泛素结合酶2S在胃癌中的表达及临床意义

目的 探讨泛素结合酶2S(UBE2S)在胃癌(GC)组织中的表达情况,并探讨其与GC患者远期预后的关系。方法 将2016年1月—2016年12月蚌埠医学院第一附属医院胃肠外科收治的GC患者(101例)列为研究对象,收集所有患者肿瘤组织及临床信息,通过免疫组织化学法检测癌及癌旁组织中UBE2S蛋白水平,分析UBE2S与组织病理学检测值之间的关系,探讨UBE2S表达对GC预后的影响,绘制生存曲线。利用生物信息学手段分析UBE2S可能参与肿瘤发生的机制。结果 免疫组化分析显示,UBE2S在GC组织中的表达显著高于癌旁组织,与组织病理学参数的关系提示UBE2S的阳性表达与CEA、CA19-9、T分期、N分期均明显相关(均P<0.01),多因素分析提示UBE2S高表达为GC的独立危险因素(HR=2.832,95%CI:1.361~4.170;P<0.01)。Kaplan-Meier生存曲线显示,GC患者的术后生存率与UBE2S高低表达组别之间差异有统计学意义(log-rank χ^(2)=27.512,P<0.01),ROC曲线结果显示AUC=0.789,敏感度和特异度分别为77.42%和74.36%。结论 UBE2S高表达于GC中,其与GC预后密切相关,UBE2S高表达可作为影响GC患者术后生存率的独立危险因素。

泛素结合酶2S参与调控黑素瘤行为机制的生物信息学分析

目的揭示黑素瘤中可能与泛素结合酶2S(UBE2S)存在相互作用的基因,探讨UBE2S参与调控黑素瘤细胞生物学行为的分子机制。方法将A375黑素瘤细胞分为基因敲降组和阴性对照组,分别用含LV-UBE2S-RNAi(14011-1)的慢病毒和CON053慢病毒转染细胞构建UBE2S敲降细胞株和阴性对照细胞株。提取两组细胞株RNA,并将其纯化及片段化,与芯片探针杂交洗染获取芯片数据。采用Ingenuity路径分析软件对获得的差异表达基因的芯片数据进行进一步解析,鉴定可能与UBE2S存在相互作用的基因,应用免疫印迹法对UBE2S调控的下游分子进行验证。采用双尾t检验筛选差异基因。结果在基因敲降组与阴性对照组之间共筛选出差异倍数绝对值>2且P<0.05的差异基因512个,其中上调基因247个,下调基因265个。差异基因信息的Ingenuity路径分析结果证实,干扰素信号和肝X受体/视网膜X受体活化通路显著激活,真核起始因子2和核因子κB信号通路则被抑制。预测上游调控因子中IFNA2为强烈激活,核因子κB(复合物)被抑制。综合以上生物信息学分析结果,推测黑素瘤细胞UBE2S基因可通过调节IFITM1、STAT1、ISG15和TNFRSF11B基因的表达发挥功能。免疫印迹显示,A375细胞UBE2S基因敲降前后,IFITM1蛋白均未表达,敲降后ISG15蛋白表达上调19.94倍,STAT1蛋白表达上调1.47倍,TNFRSF11B蛋白表达下调79.1%。结论UBE2S可能通过与STAT1、ISG15和TNFRSF11B的相互作用,共同调控黑素瘤肿瘤细胞生物学行为。

UBE2S在食管鳞状细胞癌组织中的表达及临床意义

目的:探讨食管鳞状细胞癌(ESCC)组织中UBE2S的表达及临床意义。方法:采用免疫组化SP法检测ESCC、上皮内瘤变中UBE2S的表达情况,分析其表达与ESCC患者临床病理特征的相关性及对预后的影响。结果:UBE2S在ESCC中的表达明显高于癌旁组织(P=0.035)。高级别上皮内瘤变(HIN)(P<0.001)及ESCC(P<0.001)的阳性率均高于瘤旁组织。HIN(P=0.016)及ESCC(P=0.008)的阳性率均高于低级别上皮内瘤变(LIN)。ESCC患者中UBE2S表达与种族有关(P<0.001),UBE2S表达与TP53(r=0.288,P<0.001)、Ki67(r=0.210,P=0.002)表达呈正相关。UBE2S表达是影响ESCC患者无进展生存期(P=0.005)和总生存期(P=0.005)的独立因素。结论:UBE2S高表达可能是ESCC患者不良预后的独立因素,而GEPIA上的UBE2S与ESCC预后无统计学意义,有待进一步研究。

泛素结合酶E2S在肝细胞肝癌中的表达及其与预后的关系

目的探讨泛素结合酶E2S(UBE2S)在肝细胞肝癌(HCC)中的表达及预后意义。方法利用Oncomine、GEPIA分析UBE2S在HCC组织中的表达情况,利用GEPIA分析UBE2S与HCC患者生存期的相关性,通过STRING工具分析UBE2S的蛋白相互作用网络。结果UBE2S mRNA在HCC组织中高表达,且与HCC预后呈负相关(P<0.001),UBE2S蛋白在HCC组织中的表达高于正常肝组织。结论UBE2S在HCC组织中高表达,其表达水平与肝癌的预后有明显关联。

肝细胞癌中UBE2S互作蛋白的筛选及预后模型构建

目的:筛选泛素结合酶E2S (UBE2S)互作蛋白并构建肝细胞癌(HCC)基于UBE2S互作蛋白的预后模型(UIPM),分析UIPM评估HCC患者预后的价值。方法:采用免疫共沉淀(Co-IP)技术筛选与Flag-UBE2S结合的蛋白复合体,经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDSPAGE)和Western blotting法验证后,采用液相色谱-质谱联用仪(LC-MS)分析鉴定UBE2S互作蛋白,并对互作蛋白进行基因本体论(GO)功能和京都基因与基因组百科全书(KEGG)信号通路富集分析。采用R软件survival包筛选癌症基因组图谱(TGGA)中HCC预后相关蛋白与UBE2S互作蛋白取交集,通过LASSO回归分析从交集蛋白中获取关键蛋白构建UIPM,并建立预后模型风险评分公式,按照风险评分的中位值将TGGA中HCC患者分为高风险组和低风险组,通过受试者工作特征曲线(ROC)评估UIPM的预测准确性,并采用国际癌症基因组联盟(ICGC)数据库对UIPM预测准确性进行再次验证。采用单因素和多因素Cox回归分析评估UIPM风险评分是否为HCC的预后独立危险因素,并进一步构建列线图模型。结果:Co-IP联合LC-MS分析得到97个UBE2S互作蛋白。GO功能和KEGG信号通路富集分析,互作蛋白主要与半胱氨酸型内肽酶活性、氧化应激和细胞死亡有密切关联。TCGA筛选出5 163个HCC预后相关蛋白,与UBE2S互作蛋白取交集,获得40个预后相关互作蛋白,LASSO回归分析得到7个关键蛋白,包括UBE2S、热休克蛋白家族A成员8(HSPA8)、异质性胞核核糖核蛋白H1(HNRNPH1)、含TCP1伴侣蛋白亚基3 (CCT3)、真核翻译起始因子2亚基1 (EIF2S1)、活化蛋白C激酶1受体(RACK1)和肌动蛋白相关蛋白2/3复合体亚基4(ARPC4),并构建了UIPM,高和低风险组HCC患者生存率存比较差异有统计学意义(P<0.05)。ROC曲线,UIPM预测HCC患者1、2和3年UIPM风险评分的ROC曲线下面积(AUC)值均大于0.7,表明预测模型准确度较高。ICGC数据库数据也证实UIPM预测准确度较高。单因素和多因素Cox回归分析,UIPM风险评分是HCC患者的独立预后危险因素(P<0.05)。列线图预测HCC患者生存率与实际生存率之间有较好的一致性。结论:97个互作蛋白与UBE2S相互作用,可能通过氧化应激和铁死亡相关通路的失调促进HCC发生发展。UIPM风险评分是HCC预后的独立危险因素,可以用于预测HCC患者预后。而UBE2S、HSPA8、HNRNPH1、CCT3、EIF2S1、RACK1和ARPC4有望成为HCC新的生物标志物和治疗靶点。

可可泛素结合酶基因家族的生物信息学初步分析

泛素结合酶（E2s）促进底物泛素化或者与E3s链接,是靶蛋白泛素化的关键酶,在泛素-蛋白酶体途径中起重要作用。利用可可（Theobroma cacao L.）全基因组测序数据,共鉴定出45个E2s基因家族成员,包括39个UBC和6个UEV基因。通过生物信息学方法,对可可E2s家族的基本理化性质、基因结构、二级结构预测、亚细胞定位、进化关系等方面进行初步分析。结果表明：可可E2s基因CDS长度在441（Tc UEV3）～3 651 bp（Tc UBC7）之间,对应的编码蛋白氨基酸数目在146（Tc UEV3）～1 216 aa（Tc UBC7）之间,编码蛋白分子量在16.39～134.71 ku之间。E2s基因外显子在1～11之间,多数基因外显子数目在5～7之间。E2s基因在10条染色体上均有分布,1号染色体为7个,数量最多;6号染色体2个基因,数量最少。可可E2s蛋白大多为不稳定蛋白,且均为亲水性蛋白,其二级结构以α-螺旋和无规则卷曲为主要构成元件。大多数可可E2s蛋白定位在细胞核,少数定位在内质网或者细胞质。进化树分析表明：可可E2s蛋白被分为20个亚家族,包括16个UBC亚家族和4个UEV亚家族,第Ⅵ亚家族E2s数目最多为9个;E2s家族蛋白在物种进化过程中具有高度保守性。

泛素结合酶基因生物信息学与功能分析

目的：生物信息学的发展为通过在线软件预测新基因的相关信息提供了众多有重要价值的参考信息。文中利用生物信息学方法预测泛素结合酶2S（ ubiquitin-conjugating enzyme 2S， UBE2S）生物学功能。方法以人肝癌HepG2细胞为材料，从构建的cDNA文库基因组中筛选和克隆了UBE2S基因。利用NCBI的BLAST在线分析工具分别对GenBank的非冗余核酸数据库和非冗余蛋白质数据库序列进行比对分析；采用NCBI ORF finder在线分析工具预测开放阅读框；利用ExPASy在线工具ProtParam统计基因中各种氨基酸含量，并预测理论分子量和等电点；应用ProtScale程序进行蛋白质的疏水性分析；蛋白质亚细胞定位采用在线工具（ nibb．ac．jp／form．html）预测，通过NCBI数据库GenBank分析蛋白质保守结构域；采用Protfun在线工具预测UBE2S的功能分类；采用同源模型服务软件SWISS-MODEL预测UBE2S的三维结构；采用MEGA5．05软件进行系统进化树的构建。结果 UBE2S基因编码241个氨基酸，预测相对分子质量为23770，理论等电点为8．81。跨膜结构域分析表明，UBE2S蛋白不含跨膜位点；亚细胞定位预测，UBE2S蛋白具有生长因子、离心通道、结构蛋白功能的概率为8．904、0．313和0．291。同源性比较分析结果表明，其碱基序列与已经报道的其他12个物种的相似率为90％～97％，且符合种属之间的进化关系。结论 UBE2S蛋白结构和功能的分析不仅丰富了其家族基因信息，还将为后续肝癌发生发展的分子机制实验研究奠定基础。

脑胶质瘤中UBE2S和CCNB1的表达及临床意义

目的:研究脑胶质瘤中细胞周期蛋白B1(CCNB1)和泛素结合酶E2S(UBE2S)的表达及临床意义。方法:选取本院2015年1月至2019年4月本院手术切除的脑胶质瘤组织标本106例,取114例脑出血或外伤进行颅内减压的患者脑组织标本作为对照组。采用免疫印记(WB)法测定受试者脑组织中CCNB1和UBE2S表达水平,分析二者表达水平与脑胶质瘤临床病理特征的关系,对所有术后患者进行随访,探究二者表达水平对脑胶质瘤患者预后的影响。结果:低级别脑胶质瘤组和高级别脑胶质瘤组CCNB1和UBE2S表达水平显著高于对照组(P<0.05),高级别脑胶质瘤组CCNB1和UBE2S表达水平明显高于低级别脑胶质瘤组(P<0.05)。CCNB1和UBE2S在脑胶质瘤组织中的表达水平与患者的年龄、性别、病理学类型无关(P>0.05),与肿瘤的组织分化程度、瘤周水肿、浸润程度有关(P<0.05)。Pearson法分析结果表明,脑胶质瘤组织中CCNB1和UBE2S表达水平呈正相关(r=0.460,P<0.05)。CCNB1高表达、UBE2S高表达脑胶质瘤患者术后中位生存时间均显著短于CCNB1低表达、UBE2S低表达患者(P<0.05)。COX多因素分析表明,组织低分化、CCNB1高表达、UBE2S高表达是影响脑胶质瘤患者不良预后的独立危险因素(P<0.05)。结论:CCNB1和UBE2S在脑胶质瘤组织中表达水平显著升高,与脑胶质瘤组织分化程度、瘤周水肿、浸润程度及术后生存时间有关,可能成为评定脑胶质瘤患者预后的临床指标。

Ube2s在小鼠卵泡发育和黄体形成过程中的表达研究

本研究旨在通过原位杂交、免疫组织化学和实时荧光定量PCR检测在小鼠性成熟、孕马血清促性腺激素(PMSG)诱导的卵泡发育、人绒毛膜促性腺激素(hCG)诱导的排卵以及黄体形成过程中,卵巢组织中泛素结合酶E2 S(Ube2s)的表达变化。结果表明:在不同日龄小鼠卵巢中,Ube2s在原始卵泡和初级卵泡的卵母细胞中表达强,在次级卵泡和有腔卵泡的卵母细胞中表达减弱;Ube2s在原始卵泡的颗粒细胞中有表达,在初级卵泡和次级卵泡的颗粒细胞中表达增强,在有腔卵泡的颗粒细胞表达减弱。给21日龄雌性小鼠注射PMSG诱导卵泡发育模型,并利用hCG诱导排卵模型,结果显示Ube2s的表达与不同日龄小鼠卵巢中Ube2s的表达规律一致,提示Ube2s可能与卵泡发育有关。在小鼠黄体形成与退化过程中,Ube2s在新生黄体中呈强表达,在退化黄体中表达减弱,提示Ube2s可能与黄体的形成与退化有关。综上,Ube2s可能在小鼠卵泡发育和黄体形成过程中发挥作用。

Akt1通过磷酸化泛素结合酶E2S增强胶质瘤放化疗抵抗的实验研究

目的 探讨Akt1增强胶质瘤放、化疗抵抗的机制.方法 通过免疫荧光实验检测正常星形细胞和4种恶性胶质瘤细胞（U87、U251、SF767以及U373）中泛素结合酶E2S（UBE2S）的表达情况;通过Western blot实验检测PTEN基因突变型和野生型胶质瘤细胞中UBE2S的表达差异;构建激活型Akt1载体,分别与UBE2S野生型或T152位点突变型载体共表达,观察PTEN/Akt信号通路对UBE2S的作用,以及UBE2S过表达后对非同源末端连接复合物的影响;采用流式细胞仪检测稳定敲低UBE2S的U87胶质瘤细胞对放、化疗的敏感性.结果 与正常星形细胞相比,胶质瘤细胞高表达UBE2S蛋白;PTEN突变型的胶质瘤细胞UBE2S的表达较野生型更稳定.构建激活型Akt1磷酸化UBE2S的T152位点,可促进UBE2S的稳定表达.UBE2S与Ku70、Ku80相互作用能促进Ku70的表达（P =0.009）.免疫印迹结果显示,敲低UBE2S的表达后,Ku70、Ku80和DNA-PKcs的表达量显著降低（P〈0.001）.流式细胞检测结果显示,UBE2S敲低可增强胶质瘤对放、化疗的敏感性（P〈0.001）.结论 UBE2S在恶性胶质瘤中高表达;Akt1可磷酸化UBE2S的T152位点,从而增强UBE2S的稳定性;敲低UBE2S能降低非同源末端连接复合物介导的DNA修复效率,从而增强胶质瘤细胞对放、化疗的敏感性.

泛素结合酶E2s在胆囊癌患者中的高表达及意义

目的探讨泛素结酶E2s（UBE2S）在胆囊癌中表达及临床意义。方法应用免疫组织化学检测UBE2S在85例胆囊癌、28例胆囊癌前病变及15例胆囊良性病变蜡块组织表达，以Western blot检测胆囊良恶性病变新鲜组织加以验证，并分析其临床意义。结果UBE2S在胆囊癌组织中表达显著高于胆囊癌前病变[染色指数（SI）：4．082±3．413比2．607±2．025，P=0．021]和良性病变（SI：4．082±3．413比2．067±1．335，P=0．001），在新鲜胆囊癌组织中表达亦高于良性病变（Western blot灰度值：0．734±0．181比0．197±0．099，P=0．002）。UBE2S表达与肿瘤分化程度（x^2=6．978，P=0．031）、肝转移（x^2=8．155，P=0．004）显著相关。UBE2S表达（P=0．024）和肿瘤分化程度（P=0．000）、Nevin分期（P=0．040）、R0切除（P=0．011）是影响胆囊癌患者预后的独立因素；UBE2S高表达胆囊癌患者生存期较短（P=0．011）。结论UBE2S高表达是胆囊癌患者不良预后的独立因素。