活性差异无统计学意义。结论获得了可溶性表达的USP2a-C蛋白,并且分析证明其具有完整的去泛素化酶的活性。

泛素特异性加工酶2—69对乳腺癌细胞增殖的影响

目的探讨泛素特异性加工酶2—69（USP2—69）在乳腺浸润性导管癌中的表达及意义。方法收集2013至2015年复旦大学附属华山医院24例人乳腺浸润性导管癌组织，分别应用分子杂交技术、Western blot及免疫组织化学法检测其USP2-69mRNA和蛋白水平表达。采用体外人乳腺癌细胞株MCF-7瞬时转染USP2-69质粒，使其过表达USP2-69，检测细胞增殖能力。结果乳腺浸润性导管癌的肿瘤组织中，USP2—69在mRNA及蛋白水平均高表达，与癌旁组织相比差异有统计学意义（P〈0．01）。USP2—69蛋白高表达的组织其Ki-67的蛋白表达也升高，Western blot免疫印迹法检测发现人乳腺浸润性导管癌组织中USP2-69的蛋白表达显著高于癌旁组织。细胞实验中转染USP2-69质粒的MCF-7细胞中cyclin D1较空载组表达增高，p27表达下降。细胞增殖速度明显加快，S期比例明显增高，平板阳性克隆明显增加（P〈0．01）。结论乳腺浸润性导管癌组织中USP2-69表达升高，与促进肿瘤细胞增殖能力密切有关。实验结果为进一步研究调节乳腺癌增殖的分子机制提供重要的实验基础。

皮肌炎自身特异性抗体与皮肌炎相关性恶性肿瘤的研究进展

皮肌炎是一种自身免疫性疾病,且常伴发恶性肿瘤。超过50%的皮肌炎患者体内存在肌炎自身特异性抗体。皮肌炎自身特异性抗体[抗迁移抑制因子(migration inhibitory factor,Mi)-2抗体、抗核小体蛋白(nuclear matrix protein,NXP)-2抗体、抗转录中介因子(transcription intermediary factor,TIF)1-γ抗体、抗小泛素样修饰物激活酶(small ubiquitin-like modifier activating enzyme,SAE)抗体]在皮肌炎相关性恶性肿瘤的发病机制中扮演着重要角色。揭示皮肌炎自身特异性抗体在皮肌炎并发恶性肿瘤中的作用,可为准确评估皮肌炎患者发展为恶性肿瘤的风险提供重要依据,也可为临床诊断皮肌炎和精准的个体化治疗提供新思路。

参芪复方调控GK大鼠生物钟相关基因Id2、Usp2的实验研究

目的采用基因芯片技术探索参芪复方减少2型糖尿病血糖波动的内在机制。方法30只自发性2型糖尿病(GK)大鼠适应性喂养4周后,随机分为模型组、参芪复方组(参芪组)和西格列汀组(西药组),每组10只,另设10只Wistar大鼠为正常组。参芪复方组给予参芪复方浸膏灌胃,西药组给予西格列汀混悬液灌胃,空白组、模型组给予生理盐水灌服,连续给药8周。药物干预期间观察大鼠一般状态,并根据体重变化及时调整灌胃量,每周1次测1日内8:00、10:00、14:00、16:00、18:005个时间点的血糖情况,计算每日血糖平均水平(MBG)、每日平均血糖的标准差(SDBG)、最大血糖波动幅度(LAGE)。实验第8周处死大鼠,采集血液标本,采用放免法和ELISA法测定血清胰岛素(INS)、胰高血糖素(GC)水平。应用基因芯片技术检测DNA结合抑制剂2(Id2)及泛素特异性加工酶2(Usp2)水平,同时采用实时荧光PCR检测Id2、Usp2 mRNA表达水平。结果造模期间,各组GK大鼠随着周龄增长,出现精神萎靡,反应迟缓,动作缓慢的现象,参芪组能改善GK大鼠多食、多饮现象。与正常组比较,模型组INS水平、Usp2 mRNA表达水平降低,GC、MBG、SDBG、LABG均明显升高(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,西药组INS水平升高,GC水平降低(P<0.01);参芪组、西药组Usp2 mRNA表达升高,MBG、SDBG、LABG及Id2 mRNA表达均明显降低(P<0.05,P<0.01)。同时参芪组GC、SDBG、LABG水平高于西药组(P<0.01)。结论参芪复方可能通过调节生物钟相关基因Id2、Usp2减少血糖波动。