血管内皮生长因子A与小泛素相关修饰物特异性蛋白酶5在前列腺癌中的表达及临床意义

目的:探讨血管内皮生长因子A(VEGFA)与小泛素相关修饰物特异性蛋白酶5(SENP5)在前列腺癌中的表达情况及临床意义。方法:使用GEPIA数据库,对VEGFA、SENP5基因的相关性及与前列腺癌病人的生存期进行分析;采用qRT-PCR、Western blotting从转录、蛋白质翻译水平检测肿瘤细胞中VEGFA、SENP5的表达情况;收集前列腺癌病人组织标本和临床资料,采用免疫组织化学法检测前列腺癌组织中VEGFA、SENP5的蛋白表达,分析其表达情况与肿瘤病人临床病理参数间的关系;使用STRING网站进行VEGFA、SENP5蛋白质互作网络图构建。结果:VEGFA与前列腺癌病人总生存时间有关(P<0.05),SENP5与病人总生存时间、无病进展生存时间均相关(P<0.05);与正常细胞相比,VEGFA与SENP5在前列腺癌细胞中mRNA、蛋白质均高表达(P<0.05);VEGFA与SENP5蛋白在肿瘤病理组织中可见淡黄色或棕黄色染色,VEGFA主要于细胞质中表达,SENP5主要于细胞核中表达;VEGFA强阳性表达与临床分期、有无远处转移相关(P<0.05),SENP5强阳性表达与Gleason评分、有无远处转移相关(P<0.05);VEGFA与SENP5间显著相关(P<0.01);SENP5可能通过SUMO1-HSP90AA1轴与VEGFA相互作用。结论:VEGFA、SENP5在前列腺癌中高表达,两者显著相关,且与肿瘤临床病理参数有关,可能是前列腺癌病人治疗的潜在靶点。

泛素特异性蛋白酶20、低氧诱导因子1α在乳腺癌中的表达变化及意义

目的探讨乳腺癌中泛素特异性蛋白酶20(ubiquitin-specific proteases 20,USP20)、低氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-α)表达变化及意义。方法免疫组织化学及免疫荧光方法用于检测USP20与HIF-α阳性细胞的表达变化以及细胞定位,并分析它们之间的关系;shRNA-USP20慢病毒转染乳腺癌MDA-MB-231细胞构建乳腺癌MDA-MB-231 USP20过表达细胞系,siRNA-USP20构建乳腺癌MDA-MB-231USP20敲减细胞系,通过荧光定量PCR与Westem blot检测USP20基因及蛋白的过表达和敲减水平,并观察过表达以及敲减USP20前后HIF-α基因和蛋白的表达变化。结果USP20与HIF-α在乳腺癌组织中的阳性表达率分别为69.62%(55/79)和46.83%(37/79),而在邻近相对正常组织中的表达均为阴性,与邻近相对正常组织相比,乳腺癌组织中USP20与HIF-α阳性表达均显著增加,差异均有统计学意义(P<0.01),USP20与HIF-α阳性表达均主要在乳腺癌组织细胞质中,少量在细胞核;且乳腺组织中USP20表达与HIF-1α表达呈正相关(P<0.01);过表达USP20后HIF-α的mRNA的表达不变,蛋白表达显著增加(P<0.01)。敲减USP20后HIF-αmRNA表达轻微降低,但差异均无统计学意义(P>0.05),而蛋白表达水平显著降低(P<0.01)。结论乳腺癌中USP20和HIF-α表达均显著增加,且呈正相关关系,过表达USP20后HIF-α蛋白表达显著增加,敲减USP20后HIF-α蛋白表达显著降低,USP20可能通过影响HIF-α的表达进而促进乳腺癌发生发展。

泛素特异性蛋白酶42调节人脂肪干细胞成骨向分化

目的:探索泛素特异性蛋白酶42(ubiquitin-specific protease 42,USP42)在人脂肪干细胞(human adipose-derived stem cells,hASCs)体内外成骨向分化中的作用。方法:用慢病毒转染hASCs,构建敲低和过表达USP42的稳定转染细胞系,通过碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色及活性定量、茜素红S矿化结节染色及定量,检测实验组(敲低组和过表达组)及对照组在成骨诱导下hASCs成骨向分化能力的差异,通过定量逆转录聚合酶链反应(quantitative reverse transcription polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测实验组及对照组成骨相关基因的表达水平,通过蛋白免疫印迹实验检测实验组及对照组成骨相关蛋白的表达水平,通过裸鼠异位成骨实验评价USP42在hASCs体内成骨向分化中的作用。结果:敲低组USP42的mRNA和蛋白表达显著低于对照组,过表达组显著高于对照组。成骨诱导7 d后,敲低组的ALP活性显著高于对照组,过表达组显著低于对照组;成骨诱导14 d后,敲低组茜素红S染色显著深于对照组,过表达组显著浅于对照组。qRT-PCR结果显示,成骨诱导14 d时,敲低组ALP、成骨细胞特异性转录因子(osterix,OSX)和Ⅰ型胶原(collagen typeⅠ,COLⅠ)的mRNA表达水平显著高于对照组,过表达组显著低于对照组。蛋白免疫印迹实验结果显示,成骨诱导14 d时敲低组runt相关转录因子2(runt-related transcription factor 2,RUNX2)、OSX和COLⅠ蛋白表达水平显著高于对照组,过表达组显著低于对照组。裸鼠皮下移植物苏木精-伊红染色结果显示,敲低组类骨组织百分比较对照组显著增高。结论:敲低USP42显著促进hASCs的体内外成骨向分化,过表达USP42显著抑制hASCs的体内成骨向分化,USP42可作为骨组织工程学潜在治疗靶点。

泛素特异性蛋白酶在胃癌中的作用研究进展

泛素特异性蛋白酶(USPs)是去泛素化酶家族诸多亚族之一,具有多种功能结构域和生物学功能,可通过泛素与蛋白底物解离来调控泛素化,从而调控细胞的凋亡、增殖、转移以及基因转录、间充质转化和免疫反应等。泛素是一种标记将要分解的蛋白质并存在于大多数真核细胞的小蛋白,其通过泛素化复合链式反应,使蛋白质水解。泛素化复合式链式反应存在不同位点,USPs可以作用于其位点,并影响生物体内的泛素化,对蛋白质的降解起到不同作用。USPs在多种肿瘤中表达,并通过一系列机制参与肿瘤发生发展,可作为癌症治疗靶点。本文就USPs在胃癌中的作用研究进展进行综述,以期为以USPs为靶点的胃癌治疗新药的研发提供资料。

2型糖尿病患者血清E盒锌指蛋白1和泛素化特异性蛋白酶22表达水平与糖脂代谢及胰岛素抵抗的关系

目的检测2型糖尿病患者血清E盒锌指蛋白1(ZEB1)和泛素化特异性蛋白酶22(USP22)基因的表达水平,分析两者与糖脂代谢及胰岛素抵抗的关系。方法选择2020年6月至2023年6月苏州大学附属第一医院诊治的120例2型糖尿病患者为研究对象(糖尿病组),同时选择同期在该院进行体检的120例健康者作为对照组。采用qRT-PCR法检测血清ZEB1 mRNA和USP22 mRNA表达水平;Pearson法分析2型糖尿病患者血清ZEB1 mRNA和USP22 mRNA表达水平的相关性,及两者与体重指数(BMI)、三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、空腹血糖(FPG)、空腹胰岛素(FIns)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、胰岛素敏感性指数(ISI)、胰岛β细胞功能指数(HOMA-β)相关性;多元线性回归分析2型糖尿病患者血清ZEB1 mRNA和USP22 mRNA表达水平的影响因素。结果糖尿病组患者的BMI、TG、TC、FPG、FIns、HOMA-IR、ZEB1 mRNA、USP22 mRNA水平明显高于对照组,ISI、HOMA-β明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。经Pearson相关分析显示,2型糖尿病患者血清ZEB1 mRNA和USP22 mRNA表达水平正相关(r=0.425,P<0.001);血清ZEB1 mRNA和USP22 mRNA表达水平均与FPG、FIns、HOMA-IR呈正相关(P<0.05),均与ISI、HOMA-β呈负相关(P<0.05)。多元线性回归分析显示,FIns升高、ISI降低是血清ZEB1 mRNA表达水平的影响因素(P<0.05);FPG升高是USP22 mRNA表达水平的影响因素(P<0.05)。结论2型糖尿病患者血清中ZEB1 mRAN和USP22 mRAN表达具有正相关关系,且两者与部分糖脂代谢和胰岛素抵抗指标具有相关性。

部分泛素特异性蛋白酶生物学功能的研究进展

泛素特异性蛋白酶(ubiquitin-specific proteases,USPs)家族是去泛素化酶家族中成员最多的一种,主要存在于骨骼肌、心脏、肝脏、脑、胰腺等组织中,且在不同物种间有表达差异性。目前的研究表明,虽然USPs特异性选择水解的泛素链的机制还不清楚,但USPs在机体生命过程中有极大作用,USPs在调控肿瘤发生及转移、免疫调节、炎症反应、能量代谢、病毒感染等方面具有重要临床意义。本文综述了近年来部分USPs生物学功能的研究进展,期望能够对相关疾病的诊断及治疗提供新的思路。

抑制泛素特异性蛋白酶7改善血管紧张素Ⅱ诱导的心肌细胞肥大

目的探究泛素特异性蛋白酶7(USP7)抑制剂FT671在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的H9c2细胞肥大中的作用和潜在机制。方法将H9c2细胞随机分为四组:对照组、FT671组、AngⅡ组、FT671+AngⅡ组。利用α-actinin细胞免疫荧光染色检测心肌细胞表面积;Western blot检测心房钠尿肽(ANP)、脑钠肽(BNP)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、B细胞淋巴瘤-2相关X蛋白(Bax)、白细胞介素-6(IL-6)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)以及NADPH氧化酶4(Nox4)的蛋白表达水平;RT-PCR检测ANP、BNP、β-肌球蛋白重链(β-MHC)、IL-6、MCP-1、TNF-α的mRNA表达;TUNEL染色检测细胞凋亡情况;细胞计数试剂8(CCK8)实验检测各组细胞活力;活性氧(ROS)染色检测细胞内氧化损伤水平。结果与对照组相比,AngⅡ组USP7蛋白表达明显增加,而使用FT671后,USP7表达明显被抑制。与AngⅡ组相比,FT671+AngⅡ组心肌细胞面积减小;ANP、BNP、Bax的蛋白表达减少,ANP、BNP、β-MHC、Bax、IL-6、MCP-1以及TNF-α的mRNA表达减少;Bcl-2的蛋白和mRNA表达均增加。与AngⅡ组相比,FT671+AngⅡ组TUNEL阳性细胞明显减少,心肌细胞活力增强,ROS生成减少,Nox4、NLRP3蛋白表达减少,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论FT671通过抑制Nox4/ROS/NLRP3炎症通路减轻AngⅡ诱导的心肌细胞中的氧化应激和炎症反应,从而减轻心肌细胞肥大。

分析泛素特异性蛋白酶5在不同肿瘤中的致癌作用

目的分析泛素特异性蛋白酶5(USP5)在不同肿瘤中的致癌作用,为临床治疗提供参考。方法利用癌症基因组图谱(TCGA)、基因型组织表达(GTEx)、基因表达谱交互式分析2(GEPIA2)分析USP5 mRNA在不同肿瘤中的表达情况,USP5与不同癌症患者病理分期的相关性。利用GEPIA2数据库分析USP5表达与不同癌症患者预后的相关性。利用cBioPortal数据库分析USP5基因变异情况。利用UCLCAN数据库分析USP5磷酸化水平。利用TIMER2数据库分析USP5表达与肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)免疫浸润的相关性。利用STRING、GEPIA2、注释、可视化及综合发现(DAVID)数据库构建USP5相关基因的富集图。结果USP5在多种肿瘤中的表达显著增高,而在急性髓性白血病(LAML)中表达显著降低;USP5蛋白在乳腺癌(BRCA)、结肠腺癌(COAD)、胶质母细胞瘤(GBM)、肺腺癌(LUAD)及胰腺癌(PAAD)中表达明显偏低;USP5蛋白在肾透明细胞癌(KIRC)、肺鳞癌(LUSC)及卵巢癌(OV)中表达明显偏高;USP5表达与BRCA、KIRC、肝细胞癌(LIHC)、LUAD、OV及PAAD的病理分期之间存在显著关系(均P<0.05)。USP5的高表达与LAML、LUAD、皮肤黑色素瘤(SKCM)及葡萄膜黑色素瘤(UVM)的总体生存率(OS)呈正相关(均P<0.05)。子宫内膜癌(UCEC)中USP5的改变频率最高,主要改变类型为突变;子宫癌肉瘤(UCS)中USP5改变频率次高,主要类型为“扩增”。进一步分析USP5的额外突变和位置,未获得主导性的遗传改变,遗传改变的位置较少。USP5在COAD、GBM等肿瘤中显著的去磷酸化。宫颈鳞状细胞癌(CESC)、头颈部鳞状细胞癌(HNSC)、HPV阴性HNSC的CAFs与USP5水平呈正相关(均P<0.05)。“核部分”“核腔”“剪接体”“泛素介导的蛋白水解”可能参与USP5在肿瘤发生中的作用。结论USP5表达水平与生存预后、基因突变、免疫浸润及与USP5相关基因富集之间有相关性,有助于从多个方面了解USP5在肿瘤发生和发展中的作用,为今后肿瘤免疫治疗方面的研究提供理论依据。

脓毒症患者血清泛素特异性蛋白酶13和组织因子水平与预后的相关性分析

目的探究血清泛素特异性蛋白酶13(USP13)和组织因子(TF)水平与脓毒症患者预后的相关性。方法选取2020年5月至2022年5月期间我院重症监护病房收治的脓毒症患者96例为研究对象,依据患者入住重症监护病房28 d后的生存情况,将脓毒症患者分为存活组(77例)和死亡组(19例),收集患者一般资料,酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清USP13、TF水平,脓毒症患者血清USP13、TF水平与SOFA评分的相关性采用Pearson法分析,USP13、TF对脓毒症患者28 d预后的预测价值采用ROC曲线评估。结果死亡组APACHEⅡ评分、SOFA评分、PCT及TF水平均明显高于存活组,USP13水平明显低于存活组(P<0.05);SOFA评分越高,血清USP13水平越低,TF水平及28 d死亡率越高(P<0.05);血清USP13水平与SOFA评分呈显著负相关(r=-0.513,P<0.05),血清TF水平与SOFA评分呈显著正相关(r=0.487,P<0.05);ROC曲线显示,USP13对预后预测的AUC为0.751,截断值为52.00 pg/ml,其敏感度、特异度分别为94.74%、48.05%;TF对预后预测的AUC为0.770,截断值为70.12 pg/ml,其敏感度、特异度分别为73.68%、71.43%;二者联合对预后预测的AUC为0.849,明显高于二者单独预测(Z联合vs.USP13=2.015、P=0.044;Z联合vs.TF=2.262、P=0.024),其敏感度、特异度分别为73.16%、94.81%。结论USP13、TF在脓毒症不同预后患者血清中差异表达,二者均与脓毒症患者病情密切相关,USP13、TF联合预测脓毒症患者28 d死亡的效能较高。

泛素特异性蛋白酶4对透明细胞肾细胞癌细胞增殖能力的影响

目的探讨人类泛素特异性蛋白酶4(USP4)对透明细胞肾细胞癌(KIRC)细胞增殖能力的影响。方法从TCGA数据库及GEO数据库中下载KIRC患者的基因表达及临床信息资料,进行转化及整理;同时利用Ualcan、HPA数据库等在线工具对数据库中的KIRC患者进行进一步分析,研究USP4表达与KIRC患者临床病理特征(包括TNM分期和病理分级)以及生存预后的关系。在KIRC细胞株Caki-1、OSRC-2中转染USP4干扰和过表达质粒,通过平板克隆、细胞计数试剂盒8实验检测USP4对KIRC细胞增殖能力的影响。结果生物信息学分析显示,USP4在KIRC组织中的mRNA及蛋白表达水平均明显低于癌旁正常肾脏组织(均P<0.05)。KIRC组织中USP4 mRNA表达水平与患者肿瘤T分期、病理分期、组织学分级、总生存率、疾病特异性生存率、无进展生存率均有关(均P<0.05);与性别、年龄、N分期、M分期均无关(均P>0.05)。细胞实验结果显示,USP4蛋白在Caki-1、OSRC-2细胞中显著过表达,而过表达USP4会明显降低Caki-1、OSRC-2细胞增殖能力和克隆形成能力(均P<0.05);敲低USP4会明显提高Caki-1细胞克隆形成能力(均P<0.05)。结论USP4在KIRC组织中低表达,而过表达USP4可抑制KIRC细胞增殖能力。

泛素特异性蛋白酶2、微RNA-432-5p在食管癌组织中表达及临床意义

目的 探讨食管癌组织泛素特异性蛋白酶2(USP2)、微RNA-432-5p(miR-432-5p)的表达及临床意义。方法 选取2014年6月至2016年6月在辽宁省肿瘤医院接受外科手术治疗的93例食管癌病人作为研究对象,取手术切除的食管癌组织及其癌旁组织,采用免疫组织化学法检测USP2的表达情况,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测组织中USP2 mRNA、miR-432-5p表达水平,以食管癌组织中miR-432-5p表达水平平均数分为miR-432-5p低表达组和miR-432-5p高表达组,分析食管癌组织USP2、miR-432-5p表达与食管癌病人临床病理特征的关系;使用生物信息学Targetscan网站搜索USP2、miR-432-5p是否存在结合位点,进一步分析食管癌组织USP2、miR-432-5p的相关性;采用Kaplan-Meier法分析USP2、miR-432-5p表达与食管癌病人预后的关系。结果 食管癌组织中USP2 mRNA表达水平(2.53±0.71比1.05±0.36)、USP2阳性率(55.91%比6.45%)明显高于癌旁组织(P<0.05),miR-432-5p表达水平明显低于癌旁组织(0.31±0.12比1.03±0.34,P<0.05);食管癌组织浸润深度(肌层)、TNM分期(Ⅲ期)、低分化、有淋巴结转移的食管癌组织中USP2阳性表达率均高于浸润深度(外膜)、TNM分期(Ⅰ、Ⅱ期)、中高分化、无淋巴结转移的食管癌组织(P<0.05),食管癌组织浸润深度(肌层)、TNM分期(Ⅲ期)、低分化、有淋巴结转移的食管癌组织中miR-432-5p表达水平均低于浸润深度(外膜)、TNM分期(Ⅰ、Ⅱ期)、中高分化、无淋巴结转移的食管癌组织(P<0.05);生物信息学Targetscan网站显示,USP2、miR-432-5p存在结合位点,进一步经Spearman法分析结果显示食管癌组织中USP2、miR-432-5p表达呈负相关(P<0.05),Kaplan-Meier结果显示USP2阳性表达者、miR-432-5p低表达者5年总体生存率低于USP2阴性组者、miR-432-5p高表达者(分别为16.032、7.210,P<0.05)。结论 USP2、miR-432-5p异常表达可能与食管癌的发生及预后有关,检测USP2、miR-432-5p水平对食管癌的早期防治及预后评估具有重要意义,为食管癌的临床治疗提供理论依据。

泛素特异性蛋白酶25对KGN细胞胰岛素抵抗的影响

目的用适量胰岛素诱导卵巢颗粒细胞系KGN细胞构建胰岛素抵抗(IR)的模型,探究泛素特异性蛋白酶25(USP25)对KGN细胞IR状态的影响。方法培养KGN细胞,并加入不同浓度胰岛素处理,建立诱导IR细胞模型的适宜胰岛素浓度;敲低KGN细胞中USP25的表达,诱导IR细胞模型,得到4个处理组:未敲低USP25的非IR模型对照组(lv-con-NC)、敲低USP25的非IR模型组(lv-USP25-NC)、未敲低USP25的IR模型组(lv-con-IR)与敲低USP25的IR模型组(lv-USP25-IR)。用Western blot检测葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)和胰岛素相关通路p-AKT、AKT的表达水平;用葡萄糖氧化酶法检测细胞培养基上清中葡萄糖的含量,分析4组细胞葡萄糖摄取情况。结果与lv-con-NC组相比,lv-con-IR组葡萄糖摄取量显著下降(P<0.05),但lv-USP25-NC组葡萄糖摄取量无显著变化(P>0.05);与lv-con-IR组相比,lv-USP25-IR组的葡萄糖摄取量、GLUT4蛋白表达量和p-AKT蛋白表达量均显著升高(P<0.05)。结论敲低USP25可提高胰岛素信号通路中p-AKT以及GLUT4的表达,从而恢复KGN细胞葡萄糖摄取能力,改善KGN细胞的IR状态。

泛素特异性蛋白酶44在肝细胞癌中的表达及预后价值

【目的】探讨泛素特异性蛋白酶44(USP44)在肝细胞癌(HCC)中的表达及其临床病理学意义。【方法】运用免疫组化方法,检测USP44蛋白在161例肝细胞癌中的表达水平,统计分析其与临床病理参数之间的相关性及其预后价值。【结果】在161例HCC患者中,98例(60.9%)高表达USP44蛋白,Pearson's卡方检验结果显示USP44在HCC中的表达水平与临床分期(χ^(2)=14.44,P<0.001)、肿瘤单灶及多灶性(χ2=8.04,P=0.005)显著相关;Kaplan-Mei⁃er分析结果显示,低表达组患者平均生存时间59.6个月,显著低于高表达组患者的平均生存时间185.0个月(Log-rankχ^(2)=20.77,P<0.001);多因素Cox比例风险模型揭示USP44是HCC患者的独立预后危险因素。【结论】USP44蛋白高表达的HCC患者具有良好的生存期,检测其蛋白表达可作为筛选预后良好的肝细胞癌患者的一种手段。

乳腺癌组织中泛素特异性蛋白酶18/干扰素刺激基因15表达水平及其临床意义

目的探究泛素特异性蛋白酶18(USP18)、干扰素刺激基因15(ISG15)在乳腺癌组织中的表达水平及临床意义。方法采用Ualcan数据库分析USP18、ISG15在正常乳腺组织和乳腺癌组织中的表达情况及二者与乳腺癌预后的关系;选取渭南市中心医院2012年5月至2015年7月诊治的99例乳腺癌病人癌组织、癌旁正常组织进行研究。分别检测USP18、ISG15mRNA及其蛋白表达情况;分析乳腺癌组织USP18、ISG15表达水平与病人临床病理特征、预后的关系;Cox回归分析乳腺癌病人预后的影响因素。结果Ualcan数据库中乳腺癌组织USP18为18.40±4.17、ISG15 mRNA表达水平为168.56±43.95高于正常乳腺组织(10.00±3.14、30.76±8.23)(P<0.05);乳腺癌组织USP18、ISG15 mRNA表达水平高低与乳腺癌预后无明显相关性。乳腺癌组织USP18为1.67±0.53、ISG15 mRNA为1.86±0.61及蛋白阳性表达率均高于癌旁正常组织(1.03±0.34、0.99±0.33)(P<0.05);乳腺癌组织USP18、ISG15表达水平均与淋巴结转移、乳腺癌分子亚型、肿瘤分化程度、TNM分期相关(P<0.05);乳腺癌病人癌组织中USP18表达水平与ISG15呈正相关(P<0.05);USP18阳性组、ISG15阳性组乳腺癌病人术后60个月生存率均低于USP18阴性组、ISG15阴性组(P<0.05);淋巴结转移、TNM分期、USP18、ISG15均是影响乳腺癌病人不良预后的独立危险因素(P<0.05)。结论乳腺癌病人癌组织USP18、ISG15表达水平均较高,两者均与乳腺癌病人预后关系密切,检测乳腺癌组织USP18、ISG15水平有助于评估乳腺癌病人预后。

泛素特异性蛋白酶25在肿瘤中的研究进展

泛素特异性蛋白酶(USP)25作为USP家族成员,在各种疾病发生发展过程中发挥关键作用,包括代谢调节、免疫应答以及炎症反应等。近年人们对USP25结构和功能的研究越来越清晰,发现USP25能通过与信号分子相互作用调控多种细胞内外信号通路,USP25过度激活将导致细胞的异常增殖,并使其侵袭迁移能力增加,从而促进肿瘤的形成、发展。USP25在多种肿瘤细胞中均异常高表达,其在癌症中的作用机制也逐渐被揭示。USP25有望成为肿瘤治疗的一个潜在靶标,并具有重要的临床价值和广阔的应用前景。

泛素特异性蛋白酶对肿瘤细胞增殖侵袭转移的促进作用机制研究进展

细胞周期中的蛋白质降解受泛素连接酶和去泛素化酶(DUB)双向调控,泛素特异性蛋白酶(USP)是DUB中的主要成员,它可去除靶蛋白中的泛素,从而调节蛋白酶体的降解、定位和活性。USP在肿瘤细胞周期G1、S、G2和M期转化中发挥着重要作用,其可以通过各种信号通路来促进各时期之间的转换,从而促进肿瘤细胞的增殖、侵袭和转移。USP可以通过促进细胞周期蛋白/细胞周期蛋白依赖性激酶的上调或者抑制细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂的表达来促进肿瘤细胞增殖侵袭转移。

泛素特异性蛋白酶10在低氧性肺动脉高压中的表达及对USP10-AMPK信号通路的调控作用

目的研究泛素特异性蛋白酶10(UPS10)在低氧性肺动脉高压(PAH)中表达的意义及对USP10-单磷酸腺苷活化蛋白激酶(AMPK)信号通路的调控作用。方法40只大鼠随机分为4组,空载组与沉默组分别经气管滴入USP10-lentivirus、NC-lentivirus,对照组与模型组滴入等量生理盐水。3 d后除对照组外均建立低氧PAH模型。以PowerLab压力记录分析系统检测各组平均肺动脉压(MPAP)、右心室收缩压(RVSP),计算肺血管管壁相对厚度指数(RTI)、右心肥大指数(RVHI),对比各组MPAP、RVSP、RTI、RVHI。实时荧光定量PCR技术检测USP10、AMPK、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)、内皮细胞型一氧化氮合成酶(eNOS)mRNA,比较各组USP10、AMPK、PI3K、Akt、eNOS mRNA相对表达量。蛋白质印迹法(Weston blot)检测USP10、AMPK、PI3K、Akt、eNOS蛋白及AMPK、PI3K、Akt、eNOS蛋白磷酸化表达情况,对比USP10蛋白相对表达量及p-AMPK/AMPK、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-eNOS/eNOS蛋白比值。结果沉默组、模型组与空载组大鼠均出现精神状态变差,活动量减少,毛发暗淡,口唇、眼眶发紫,沉默组更为严重。肺动脉血管组织HE染色观察,沉默组、模型组与空载组管壁增厚、管腔变窄,伴有平滑肌和弹力纤维层增厚,沉默组变化更为明显。与对照组比较,其余3组的MPAP、RVSP、RTI、RVHI均增加(P<0.05),沉默组均大于模型组与空载组(P<0.05);与对照组比较,其余3组的USP10 mRNA、蛋白相对表达量及p-AMPK/AMPK、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-eNOS/eNOS蛋白比值均下降(P<0.05),沉默组均低于模型组与空载组(P<0.05)。结论USP10在低氧性PAH大鼠肺组织中表达低于正常肺组织,且其在肺组织中的表达下调刺激了PAH的发展,推测可能与抑制AMPK/PI3K/Akt/eNOS信号通路有关。

泛素特异性蛋白酶39对肺癌细胞的生物学影响

背景 肺癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一,也是死亡率最高的肿瘤。与大多数肿瘤相比,肺癌的治疗现状仍不容乐观,严重威胁着人类的健康。蛋白质泛素化是翻译后修饰之一,以不同的方式调节许多的细胞过程。泛素特异性蛋白酶39(ubiquitin specific protease 39,USP39)与多种肿瘤的发生发展密切相关,但其在肺癌中的作用机制仍有待探索。目的 构建USP39稳定过表达的人肺癌A549细胞系,观察USP39过表达对肺癌A549细胞的生物学影响。方法 采用慢病毒感染法构建USP39稳定过表达的A549 USP39细胞系,并用Western blot进行验证。利用克隆形成实验检测USP39过表达对A549细胞增殖的影响;利用划痕实验检测USP39过表达对A549细胞迁移能力的影响。结果 Western blot结果显示,A549USP39稳定过表达的A549细胞系构建成功。与对照组相比,克隆形成实验表明USP39稳定过表达可明显促进细胞增殖,划痕实验显示USP39过表达可显著增加A549细胞的迁移能力,且差异有统计学意义(P<0.05)。结论 本实验成功构建了USP39稳定过表达的A549细胞系,并初步验证USP39过表达与肺癌细胞的增殖和迁移相关。

泛素特异性蛋白酶USP25的研究进展

泛素特异性蛋白酶25(ubiquttin specific protease 25,USP25)是一种去泛素化蛋白酶,可以水解靶蛋白上的泛素,调节靶蛋白的稳定性和活性,维持蛋白质稳态。USP25在炎症反应、病毒感染、癌症、神经系统疾病、肠道系统疾病中发挥着重要的调控作用。近年来关于USP25的文献报道尚少,对USP25的深入研究仍有较大空间,本文将关于USP25的研究进展作一综述。

青虾泛素特异性蛋白酶9基因Usp9全长cDNA序列的克隆及表达分析

本研究首次克隆了青虾的Usp9(ubiquitin-specific protease 9)基因全长c DNA序列,并在青虾中使用荧光定量PCR技术首次检测了Usp9基因在不同组织和发育阶段中的表达变化。青虾Usp9基因c DNA全长1259 bp,包括162 bp的5’UTR,978 bp的开放阅读框以及116 bp的3’UTR。氨基酸序列比对分析显示,青虾Usp9蛋白与太平洋牡蛎(Crassostrea gigas)、凤仙花熊蜂(Bombus impatiens)及灰短尾负鼠(Monodelphis domestica)的蛋白相似度分别为99%、97%和95%。应用MEGA5.1软件对青虾与其他物种的Usp9氨基酸进行系统进化树分析,结果表明,青虾Usp9与同为甲壳纲的钩额型蚤状溞聚为一支,具有最近的亲缘关系。采用荧光定量PCR技术检测了Usp9基因的时空表达,水温28℃时,Usp9基因在青虾发育的后幼体发育期第5天PL5出现表达高峰。Usp9基因在6种成体组织中均有表达,表达水平依次为:脑>腹神经>精巢>卵巢>肌肉>肠。而在雌雄组织差异表达分析表明,精巢中Usp9基因表达量比卵巢的比值为2.86,脑组织中雄虾的表达量比雌虾为2.27,差异均为极其显著(P<0.01)。这表明Usp9基因的表达和雄性偏向基因趋势是一致的(雄性表达:雌性表达≥1.5)。本研究为进一步开展青虾Usp9基因功能等相关研究奠定了基础,并可为青虾性别的遗传调控机制研究提供参考。