结肠癌叉头框蛋白P3、促泛素结合衔接子p62及核因子-κB与癌旁肿瘤沉积形成相关性分析

目的探究结肠癌患者叉头框蛋白P3(Foxp3)、促泛素结合衔接子(p62)及核因子κB(NF-κB)表达及与癌旁肿瘤沉积形成相关性。方法选取河北北方学院附属第一医院普通外科2019年1月至2022年1月收治的结肠癌患者80例,根据其是否合并癌旁肿瘤沉积分为对照组(36例),沉积组(44例)。使用实时荧光定量PCR技术(qRT-PCR)检测患者Foxp3、p62、NF-κB mRNA表达,使用免疫组化检测患者Foxp3、p62、NF-κB阳性细胞表达,使用蛋白质印迹法检测两组患者病灶组织中Foxp3、p62、NF-κB mRNA相对蛋白表达量。并使用多因素Logistic回归分析以上指标与患者癌旁肿瘤沉积形成相关性。结果比较两组基线资料,差异无统计学意义。沉积组Foxp3、p62、NF-κB mRNA表达显著高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);沉积组Foxp3、p62、NF-κB免疫组化阳性细胞占比表达显著高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);沉积组Foxp3、p62、NF-κB蛋白相对表达显著高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);多因素Logistic回归分析结果显示,Foxp3、p62、NF-κB mRNA,Foxp3、p62、NF-κB阳性细胞占比,Foxp3、p62、NF-κB蛋白相对表达均与患者癌旁肿瘤沉积发生具有显著相关性,其高表达均是患者发生癌旁肿瘤沉积的独立危险因素(P<0.05)。结论合并癌旁肿瘤沉积结肠癌患者病灶Foxp3、p62、NF-κB mRNA,Foxp3、p62、NF-κB阳性细胞占比及Foxp3、p62、NF-κB蛋白相对表达均升高,且其高水平表达是结直肠癌患者癌旁肿瘤沉积形成独立危险因素,在患者实际治疗中,应重视以上指标表达,有助于评估及预测患者病情进展。

p62敲除对细胞自噬的影响及其对泛素化修饰蛋白募集的作用

目的探讨p62敲除对细胞自噬及泛素化蛋白募集的影响。方法将野生型(Wild Type,WT)和p62基因敲除(p62 knockout,p62-KO)的大鼠肾上皮细胞(NRK)分别分为野生型阴性对照组(WT CT组)和野生型饥饿4 h组(WT Sta4 h组)、p62基因敲除阴性对照组(p62-KO CT组)和p62基因敲除饥饿4 h组(p62-KO Sta4 h组)。WT CT组和p62-KO CT组中加入普通培养基,对细胞进行空白对照处理;WT Sta4 h组和p62-KO Sta4 h组中加入饥饿培养基,对细胞进行饥饿4 h处理。免疫印迹法鉴定和检测p62基因的敲除及自噬体标志蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3)、泛素化修饰蛋白(Ub)的表达;电子显微镜观察自噬体形成;激光共聚焦显微镜法观察LC3蛋白阳性点状结构的数量。结果鉴定p62基因成功被敲除。饥饿处理4 h后,WT和p62-KO细胞中均能观察到自噬结构(包括自噬体和自噬溶酶体)。与WT CT组比较,WT Sta4 h组中LC3蛋白酯化和Ub蛋白表达水平升高(P<0.05),LC3蛋白阳性点状结构数量显著增加(P<0.01);与p62-KO CT组比较,p62-KO Sta4 h组中LC3蛋白酯化和Ub蛋白表达水平升高(P<0.05),LC3蛋白阳性点状结构数量显著增加(P<0.01)。结论p62参与细胞自噬并募集泛素化修饰蛋白,最终影响选择性自噬体底物的凝聚和降解。

LC-3、Beclin-1和P62表达与非小细胞肺癌临床病理特征的相关性

目的 探讨微管相关蛋白1轻链3(LC-3)、自噬调控因子Beclin-1和P62表达与非小细胞肺癌(NSCLC)临床病理特征的相关性。方法 回顾性分析93例NSCLC患者资料,比较癌组织和癌旁组织LC-3、Beclin-1和P62表达情况;比较LC-3、Beclin-1和P62不同表达情况患者临床病理特征差异。结果 癌组织LC-3、Beclin-1阳性率低于癌旁组织,P62表达阳性率高于癌旁组织(P<0.05)。LC-3、Beclin-1和P62不同表达情况患者肺癌病理类型、TNM分期以及分化程度差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 LC-3、Beclin-1和P62表达情况与NSCLC患者病理类型、TNM分期以及分化程度有密切联系。LC-3、Beclin-1表达降低及P62表达升高与肺癌的发生发展相关,可作为NSCLC患者早期评估的辅助指标。

清热活血方对CIA大鼠自噬相关蛋白p62表达的影响

目的 研究清热活血方对胶原诱导关节炎(collagen type Ⅱ-induced arthritis, CIA)大鼠滑膜组织、外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells, PBMC)自噬相关蛋白p62的影响,进一步探讨清热活血方防治类风湿关节炎的相关机制。方法 40只SD大鼠随机分成正常组、模型组、清热活血方组、依那西普组,用免疫源性牛Ⅱ型胶原造模,造模成功后各组大鼠分别给予相应药物灌胃,连续治疗28 d后观察大鼠关节肿胀程度,检测大鼠血清肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)及白细胞介素-1β(interleukin-1β, IL-1β)水平、滑膜及PBMC中p62蛋白表达情况。结果 与正常组比较,模型组大鼠出现关节红肿,血清TNF-α、IL-1β水平上升(P<0.01),关节滑膜组织及PBMC中p62 mRNA水平上升(P<0.01),p62蛋白相对含量降低(P<0.01)。与模型组比较,清热活血方组大鼠血清TNF-α、IL-1β含量降低(P<0.01),滑膜组织及PBMC中p62 mRNA水平均降低(P<0.01),p62蛋白相对含量升高(P<0.01)。结论 清热活血方可通过下调CIA大鼠血清TNF-α、IL-1β水平抑制大鼠滑膜组织及PBMC中p62蛋白的转录,减少p62蛋白的消耗,抑制自噬水平而起到抗炎作用。

Sequestosome 1/p62蛋白在癫痫中的作用研究进展

癫痫(epilepsy)是儿童常见的慢性脑疾病,反复的癫痫发作可引起不可逆的脑损伤,给患儿及其家庭带来沉重的负担。临床实践中约有三分之一病例为药物难治性癫痫患者,饱受反复惊厥发作的痛苦,亟需寻找新的治疗干预措施。研究发现,作为自噬关键分子的Sequestosome 1/p62可能通过其多功能结构域参与调节多种信号通路,包括哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合物1(mTORC1)信号通路及炎症信号通路。进一步探索p62蛋白在癫痫中的作用及潜在机制具有重要意义。本文就p62蛋白结构及功能进行探讨,并对其在癫痫中的可能作用、相关机制及潜在治疗意义进行综述。

STAT3、自噬相关蛋白p62与子宫内膜癌手术治疗预后的关系

目的:观察STAT3、自噬相关蛋白p62与子宫内膜癌(EC)患者手术治疗预后的关系。方法:选择188例EC患者,术后随访2年,比较预后良好与预后不良患者STAT3、自噬相关蛋白p62表达,分析STAT3、自噬相关蛋白p62与EC患者手术治疗预后的关系。结果:188例EC患者随访2年,病死率11.17%。预后不良组STAT3阳性、自噬相关蛋白p62阳性占比高于预后良好组(P<0.05);经Cox回归分析结果显示,STAT3阳性、自噬相关蛋白p62阳性是EC患者手术治疗预后不良的影响因素(P<0.05)。结论:STAT3、自噬相关蛋白p62表达与EC患者预后有关。

抗凝血酶Ⅲ和膜糖蛋白CD62P对特发性膜性肾病发生栓塞风险的研究

据研究统计,慢性疾病给人们造成巨大的经济损失,长期遗留的并发症也严重影响着人们的生活质量。肾脏病也逐渐增加,现在已成为常见慢性疾病,肾病综合征是其中常见类型。原发性肾病综合征的发病病理类型有20%是特发性膜性肾病,近年仍有上升的趋势。特发性膜性肾病常见且严重的并发症是血栓栓塞,血栓栓塞一旦发生会危及患者的生命安全并且严重影响预后与未来生活质量,因此预防血栓栓塞的发生有重要作用。本文探讨抗凝血酶Ⅲ与血小板膜糖蛋白CD62P这两个指标对发生血栓栓塞的风险预测。

非小细胞肺癌患者组织中自噬相关蛋白Beclin1、LC3、P62的表达水平及临床意义

目的 探究非小细胞肺癌(NSCLC)组织中自噬相关蛋白Beclin1、微管相关蛋白1轻链3(LC3)、P62的表达水平及临床意义。方法 回顾性选取2022年4月至2023年4月在山东第一医科大学附属人民医院手术的98例NSCLC患者,术中留取病理标本。对照标本选择距离癌组织边缘5 cm内的癌旁组织。采用免疫组织化学法和蛋白质印迹法检测各组织中Beclin1、LC3、P62的表达情况。结果 免疫组织化学结果显示,癌组织中Beclin1和LC3阳性表达率显著低于癌旁组织,P62阳性表达率显著高于癌旁组织,差异均有统计学意义(P<0.05)。蛋白质印迹法结果显示,癌组织中Beclin1和LC3表达量显著低于癌旁组织,P62表达量显著高于癌旁组织,差异均有统计学意义(P<0.05)。Beclin1、LC3、P62阳性表达在性别、年龄和病理类型中的差异无统计学意义(P>0.05);有吸烟史、分化程度越低和TMN分期越高的患者,其Beclin1、LC3阳性表达率越低,P62阳性表达率越高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 NSCLC组织中自噬相关蛋白Beclin1、LC3表达下调,P62表达上调,自噬作用在NSCLC发生、发展过程中可能发挥作用,Beclin1、LC3、P62可能为NSCLC的早期诊疗提供新的治疗靶点。

断流术后门静脉血栓形成与血小板膜蛋白CD62P的关系

目的探讨断流术后门静脉血栓形成与血小板膜蛋白CD62P的关系。方法选取肝硬化门脉高压症行断流术的患者30例作为实验组,同期行胆囊切除术的患者15例作为对照组。于术前1天及术后第1天测定静脉血中血小板CD62P水平,并行血小板计数;实验组行彩色多普勒超声检查,了解门静脉系统血栓形成情况。结果实验组术后门静脉系统血栓形成6例。术前实验组CD62P高于对照组(P<0.01);术后实验组CD62P明显高于术前(P<0.01)。血栓组与无血栓组术前CD62P的差异无显著性意义(P>0.05);术后血栓组CD62P升高更明显(P<0.01)。结论门脉高压症断流术后CD62P明显升高,且与门静脉系统血栓形成高度相关,可作为评判门静脉系统血栓形成高危的敏感指标。

糖尿病并血管病变患者血小板膜糖蛋白CD62p、CD63的表达及血小板四参数的研究

目的 :探讨血小板膜糖蛋白CD62p、CD63的表达及血小板四参数与糖尿病并血管病变患者的关系。 方法 :采用流式细胞术测定 42例 2型糖尿病并发血管性疾病患者 (糖尿病伴血管病变组 )血小板膜糖蛋白CD62p、CD63的表达 ,同时用自动血细胞计数仪对其进行血小板四参数的测定 ,并与 50例糖尿病不伴血管病变组和 46例正常对照组比较。 结果 :糖尿病伴血管病变组CD62p (11 64± 3 79) %、CD63 (15 73± 4 2 2 ) %的表达和血小板平均体积 (11 85± 2 3 1)fl等 3指标与正常对照组CD62p (2 2 7± 2 11) % ,CD63 (6 83± 2 85) % ,血小板平均体积 (10 72± 1 63 )fl比较均显著性增高(P值分别为 <0 0 0 1,<0 0 0 1和 <0 0 1) ,血小板计数、血小板压积和血小板分布宽度在两组间差异无统计学意义 (P >0 0 5) ;与不伴血管病变组比较 ,CD62p (10 0 1± 3 65) %和CD63 (14 0 2± 3 87) %也显著性增高 (P <0 0 5) ,血小板平均体积、血小板计数、血小板压积和血小板分布宽度在两组间差异无统计学意义 (P >0 0 5)。结论

自噬受体蛋白p62的表达及功能研究

目的:构建人自噬受体蛋白p62的真核表达质粒,初步探索p62在氧化应激中的功能。方法:从HeLa细胞系中扩增SQSTM1基因,插入真核表达载体nFLAG/pRK5,构建p62的重组表达质粒nFLAG-SQSTM1/pRK5。采用HEK293T细胞表达带有FLAG标签的重组p62蛋白,免疫共沉淀法观察p62和核因子E2相关因子2(Nrf2)相互作用。结果:重组表达质粒nFLAG-SQSTM1/pRK5经琼脂糖凝胶电泳和测序对比均与预期结果一致,Western blot实验中p62蛋白可正常表达,且大小与预期结果一致。免疫共沉淀和蛋白质谱证明p62与氧化应激转录调控蛋白Nrf2可相互作用。结论:采用真核表达系统成功表达p62蛋白,并发现其与Nrf2可相互作用,为进一步研究p62与Keap1-Nrf2通路关系提供依据。

血浆中CD62p与C反应蛋白在脑梗死及脑出血患者中的表达

脑卒中的发生发展涉及各种因素，其中C－反应蛋白（ CRP）可能是参与动脉粥样硬化形成的重要炎性因子，而血浆CD62 p是活化血小板的特异性标志，具有启动、放大血栓形成的重要作用，在炎症和栓塞中起着中心环节作用。本文探讨CD62 p及CRP在急性脑出血（CH）及脑梗死（ACI）患者中的临床意义，为脑卒中的临床预防与治疗提供一定的理论依据和数据支持。

危重患者血小板平均体积及其膜糖蛋白CD62p的临床研究

目的研究危重患者血小板计数、血小板平均体积(MPV)及血小板膜糖蛋白CD62p的关系。方法我院胸心血管外科监护室55例患者,男44例,女11例,按全身炎症反应综合征(SIRS)程度和多脏器功能不全综合征(MODS)分为SIRS2、SIRS3、SIRS4、MODS四组,分别应用HEMACELL Plus全自动二十二项五类血细胞分析仪,通过阻抗法来检测血小板计数、MPV,用流式细胞仪检测血小板糖蛋白CD62p。结果四组患者CD62p均增加,MODS组较SIRS组有增加趋势,但无统计学意义;四组患者MPV逐渐增大;血小板计数四组间比较差异无显著性,但MODS组再分成生存组和死亡组,血小板计数比较差异有显著性,死亡组明显减少。结论动态监测危重患者血小板计数、MPV、CD62p水平均可反映危重患者的病情变化。

胆囊癌组织P62蛋白的表达及其与血管生成关系

目的 :检测胆囊癌组织中P6 2蛋白、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的表达和微血管密度 (MVD) ,探讨它们的相互关系 ,以及与胆囊癌临床病理特征的关系。方法 :4 1例胆囊癌和 2 2例慢性胆囊炎组织中 ,P6 2蛋白和bFGF的表达用SP免疫组化染色法进行检测。胆囊癌组织中MVD用抗CD34单抗 (mAb)做SP免疫组化染色进行检测。结果 :4 1例胆囊癌组织中 ,P6 2和bFGF表达阳性率分别为 6 3.4 %和 75 .6 % ,均高于 2 2例慢性胆囊炎组织 (P <0 .0 1)。P6 2的表达与胆囊癌淋巴结转移有关 (P <0 .0 5 ) ,与癌组织的分级、临床分期无显著关系。bFGF的表达与胆囊癌临床病理分期及组织学分级有关 (P <0 .0 5 ) ,而与淋巴结转移无显著关系。P6 2表达率与bFGF表达率呈正相关关系 (r=0 .5 2 1;P <0 .0 1)。两者的表达均与患者的年龄、性别、肿瘤的种类、是否伴有胆囊结石无关。胆囊癌组织中MVD明显高于慢性胆囊炎组织 (P <0 .0 1)。P6 2及bFGF表达阳性组织MVD高于表达阴性组织 (分别P <0 .0 5和P <0 .0 1)。MVD与胆囊癌的Nevin分期及淋巴结转移有关 (P<0 .0 1) ,与患者的年龄、性别、肿瘤种类、分化程度以及是否伴有胆囊结石无关。结论 :P6 2蛋白及bFGF的表达与胆囊癌组织中血管的生成相关 ,在胆囊癌的发生和发展过程中可能具有重?

短暂脑缺血发作患者血小板膜糖蛋白CD61、CD62P表达及阿斯匹林干预的临床研究

目的 观察短暂脑缺血发作 (TIA)患者外周血血小板膜糖蛋白CD6 1、CD6 2P的表达及其临床意义 ,并探讨阿司匹林对血小板表面膜糖蛋白的作用。方法 应用流式细胞术 ,用单克隆抗体作分子探针测定 2 0例TIA患者的CD6 1、CD6 2P的分子表达 ,包括进展及未进展为脑梗塞的病人 ,并依其是否常规口服阿司匹林将其分两组 ,患者组内及患者与 18例健康成年人所测结果进行比较。结果 (1)TIA组血小板CD6 2P阳性表达率与健康对照组比较P <0 0 1;(2 )进展为脑血栓形成的患者与未进展为脑血栓形成的患者比较P <0 0 1;(3)TIA组常规口服阿司匹林患者与未常规口服阿司匹林的患者相比P <0 0 1;(4)TIA组男性与女性血小板CD6 2P阳性表达率相比P >0 0 5。结论 血小板活化是短暂脑缺血发生的重要因素 ,且活化程度越高 ,越容易形成血栓 ,而CD6 1、CD6 2P能较好反映血小板活化 ,故可较早预测TIA并估计其演变趋势 ;同时 ,阿司匹林对CD6 1、CD6

乳腺癌中p62^(m-myc)和p16蛋白表达与预后的关系探讨

本研究采用免疫组化ＬＳＡＢ法对１０７例有随访资料的乳腺癌石蜡标本进行了ｐ６２ｃｍｙｃ和ｐ１６蛋白的联合检测，结合ＥＲ、ＰＲ、病理类型、组织学分级等进行了ｃｏｘ模型分析，并绘制了两者表达相反时的ｋａｐｌａｎＭｅｉｅｒ生存曲线。结果显示：ｐ６２ｃｍｙｃ蛋白在乳腺癌的阳性表达率为６３５５％，ｐ１６蛋白的阳性表达率为４０１９％。ｐ６２ｃｍｙｃ表达阳性的乳腺癌患者存活时间较短，ｐ１６蛋白表达阳性者存活时间较长。

犬急性冠状动脉血栓时血小板膜糖蛋白CD62P和CD63的表达

目的 :探讨犬急性冠状动脉血栓模型中血小板膜糖蛋白CD62P和CD63的阳性表达水平。方法 :开胸微电流刺激麻醉犬左冠状动脉前降支血管外膜方法制备犬急性冠状动脉血栓模型 ,采用流式细胞仪和全血单克隆抗体直接免疫荧光标记法 ,对其血小板表面CD62P和CD63的表达进行检测。结果 :8只犬制成犬急性冠状动脉血栓及急性心肌梗塞模型 ,其血小板表面CD62P和CD63阳性表达率分别为 (36 .2 4± 1 1 .69) %和 (3 .2 2± 1 .0 7) % ,显著高于模型复制前基础值 (8.35± 2 .73) %和 (0 .45± 0 .2 3) % (P <0 .0 5)。结论 :犬急性冠状动脉血栓模型中存在明显的血小板活化现象 。

益气活血中药血液透析液对慢性肾功能衰竭患者血小板膜糖蛋白CD62P表达的影响

目的探讨益气活血中药血液透析液对慢性肾功能衰竭(CRF)患者血小板膜糖蛋白CD62P表达的影响。方法维持性血液透析患者40例随机分为西药组和益气活血中药组,采用ELISA方法检测两组患者血液透析前后血小板膜糖蛋白CD62P的含量。结果两组治疗后与治疗前比较,血尿素氮、肌酐、钾离子、红细胞压积、血小板计数、二氧化碳结合力水平,差异均有显著性(P<0.05);血小板膜糖蛋白CD62P的表达差异有显著性(P<0.05),两组治疗后比较差异亦有显著性(P<0.05)。两组中医症候疗效比较,差异无显著性(P>0.05)。结论益气活血中药血液透析可以改变血小板膜糖蛋白CD62P表达,可能与中药治疗CRF有关。

益气活血中药血液透析液对慢性肾功能衰竭患者血小板膜糖蛋白CD62P表达的影响

目的分析益气活血中药血液透析液对慢性肾功能衰竭(CRF)患者血小板膜糖蛋白CD62P表达的影响。方法选取我科2012年1月至2014年1月长期接受血液透析的CRF患者92例,随机分为实验组和对照组。对照组采用碳酸氢盐血液透析液,实验组在对照组基础上,加用益气活血中药。对比两组患者透析3个月后中医症候评分、血生化、和血清CD62P水平。结果治疗3个月后,两组患者的中医症候评分较治疗前显著降低(P<0.05);实验组治疗3个月后中医症候评分较对照组显著降低(P<0.05)。治疗3个月后,两组患者的血肌酐、尿素氮、血钾、血磷和免疫反应性甲状旁腺激素(i PTH)较治疗前显著降低,血钙较治疗前显著上升(P<0.05);治疗3个月后,实验组的血肌酐、尿素氮、血钾、血磷和i PTH较对照组显著降低,血钙较对照组显著上升(P<0.05)。治疗3个月后,实验组的红细胞、血红蛋白和尿渗透压较对照组显著升高,尿ACR较对照组显著降低,(P<0.05)。治疗3个月后,两组患者的血清CD62P水平较治疗前显著降低(P<0.05);治疗3个月后,实验组血清CD62P水平较对照组显著降低(P<0.05)。结论益气活血中药血液透析液用于CRF患者透析可降低其CD62P水平,改善肾功能,具有一定的应用价值。

缺血性脑卒中患者血小板糖蛋白Ⅵ、CD62P的检测及其意义

目的探讨缺血性脑卒中患者血小板活化标记物血小板糖蛋白Ⅵ(glycoprotein,GPⅥ)、P-选择素(CD62P)的表达水平及葛根素治疗对其的影响。方法收集2009年1-6月佛山市第三人民医院首发的缺血性脑卒中住院患者50例和同期体检的正常对照50例作为研究对象;采用流式细胞仪(FCM)检测两组GPⅥ和CD62P的表达水平并观察患者葛根素治疗前后GPⅥ和CD62P的表达变化;应用双抗体夹心ELISA法检测两组血浆中可溶性GPⅥ水平;应用直线相关分析统计血小板膜GPⅥ与CD62P、血小板膜GPⅥ与可溶性GPⅥ之间的相关性。结果缺血性脑卒中患者(病例组)血小板膜GPⅥ和CD62P表达增加,并且明显高于正常对照组(P<0.01);葛根素治疗后血小板膜GPⅥ、CD62P表达有明显下降(P<0.05),但仍高于正常对照组(P<0.05);缺血性脑卒中患者血小板膜GPⅥ与CD62P之间呈显著直线正相关(r=0.784,P<0.01);病例组可溶性GPⅥ水平明显低于正常对照组(P<0.01);血小板膜GPⅥ与血浆可溶性GPⅥ之间呈直线负相关(r=-0.828,P<0.01)。结论 GPⅥ和CD62P均可作为缺血性脑卒中血小板活化的标志物,而且二者具有同样的敏感性;GPⅥ、CD62P检测对于指导用药有临床价值;血浆可溶性GPⅥ亦可作为血小板活化的评估指标。