泛素特异性蛋白酶18刺激乙型肝炎病毒复制的初步研究

目的了解泛素特异性蛋白酶18（USP18）对乙型肝炎病毒（HBV）复制的影响及其潜在机制。方法 1）USP18和Pol质粒构建：采用常规基因克隆方法,将人USP18编码序列及HBV多聚酶（Pol）编码序列分别构建到pcDNA3.1-3tag真核细胞表达载体内。2）研究Pol对USP18的影响：高表达转染Pol质粒至Hep AD38细胞内,抽提细胞内总RNA,逆转录成c DNA,用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测Pol对USP18的影响。3）研究USP18对HBV的影响：高表达转染USP18质粒至Hep AD38细胞内,抽提细胞内总RNA和总DNA,qRT-PCR检测USP18对HBV复制的影响。4）研究Pol与USP18之间的相互作用：将Pol质粒按一定比例转染到铺有293T细胞的10cm培养皿中,采用免疫共沉淀的方法检测Pol与USP18之间是否存在相互作用。结果成功构建USP18和Pol表达质粒,并在HepAD38细胞中高表达;过表达Pol蛋白促进USP18表达;过表达USP18刺激HBV复制;Pol与USP18存在相互作用。结论初步证明USP18可能通过与Pol相互作用促进HBV复制。

泛素特异性蛋白酶18抑制IFNα抗HBV活性但并不抑制IFNλ抗HBV的活性（英文）

干扰素α(IFN-α)是临床最常用的抗乙型肝炎病毒(HBV)药物之一。泛素特异性蛋白酶18(USP18)被证实是抑制IFN-α抗HBV活性的因子,但USP18是否对干扰素λ(IFN-λ)抗HBV有影响还尚未可知。为了明确USP18对IFNλ抗HBV活性的影响,本研究以Hep G2. 2. 15细胞作为乙肝体外模型,采用脂质体转染法分别向细胞转染p EGFP-USP18、PEGFP-N1经48 h,再经IFN-α和IFN-λ处理24 h,分为阴性对照组﹑USP18过表达+IFN-α组﹑空载组+IFN-α组﹑USP18过表达+IFN-λ组﹑空载组+IFN-λ组。采用Western印迹、RT-q PCR和ELISA检测各组的乙肝病毒标志物、STAT1/p STAT1和下游的干扰素刺激基因(ISGs)的表达。结果显示,与阴性对照组和空载组相比,USP18蛋白在过表达组明显升高(P <0. 05),过表达细胞模型构建成功;在IFN-α处理的两组中,空载组中HBs Ag、HBe Ag、HBc Ag及HBV-DNA的表达均低于USP18过表达组,差异有统计学意义(P <0. 05)。而IFN-λ处理组中,乙肝病毒标志物的差异不明显。在IFN-α处理组中,空载组的ISG15、Mx A、IFIT1和p STAT1表达均高于USP18过表达组,差异有统计学意义(P <0. 05),而在IFN-λ处理组中ISGs和p STAT1的表达无明显差异。上述结果证实,USP18可通过抑制JAK/STAT信号通路的激活来减弱IFN-α抗HBV的活性。研究还证实,IFN-λ可发挥抗HBV的作用,USP18不通过JAK/STAT信号通路抑制其抗HBV活性。

泛素特异性蛋白酶18在恶性肿瘤发生和发展中作用及其机制的研究进展

恶性肿瘤给社会和个人带来了沉重的负担,提高肿瘤的早期诊断率和治疗效果、寻找潜在的治疗靶点成为目前临床上亟待解决的问题。泛素特异性蛋白酶18(USP18)是蛋白翻译后修饰酶的一种,具有去泛素化酶活性,能够特异性地将干扰素刺激基因15(ISG15)从底物蛋白上移除,也可调控干扰素信号通路,阻碍ISG的表达,在感染、免疫等病理过程中发挥作用。近年的研究发现,USP18在多种类型肿瘤中高表达,在肿瘤的发生和发展中扮演了重要角色,能够影响肿瘤增殖和凋亡,调控肿瘤细胞代谢、侵袭和转移。此外,USP18还可影响肿瘤细胞的放射和化学治疗的敏感性,并调控部分免疫细胞的功能。因此,开发USP18的特异性抑制剂,可能成为抗肿瘤药物开发的一种新思路。

乳腺癌组织中泛素特异性蛋白酶18/干扰素刺激基因15表达水平及其临床意义

目的探究泛素特异性蛋白酶18(USP18)、干扰素刺激基因15(ISG15)在乳腺癌组织中的表达水平及临床意义。方法采用Ualcan数据库分析USP18、ISG15在正常乳腺组织和乳腺癌组织中的表达情况及二者与乳腺癌预后的关系;选取渭南市中心医院2012年5月至2015年7月诊治的99例乳腺癌病人癌组织、癌旁正常组织进行研究。分别检测USP18、ISG15mRNA及其蛋白表达情况;分析乳腺癌组织USP18、ISG15表达水平与病人临床病理特征、预后的关系;Cox回归分析乳腺癌病人预后的影响因素。结果Ualcan数据库中乳腺癌组织USP18为18.40±4.17、ISG15 mRNA表达水平为168.56±43.95高于正常乳腺组织(10.00±3.14、30.76±8.23)(P<0.05);乳腺癌组织USP18、ISG15 mRNA表达水平高低与乳腺癌预后无明显相关性。乳腺癌组织USP18为1.67±0.53、ISG15 mRNA为1.86±0.61及蛋白阳性表达率均高于癌旁正常组织(1.03±0.34、0.99±0.33)(P<0.05);乳腺癌组织USP18、ISG15表达水平均与淋巴结转移、乳腺癌分子亚型、肿瘤分化程度、TNM分期相关(P<0.05);乳腺癌病人癌组织中USP18表达水平与ISG15呈正相关(P<0.05);USP18阳性组、ISG15阳性组乳腺癌病人术后60个月生存率均低于USP18阴性组、ISG15阴性组(P<0.05);淋巴结转移、TNM分期、USP18、ISG15均是影响乳腺癌病人不良预后的独立危险因素(P<0.05)。结论乳腺癌病人癌组织USP18、ISG15表达水平均较高,两者均与乳腺癌病人预后关系密切,检测乳腺癌组织USP18、ISG15水平有助于评估乳腺癌病人预后。

泛素特异性蛋白酶USP25的研究进展

泛素特异性蛋白酶25(ubiquttin specific protease 25,USP25)是一种去泛素化蛋白酶,可以水解靶蛋白上的泛素,调节靶蛋白的稳定性和活性,维持蛋白质稳态。USP25在炎症反应、病毒感染、癌症、神经系统疾病、肠道系统疾病中发挥着重要的调控作用。近年来关于USP25的文献报道尚少,对USP25的深入研究仍有较大空间,本文将关于USP25的研究进展作一综述。

乳腺癌中泛素蛋白连接酶E3A与泛素特异性蛋白酶25的表达及其临床意义

目的探讨泛素蛋白连接酶E3A(ubiquitin protein ligase E3A,UBE3A)与泛素特异性蛋白酶25(ubiquitin specific protease 25,USP25)在乳腺癌组织中的表达及与临床病理特征的相关性,并分析UBE3A与USP25在乳腺癌泛素蛋白酶体系统中的关系。方法采用免疫组织化学染色检测50例乳腺癌组织及癌旁相对正常组织石蜡标本中UBE3A与USP25的表达情况,并分析它们与乳腺癌患者临床病理特征的关系;shRNA-UBE3A慢病毒转染乳腺癌MCF-7细胞,通过荧光定量PCR与Western Blot检测UBE3A基因及蛋白的敲减水平,然后观察敲减UBE3A后USP25的表达水平。结果UBE3A与USP25在乳腺癌组织中的阳性表达率分别为64%、72%,而在邻近相对正常组织中的表达均为阴性,两者在乳腺癌组织与相对正常组织中的表达差异具有统计学意义(P<0.001);UBE3A的表达与淋巴结转移(P=0.001)、Ki-67的表达(P<0.001)相关,USP25的表达与组织学分级(P=0.046)、淋巴结转移(P=0.041)、Ki-67的表达(P=0.029)相关;shRNA-UBE3A慢病毒转染乳腺癌MCF-7细胞后,UBE3A蛋白及mRNA的表达均明显降低(P<0.001),且敲减UBE3A后USP25的蛋白及mRNA的表达明显降低(P<0.001)。结论UBE3A与USP25和乳腺癌细胞的增殖、转移等生物学行为相关,在乳腺癌泛素蛋白酶体系统中UBE3A与USP25功能作用明显增强且保持动态平衡,它们可能共同作用促进乳腺癌的的发生发展。

泛素特异性蛋白酶39的生物学功能及在肿瘤中的研究进展

泛素特异性蛋白酶39(ubiquitin-specific protease 39,USP39)是泛素特异性蛋白酶家族的成员之一,在多种肿瘤细胞中高表达。USP39不仅能够参与剪接体的形成,参与pre-mRNAs的剪接过程,在维持纺锤体的稳定、调节细胞周期方面也起着重要的作用。USP39可以通过多种信号通路调节细胞的增殖、迁移、细胞周期阻滞、增加肿瘤细胞对化疗药物和放射的耐受性,导致肿瘤的恶性进展等。本文就USP39的生物学功能及其在肿瘤发生发展中的作用进行综述,为基于USP39的肿瘤诊断和治疗提供理论依据。

泛素特异性蛋白酶44在肝细胞癌中的表达及预后价值

【目的】探讨泛素特异性蛋白酶44(USP44)在肝细胞癌(HCC)中的表达及其临床病理学意义。【方法】运用免疫组化方法,检测USP44蛋白在161例肝细胞癌中的表达水平,统计分析其与临床病理参数之间的相关性及其预后价值。【结果】在161例HCC患者中,98例(60.9%)高表达USP44蛋白,Pearson's卡方检验结果显示USP44在HCC中的表达水平与临床分期(χ^(2)=14.44,P<0.001)、肿瘤单灶及多灶性(χ2=8.04,P=0.005)显著相关;Kaplan-Mei⁃er分析结果显示,低表达组患者平均生存时间59.6个月,显著低于高表达组患者的平均生存时间185.0个月(Log-rankχ^(2)=20.77,P<0.001);多因素Cox比例风险模型揭示USP44是HCC患者的独立预后危险因素。【结论】USP44蛋白高表达的HCC患者具有良好的生存期,检测其蛋白表达可作为筛选预后良好的肝细胞癌患者的一种手段。

泛素特异性蛋白酶15稳定着色性干皮病F蛋白并促进DNA链间交联损伤修复

着色性干皮病F蛋白(xeroderma pigmentosum group F,XPF)和切除修复交叉互补组1蛋白(excision repair cross complementing group 1,ERCC1)组成一种结构特异性的核酸内切酶(XPFERCC1)复合物,参与DNA链间交联(interstrand crosslink,ICL)损伤修复。其中,XPF蛋白的去泛素化修饰对DNA损伤修复的影响尚未见报道。本工作主要研究泛素特异性蛋白酶15 (ubiquitinspecific protease 15,USP15)对XPF的稳定性及ICL修复的影响。本研究通过蛋白质质谱和Western印迹法分析发现,XPF蛋白与USP15存在相互作用,进而使XPF蛋白去泛素化修饰;采用CRISPR-Cas9技术构建USP15基因敲除的He La细胞株(USP15 KO)并进行Western印迹分析,结果显示,敲除组XPF蛋白水平低于对照组(P<0. 001)。克隆形成试验显示,在ICL诱导剂顺铂(cisplatin,DDP)和丝裂霉素C (mitomycin,MMC)的作用下,USP15基因敲除的HeLa细胞增殖能力显著降低(P<0. 01)。本研究表明,去泛素化酶USP15是一种重要的DNA修复调节因子,该酶通过稳定XPF蛋白促进由XPF-ERCC1介导的ICL修复。本研究为改善ICL诱导剂类抗癌药物的耐药性提供了理论依据,并为肿瘤的治疗提供了潜在的新靶点。

泛素特异性蛋白酶4对脂肪干细胞成骨分化的影响

目的:本研究通过使用泛素特异性蛋白酶4(USP4)抑制剂Vialinin A干预大鼠脂肪干细胞(ASCs)的生长分化,探究USP4对ASCs的成骨分化的影响。方法:将分离培养至第3代的ASCs细胞分为6组分别用含0、0.1、0.5、1、5、10μmol/L Vialinin A的培养基培养10 d,CCK-8检测各组细胞增殖情况。将第3代细胞分为实验组、阳性以及阴性对照组,分别用含0.5μmol/L Vialinin A的成骨诱导液、不含Vialinin A的成骨诱导液及普通的α-MEM培养。检测各组第7天细胞内USP4、β-catenin、碱性磷酸酶(ALP)及骨桥蛋白(OPN)基因的表达。将3组细胞培养至第4、7、10、14天进行ALP染色,检测ALP的活性;培养至21 d时进行茜素红染色,检测细胞矿化结节的形成。采用t检验比较组间数据差异,P<0.05时差异具有统计学意义。结果:0.5μmol/L Vialinin A处理的实验组细胞增殖趋势与对照组的差异无统计学意义,表明该浓度的Vialinin A对细胞增殖无影响,作为后续实验组浓度。ALP与茜素红染色结果显示实验组染色效果均较其他组显著。RT-qPCR结果显示与阴性对照组相比,阳性对照组与实验组细胞内USP4与β-catenin表达量较低,差异具有统计学意义。实验组与阳性对照组相比无显著性差异。与阳性对照组相比,实验组的ALP与OPN表达量显著升高,差异具有统计学意义。结论 :0.5μmol/L的USP4抑制剂Vialinin A可以促进大鼠ASCs内ALP与OPN基因的表达。但USP4可能并非通过β-catenin途径调节其成骨分化。

喉鳞状细胞癌组织中USP18、BTG3表达变化及与预后的相关性

目的 观察喉鳞状细胞癌组织中泛素特异性蛋白酶18(USP18)和B细胞转位基因3(BTG3)的表达变化,并探讨其与预后的关系。方法 应用免疫组化法检测82例喉鳞状细胞癌组织和50例癌旁正常喉黏膜组织中的USP18、BTG3表达水平,分析二者表达与患者临床病理参数及预后的关系。结果 喉鳞状细胞癌组织中USP18高表达率为37.80%,高于癌旁正常组织的12.00%;BTG3高表达率为45.12%,低于癌旁正常组织的82.00%。肿瘤直径≥3cm、临床分期Ⅰ~Ⅱ期、中低分化、合并淋巴结转移患者USP18高表达率低于肿瘤直径<3cm、临床分期Ⅲ~Ⅳ期、高分化、无淋巴结转移患者(P均<0.05);肿瘤高分化、临床分期Ⅰ~Ⅱ期、无淋巴结转移患者BTG3高表达率高于肿瘤中低分化、临床分期Ⅲ~Ⅳ期、合并淋巴结转移患者(P均<0.05)。USP18低表达患者的3年总生存率、3年无进展生存率均高于USP18高表达患者,BTG3高表达患者的3年总生存率、3年无进展生存率均高于BTG3低表达患者(P均<0.05)。单因素和多因素回归分析显示,USP18高表达、BTG3低表达是影响喉鳞状细胞癌患者生存时间的危险因素(OR=0.241,95%CI为0.092~0.661,P=0.007;OR=0.336,95%CI为0.182~0.935,P<0.001)。结论 喉鳞状细胞癌组织中USP18表达升高,BTG3表达降低;USP18、BTG3表达状态与临床病理特征具有明显相关性,USP18高表达和BTG3低表达是影响喉鳞状细胞癌患者预后的危险因素。

1例USP7基因自发突变致Hao-Fountain综合征的病例特点分析并文献复习

回顾分析德州市妇女儿童医院1例因泛素特异性蛋白酶7(USP7)基因自发突变所致Hao-Fountain综合征患儿的临床资料,该女性患儿因语言及智力发育落后1年就诊,查体表情淡漠,眼神交流少,眼距宽,小下颌,眼球略凹陷,眼窝略深。基因检测USP7基因有1个杂合突变,确诊为Hao-Fountain综合征。USP7基因突变属于杂合突变,导致USP7蛋白缺失,不能完成正常的细胞周期,考虑该基因的突变与神经发育障碍有关。患儿后期随访尤为重要,应定期随访患儿生长发育水平,早期发现异常,及早进行科学干预,尽可能提高患儿生活质量。

下调泛素特异性蛋白酶18抑制胃癌细胞的侵袭和增殖

目的 分析泛素特异性蛋白酶18（USP18）在人胃癌细胞株中的表达及其作用,探讨其与胃癌发生、发展的关系.方法 蛋白质印迹法和实时荧光定量聚合酶链反应（RT-PCR）检测永生化胃黏膜上皮细胞株GSE和胃癌细胞株（AGS、MKN45、MKN25、BGC823、BGC803、SGC7901）中USP18蛋白和mRNA表达水平;CCK-8法和Transwell实验检测USP18在胃癌细胞侵袭和增殖中的作用.结果 GSE细胞中USP18 mRNA的含量表达低于各胃癌细胞株（F=794.052,P＜0.000 1）.6种胃癌细胞株中,BGC823和BGC803中USP18 mRNA的相对含量高,分别为17.62±0.55和13.52±0.50,而在MKN28和MKN45细胞中的含量低,分别为1.40±0.17和4.23±0.26.在蛋白水平上,USP18在GSE细胞中的表达最低,在6株胃癌细胞中,USP18在侵袭能力较强的SGC7901和BGC803细胞中的表达最高,而在AGS和MKN45细胞中的表达最低.与对照组相比,干扰USP18后SGC7901和BGC803的侵袭和增殖能力降低,差异均具有统计学意义（P＜0.01）.结论 USP18在侵袭能力较强的胃癌细胞株中高表达,下调USP18能抑制胃癌细胞的侵袭和增殖.

USP18的多样性功能

自泛素系统及其在蛋白质降解过程中的重要作用被发现以来,很多研究表明泛素特异性蛋白酶(ubiquitin-specific peptidases,USPs)的重要性。USP18蛋白(原名UBP 43)是这个家族的特殊成员之一。在过去的二十年中,USP18被发现具有多种功能,它不仅是一种异肽酶,也是一种有效的干扰素信号通路抑制剂。因此,USP18在多种类型细胞的生物学途径发挥着协调者的作用。本文概述了USP18在各种免疫调节过程中的多种功能,包括病原控制、癌症的发展和自身免疫性疾病。

泛素特异性蛋白酶18在HBV慢性感染及干扰素抵抗中的作用机制

干扰素（interferon，IFN）α在慢性乙型肝炎（chronic hepatitis B，CHB）抗病毒治疗中的优势为有限疗程和相对较高的HBeAg和HBsAg的血清学转换率，但是其疗效尚不尽人意。在造成IFN应答不佳的众多影响因素中，IFN抗病毒作用信号通路尤其是对IFN刺激基因（interferonstimulatedgene，ISG）的研究逐渐成为热点，

USP18的多样性功能

自泛素系统及其在蛋白质降解过程中的重要作用被发现以来,很多研究表明泛素特异性蛋白酶(ubiquitin-specific peptidases,USPs)的重要性。USP18蛋白(原名UBP 43)是这个家族的特殊成员之一。在过去的二十年中,USP18被发现具有多种功能,它不仅是一种异肽酶,也是一种有效的干扰素信号通路抑制剂。因此,USP18在多种类型细胞的生物学途径发挥着协调者的作用。本文概述了USP18在各种免疫调节过程中的多种功能,包括病原控制、癌症的发展和自身免疫性疾病。

泛素特异性蛋白酶USP18在肺腺癌中的表达及其影响研究

目的拟探讨泛素特异性蛋白酶USP18在肺腺癌中的表达及其对人肺腺癌细胞A549增殖、迁移能力的影响。方法基于癌症数据库TCGA-LUAD中的转录组数据,分析USP18在肺腺癌中的表达量;通过基因富集分析,探索USP18在肺腺癌发生发展中的功能。利用人肺腺癌A549细胞过表达USP18蛋白,生长曲线、克隆形成以及划痕实验探究USP18对A549细胞增殖、迁移能力的影响。结果在TCGA-LUAD数据库中,相比于癌旁组织,肺腺癌组织的USP18 mRNA水平明显升高;细胞生长曲线和克隆形成实验结果显示,转染Flag-USP18的人肺腺癌A549细胞较转染空载体细胞增殖能力增强;划痕实验显示,转染Flag-USP18的人肺腺癌A549细胞较转染空载体细胞迁移能力增强。结论肺腺癌细胞中USP18表达增强,且高表达的USP18可增强肺腺癌细胞增殖、迁移能力。

高血压脑出血患者TIMP-1、MMP-9、NSE、IL-18水平变化对神经功能影响

目的探讨高血压脑出血患者血清基质金属蛋白酶9(MMP-9)、基质金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)、血清神经元特异性烯醇化酶(NSE)、白细胞介素-18(IL-18)的变化与病情及神经功能缺损的关系。方法选取我院收治的高血压脑出血患者100例(高血压脑出血组)、同期健康体检对象100例(对照组),检测两组的TIMP-1、MMP-9、NSE、IL-18水平并进行比较;按照美国国立卫生研究院卒中量表评分(NIHSS)对高血压脑出血组进行分组,治疗2周前后对上述指标进行对比。结果高血压脑出血组患者的TIMP-1、MMP-9、NSE、IL-18测定值均显著高于对照组,差异均具有统计学意义(F=7.62~23.65,均P<0.05);重度、中度的高血压脑出血患者的TIMP-1、MMP-9、NSE、IL-18测定值均显著高于轻度组(F=15.45~23.60,P<0.05),重度的高血压脑出血患者的TIMP-1、MMP-9、NSE、IL-18测定值均显著高于中度组(均P<0.05);治疗2周后的高血压脑出血患者的TIMP-1、MMP-9、NSE、IL-18测定值均显著的低于治疗前水平(均P<0.05);高血压脑出血患者治疗前的TIMP-1、MMP-9、NSE、IL-18测定值与患者NIHSS评分均呈正相关(P<0.05)。结论高血压脑出血患者TIMP-1、MMP-9、NSE、IL-18水平升高显著,并且可以反应患者的病情变化、神经功能缺损程度。

细胞焦亡因子Caspase-1、IL-1β与IL-18在子宫内膜息肉组织中的表达和意义

目的检测细胞焦亡相关因子Caspase-1、IL-1β与IL-18在子宫内膜息肉组织中的表达情况,探讨细胞焦亡与子宫内膜息肉发病的关系,为深入研究子宫内膜息肉的发病机制提供依据。方法选取2020年1月至2021年1月在昆明医科大学第一附属医院妇科行宫腔镜探查术+诊刮术的60例患者,将术后病检为子宫内膜息肉的30例患者纳入观察组,术后病检为增生期子宫内膜的30例患者纳入对照组。采用免疫组化法检测Caspase-1、IL-1β与IL-18在观察组和对照的表达情况。结果Caspase-1主要表达于胞浆内,观察组的IRS得分为:(4.88±1.8)分,对照组的IRS得分为:(1.37±1.13)分,Caspase-1在观察组的表达高于对照组(t=8.95,P<0.05)。IL-1β在2组中均不表达。IL-18主要表达于胞浆和胞核内,观察组的IRS得分为:(6.84±2.41)分,对照组的IRS得分为:(1.73±0.90)分,IL-18在观察组的表达高于对照组(t=10.87,P<0.05)。结论Caspase-1和IL-18在子宫内膜息肉组织中高表达,这两种细胞焦亡相关因子可能参与子宫内膜息肉的发生。

血清IL-18、Caspase-3水平与新生儿缺氧缺血性脑病的相关性

目的探讨血清白介素-18(IL-8)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)与新生儿缺氧缺血性脑病(HIE)的相关性。方法 HIE患儿50例为HIE组,正常足月新生儿30例为对照组。2组新生儿均在出生后1 d、3 d、7 d采集外周静脉血,分离血清ELISA法检测血清中IL-8、Caspase-3水平。结果 HIE组轻度患儿血清IL-18、Caspase-3水平与对照组无显著差异(P>0.05)。出生1 d、3 d、7 d后,HIE组中度、重度患儿血清IL-18、Caspase-3水平显著高于轻度(P<0.05),重度患儿血清IL-18、Caspase-3水平显著高于中度(P<0.05)。出生3 d时,HIE组中度、重度患儿血清IL-18、Caspase-3水平显著高于出生1d、7d(P<0.05)。HIE患者的IL-8和Caspase-3水平无相关性。结论 IL-8、Caspase-3均参与了新生儿HIE的病理生理过程,血清IL-8、Caspase-3水平与HIE病情轻重与病程变化密切相关。