抑制泛素特异性蛋白酶7改善血管紧张素Ⅱ诱导的心肌细胞肥大

目的探究泛素特异性蛋白酶7(USP7)抑制剂FT671在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的H9c2细胞肥大中的作用和潜在机制。方法将H9c2细胞随机分为四组:对照组、FT671组、AngⅡ组、FT671+AngⅡ组。利用α-actinin细胞免疫荧光染色检测心肌细胞表面积;Western blot检测心房钠尿肽(ANP)、脑钠肽(BNP)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、B细胞淋巴瘤-2相关X蛋白(Bax)、白细胞介素-6(IL-6)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)以及NADPH氧化酶4(Nox4)的蛋白表达水平;RT-PCR检测ANP、BNP、β-肌球蛋白重链(β-MHC)、IL-6、MCP-1、TNF-α的mRNA表达;TUNEL染色检测细胞凋亡情况;细胞计数试剂8(CCK8)实验检测各组细胞活力;活性氧(ROS)染色检测细胞内氧化损伤水平。结果与对照组相比,AngⅡ组USP7蛋白表达明显增加,而使用FT671后,USP7表达明显被抑制。与AngⅡ组相比,FT671+AngⅡ组心肌细胞面积减小;ANP、BNP、Bax的蛋白表达减少,ANP、BNP、β-MHC、Bax、IL-6、MCP-1以及TNF-α的mRNA表达减少;Bcl-2的蛋白和mRNA表达均增加。与AngⅡ组相比,FT671+AngⅡ组TUNEL阳性细胞明显减少,心肌细胞活力增强,ROS生成减少,Nox4、NLRP3蛋白表达减少,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论FT671通过抑制Nox4/ROS/NLRP3炎症通路减轻AngⅡ诱导的心肌细胞中的氧化应激和炎症反应,从而减轻心肌细胞肥大。

泛素特异性蛋白酶7的表达与男性不育的相关性

目的探讨弱精子症(asthenozoospermia)和少弱精子症(oligoasthenozoospermia)患者精子中泛素特异性蛋白酶7(ubiquitin specific peptidase 7,USP7)的表达及其与男性不育的相关性。方法随机选取就诊于重庆医科大学附属第二医院妇产科生殖医学中心的不育症患者120例,根据2010年世界卫生组织标准进行精液参数常规分析,包括精子浓度和运动能力,分为弱精子症组(A组)37例、少弱精子症组(OA组)26例和正常精子(normozoospermia)组(N组)57例。采用免疫荧光染色和蛋白质印迹法检测USP7在人精子中的定位与表达变化,并进行相关性分析。结果 USP7定位于精子尾部中段和主段,与N组(1.63±0.76)相比,在A组(0.86±0.53)或OA组(0.62±0.43)精子中USP7蛋白的表达下降(P<0.01)。经相关分析,USP7蛋白水平与精子浓度(r=0.455 0,P=0.005 3)、前向运动精子百分率(r=0.431 2,P=0.008 7)和总活动率(r=0.443 8,P=0.006 7)呈正相关。结论 USP7表达下降与人精子活力和浓度降低有关,其可作为评估男性生育力的指标之一。

泛素特异性蛋白酶7在博莱霉素诱导的小鼠炎症及肺纤维化过程中的表达及作用

目的:观察和评价泛素特异性蛋白酶7(USP7)在博莱霉素诱导的小鼠炎症及肺纤维化过程中的作用。方法:正常野生型成年小鼠36只,随机分为空白组及博莱霉素组。博莱霉素组采用博莱霉素气管内滴注复制小鼠肺纤维化模型,空白组用同等方法注入同样体积的0.9%氯化钠注射液制备对照模型。造模后第7、14、21天处死小鼠,取小鼠肺组织进行肺系数测定、羟脯氨酸含量测定、HE染色、Masson染色、免疫组织化学染色,观察博莱霉素诱导的小鼠炎症及肺纤维化过程,肺组织中USP7表达水平的动态变化及其与肺胶原蛋白含量的关系。结果:在各时间点博莱霉素组肺系数显著高于空白组(P<0.01)。博莱霉素组羟脯氨酸含量在各时间点的差异均有统计学意义(P<0.01),在第14天和第21天均显著高于空白组(P<0.01)。肺组织病理切片HE染色、Masson染色结果表明博莱霉素气管内给药能诱导的小鼠炎症及肺纤维化过程。免疫组织化学观察半定量USP7结果显示,USP7弱表达于正常肺组织中。在各时间点,博莱霉素组USP7表达差异均有统计学意义(P<0.01),且均较空白组明显增强(P<0.05~P<0.01),并随着时间的延长,表达逐渐减弱(P<0.01)。结论:USP7在博莱霉素诱导的小鼠炎症及肺纤维化过程中呈现明显的动态变化,可能在肺纤维化的发生、发展各个环节中起着一定作用。

USP7-MDM2-p53信号轴对子宫内膜癌细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响

目的:探讨泛素特异性蛋白酶7(USP7)调节Mdm2 p53结合蛋白同源物(MDM2)-p53轴对子宫内膜癌细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响。方法:Western blot检测人子宫内膜癌组织、癌旁组织、人子宫内膜上皮细胞hEEC及人子宫内膜癌细胞系Ishikawa、HEC-1-A、KLE中USP7蛋白表达。将Ishikawa细胞分为NC组、P22077(USP7抑制剂)组、pcDNA组、pcDNA-MDM2组、P22077+pcDNA组、P22077+pcDNA-MDM2组,CCK-8法和克隆形成实验检测Ishikawa细胞增殖;流式细胞术检测Ishikawa细胞凋亡与细胞周期变化;Western blot检测Ishikawa细胞中USP7、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、周期素依赖性激酶2(CDK2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、MDM2、p53蛋白表达。以RG7388(MDM2抑制剂)或PFT-α(p53抑制剂)与20μmol/L P22077共处理Ishikawa细胞48 h以验证USP7-MDM2-p53信号轴上下游关系。结果:USP7蛋白在子宫内膜癌组织和细胞中高表达,且Ishikawa细胞中USP7蛋白表达量最高,因此,选择Ishikawa细胞为研究对象。与NC组比较,P22077组Ishikawa细胞OD 450值、克隆形成率、S期和G 2/M期细胞数、USP7、CyclinD1、CDK2、MDM2蛋白表达降低,细胞凋亡率、G_(0)/G_(1)期细胞数、p53、Bax蛋白表达升高(P<0.05);与NC组、pcDNA组比较,pcDNA-MDM2组Ishikawa细胞OD 450值、克隆形成率、S期和G 2/M期细胞数、USP7、CyclinD1、CDK2、MDM2蛋白表达升高,细胞凋亡率、G_(0)/G_(1)期细胞数、p53、Bax蛋白表达降低(P<0.05);与P22077组、P22077+pcDNA组比较,P22077+pcDNA-MDM2组Ishikawa细胞OD 450值、克隆形成率、S期和G 2/M期细胞数、USP7、CyclinD1、CDK2、MDM2蛋白表达升高,细胞凋亡率、G_(0)/G_(1)期细胞数、p53、Bax蛋白表达降低(P<0.05)。p53为USP7-MDM2通路下游分子。结论:抑制USP7表达可能通过下调MDM2来激活p53进而抑制Ishikawa细胞增殖、促进细胞凋亡及周期停滞。

泛素-特异性蛋白酶7在高氧暴露早产鼠肺组织中的表达及意义

目的探讨泛素-特异性蛋白酶7(USP7)及Wnt信号通路中关键因子在高氧暴露早产大鼠肺组织中的表达及意义。方法将180只新生早产Wistar大鼠随机均分成空气对照组、空气干预组、高氧对照组及高氧干预组,每组45只。干预组早产鼠每天腹腔注射USP7特异性抑制剂P5091(5 mg/kg),高氧组建立早产大鼠高氧暴露肺损伤动物模型。分别于实验过程第3、5、9天时处死动物收集早产鼠肺组织标本,通过苏木精-伊红染色病理切片观察肺组织病理变化;采用RT-PCR及Western blot技术检测肺组织中USP7及Wnt信号通路关键因子β-catenin、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的mRNA及其蛋白表达水平。结果空气各组肺组织形态结构基本正常;高氧对照组3 d、5 d时可见肺泡明显压缩、结构紊乱,有明显炎症细胞、红细胞渗出及间质水肿改变;高氧对照组9 d时可见肺泡结构紊乱、肺泡间隔明显增厚;高氧干预组肺组织结构紊乱、炎症细胞浸润、红细胞渗出情况均较相应时间点的高氧对照组有所减轻;各时间点高氧各组放射状肺泡计数(RAC)均明显低于相应空气各组(P<0.05),且高氧干预组RAC较高氧对照组明显升高(P<0.05)。实验第3、5、9天时,高氧各组USP7、β-catenin mRNA及USP7、β-catenin、α-SMA蛋白表达均较相应空气各组增加(P<0.05);高氧干预组β-catenin mRNA及β-catenin、α-SMA蛋白表达较高氧对照组减少(P<0.05);高氧干预组USP7 mRNA及蛋白表达与高氧对照组相比差异无统计学意义(P>0.05),空气干预组USP7、β-catenin mRNA及USP7、β-catenin、α-SMA蛋白表达与空气对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论高氧暴露可激活Wnt/β-catenin信号通路;USP7可能通过Wnt/β-catenin信号通路参与高氧肺损伤;USP7特异性抑制剂P5091可能通过加强β-catenin的泛素化来加速其降解,减少肺上皮-间质转化,从而对高氧肺损伤具有一定的保护作用。

翘嘴鳜USP7基因cDNA的克隆及饥饿对其表达影响分析

为探讨饥饿对翘嘴鳜肝脏USP7基因表达的影响,本文应用实时荧光定量PCR、3′-RACE和5′-RACE技术,从翘嘴鳜肝脏组织中克隆得到了USP7基因的全长cDNA序列(登录号:MF000683)为4 319bp。生物信息学分析表明:翘嘴鳜USP7基因编码区全长为3 336bp,共编码个1 111氨基酸,其中180个带负电荷,137个带正电荷。翘嘴鳜USP7在饥饿中的表达分析表明,肝脏USP7基因在不同饥饿时间的相对表达量呈现一个峰值变化,在饥饿4d时出现显著的上升且到达最高值;在饥饿7d时又逐渐下降,最终达到初始水平(P<0.05)。本文结果发现饥饿后肝脏中USP7表达量的变化可能与翘嘴鳜的生长和健康状况密切相关,为鳜鱼的生产养殖提供一定的理论依据。

siRNA干扰USP7表达对喉癌细胞生物学特性的影响

目的通过小干扰RNAs(siRNA)干扰泛素特异性蛋白酶7(USP7)在喉癌细胞中的表达,来探讨USP7对喉癌细胞生物学特性的影响。方法自行设计并使用高效siRNA在喉癌HEP2细胞株特异性干扰USP7表达,然后利用CCK-8法、Transwell小室迁移实验和流式细胞术观察USP7干扰后对喉癌细胞增殖、迁移能力和凋亡的影响。结果自行设计的siRNA可高效抑制喉癌HEP2细胞USP7mRNA及蛋白表达,显著抑制喉癌细胞的增殖、迁移能力,促进喉癌细胞的凋亡。结论 siRNAUSP7可以显著抑制喉癌细胞增殖和迁移能力,并促进凋亡,提示USP7可能是晚期喉癌治疗的一个重要靶标。

泛素特异性蛋白酶7基因的泛癌分析及其在瘢痕溃疡癌变中的表达

目的探讨泛素特异性蛋白酶7(USP7)在瘢痕溃疡癌变过程中的生物学作用及其临床意义。方法采用回顾性观察性研究结合生物信息学分析方法。从癌症基因组图谱(TCGA)数据库和基因表达综合数据库中获取USP7在肿瘤和/或其对应癌旁正常组织中的RNA表达谱数据,并将RNA测序数据进行log2转化。通过多维度癌症基因集cBioPortal数据库分析USP7基因变异情况,并分析其突变位点。通过TIMER 2.0数据库中“差异表达”模块获得TCGA数据库中肿瘤、癌旁正常组织USP7 mRNA表达情况。使用基因表达谱交互分析2(GEPIA2)数据库分析皮肤黑色素瘤(SKCM)、宫颈鳞状细胞癌(CESC)、肺鳞状细胞癌(LUSC)和头颈鳞状细胞癌(HNSC)中高表达USP7患者与低表达USP7患者的生存率并绘制Kaplan-Meier生存曲线。利用Sangerbox数据库分析USP7在泛癌中的表达与微卫星不稳定性(MSI)或肿瘤突变负担(TMB)的相关性。通过GEPIA2数据库中“相关性分析”模块,评估USP7在泛癌中的表达与5种DNA错配修复基因(MLH1、MSH2、MSH6、PMS2和EPCAM)表达水平和3种必需DNA甲基转移酶(DNMT)——DNMT1、DNMT3A、DNMT3B表达水平的相关性。通过TIMER 2.0数据库中“免疫-基因”模块分析USP7在CESC、HNSC、LUSC和SKCM中表达及其与免疫细胞(B细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞、中性粒细胞、巨噬细胞和树突状细胞)浸润的相关性。利用GEPIA2数据库的“相似基因检测”模块获得与USP7表达模式相似且排名前100的蛋白集。将前述蛋白集与利用STRING数据库获得的与USP7有直接物理结合作用且排名前50的蛋白集进行交集分析。通过DAVID数据库对上述2个蛋白集进行京都基因与基因组百科全书(KEGG)和基因本体论(GO)富集分析。收集2018年10月—2022年10月武汉大学附属同仁医院暨武汉市第三医院病理科有相应临床病理特征的正常皮肤、增生性瘢痕、瘢痕溃疡、瘢痕癌的术后标本,采用免疫组织化学法检测组织中USP7表达情况,样本数为6。对数据行Log-rank检验、单因素方差分析及Bonferroni检验。结果在泛癌中,USP7的主要基因变异类型为突变和扩增,变异频率(>6%)居前3位的肿瘤依次为膀胱尿路上皮癌、SKCM和子宫内膜癌。USP7基因在泛癌中的主要突变为错义突变。在突变频率最高的SKCM中,主要突变类型是USP7_ICP0_bdg结构域的错义突变。USP7 mRNA在乳腺浸润癌、胆管癌、结肠癌、食管癌、HNSC、肾嫌色细胞癌、肝细胞肝癌、肺腺癌、LUSC、前列腺癌和胃癌肿瘤组织中的表达均明显高于其对应的癌旁正常组织(P<0.05),在多形成性胶质细胞瘤、肾透明细胞癌、肾乳头状细胞癌和甲状腺癌中的表达均明显低于其对应的癌旁正常组织(P<0.05);此外,USP7 mRNA在SKCM转移组织中的表达远高于其原发肿瘤组织(P<0.05)。生存曲线显示,在CESC、HNSC、LUSC和SKCM中,高表达USP7患者与低表达USP7患者的存活率比较,差异均无统计学意义(Log-rank P>0.05,风险比分别为1.00、0.99、1.00、1.30)。USP7在结肠癌、结直肠癌、胸腺癌、甲状腺癌中的表达均与TMB呈显著负相关(Pearson相关系数分别为−0.26、−0.19、−0.19和−0.11,P<0.05);USP7在神经胶质瘤、CESC、肺腺癌、混合肾癌、LUSC中的表达均与MSI呈显著正相关(Pearson相关系数分别为0.22、0.14、0.15、0.08和0.14,P<0.05),在结肠癌、结直肠癌、乳腺浸润癌、前列腺癌、HNSC、甲状腺癌和弥漫性大B细胞淋巴瘤中的表达均与MSI呈显著负相关(Pearson相关系数分别为−0.31、−0.27、−0.13、−0.19、−0.16、−0.18和−0.53,P<0.05)。USP7在CESC中的表达与MSH2和MSH6的表达均呈明显正相关(Spearman相关系数分别为0.51和0.44,P<0.05),在HNSC中的表达与EPCAM、MLH1、MSH2、MSH6、PMS2的表达均呈明显正相关(Spearman相关系数分别为0.39、0.14、0.49、0.54和0.41,P<0.05),在LUSC中的表达与EPCAM、MSH2、MSH6和PMS2的表达均呈明显正相关(Spearman相关系数分别为0.20、0.36、0.40和0.34,P<0.05),在SKCM中的表达与EPCAM、MLH1、MSH2、MSH6和PMS2的表达均呈明显正相关(Spearman相关系数分别为0.11、0.33、0.42、0.55和0.34,P<0.05);USP7在CESC、HNSC、LUSC和SKCM中的表达与DNMT1、DNMT3A和DNMT3B的表达均呈显著正相关(Spearman相关系数分别为0.42、0.34和0.22,0.45、0.52和0.22,0.36、0.36和0.22,0.38、0.46和0.21,P<0.05)。USP7在CESC、HNSC、LUSC和SKCM中的表达仅与CD4+T细胞浸润呈显著正相关(Partial相关系数分别为0.14、0.22、0.13、0.16,P<0.05)。与USP7表达模式相似且排名前100的蛋白集中,排名前5的蛋白依次是C16orf72、BCLAF1、UBN、GSPT1、ERI2(Spearman相关系数分别为0.83、0.74、0.73、0.73和0.72,P值均<0.05)。与USP7有直接物理结合作用且排名前50的蛋白集与前述蛋白集的交集仅有1个蛋白,即为甲状腺激素受体相互作用因子12。KEGG富集分析显示,USP7相关基因涉及细胞周期、剪接体、细胞衰老和p53信号通路等。GO富集分析显示,USP7相关基因涉及转录调控、蛋白质泛素化、DNA修复和细胞质模式识别受体信号通路等。临床样本分析显示,USP7在增生性瘢痕(0.35±0.05)、瘢痕溃疡(0.43±0.04)和瘢痕癌(0.61±0.03)中的表达均明显高于正常皮肤(0.18±0.04),P<0.05。结论USP7可能为临床瘢痕溃疡癌变恶化的生物标志物。

USP7和DNMT1在乙肝相关性肝癌中的表达及意义

目的 :研究泛素特异性蛋白酶7(ubiquitin-specific proteinase, USP7)、DNA甲基化转移酶1(DNA methylation transferase 1, DNMT1)在慢性乙型病毒性肝炎(以下简称乙肝)相关性肝癌中的表达及临床意义。方法 :收集乙肝患者17例、乙肝肝硬化患者18例、乙肝相关性肝癌患者30例和健康体检者19例血清,采用ELISA法检测USP7、DNMT1、甲胎蛋白(alpha fetoprotein, AFP)的表达情况,并分析其临床意义。结果:肝癌患者血清AFP、USP7、DNMT1水平较健康体检者、乙肝及肝硬化患者高(P<0.05)。肝癌患者血清中USP7与肿瘤分期、Child-Pugh分级呈正相关(P<0.05),DNMT1与肿瘤分期、肿瘤个数呈正相关(P<0.05)。AFP、USP7、DNMT1均为乙肝相关性肝癌的影响因素(均P<0.05)。血清AFP、USP7、DNMT1水平均在肝细胞癌中有诊断效能(均P<0.05),且联合检测诊断效能高于单一检测。结论 :肝癌患者血清AFP、USP7、DNMT1水平较高,USP7、DNMT1与临床病理特征相关。三项指标联合测定能提高鉴别乙肝相关性肝癌的诊断效能。

去泛素化酶USP7在肿瘤中的研究进展

泛素特异性蛋白酶7(USP7)是泛素特异性修饰酶家族中的成员之一,通过与癌蛋白、抑癌蛋白甚至致瘤病毒的相关蛋白相互作用,在肿瘤的发生和进展中发挥着一定作用。研究发现USP7在肺癌、宫颈癌、鼻咽癌、骨肉瘤和前列腺癌等多种癌组织中有表达,因肿瘤差异其预后意义不同。因此,USP7可作为部分肿瘤诊断和预后的新型治疗靶点。本文主要关于USP7在肿瘤发病中的作用做一综述。

USP7在喉癌组织中的表达及其临床意义

目的探讨泛素特异性蛋白酶7(ubiquitin specific peptidase 7,USP7)在喉癌组织中的表达与其临床病理特征间的联系。方法收集经病理科确诊的喉癌组织标本73例,同时选取癌旁组织52例作为对照。采用免疫组织化学法检测USP7在喉癌和癌旁组织中的表达情况。结果 73例喉癌组织中,61例(83.5%)USP7呈阳性表达,较癌旁组织阳性表达(19/52,36.5%)显著升高(χ2=29.1446,P<0.05)。病理分型中,肿瘤分化程度越低,USP7阳性表达率越高。结论喉癌组织中USP7的高阳性表达与肿瘤分化程度相关,对晚期USP7阳性表达喉癌患者治疗提供新思路。

USP7和Ki-67在大肠癌组织中的表达及其临床意义

目的:观察USP7和Ki-67在人大肠癌组织中的表达,以及其相关病理特征的关联性和临床意义。方法:选取确诊为大肠癌组织的手术标本90例,同时随机选取20例癌旁正常组织作为对照组。采用免疫组织化学方法检测USP7和Ki-67在大肠癌组织和癌旁正常组织中的表达情况。结果:USP7和Ki-67在大肠癌组织中呈高表达,且两者在大肠癌组织中的表达呈正相关,USP7和Ki-67的高表达均与肿瘤恶性程度、淋巴结转移具有相关性。结论:USP7和Ki-67的高表达可能与大肠癌的发生、发展有关,并且在某种程度上可能存在协同作用。

USP7调节EGR1的表达对喉癌细胞生物学行为的影响

目的本研究主要通过siRNA敲低喉癌细胞USP7表达后,检测经转录组测序筛选并与喉癌增殖、迁移相关基因早期生长反应基因1(EGR 1)的表达,以了解其在喉癌发病机制中的作用。方法设计特异性siRNA序列,包装慢病毒并转染喉癌HEp-2细胞特异性敲低泛素特异性蛋白酶7(USP7)表达,再通过RT-PCR和Western blot方法从基因和蛋白质水平检测EGR1的表达。结果①siRNA敲低喉癌细胞中USP7后,敲低组USP7 mRNA表达显著降低,同时敲低组USP7蛋白也显著下降;②RT-PCR检测到敲低后的喉癌细胞EGR1 mRNA表达上升,Western blot检测到EGR1蛋白质表达也呈上升;③CCK8实验检测到敲低后的喉癌细胞较阴性对照组和空白组细胞增殖能力明显下降;Transwell实验检测敲低组喉癌细胞迁移能力较阴性对照组和空白组明显下降。结论在USP7敲低后,EGR1在基因和蛋白水平上升,表明在喉癌的发生过程中USP7可能对EGR1的表达有抑制作用,因此,USP7可能通过抑制EGR1表达在喉癌发生发展过程中有一定作用,为喉癌的临床研究提供实验依据。

USP7抑制剂的研究进展

泛素特异性蛋白酶7(Ubiquitin-specific protease 7,USP7)是去泛素化酶(Deubiquitinases,DUBs)家族中的一员。约50%的人类癌症中抑癌基因TP53发生了突变,细胞内p53不正常表达,导致细胞凋亡等正常生命活动紊乱。USP7与p53以及HDM2有着密切的联系,USP7是p53的上游蛋白,所以调控USP7能达到调控p53的目的。并且许多癌症也与USP7的不正常表达有关。

泛素特异性蛋白酶7研究进展

泛素-蛋白酶途径可调节多种细胞过程,近年来以该途径为导向的研究逐渐增多。特异性蛋白酶7作为其调节泛素化动力学的关键成分——去泛素化酶家族成员之一,参与病毒复制、肿瘤、神经系统病变、炎症反应等多种疾病的相关蛋白调控。在过去十多年进行了一系列的相关疾病及其抑制剂研究,一些抑制剂已经初步显现出其对肿瘤、炎症等疾病的治疗意义。本文就特异性蛋白酶7的结构、功能及其与疾病的关联和其抑制剂进行综述。

泛素特异性蛋白酶7对乙肝细胞中凋亡因子的调控作用研究

目的研究泛素特异性蛋白酶7(USP7)在肝细胞中对凋亡因子的调控作用。方法将HepG2.2.15细胞随机分为3组:对照组,转染组和阴性对照组。对照组为常规培养的细胞;转染组转染si-USP7,阴性对照组使用10%siRNA-mate转染试剂进行处理,各组均处理72 h。实时荧光定量聚合酶链反应(Q-PCR)检测USP7、P53、B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白(Bax)的mRNA表达水平;蛋白质印迹法检测USP7、P53蛋白的表达情况;酶联免疫法检测谷丙转氨酶(GPT)、谷草转氨酶(GOT)、乙型肝炎病毒(HBV)DNA、乙型肝炎表面抗原(HBsAg)和乙型肝炎核心e抗原(HBeAg)的表达量。结果对照组、转染组、阴性对照组USP7 mRNA表达水平分别为1.74±0.01,1.00±0.06和1.73±0.01;P53 mRNA表达水平分别为1.94±0.01,0.81±0.03和1.92±0.01;Bax mRNA表达水平分别为6.28±0.04,1.81±0.16,6.26±0.04;蛋白结果的趋势与基因一致。以上3组的HBV-DNA表达量分别为(1032.68±2.96),(541.92±6.78)和(1035.44±1.86)pg·mL^(-1);HBsAg表达量分别为(905.19±1.41),(246.23±7.04)和(902.56±4.74)U·mL^(-1);HBeAg表达量分别为(45.28±0.06),(10.09±0.68)和(45.82±0.36)U·mL^(-1)。以上指标,转染组与对照组比,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论USP7的下调能减少P53的表达,使Bax表达下降,并降低乙型肝炎病毒的复制和细胞凋亡。

泛素特异性蛋白酶7对HepG2.2.15细胞的炎症相关因子表达的影响

目的在预测miR-217对泛素特异性蛋白酶7(USP7)靶向作用的基础上探讨USP7在HepG2.2.15细胞中的促炎机制。方法将HepG2.2.15细胞分为对照组、转染组(siRNA-USP7)和阴性对照组(siRNA-NC)。检测细胞上清液中谷丙转氨酶(GPT)及谷草转氨酶(GOT)的含量;用酶联免疫吸附(ELISA)法测定细胞上清液中乙型病毒性肝炎表面抗原(HBsAg)和乙型病毒性肝炎e抗原(HBeAg)的含量;用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-qPCR)测定USP7、核因子κB p65(NF-κB p65)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA含量;用蛋白质印迹(Western blot)法和ELISA法检测各指标蛋白含量;用免疫共沉淀法验证USP7与NF-κB p65的相互作用。结果对照组、转染组和阴性对照组的GPT含量分别为(13.45±0.07),(6.85±0.21)和(13.75±0.35)U·L^(-1);GOT含量分别为(15.10±0.57),(7.55±0.07)和(15.70±0.42)U·L^(-1);HBsAg含量分别为(3766.00±62.39),(2093.50±51.47)和(3727.00±55.73)pg·mL^(-1);HBeAg含量分别为(49.64±0.65),(27.49±0.60)和(49.59±1.13)pg·mL^(-1);USP7蛋白表达量分别为0.97±0.03,0.49±0.01和0.96±0.04;NF-κB p65蛋白表达量分别为0.73±0.03,0.46±0.02和0.76±0.01;IL-6蛋白表达量分别为(83.00±4.24),(43.00±4.24)和(82.50±3.54)pg·mL^(-1);TNF-α蛋白表达量分别为(95.00±2.83),(57.00±1.41)和(92.50±4.95)pg·mL^(-1),转染组与对照组相比,差异均有统计学意义(均P<0.05)。免疫共沉淀显示USP7与NF-κB p65能够有效形成复合物。结论在乙型病毒性肝炎中,USP7呈现高表达,抑制USP7可减轻乙型病毒性肝炎细胞中NF-κB p65、IL-6以及TNF-α的表达,缓解肝细胞炎性损伤。

慢性肾脏病患者肾组织USP7和自噬相关蛋白的表达及其与肾间质纤维化的关系

目的探讨泛素特异性蛋白酶7(USP7)和自噬相关蛋白在慢性肾脏病(CKD)患者中的表达,及与肾间质纤维化(RIF)的关系。方法回顾性选取2021年6月至2022年1月陕西省人民医院肾病血透中心收治并行肾穿刺活检术的CKD患者55例,采用免疫组化法检测患者肾穿刺活检组织USP7及自噬相关蛋白[P62、微管相关蛋白1轻链3B(LC3B)]、RIF标志蛋白[α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤连蛋白(FN)]的表达水平。比较不同程度RIF肾组织USP7表达的差异,分析其与实验室相关指标、α-SMA、FN及P62、LC3B的相关性。结果依无纤维化组、轻度纤维化组、中重度纤维化组之序,CKD患者肾组织USP7表达水平递升(P<0.01),自噬相关蛋白P62表达水平递升、LC3B递降(P<0.01)。在临床指标方面,USP7表达水平与血尿素氮、肌酐、胱抑素C(CysC)、尿酸和中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)呈显著正相关(P<0.01),与肾小球滤过率呈显著负相关(P<0.05);在RIF标志蛋白及自噬相关蛋白方面,USP7表达水平与α-SMA、FN、P62呈显著正相关(r=0.928,P<0.01;r=0.871,P<0.01;r=0.770,P<0.01),与LC3B呈显著负相关(r=-0.668,P<0.01)。结论USP7与细胞自噬可能是CKD患者RIF发生、发展的重要因素,USP7可能通过抑制细胞自噬促进RIF的发生。

重构型人caspase-7基因对肿瘤细胞的促凋亡作用

目的观察重构型caspase-7的表达对肿瘤细胞的凋亡诱导作用。方法用反转录PCR方法获取野生型人caspase-7基因,用重组PCR构建了两种重构型caspase-7基因,即大、小亚基序列次序颠倒的rev-ca2spase-7以及N-端带有绿脓杆菌外毒素转膜结构域部分肽段的融合蛋白(PEⅡ=rev-caspase-7)的基因。将两种重构型caspase-7基因克隆入表达载体pIRES2-EGFP,脂质体法转染肿瘤细胞,通过荧光显微镜观察、电镜观察、MTT检测等方法检测重组基因的表达及其对肿瘤细胞的促凋亡活性。结果 成功获得了caspase-7基因,构建了rev-caspase-7基因和rev-caspase-7与绿脓杆菌外毒素(PE)转膜肽段的融合蛋白(PEⅡ-rev-caspase-7)基因及其表达载体。将两种重构型caspase-7转染肿瘤细胞后,证实细胞发生凋亡。结论两种重构型caspase-7均可以有效地诱导肿瘤细胞发生凋亡。

USP7在前列腺癌发病机制中的研究

去势抵抗性前列腺癌(CRPC)的产生使前列腺癌传统的内分泌疗法受到挑战,越来越多的研究转向从分子水平寻找合适的靶点来抑制癌症的进展。泛素特异性蛋白酶7(USP7)是一种重要的去泛素化酶,以翻译后修饰的方式调控关键蛋白的半衰期或亚细胞定位。近期的研究结果表明,USP7在前列腺癌细胞中显示出明显的促癌效应,但机制复杂,本文对USP7在前列腺癌中的作用机制进行综述。