泛素特异性蛋白酶10在低氧性肺动脉高压中的表达及对USP10-AMPK信号通路的调控作用

目的研究泛素特异性蛋白酶10(UPS10)在低氧性肺动脉高压(PAH)中表达的意义及对USP10-单磷酸腺苷活化蛋白激酶(AMPK)信号通路的调控作用。方法40只大鼠随机分为4组,空载组与沉默组分别经气管滴入USP10-lentivirus、NC-lentivirus,对照组与模型组滴入等量生理盐水。3 d后除对照组外均建立低氧PAH模型。以PowerLab压力记录分析系统检测各组平均肺动脉压(MPAP)、右心室收缩压(RVSP),计算肺血管管壁相对厚度指数(RTI)、右心肥大指数(RVHI),对比各组MPAP、RVSP、RTI、RVHI。实时荧光定量PCR技术检测USP10、AMPK、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)、内皮细胞型一氧化氮合成酶(eNOS)mRNA,比较各组USP10、AMPK、PI3K、Akt、eNOS mRNA相对表达量。蛋白质印迹法(Weston blot)检测USP10、AMPK、PI3K、Akt、eNOS蛋白及AMPK、PI3K、Akt、eNOS蛋白磷酸化表达情况,对比USP10蛋白相对表达量及p-AMPK/AMPK、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-eNOS/eNOS蛋白比值。结果沉默组、模型组与空载组大鼠均出现精神状态变差,活动量减少,毛发暗淡,口唇、眼眶发紫,沉默组更为严重。肺动脉血管组织HE染色观察,沉默组、模型组与空载组管壁增厚、管腔变窄,伴有平滑肌和弹力纤维层增厚,沉默组变化更为明显。与对照组比较,其余3组的MPAP、RVSP、RTI、RVHI均增加(P<0.05),沉默组均大于模型组与空载组(P<0.05);与对照组比较,其余3组的USP10 mRNA、蛋白相对表达量及p-AMPK/AMPK、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-eNOS/eNOS蛋白比值均下降(P<0.05),沉默组均低于模型组与空载组(P<0.05)。结论USP10在低氧性PAH大鼠肺组织中表达低于正常肺组织,且其在肺组织中的表达下调刺激了PAH的发展,推测可能与抑制AMPK/PI3K/Akt/eNOS信号通路有关。

泛素特异性蛋白酶10的互作组分析及其与UPF1相互作用分析

细胞内泛素化调控是一个由泛素化和去泛素化协同调控的动态平衡可逆过程。去泛素酶(DUBs)是介导蛋白质去泛素化过程的蛋白质家族,它在许多复杂的细胞过程中发挥着关键作用,但其生物学特征尚未完全阐明。作为去泛素化酶的一种,USP10在许多生物过程和癌症中都发挥重要的作用。为了进一步探索USP10在细胞中的功能,采用免疫沉淀与质谱联用(IP-MS)的方法鉴定USP10的相互作用蛋白质。通过Flag柱子的富集方式(Flag-USP10 IP-MS)共鉴定出165个与USP10相互作用蛋白质。通过USP10内源抗体的富集方式(USP10 antibody IP-MS)鉴定出192个USP10相互作用蛋白质。基因本体(GO)分析表明,USP10的互作蛋白质中存在一组与无义介导的mRNA降解(NMD)相关蛋白质,包括无NMD的核心因子UPF1(Up-frameshift 1)。进一步验证了USP10和UPF1在细胞质中共定位。此外,还确定了UPF1通过其HD结构域与全长的USP10相互作用。本研究提供了新的USP10相互作用蛋白质,为探索其在RNA调控和NMD通路中的重要性提供线索。

泛素特异性蛋白酶42调节人脂肪干细胞成骨向分化

目的:探索泛素特异性蛋白酶42(ubiquitin-specific protease 42,USP42)在人脂肪干细胞(human adipose-derived stem cells,hASCs)体内外成骨向分化中的作用。方法:用慢病毒转染hASCs,构建敲低和过表达USP42的稳定转染细胞系,通过碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色及活性定量、茜素红S矿化结节染色及定量,检测实验组(敲低组和过表达组)及对照组在成骨诱导下hASCs成骨向分化能力的差异,通过定量逆转录聚合酶链反应(quantitative reverse transcription polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测实验组及对照组成骨相关基因的表达水平,通过蛋白免疫印迹实验检测实验组及对照组成骨相关蛋白的表达水平,通过裸鼠异位成骨实验评价USP42在hASCs体内成骨向分化中的作用。结果:敲低组USP42的mRNA和蛋白表达显著低于对照组,过表达组显著高于对照组。成骨诱导7 d后,敲低组的ALP活性显著高于对照组,过表达组显著低于对照组;成骨诱导14 d后,敲低组茜素红S染色显著深于对照组,过表达组显著浅于对照组。qRT-PCR结果显示,成骨诱导14 d时,敲低组ALP、成骨细胞特异性转录因子(osterix,OSX)和Ⅰ型胶原(collagen typeⅠ,COLⅠ)的mRNA表达水平显著高于对照组,过表达组显著低于对照组。蛋白免疫印迹实验结果显示,成骨诱导14 d时敲低组runt相关转录因子2(runt-related transcription factor 2,RUNX2)、OSX和COLⅠ蛋白表达水平显著高于对照组,过表达组显著低于对照组。裸鼠皮下移植物苏木精-伊红染色结果显示,敲低组类骨组织百分比较对照组显著增高。结论:敲低USP42显著促进hASCs的体内外成骨向分化,过表达USP42显著抑制hASCs的体内成骨向分化,USP42可作为骨组织工程学潜在治疗靶点。

泛素特异性蛋白酶在胃癌中的作用研究进展

泛素特异性蛋白酶(USPs)是去泛素化酶家族诸多亚族之一,具有多种功能结构域和生物学功能,可通过泛素与蛋白底物解离来调控泛素化,从而调控细胞的凋亡、增殖、转移以及基因转录、间充质转化和免疫反应等。泛素是一种标记将要分解的蛋白质并存在于大多数真核细胞的小蛋白,其通过泛素化复合链式反应,使蛋白质水解。泛素化复合式链式反应存在不同位点,USPs可以作用于其位点,并影响生物体内的泛素化,对蛋白质的降解起到不同作用。USPs在多种肿瘤中表达,并通过一系列机制参与肿瘤发生发展,可作为癌症治疗靶点。本文就USPs在胃癌中的作用研究进展进行综述,以期为以USPs为靶点的胃癌治疗新药的研发提供资料。

部分泛素特异性蛋白酶生物学功能的研究进展

泛素特异性蛋白酶(ubiquitin-specific proteases,USPs)家族是去泛素化酶家族中成员最多的一种,主要存在于骨骼肌、心脏、肝脏、脑、胰腺等组织中,且在不同物种间有表达差异性。目前的研究表明,虽然USPs特异性选择水解的泛素链的机制还不清楚,但USPs在机体生命过程中有极大作用,USPs在调控肿瘤发生及转移、免疫调节、炎症反应、能量代谢、病毒感染等方面具有重要临床意义。本文综述了近年来部分USPs生物学功能的研究进展,期望能够对相关疾病的诊断及治疗提供新的思路。

抑制泛素特异性蛋白酶7改善血管紧张素Ⅱ诱导的心肌细胞肥大

目的探究泛素特异性蛋白酶7(USP7)抑制剂FT671在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的H9c2细胞肥大中的作用和潜在机制。方法将H9c2细胞随机分为四组:对照组、FT671组、AngⅡ组、FT671+AngⅡ组。利用α-actinin细胞免疫荧光染色检测心肌细胞表面积;Western blot检测心房钠尿肽(ANP)、脑钠肽(BNP)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、B细胞淋巴瘤-2相关X蛋白(Bax)、白细胞介素-6(IL-6)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)以及NADPH氧化酶4(Nox4)的蛋白表达水平;RT-PCR检测ANP、BNP、β-肌球蛋白重链(β-MHC)、IL-6、MCP-1、TNF-α的mRNA表达;TUNEL染色检测细胞凋亡情况;细胞计数试剂8(CCK8)实验检测各组细胞活力;活性氧(ROS)染色检测细胞内氧化损伤水平。结果与对照组相比,AngⅡ组USP7蛋白表达明显增加,而使用FT671后,USP7表达明显被抑制。与AngⅡ组相比,FT671+AngⅡ组心肌细胞面积减小;ANP、BNP、Bax的蛋白表达减少,ANP、BNP、β-MHC、Bax、IL-6、MCP-1以及TNF-α的mRNA表达减少;Bcl-2的蛋白和mRNA表达均增加。与AngⅡ组相比,FT671+AngⅡ组TUNEL阳性细胞明显减少,心肌细胞活力增强,ROS生成减少,Nox4、NLRP3蛋白表达减少,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论FT671通过抑制Nox4/ROS/NLRP3炎症通路减轻AngⅡ诱导的心肌细胞中的氧化应激和炎症反应,从而减轻心肌细胞肥大。

非小细胞肺癌组织中组蛋白去乙酰化酶7、泛素特异性肽酶10的表达变化及其意义

目的观察非小细胞肺癌(NSCILC)组织中组蛋白去乙酰化酶7(HDAC7)、泛素特异性肽酶10(USP10)的表达变化,探讨其意义。方法98例NSCLC患者,均行肿瘤切除术,术中保留癌组织及癌旁组织。采用免疫组织化学法检测癌组织及癌旁组织HDAC7、USP10,采用Spearman相关性分析法分析NSCLC癌组织中HDAC7与USP10表达的相关性,分析HDAC7、USP10表达与NSCLC患者临床病理参数的关系,采用Kaplan-Meier生存曲线分析HDAC7、USP10表达与NSCLC患者预后的关系,采用COX多因素比例风险模型分析NSCLC患者预后的影响因素。结果NSCLC组织、癌旁组织中HDAC7阳性率分别为65.31%(64/98)、6.12%(6/98)(χ^(2)=74.756,P<0.05);NSCLC组织、癌旁组织中USP10阳性率分别为63.27%(62/98)、8.16%(8/98)(χ^(2)=64.800,P<0.05)。肿瘤低分化程度、有淋巴结转移及TNM分期Ⅲ期NSCLC癌组织HDAC7,USP10表达阳性率高于高中分化程度、无淋巴结转移及TNM分期Ⅰ~Ⅱ期(P均<0.05)。NSCLC组织中HDAC7、USP10的表达呈正相关(r=0.714,P<0.05)。与表达阴性者比较,HDAC7、USP10表达阳性的患者3年累积生存率低(χ^(2)=16.300、15.870,P均<0.05)。HDAC7表达阳性、USP10表达阳性、肿瘤低分化程度、有淋巴结转移、TNM分期Ⅲ期是NSCLC患者预后的独立危险因素。结论NSCLC癌组织中HDAC7、USP10高表达,HDAC7、USP10可能协同促进NSCLC的发生发展,HDAC7、USP10高表达NSCLC患者的预后较差。

泛素特异性蛋白酶4对透明细胞肾细胞癌细胞增殖能力的影响

目的探讨人类泛素特异性蛋白酶4(USP4)对透明细胞肾细胞癌(KIRC)细胞增殖能力的影响。方法从TCGA数据库及GEO数据库中下载KIRC患者的基因表达及临床信息资料,进行转化及整理;同时利用Ualcan、HPA数据库等在线工具对数据库中的KIRC患者进行进一步分析,研究USP4表达与KIRC患者临床病理特征(包括TNM分期和病理分级)以及生存预后的关系。在KIRC细胞株Caki-1、OSRC-2中转染USP4干扰和过表达质粒,通过平板克隆、细胞计数试剂盒8实验检测USP4对KIRC细胞增殖能力的影响。结果生物信息学分析显示,USP4在KIRC组织中的mRNA及蛋白表达水平均明显低于癌旁正常肾脏组织(均P<0.05)。KIRC组织中USP4 mRNA表达水平与患者肿瘤T分期、病理分期、组织学分级、总生存率、疾病特异性生存率、无进展生存率均有关(均P<0.05);与性别、年龄、N分期、M分期均无关(均P>0.05)。细胞实验结果显示,USP4蛋白在Caki-1、OSRC-2细胞中显著过表达,而过表达USP4会明显降低Caki-1、OSRC-2细胞增殖能力和克隆形成能力(均P<0.05);敲低USP4会明显提高Caki-1细胞克隆形成能力(均P<0.05)。结论USP4在KIRC组织中低表达,而过表达USP4可抑制KIRC细胞增殖能力。

泛素特异性蛋白酶2、微RNA-432-5p在食管癌组织中表达及临床意义

目的 探讨食管癌组织泛素特异性蛋白酶2(USP2)、微RNA-432-5p(miR-432-5p)的表达及临床意义。方法 选取2014年6月至2016年6月在辽宁省肿瘤医院接受外科手术治疗的93例食管癌病人作为研究对象,取手术切除的食管癌组织及其癌旁组织,采用免疫组织化学法检测USP2的表达情况,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测组织中USP2 mRNA、miR-432-5p表达水平,以食管癌组织中miR-432-5p表达水平平均数分为miR-432-5p低表达组和miR-432-5p高表达组,分析食管癌组织USP2、miR-432-5p表达与食管癌病人临床病理特征的关系;使用生物信息学Targetscan网站搜索USP2、miR-432-5p是否存在结合位点,进一步分析食管癌组织USP2、miR-432-5p的相关性;采用Kaplan-Meier法分析USP2、miR-432-5p表达与食管癌病人预后的关系。结果 食管癌组织中USP2 mRNA表达水平(2.53±0.71比1.05±0.36)、USP2阳性率(55.91%比6.45%)明显高于癌旁组织(P<0.05),miR-432-5p表达水平明显低于癌旁组织(0.31±0.12比1.03±0.34,P<0.05);食管癌组织浸润深度(肌层)、TNM分期(Ⅲ期)、低分化、有淋巴结转移的食管癌组织中USP2阳性表达率均高于浸润深度(外膜)、TNM分期(Ⅰ、Ⅱ期)、中高分化、无淋巴结转移的食管癌组织(P<0.05),食管癌组织浸润深度(肌层)、TNM分期(Ⅲ期)、低分化、有淋巴结转移的食管癌组织中miR-432-5p表达水平均低于浸润深度(外膜)、TNM分期(Ⅰ、Ⅱ期)、中高分化、无淋巴结转移的食管癌组织(P<0.05);生物信息学Targetscan网站显示,USP2、miR-432-5p存在结合位点,进一步经Spearman法分析结果显示食管癌组织中USP2、miR-432-5p表达呈负相关(P<0.05),Kaplan-Meier结果显示USP2阳性表达者、miR-432-5p低表达者5年总体生存率低于USP2阴性组者、miR-432-5p高表达者(分别为16.032、7.210,P<0.05)。结论 USP2、miR-432-5p异常表达可能与食管癌的发生及预后有关,检测USP2、miR-432-5p水平对食管癌的早期防治及预后评估具有重要意义,为食管癌的临床治疗提供理论依据。

脓毒症患者血清泛素特异性蛋白酶13和组织因子水平与预后的相关性分析

目的探究血清泛素特异性蛋白酶13(USP13)和组织因子(TF)水平与脓毒症患者预后的相关性。方法选取2020年5月至2022年5月期间我院重症监护病房收治的脓毒症患者96例为研究对象,依据患者入住重症监护病房28 d后的生存情况,将脓毒症患者分为存活组(77例)和死亡组(19例),收集患者一般资料,酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清USP13、TF水平,脓毒症患者血清USP13、TF水平与SOFA评分的相关性采用Pearson法分析,USP13、TF对脓毒症患者28 d预后的预测价值采用ROC曲线评估。结果死亡组APACHEⅡ评分、SOFA评分、PCT及TF水平均明显高于存活组,USP13水平明显低于存活组(P<0.05);SOFA评分越高,血清USP13水平越低,TF水平及28 d死亡率越高(P<0.05);血清USP13水平与SOFA评分呈显著负相关(r=-0.513,P<0.05),血清TF水平与SOFA评分呈显著正相关(r=0.487,P<0.05);ROC曲线显示,USP13对预后预测的AUC为0.751,截断值为52.00 pg/ml,其敏感度、特异度分别为94.74%、48.05%;TF对预后预测的AUC为0.770,截断值为70.12 pg/ml,其敏感度、特异度分别为73.68%、71.43%;二者联合对预后预测的AUC为0.849,明显高于二者单独预测(Z联合vs.USP13=2.015、P=0.044;Z联合vs.TF=2.262、P=0.024),其敏感度、特异度分别为73.16%、94.81%。结论USP13、TF在脓毒症不同预后患者血清中差异表达,二者均与脓毒症患者病情密切相关,USP13、TF联合预测脓毒症患者28 d死亡的效能较高。

泛素特异性蛋白酶25对KGN细胞胰岛素抵抗的影响

目的用适量胰岛素诱导卵巢颗粒细胞系KGN细胞构建胰岛素抵抗(IR)的模型,探究泛素特异性蛋白酶25(USP25)对KGN细胞IR状态的影响。方法培养KGN细胞,并加入不同浓度胰岛素处理,建立诱导IR细胞模型的适宜胰岛素浓度;敲低KGN细胞中USP25的表达,诱导IR细胞模型,得到4个处理组:未敲低USP25的非IR模型对照组(lv-con-NC)、敲低USP25的非IR模型组(lv-USP25-NC)、未敲低USP25的IR模型组(lv-con-IR)与敲低USP25的IR模型组(lv-USP25-IR)。用Western blot检测葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)和胰岛素相关通路p-AKT、AKT的表达水平;用葡萄糖氧化酶法检测细胞培养基上清中葡萄糖的含量,分析4组细胞葡萄糖摄取情况。结果与lv-con-NC组相比,lv-con-IR组葡萄糖摄取量显著下降(P<0.05),但lv-USP25-NC组葡萄糖摄取量无显著变化(P>0.05);与lv-con-IR组相比,lv-USP25-IR组的葡萄糖摄取量、GLUT4蛋白表达量和p-AKT蛋白表达量均显著升高(P<0.05)。结论敲低USP25可提高胰岛素信号通路中p-AKT以及GLUT4的表达,从而恢复KGN细胞葡萄糖摄取能力,改善KGN细胞的IR状态。

乳腺癌组织中泛素特异性蛋白酶18/干扰素刺激基因15表达水平及其临床意义

目的探究泛素特异性蛋白酶18(USP18)、干扰素刺激基因15(ISG15)在乳腺癌组织中的表达水平及临床意义。方法采用Ualcan数据库分析USP18、ISG15在正常乳腺组织和乳腺癌组织中的表达情况及二者与乳腺癌预后的关系;选取渭南市中心医院2012年5月至2015年7月诊治的99例乳腺癌病人癌组织、癌旁正常组织进行研究。分别检测USP18、ISG15mRNA及其蛋白表达情况;分析乳腺癌组织USP18、ISG15表达水平与病人临床病理特征、预后的关系;Cox回归分析乳腺癌病人预后的影响因素。结果Ualcan数据库中乳腺癌组织USP18为18.40±4.17、ISG15 mRNA表达水平为168.56±43.95高于正常乳腺组织(10.00±3.14、30.76±8.23)(P<0.05);乳腺癌组织USP18、ISG15 mRNA表达水平高低与乳腺癌预后无明显相关性。乳腺癌组织USP18为1.67±0.53、ISG15 mRNA为1.86±0.61及蛋白阳性表达率均高于癌旁正常组织(1.03±0.34、0.99±0.33)(P<0.05);乳腺癌组织USP18、ISG15表达水平均与淋巴结转移、乳腺癌分子亚型、肿瘤分化程度、TNM分期相关(P<0.05);乳腺癌病人癌组织中USP18表达水平与ISG15呈正相关(P<0.05);USP18阳性组、ISG15阳性组乳腺癌病人术后60个月生存率均低于USP18阴性组、ISG15阴性组(P<0.05);淋巴结转移、TNM分期、USP18、ISG15均是影响乳腺癌病人不良预后的独立危险因素(P<0.05)。结论乳腺癌病人癌组织USP18、ISG15表达水平均较高,两者均与乳腺癌病人预后关系密切,检测乳腺癌组织USP18、ISG15水平有助于评估乳腺癌病人预后。

泛素特异性蛋白酶25在肿瘤中的研究进展

泛素特异性蛋白酶(USP)25作为USP家族成员,在各种疾病发生发展过程中发挥关键作用,包括代谢调节、免疫应答以及炎症反应等。近年人们对USP25结构和功能的研究越来越清晰,发现USP25能通过与信号分子相互作用调控多种细胞内外信号通路,USP25过度激活将导致细胞的异常增殖,并使其侵袭迁移能力增加,从而促进肿瘤的形成、发展。USP25在多种肿瘤细胞中均异常高表达,其在癌症中的作用机制也逐渐被揭示。USP25有望成为肿瘤治疗的一个潜在靶标,并具有重要的临床价值和广阔的应用前景。

泛素特异性蛋白酶对肿瘤细胞增殖侵袭转移的促进作用机制研究进展

细胞周期中的蛋白质降解受泛素连接酶和去泛素化酶(DUB)双向调控,泛素特异性蛋白酶(USP)是DUB中的主要成员,它可去除靶蛋白中的泛素,从而调节蛋白酶体的降解、定位和活性。USP在肿瘤细胞周期G1、S、G2和M期转化中发挥着重要作用,其可以通过各种信号通路来促进各时期之间的转换,从而促进肿瘤细胞的增殖、侵袭和转移。USP可以通过促进细胞周期蛋白/细胞周期蛋白依赖性激酶的上调或者抑制细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂的表达来促进肿瘤细胞增殖侵袭转移。

非小细胞肺癌中泛素特异性蛋白酶10及真核翻译起始因子4G1的相关研究进展

肺癌是全球范围内的恶性肿瘤,尤其是非小细胞肺癌大大折损了患者的健康寿命年。因其病因不明确、症状不特异、晚期治疗预后差,靶向治疗昂贵且耐药性强,现迫切需要新的分子标志物作为非小细胞肺癌早期诊断的预警信号,并有助于相关肿瘤的分类、预后判断以及治疗指导。泛素特异性蛋白酶10(USP10)作为肿瘤分子通路的明星因子,与真核翻译起始因子4G1(EIF4G1)存在相互作用,且二者均在肿瘤中高表达,其潜在分子标志物的价值亟待探索。本文总结了EIF4G1、USP10及其近年肿瘤相关研究,包括表型研究、信号通路、生物功能等作用机制,以期为该领域相关研究的开展提供帮助。

泛素特异性蛋白酶39对肺癌细胞的生物学影响

背景 肺癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一,也是死亡率最高的肿瘤。与大多数肿瘤相比,肺癌的治疗现状仍不容乐观,严重威胁着人类的健康。蛋白质泛素化是翻译后修饰之一,以不同的方式调节许多的细胞过程。泛素特异性蛋白酶39(ubiquitin specific protease 39,USP39)与多种肿瘤的发生发展密切相关,但其在肺癌中的作用机制仍有待探索。目的 构建USP39稳定过表达的人肺癌A549细胞系,观察USP39过表达对肺癌A549细胞的生物学影响。方法 采用慢病毒感染法构建USP39稳定过表达的A549 USP39细胞系,并用Western blot进行验证。利用克隆形成实验检测USP39过表达对A549细胞增殖的影响;利用划痕实验检测USP39过表达对A549细胞迁移能力的影响。结果 Western blot结果显示,A549USP39稳定过表达的A549细胞系构建成功。与对照组相比,克隆形成实验表明USP39稳定过表达可明显促进细胞增殖,划痕实验显示USP39过表达可显著增加A549细胞的迁移能力,且差异有统计学意义(P<0.05)。结论 本实验成功构建了USP39稳定过表达的A549细胞系,并初步验证USP39过表达与肺癌细胞的增殖和迁移相关。

泛素特异性蛋白酶39在非小细胞肺癌中的表达及其对细胞增殖的影响

目的检测泛素特异性蛋白酶39(USP39)在非小细胞肺癌组织及细胞中的表达情况,并分析USP39的表达水平与85例非小细胞肺癌患者的临床病理特征的相关性,及USP39对非小细胞肺癌细胞系增殖、凋亡和周期的影响。方法利用免疫组织化学技术检测非小细胞肺癌石蜡组织标本中USP39蛋白的表达情况,分析非小细胞肺癌组织及癌旁组织中USP39的表达差异,利用Spearman秩相关分析USP39与非小细胞肺癌患者临床病理特征的相关性,利用实时荧光定量聚合酶链反应(q RT-PCR)检测非小细胞肺癌细胞系及支气管上皮样细胞系中USP39的表达,利用CCK-8实验检测USP39对非小细胞肺癌细胞增殖的影响,利用流式细胞术检测USP39对非小细胞肺癌细胞凋亡和周期的影响。结果 USP39蛋白在非小细胞肺癌组织中的阳性率高于癌旁组织(P <0.05);USP39蛋白的表达水平与非小细胞肺癌患者TNM分期呈正相关(P <0.05),而与其他临床病理特征无相关性(P>0.05);非小细胞肺癌细胞系中USP39的表达水平高于支气管上皮样细胞(P <0.05);转染USP39 siRNA的非小细胞肺癌细胞增殖能力低于转染USP39 NC者(P <0.05);转染USP39 siRNA的非小细胞肺癌细胞早期凋亡细胞比例高于转染USP39 NC者(P <0.05),细胞周期被阻滞于G1期。结论 USP39在非小细胞肺癌中表达升高,与患者TNM分期密切相关,可促进非小细胞肺癌的增殖。

以铂类为基础的新辅助化疗疗效与胃癌临床病理特征及泛素特异性蛋白酶39的相关性研究

背景胃癌新辅助化疗是胃癌综合治疗的重要内容,取得了很好的结果,但是仍然有部分患者在治疗期间疾病进展,失去治疗机会。寻找能够预测新辅助化疗疗效的指标是今后研究的热点。目的探讨以铂类为基础的新辅助化疗疗效与胃癌临床病理特征及泛素特异性蛋白酶39(USP39)的相关性。方法选取2012—2013年在中国人民解放军总医院进行以铂类为基础的新辅助化疗的胃癌患者44例为研究对象,采用以铂类为基础的新辅助化疗SOX方案进行治疗,根据治疗效果分为有效组和无效组。收集患者的临床病理资料,采用免疫组织化学及Western blotting法检测USP39的表达。结果 44例患者采用以铂类为基础的新辅助化疗SOX方案,其中有效组23例,无效组21例。有效组与无效组患者性别、年龄、病程、血红蛋白、中性粒细胞分数(N)、淋巴细胞分数(L)、血清清蛋白水平及肿瘤部位、肿瘤大小、分化程度、术前化疗疗程比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。无效组患者N/L≥3及USP39阳性率高于有效组(P<0.05)。结论以铂类为基础的新辅助化疗治疗胃癌,有效组患者的N/L、USP39低于无效组,N/L、USP39有可能成为预测胃癌以铂类为基础的新辅助化疗疗效的有效分子。

疱疹病毒相关性泛素特异性蛋白酶在乳腺癌组织中的表达及临床意义

背景与目的:疱疹病毒相关性泛素特异性蛋白酶(herpesvirus-associated ubiquitin specific protease,HAUSP)是新近发现的一种去泛素化蛋白酶。最近的研究表明,HAUSP能在体内外使p53去泛素化,避免其降解,提示HAUSP可能通过稳定p53蛋白发挥肿瘤抑制功能。本研究旨在观察HAUSP在乳腺癌组织及非癌组织中表达的差异;探讨HAUSP与p53蛋白表达的相关性及其与乳腺癌预后的关系。方法:采用实时荧光定量-PCR检测13例新鲜乳腺癌组织及13例癌旁组织中HAUSP mRNA的表达;免疫组织化学EnVision法检测69例乳腺癌组织和40例非癌组织以及13例新鲜乳腺癌组织中HAUSP蛋白及p53蛋白的表达。结合患者临床资料进行预后分析。结果:乳腺癌组织中HAUSP mRNA转录量为1.85±0.04,癌旁组织为2.74±0.03,HAUSP mRNA在乳腺癌中的转录量明显低于癌旁组织,差异有显著性(P<0.01)。HAUSP蛋白在乳腺癌及对照组中的阳性表达率分别为59.4%和75.0%,乳腺癌组织阳性率低于对照组,差异有显著性(P<0.01);HAUSP蛋白表达与患者的年龄、瘤体大小、分化程度、病理类型、腋窝淋巴结转移及临床分期均无相关性;HAUSP蛋白表达与其mRNA转录一致;HAUSP mRNA和其蛋白的表达与p53蛋白的表达无相关性(P>0.05);同时具备HAUSP蛋白阳性和p53蛋白阴性的乳腺癌患者无病生存率(disease-free survival,DFS)高于HAUSP蛋白阴性或p53阳性的患者。结论:乳腺癌HAUSP mRNA和蛋白表达下调提示HAUSP基因可能与乳腺癌发生、发展有关。同时评价HAUSP蛋白和p53蛋白的状态可能有助于判断患者的预后。

乳腺癌中泛素蛋白连接酶E3A与泛素特异性蛋白酶25的表达及其临床意义

目的探讨泛素蛋白连接酶E3A(ubiquitin protein ligase E3A,UBE3A)与泛素特异性蛋白酶25(ubiquitin specific protease 25,USP25)在乳腺癌组织中的表达及与临床病理特征的相关性,并分析UBE3A与USP25在乳腺癌泛素蛋白酶体系统中的关系。方法采用免疫组织化学染色检测50例乳腺癌组织及癌旁相对正常组织石蜡标本中UBE3A与USP25的表达情况,并分析它们与乳腺癌患者临床病理特征的关系;shRNA-UBE3A慢病毒转染乳腺癌MCF-7细胞,通过荧光定量PCR与Western Blot检测UBE3A基因及蛋白的敲减水平,然后观察敲减UBE3A后USP25的表达水平。结果UBE3A与USP25在乳腺癌组织中的阳性表达率分别为64%、72%,而在邻近相对正常组织中的表达均为阴性,两者在乳腺癌组织与相对正常组织中的表达差异具有统计学意义(P<0.001);UBE3A的表达与淋巴结转移(P=0.001)、Ki-67的表达(P<0.001)相关,USP25的表达与组织学分级(P=0.046)、淋巴结转移(P=0.041)、Ki-67的表达(P=0.029)相关;shRNA-UBE3A慢病毒转染乳腺癌MCF-7细胞后,UBE3A蛋白及mRNA的表达均明显降低(P<0.001),且敲减UBE3A后USP25的蛋白及mRNA的表达明显降低(P<0.001)。结论UBE3A与USP25和乳腺癌细胞的增殖、转移等生物学行为相关,在乳腺癌泛素蛋白酶体系统中UBE3A与USP25功能作用明显增强且保持动态平衡,它们可能共同作用促进乳腺癌的的发生发展。