肿瘤中环状RNA泛素结合相关蛋白2的表达及调控作用研究进展

泛素结合相关蛋白2(UBAP2)是一种新发现的环状RNA,其在诸多人类肿瘤中异常表达并能参与调控肿瘤恶性生物学行为进程如肿瘤细胞的增殖、侵袭转移、抗凋亡和上皮间质转化等。环状RNA UBAP2(circ-UBAP2)的异常表达也与肿瘤的淋巴结转移、TNM分期、微血管浸润等病理特征有关;并且circ-UBAP2与环状RNA临床应用的研究热点如调控肿瘤细胞自噬、诱导细胞放疗和化疗耐受等也紧密相关。本文就circ-UBAP2在肿瘤中的表达、生物学作用及调控机制进行综述。

还原型谷胱甘肽对脑缺血大鼠海马神经元泛素蛋白结合物表达的影响

目的探讨游离锌(Zn2+)和泛素蛋白结合物在大鼠脑缺血/再灌注损伤后海马神经元内的变化,以及还原型谷胱甘肽(GSH)干预的影响。方法取雄性SD大鼠90只,随机均分为假手术对照(sham)组,脑缺血/再灌注(I/R)组,还原型谷胱甘肽+脑缺血/再灌注处理(GSH)组。I/R组按Pulsinelli的四血管阻塞法建立大鼠前脑缺血/再灌注模型,Sham组大鼠进行相同的手术处理,但不进行四血管阻塞。GSH组大鼠于造模前30min给予GSH(1.2g/kg)腹腔注射,sham组和I/R组在相同时刻注射等量生理盐水。分别在脑缺血/再灌注后6、24、72h三个时间点从各组取大鼠,断头取脑,取海马CA1区进行相应处理后用于后续检测。应用Fluoro-JadeB染色法检测神经元变性死亡的数目,TSQ荧光染色检测神经元内Zn2+变化,Westernblotting检测海马神经元内泛素蛋白结合物的表达变化。结果脑缺血/再灌注后6、24h时点,各组大鼠海马CA1区神经元均未见Fluoro-JadeB荧光染色阳性细胞;72h时点,sham组仍未见阳性细胞,GSH组阳性细胞数目(48.6±10.8个/0.2mm2)明显少于I/R组(96.7±13.3个/0.2mm2,P<0.01)。脑缺血/再灌注后72h时点,与sham组比较,I/R组大鼠CA1区细胞内游离Zn2+聚集增加,GSH组神经元游离Zn2+聚集较I/R组有所减少。脑缺血/再灌注后6h时点,I/R组海马CA1区神经元泛素蛋白结合物的表达(10.25±1.23)较sham组(3.68±0.46)和GSH组(7.20±0.97)明显增多(P<0.01),后两组比较有统计学差异(P<0.01)。结论 GSH可通过螯合神经元内游离Zn2+和降低泛素蛋白结合物聚集对大鼠脑缺血/再灌注损伤发挥保护作用。

尿泛素-核糖体结合蛋白52、尿微量清蛋白、尿视黄醇结合蛋白联检在早期糖尿病肾损伤诊断中的价值

目的探讨尿泛素-核糖体结合蛋白(UBA)-52、尿微量清蛋白(U-m Alb)、尿视黄醇结合蛋白(RBP)在评估早期糖尿病肾损伤的价值。方法选择224例糖尿病患者及同期50名健康体检老年人,依照临床诊断结果分为糖尿病肾损伤尿蛋白阳性组(A组)、糖尿病肾损伤尿蛋白阴性组(B组)、糖尿病无肾损伤组(C组),健康体检者为对照组;采集患者晨尿,检测UAB-52、Um Alb及RBP水平。结果 A组尿中UAB-52、U-m Alb、RBP水平均显著高于其余3组,B组均显著高于C组及对照组(P<0.05);A组尿中UAB-52、U-m Alb、RBP阳性检出率显著高于其余3组,B组均显著高于C组及对照组(P<0.05);单独检测尿中UAB-52、Um Alb、RBP水平的标准误显著高于三指标联合检测,且三指标联合检测敏感性显著高于单独检测一指标(P<0.05)。结论联合检测尿中UBA52、U-m Alb及RBP水平,可自多角度评估肾功能受损情况,弥补单一评估指标的局限性,明显提高诊断效能。

细胞自噬调控宫颈癌发生和发展的研究进展

自噬指细胞利用溶酶体分解细胞内老化的细胞器和不正确折叠的蛋白质等,再利用降解物质和细胞内的有害物质,为细胞提供所需能量。正常情况下,自噬水平较低,但当细胞遭受损害时,自噬机制被触发。自噬相关蛋白,如自噬效应蛋白1(Beclin1)、微管相关蛋白轻链3(LC3)和泛素结合蛋白(p62)等,在宫颈癌中的表达受到抑制,这在宫颈癌的形成和进展中发挥了关键作用。本文就自噬调控宫颈癌的发生和发展展开综述,为宫颈癌治疗提供新的靶点。

慢性氧化应激诱导兔动脉粥样硬化对蛋白酶体26S及20S活性影响的实验研究

目的探讨慢性氧化应激诱导动脉粥样硬化(AS)对蛋白酶体26S及20S活性的影响,以及与泛素/泛素蛋白结合物(Ub/UPC)表达之间的关系。方法新西兰雄性兔30只,随机分为正常饮食组(N)和高胆固醇饮食组(H),共饲养12周。检测26S及20S的活性,观察腹主动脉的病理变化、Ub/UPC的表达及氧化应激等指标。结果成功诱导了AS模型,H组的20S的活性比N组明显增高(P<0.01),而26S的活性两组间差异无统计学意义(P>0.05),Ub/UPC在H组的表达比N组明显增强。结论慢性氧化应激状态下,20S的活性明显增强,Ub/UPC大量聚集,可能在AS的病理变化过程中起着重要的作用。

龟羚帕安丸对帕金森病大鼠转录因子EB介导自噬调控机制的研究

目的:研究龟羚帕安丸治疗帕金森病(PD)对转录因子EB(TFEB)表达的影响及其机制。方法:将PD大鼠模型随机分为模型组、西药组、中西药组、中药低、中、高剂量组,每组15只,另取15只正常大鼠作为假手术组。模型组及假手术组给予等容积生理盐水,其余组给予相应药物灌胃,各组均连续给药4周。PD大鼠处死后,将中脑黑质组织剥离出来,运用蛋白质印迹法(Western Blotting)检测TFEB、微管相关膜蛋白轻链3Ⅱ(LC3Ⅱ)、泛素结合蛋白P62(P62)、酪氨酸羟化酶(TH)、α-突触核蛋白(α-syn)的表达量。结果:与假手术组比较,模型组、西药组、中西药组、中药各剂量组黑质内TFEB、LC3Ⅱ、TH蛋白表达显著降低(P<0.01),P62、α-syn表达显著增高(P<0.01);与模型组比较,西药组、中西药组、中药各剂量组黑质内TFEB、LC3Ⅱ、TH蛋白表达显著增高(P<0.01),P62、α-syn表达显著降低(P<0.01)。结论:龟羚帕安丸可通过TFEB激活自噬-溶酶体系统,增强神经细胞自噬活性,增加LC3Ⅱ、TH表达,促进α-syn、P62降解及清除,发挥神经保护作用。

泛素结合酶蛋白在脑胶质瘤细胞中的表达及与细胞周期的关系

目的探讨泛素结合酶蛋白在脑胶质瘤细胞中的表达及与细胞周期的关系。方法选取2015年1月至2016年12月间陕西省第四人民医院冻存的96例脑胶质瘤组织,采用免疫组化及蛋白印迹法检测脑胶质瘤组织和脑胶质瘤细胞株U251细胞内细胞增殖标记物表达,分析脑胶质瘤细胞患者病理特征及预后与泛素集合酶Ubc H10的关系;以血清饥饿释放试验分析U251细胞周期与Ubc H10的关系;以siRNA干扰U251细胞中Ubc H10表达情况,观察细胞周期进程、Rb磷酸化水平及细胞增殖能力变化情况。结果脑胶质瘤组织中Ubc H10表达量显著高于正常组织,差异有统计学意义(P<0.05);细胞增殖标志物Ki-67表达量与Ubc H表达量正相关(P<0.05),Ubc H表达量与组织学分级、肿瘤直径、肿瘤转移及浸润和预后相关(P<0.05)。经无血清饥饿72h后,细胞周期同步化,74.0%的细胞停止于G1期,血清释放推进细胞周期进程,6~8h后逐渐向S期和G2期转换;细胞饥饿72h后Ubc H处于低表达状态,血清释放后其表达量逐渐升高,在9h时逐渐下降;siRNA干扰后,siRNA#3的抑制效果最强(P<0.05);siRNA#3干扰后,Rb蛋白磷酸化水平降低(P<0.05)。采用siRNA干扰后,细胞阻滞在G1期,且差异存统计学意义(P<0.05);shRNA干扰后U251细胞克隆形成数低于未处理组(P<0.05)。结论在脑胶质瘤中Ubc H10处于高表达状态,可通过下调Rb蛋白水平释放转录因子释放,调节下游靶基因表达及转录,促进细胞增殖,在脑胶质瘤的发生与发展过程中十分重要。

降糖益肾汤联合前列地尔治疗糖尿病肾病临床研究

目的:观察降糖益肾汤联合前列地尔对糖尿病肾病患者全段成纤维细胞生长因子-23 (iFGF-23)、α-Klotho、尿泛素-核糖体结合蛋白52 (UBA52)的影响。方法:选取糖尿病肾病患者118例作为研究对象,按照随机数表法分为对照组和观察组,每组59例。对照组采用前列地尔治疗,观察组在对照组基础上联合降糖益肾汤治疗。比较2组临床疗效及治疗前后血清iFGF-23、α-Klotho、UBA52、肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、肌酐清除率(CCr)、尿白蛋白排泄率(UAER)的变化情况。结果:观察组总有效率为94.92%,显著高于对照组的83.05%(P<0.05)。与同组治疗前比较,治疗后2组血清iFGF-23、UBA52、BUN、Cr、TC、TG、UAER均降低(P<0.05),α-Klotho、CCr均升高(P<0.05)。与对照组治疗后比较,观察组治疗后血清iFGF-23、UBA52、BUN、Cr、TC、TG、UAER均降低(P<0.05),α-Klotho、CCr均升高(P<0.05)。结论:降糖益肾汤联合前列地尔可调节糖尿病肾病患者iFGF-23、α-Klotho、UBA52水平,保护肾功能,纠正代谢紊乱,较单独应用前列地尔治疗疗效更佳。

OTUB2表达下调对胃癌细胞增殖、迁移、侵袭能力及PI3K/AKT信号通路的影响

目的探讨含OTU结构域的泛素醛结合蛋白2(OTUB2)表达下调对胃癌细胞增殖、迁移、侵袭能力及磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)信号通路的影响。方法采用Lipofectmine 2000转染试剂向MGC-803细胞中转染OTUB2小干扰RNA(si-OTUB2)序列(si-OTUB2组)和si-NC序列(si-NC组),以不进行任何转染的胃癌MGC-803细胞作为空白对照组。分别采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞中OTUB2 mRNA及蛋白的表达水平。采用CCK-8法检测细胞增殖能力,Transwell小室检测细胞迁移和侵袭能力,Western blot检测增殖细胞核抗原(PCNA)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、AKT、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)蛋白表达水平。结果与空白对照组和si-NC组比较,si-OTUB2组细胞中OTUB2 mRNA及蛋白表达水平降低(P<0.05),细胞增殖能力减弱(P<0.05),细胞迁移数和侵袭数减少(P<0.05),细胞中PCNA、N-cadherin和p-AKT蛋白表达水平降低(P<0.05),E-cadherin蛋白表达水平升高(P<0.05)。结论下调OTUB2可以抑制胃癌细胞的增殖、迁移、侵袭,其作用机制可能与抑制PI3K/AKT信号通路有关。

塞利尼索通过调控miR-205-5p/OTUB1通路对白血病KOCL44细胞增殖、凋亡的影响

目的 探讨塞利尼索(Selinexor)对急性淋巴细胞白血病细胞KOCL44增殖、凋亡的影响,分析其对微小RNA-205-5p(miR-205-5p)/去泛素化酶卵巢肿瘤蛋白域所含泛素乙酰结合蛋白1(OTUB1)通路的调控作用。方法 体外培养KOCL44细胞,随机分为空白组和低、中、高剂量实验组(125、250、500 nmol·L^(-1)塞利尼索)及高剂量+anti-miR-205-5p组(转染anti-miR-205-5p 48 h后再用500 nmol·L^(-1)塞利尼索处理)、高剂量+pcDNA-OTUB1组(转染pcDNA-OTUB1 48 h后再用500 nmol·L^(-1)塞利尼索处理)。用细胞计数-8(CCK-8)实验检测细胞增殖情况;用流式细胞术检测细胞凋亡情况;用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-205-5p表达水平;用蛋白质印迹法检测OTUB1蛋白表达水平;用双荧光素酶报告实验检测miR-205-5p、OTUB1靶向关系。结果 空白组和低、中、高剂量实验组72 h细胞活力分别为1.21±0.08、1.03±0.08、0.81±0.05和0.67±0.05;细胞凋亡率分别为(5.62±0.49)%、(8.99±0.77)%、(16.81±1.43)%和(25.98±2.22)%;miR-205-5p表达水平分别为1.00±0.00、1.73±0.11、3.08±0.28和5.35±0.36;OTUB1蛋白水平分别为0.72±0.05、0.58±0.05、0.43±0.03和0.24±0.02。空白组与低、中、高剂量实验组比较,各剂量实验组间比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。高剂量实验组、高剂量+anti-miR-205-5p组、高剂量+pcDNA-OTUB1组72 h细胞活力分别为0.65±0.06、1.08±0.08和1.11±0.08;细胞凋亡率分别为(26.27±2.56)%、(9.19±0.76)%和(8.59±0.72)%。高剂量+anti-miR-205-5p组、高剂量+pcDNA-OTUB1组与高剂量实验组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 塞利尼索可抑制KOCL44细胞增殖,诱导细胞凋亡,其作用机制与调节miR-205-5p/OTUB1表达有关。

基于自噬途径探讨当归饮子缓解CU模型小鼠过敏反应的效应机制

目的:探讨当归饮子对慢性荨麻疹(CU)小鼠模型过敏反应的影响及自噬干预机制。方法:选用SPF级BALB/c小鼠,腹腔注射卵白蛋白与氢氧化铝悬液复制CU小鼠模型,设立分组并灌胃给药:空白组(生理盐水20 mL·kg^-1·d^-1),模型组(生理盐水20 mL·kg^-1·d^-1),开瑞坦组(0.0013 g·kg^-1·d^-1),当归饮子高、中、低剂量组(39.3,19.6,9.8 g·kg^-1·d^-1)。苏木素-伊红(HE)染色观察CU小鼠皮肤组织病理学改变;透射电镜观察皮肤组织细胞的自噬形态学;免疫组化(IHC)检测皮肤组织微管相关蛋白1轻链3B(LC3B)和p62蛋白的表达;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测皮肤组织LC3B,p62mRNA转录水平。结果:当归饮子可显著改善CU小鼠皮肤真皮水肿、胶原束分离、毛细血管扩张等病理表现;并促进自噬小体形成,改善胞核染色质浓聚、线粒体肿胀、内质网扩张等异常细胞超微结构;与空白组比较,模型组CU小鼠皮肤组织中LC3B蛋白表达显著增加(P<0.01),LC3B mRNA水平有升高趋势,p62 mRNA水平及蛋白表达均显著降低(P<0.01);与模型组比较,当归饮子各剂量组小鼠皮肤组织LC3B mRNA水平及蛋白表达明显降低(P<0.05,P<0.01),小鼠皮肤组织的p62mRNA水平及蛋白表达明显下降(P<0.05,P<0.01),以高剂量组疗效最佳。结论:当归饮子可调节LC3B,p62 mRNA及蛋白表达,增强细胞自噬水平,进而改善CU小鼠皮肤病理状态。

拟穴青蟹OTUB的分子克隆及其在性腺发育过程中的表达

OTUB1是哺乳动物雌激素信号通路中的一个关键因子,它可以使雌激素受体α(ERα)去泛素化并抑制其转录活性。本研究从实验室拟穴青蟹(Scylla paramamosain)转录组测序数据库中筛选出OTUB基因片段,利用SMART RACE技术克隆得到Sp-OTUB的cDNA全长。该序列全长1 261 bp,包括5'非编码区(5'-UTR)40 bp,开放阅读框(ORF)804 bp和3'非编码区(3'-UTR)417 bp。其ORF编码267个氨基酸,预测其分子量为31 ku。该蛋白序列中包含一个OTU样的半胱氨酸蛋白酶催化结构域和一个由半胱氨酸(C)、天冬氨酸(D)和组氨酸(H)组成的催化三联体。实时定量PCR结果显示,Sp-OTUB在成熟拟穴青蟹各组织器官中均有表达,其中在血淋巴中的表达量最大,精巢中表达量最低。在卵巢发育过程中,Sp-OTUB的表达量在卵巢增值期为最大,与其他各时期具有显著差异;在精巢发育各阶段,Sp-OTUB表达量在精子细胞期达到最大,显著高于精母细胞期和成熟精子期。同源系统进化分析Sp-OTUB与大多数物种的OTUB1聚为一支,与肩突硬蜱(Ixodes scapularis)和紫海胆(Strongylocentrotuspurpuratus)亲缘关系最近。实验结果初步显示Sp-OTUB在拟穴青蟹生殖调控方面可能发挥重要作用。