泛素结合酶E2T增强鼻咽癌细胞放疗敏感性的机制研究

目的 探讨泛素结合酶E2T(UBE2T)对鼻咽癌细胞放疗敏感性的影响及相关分子机制。方法 采用qRT-PCR检测鼻咽癌细胞CNE2及正常鼻咽上皮细胞NP69中UBE2T的表达水平。将UBE2T小干扰RNA序列(UBE2T-siRNA)及其阴性对照序列(NC-siRNA)转染至CNE2细胞,联合或不联合放射治疗,并分为Control组、NC-siRNA组、UBE2T-siRNA组、放疗组、NC-siRNA+放疗组、UBE2T-siRNA+放疗组。采用CCK-8检测各组细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡情况;Western blot检测Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达水平。结果 CNE2细胞中UBE2T mRNA表达水平高于NP69细胞(P<0.05);与Control组比较,NC-siRNA组细胞中UBE2T mRNA表达水平无明显变化(P>0.05),UBE2T-siRNA组细胞中UBE2T mRNA表达水平显著降低(P<0.05)。与Control组比较,放疗组、UBE2T-siRNA组细胞增殖活性均降低,细胞凋亡率均升高(P<0.05);与放疗组和UBE2T-siRNA组比较,UBE2T-siRNA+放疗组细胞增殖活性降低,细胞凋亡率升高(P<0.05)。与Control组比较,放疗组、UBE2T-siRNA组细胞中Wnt3α、β-catenin、c-myc蛋白表达均降低(P<0.05);与放疗组和UBE2T-siRNA组比较,UBE2T-siRNA+放疗组细胞中Wnt3α、β-catenin、c-myc蛋白表达均降低(P<0.05)。结论 UBE2T通过调控Wnt/β-catenin信号通路增强鼻咽癌细胞的放疗敏感性。

泛素结合酶E2T基因干扰影响人卵巢癌细胞株SKOV3增殖的作用与机制

目的观察泛素结合酶E2T(UBE2T)基因感染对人卵巢癌细胞株SKOV3增殖的影响,并探讨其机制。方法构建UBE2T⁃shRNA、携带UBE2T、NC⁃shRNA基因的慢病毒载体,将其转染至人卵巢癌细胞株SKOV3,分别记为沉默组、转染组、阴性对照组;并取未转染的人卵巢癌细胞株SKOV3,记为空白对照组,每组设置3个复孔,制成细胞悬液,细胞浓度均调整为1×105个/mL。培养72 h。检测细胞形态、增殖抑制率及AKT等相关蛋白表达。结果沉默组细胞显著减少、连接疏松且有形态改变;沉默组细胞增殖抑制率、G1期细胞占比均高于其余3组(P<0.05),S期和G2期细胞占比、UBE2T、AKT、Cyclin D1 mRNA及蛋白表达、p⁃AKT水平均低于其余3组(P<0.05),转染组细胞增殖抑制率、G1期细胞占比均低于阴性对照组与空白组(P<0.05),S期和G2期细胞占比、UBE2T、蛋白激酶B(AKT)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)mRNA及蛋白表达、磷酸化⁃AKT(p⁃AKT)水平均高于阴性对照组与空白组(P<0.05)。结论UBE2T表达下调可抑制人卵巢癌细胞株SKOV3增殖,而UBE2T基因过表达则可促进人卵巢癌细胞株SKOV3增殖。

胆囊癌患者胆囊癌组织泛素结合酶E2T蛋白表达及其临床意义探讨

目的探讨胆囊癌患者胆囊组织泛素结合酶E2T(UBE2T)蛋白表达及其临床意义。方法2015年1月~2017年12月收治的胆囊癌患者50例,手术后同时取癌组织和癌旁胆囊组织,另取良性疾病胆囊组织50例,采用Western blot法检测胆囊组织UBE2T蛋白相对表达水平,采用多因素Logistic回归模型分析影响生存的危险因素。结果胆囊癌组织UBE2T蛋白表达量为(2.9±0.4),显著高于癌旁组织(1.5±0.3,P<0.05)或正常胆囊组织(1.7±0.3,P<0.05);不同TNM肿瘤分期、浸润深度、淋巴结转移、远处转移和病理学分级癌组织UBE2T表达差异存在统计学意义(P<0.05);术后中位随访21.0个月,Logrank分析显示,31例UBE2T高表达和19例低表达胆囊癌患者中位生存时间分别为12.0个月和25.0个月(P<0.05);多元Logistic回归分析显示,TNM分期高[OR(95%CI)为1.9(1.5~2.4)]、UBE2T高表达[OR(95%CI)为2.5(2.1~2.9)]、肿瘤浸润程度高[OR(95%CI)为2.3(1.8~3.0)]、淋巴结转移程度高[OR(95%CI)为1.2(1.0~1.8)]、远处转移[OR(95%CI)为2.1(1.7~2.8)]和病理学分级高[OR(95%CI)为1.6(1.3~2.2)]是胆囊癌患者术后生存的危险因素(P<0.05)。结论胆囊癌患者胆囊组织UBE2T蛋白表达显著升高,可能与不良预后相关,有必要进行深入研究。

泛素结合酶E2T在消化系统肿瘤中的表达

目的探讨泛素结合酶E2T(UBE2T)在消化系统肿瘤中的表达及其临床意义。方法应用组织芯片技术结合免疫组织化学方法,检测并分析UBE2T在由37例恶性消化系统肿瘤组织及11例消化系统正常组织制成96个点的组织芯片中的表达情况。结果 UBE2T在消化系统恶性肿瘤的高表达率为86.5%(32/37),明显高于正常组织的9.1%(1/11),差异有统计学意义(P<0.001)。结论 UBE2T在消化系统恶性肿瘤组织中呈高表达,可能与消化系统肿瘤的发生相关。

敲减泛素结合酶E2T的表达抑制肺癌细胞A549生长、侵袭和裸鼠成瘤性

目的:探讨敲减泛素结合酶E2T(UBE2T)的表达对肺癌细胞A549生长、侵袭和裸鼠成瘤性的影响,初步阐明其作用机制。方法:靶向UBE2T基因的慢病毒载体(shRNA1、shRNA2、shRNA3)及阴性对照慢病毒载体(shRNA-NC)转染人非小细胞肺癌(NSCLC)A549细胞系,筛选干扰效果较好的shRNA3进行后续实验。CCK-8法、流式细胞术、Transwell小室法检测细胞的增殖、凋亡及侵袭能力,Western blot法检测相关蛋白表达。检测小鼠体内的成瘤质量,免疫组化法检测瘤体组织中Ki67、VEGF蛋白表达情况。结果:与shRNA-NC组相比,UBE2T-shRNA3组各时间点的细胞增殖率、穿膜细胞数及Ki67、VEGF、N-cad蛋白表达明显下降(P<0.05),细胞凋亡率、p21、cleaved cas3/cas3、cleaved cas9/cas9明显上升(P<0.05)。体内实验结果显示,与shRNA-NC组相比,UBE2T-shRNA3组小鼠的瘤体质量及Ki67、VEGF蛋白阳性表达率明显下降(P<0.05)。结论:敲减UBE2T的表达可抑制肺癌细胞A549的增殖、侵袭,促进细胞凋亡,抑制裸鼠成瘤。

泛素结合酶E2T 对卵巢癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的:探究沉默泛素结合酶E2T(UBE2T)对卵巢癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响。方法:实时荧光定量PCR检测UBE2T在人正常卵巢细胞系IOSE80和人卵巢癌细胞系HO8910和A2780中的表达;通过小干扰RNA技术对卵巢癌细胞进行si-UBE2T转染,Western blot检测转染效率。CCK8实验检测UBE2T对卵巢癌细胞增殖能力的影响;划痕愈合实验以及Transwell实验检测UBE2T对卵巢癌细胞迁移和侵袭的影响。结果:与IOSE80相比,HO8910和A2780细胞中UBE2TmRNA表达均升高(P<0.001);转染后,与对照组相比,si-UBE2T组的蛋白表达降低,细胞的增殖、迁移及侵袭能力也降低(P<0.05)。结论:沉默UBE2T能够抑制卵巢癌细胞增殖、迁移以及侵袭,UBE2T可能是卵巢癌治疗的潜在研究靶点。

UBE2T通过JAK-STAT通路促进甲状腺乳头状癌细胞增殖

目的:探讨泛素结合酶E2T(ubiquitin-binding enzyme E2T,UBE2T)在人甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcino-ma,PTC)中的表达情况及其对患者预后的影响,同时探讨UBE2T在PTC细胞中的功能,旨在识别其可能的调控机制,为未来PTC的靶向治疗策略提供理论依据。方法:采用癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库,系统分析UBE2T在PTC中的表达及其与患者预后的关系。通过Western blot技术检测UBE2T在甲状腺肿瘤组织和癌旁正常组织中的表达。在PTC细胞系(TPC-1、KTC-1)中进行UBE2T敲减实验,借助CCK-8、平板克隆、划痕和Transwell实验评估细胞增殖、迁移和侵袭能力,并通过Western blot检测相关蛋白水平的变化。结果:TCGA数据库生物信息学分析表明,PTC组织中UBE2T显著升高,且其表达与患者无疾病间隔、淋巴结转移相关(P<0.01)。UBE2T敲减导致TPC-1和KTC-1细胞增殖活力显著下降,同时抑制细胞迁移和侵袭,诱导STAT磷酸化下调。敲减UBE2T的细胞系加入STAT激活剂后,细胞增殖显著提高。结论:敲减UBE2T能抑制PTC细胞系TPC-1和KTC-1的增殖、迁移和侵袭,UBE2T通过调控JAK-STAT信号通路促进细胞增殖,提示UBE2T有可能成为PTC的治疗靶点。

泛素结合酶E2T对急性淋巴细胞白血病细胞糖皮质激素耐药的影响

目的探讨泛素结合酶E2T(ubiquitin-conjugating enzyme E2T,UBE2T)在急性淋巴细胞白血病细胞糖皮质激素耐药中的作用及其对泛素化介导的P53蛋白降解的影响。方法人急性淋巴细胞白血病细胞系糖皮质激素耐药株CEM-C1和糖皮质激素敏感株CEM-C7细胞,采用实时荧光定量PCR法检测2种细胞UBE2T、p53 mRNA相对表达量,采用Western blot法检测2种细胞UBE2T、P53蛋白相对表达量。对数生长期CEM-C1细胞分为空白组(不进行转染)、sh-NC组(转染sh-NC)、sh-UBE2T组(转染sh-UBE2T)、sh-UBE2T+sh-p53组(转染sh-UBE2T和sh-p53),转染48 h后采用实时荧光定量PCR法检测4组UBE2T、p53 mRNA相对表达量,采用Western blot法检测4组细胞UBE2T、P53蛋白相对表达量,采用CCK-8法检测4组细胞增殖率及地塞米松对CEM-C1细胞的半数抑制浓度,采用流式细胞术检测4组细胞凋亡率,采用Transwell实验检测4组迁移细胞数和侵袭细胞数;采用放线菌酮蛋白合成抑制实验检测sh-UBE2T组与sh-NC组细胞P53蛋白半衰期,采用免疫共沉淀实验检测sh-UBE2T组与sh-NC组细胞P53蛋白泛素化水平。结果CEM-C1细胞UBE2T mRNA和蛋白相对表达量(2.38±0.14、0.85±0.07)均高于CEM-C7细胞(1.00±0.03、0.43±0.02)(t=15.351,P=0.017;t=13.789,P=0.022),p53 mRNA和P53蛋白相对表达量(0.47±0.01、0.23±0.04)均低于CEM-C7细胞(1.00±0.02、0.61±0.06)(t=13.280,P=0.035;t=14.092,P=0.019)。sh-UBE2T+sh-p53组(0.33±0.04、0.28±0.01)、sh-UBE2T组(0.35±0.09、0.27±0.01)细胞UBE2T mRNA和蛋白相对表达量低于空白组(1.01±0.01、1.02±0.01)、sh-NC组(1.00±0.02、1.07±0.02)(P<0.05),sh-UBE2T+sh-p53组与sh-UBE2T组比较差异均无统计学意义(P>0.05);sh-UBE2T+sh-p53组细胞p53 mRNA(0.12±0.01)和P53蛋白(0.19±0.02)相对表达量均低于sh-UBE2T组(0.98±0.04、1.28±0.04)、空白组(1.00±0.01、0.25±0.01)、sh-NC组(1.00±0.03、0.26±0.02)(P<0.05);sh-UBE2T组细胞p53 mRNA相对表达量与空白组、sh-NC组比较差异均无统计学意义(P>0.05),P53蛋白相对表达量均高于空白组、sh-NC组(P>0.05);sh-UBE2T+sh-p53组、sh-UBE2T组不同浓度地塞米松下细胞增殖率、地塞米松对CEM-C1细胞的半数抑制浓度均低于空白组、sh-NC组(P<0.05),sh-UBE2T组低于sh-UBE2T+sh-p53组(P<0.05);sh-UBE2T+sh-p53组、sh-UBE2T组迁移细胞数、侵袭细胞数少于空白组、sh-NC组(P<0.05),sh-UBE2T组少于sh-UBE2T+sh-p53组(P<0.05);sh-UBE2T+sh-p53组、sh-UBE2T组细胞凋亡率高于空白组、sh-NC组(P<0.05),sh-UBE2T组高于sh-UBE2T+sh-p53组(P<0.05);以上指标比较空白组与sh-NC组比较差异均无统计学意义(P>0.05);sh-UBE2T组在放线菌酮处理CEM-C1细胞15、30、45 min时P53蛋白相对表达量均高于sh-NC组(P<0.05),P53泛素化水平(24.86±5.26)低于sh-NC组(154.42±12.45)(t=-16.603,P<0.001)。结论UBE2T通过介导P53蛋白泛素化和降解,促进糖皮质激素诱导的CEM-C1细胞增殖、迁移和侵袭,抑制细胞凋亡,从而促进CEM-C1细胞对糖皮质激素耐药。

泛素结合酶UBE2T基因在布鲁氏菌感染过程中的作用

[目的]探讨泛素结合酶E2T(UBE2T)在布鲁氏菌感染过程中的功能。[方法]构建UBE2T基因过表达载体pLVX-puro-UBE2T,对其进行PCR和EcoRⅠ/BamHⅠ双酶切验证,并将其转染小鼠巨噬细胞RAW264.7,利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测UBE2T基因过表达效果。设计并合成3条UBE2T基因沉默表达的siRNA(UBE2T-379-siRNA、UBE2T-599-siRNA和UBE2T-661-siRNA),将其转染小鼠巨噬细胞RAW264.7,利用qRT-PCR检测UBE2T基因沉默表达效果。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)试验,检测UBE2T沉默或过表达对RAW264.7细胞活性的影响。利用qRT-PCR,检测M5-90感染对RAW264.7细胞UBE2T基因相对表达量的影响,以及对过表达或沉默表达UBE2T基因的RAW264.7细胞中含pyrin结构域NOD样受体家族3(NLRP3)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶1(Caspase-1)基因相对表达量的影响。用布鲁氏菌M5-90菌株感染过表达和沉默UBE2T基因的RAW264.7细胞,用活菌计数法检测UBE2T沉默或过表达对RAW264.7细胞内布鲁氏菌增殖的影响,利用相应的试剂盒检测细胞乳酸脱氢酶(LDH)水平、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)活性及白细胞介素6(IL-6)、IL-18、IL-1β和γ-干扰素(IFN-γ)等细胞因子的水平。[结果]成功构建了UBE2T基因过表达载体pLVX-puro-UBE2T,过表达效果良好。3条siRNA中,UBE2T-661-siRNA的干扰效果最佳,其对UBE2T基因的沉默效率为84%。UBE2T沉默或过表达对RAW264.7细胞活性无影响。M5-90感染可提高RAW264.7细胞UBE2T的表达量;沉默UBE2T可提高M5-90介导的NLRP3和Caspase-1的表达,而过表达UBE2T会抑制M5-90介导的NLRP3表达,提高M5-90介导的Caspase-1表达。沉默表达UBE2T可抑制胞内M5-90的增殖,而过表达UBE2T可促进胞内M5-90的增殖。沉默表达UBE2T可抑制M5-90介导的LDH水平,提高Caspase-3活性及IFN-γ、IL-6和IL-1β水平;而过表达UBE2T可提高M5-90介导的LDH水平,抑制Caspase-3的活性及IFN-γ、IL-1β水平。[结论]泛素结合酶UBE2T对胞内布鲁氏菌增殖具有正调控作用。

干扰泛素结合酶E2T小干扰RNA对乳腺癌细胞增殖 凋亡及侵袭的影响

目的探讨干扰泛素结合酶E2T(UBE2T)表达对乳腺癌细胞增殖、凋亡及侵袭过程的影响,为乳腺癌治疗靶标提供理论依据。方法采用脂质体Lipofectamin 2000介导的方法将UBE2T小干扰RNA(UBE2T siRNA)转染乳腺癌细胞株MCF-7,通过用细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)法检测UBE2T沉默对MCF-7细胞增殖能力的影响,采用Annexin V/PI双染流式细胞术检测UBE2T沉默对细胞凋亡的影响,采用Transwell小室法检测UBE2T沉默对MCF-7细胞迁移及侵袭能力的影响,通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)及免疫印迹(Western-blot)法检测UBE2T及AKT/GSK3β/β-catenin通路相关蛋白表达变化。结果CCK-8实验显示,与空白组、UBE2T NC组相比,UBE2T siRNA组转染48 h后OD值显著降低UBE2T siRNA组细胞凋亡率显著升高,UBE2T siRNA组侵袭、迁移细胞数显著降低,增殖相关蛋白Ki-67、间质细胞标志蛋白Vimentin蛋白、AKT/GSK3β/β-catenin通路相关蛋白p-AKT/AKT、p-GSK3β/GSK3β、β-catenin蛋白表达显著降低,上皮细胞标志蛋白E-cadherin蛋白、促凋亡蛋白Bax表达显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论UBE2T-siRNA可降低乳腺癌细胞增殖、侵袭、迁移能力,增强其凋亡能力,可能通过抑制AKT/GSK3β/β-catenin活化实现。

泛素结合酶E2T对卵巢癌细胞增殖的影响

目的 观察泛素结合酶E2T(UBE2T)对人卵巢癌细胞株SKOV3增殖的影响,并探讨其机制。方法 构建UBE2T-shRNA和携带UBE2T基因的慢病毒载体,将其转染至经过培养传代的人卵巢癌细胞株SKOV3,筛选稳定株,分别记为下调组、上调组;另转染NC-shRNA阴性对照慢病毒载体至人卵巢癌细胞株SKOV3,记为阴性对照组;并取未转染的人卵巢癌细胞株SKOV3,记为空白对照组。培养72 h。噻唑蓝(MTT)法、流式细胞仪、反转录-实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)和蛋白质免疫印迹法(WB)分别检测细胞增殖抑制率、细胞周期、UBE2T及其下游相关基因和蛋白表达。结果 下调组细胞增殖抑制率、G1期细胞占比均高于其余3组(P<0.05),S期和G2期细胞占比、UBE2T、蛋白激酶B(AKT)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)mRNA及蛋白表达、p-AKT水平均低于其余3组(P<0.05),上调组细胞增殖抑制率、G1期细胞占比均低于阴性对照组与空白组(P<0.05),S期和G2期细胞占比、UBE2T、AKT、Cyclin D1 mRNA及蛋白表达、p-AKT水平均高于阴性对照组与空白组(P<0.05)。结论 UBE2T基因下调可抑制人卵巢癌细胞株SKOV3增殖。

UBE2T在子宫内膜癌中的表达及临床意义

目的研究泛素结合酶E2T(ubiquitin binding enzyme E2T,UBE2T)在子宫内膜癌组织中表达及临床意义。方法通过TCGA数据库分析UBE2T在正常子宫内膜组织与子宫内膜癌组织中的表达情况;采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)技术检测58例子宫内膜癌组织和30例正常子宫内膜组织中UBE2T mRNA的表达情况。选取105例子宫内膜癌组织、35例不典型增生子宫内膜组织以及35例正常子宫内膜组织中,采用免疫组织化学法检测各组UBE2T蛋白的表达情况,并分析UBE2T表达与患者临床病理特征的关系,采用Kaplan-Meier法分析UBE2T表达对子宫内膜癌患者预后的影响。结果TCGA数据库显示,UBE2T mRNA在不同子宫内膜组织中的表达比较,差异有统计学意义;在配对的子宫内膜癌组织及其癌旁组织中比较,差异有统计学意义。子宫内膜癌组织中UBE2T mRNA表达水平明显高于正常子宫内膜组织。UBE2T蛋白在子宫内膜癌组织中的阳性表达率高于正常子宫内膜组织及不典型增生子宫内膜组织;UBE2T在子宫内膜癌组织中的阳性表达在国际妇产科联盟(International Federation of Gynecology and Obstetrics,FIGO)分期、组织分化程度方面比较,差异有统计学意义(P<0.05)。Kaplan-Meier生存分析结果显示,UBE2T阳性表达患者的平均生存时间短于阴性表达患者。COX回归分析结果显示,FIGO分期、淋巴结转移及UBE2T的表达是子宫内膜癌患者预后的影响因素,其中FIGO分期、UBE2T的表达是影响子宫内膜癌预后的独立危险因素。结论子宫内膜癌组织中UBE2T表达水平增高,与子宫内膜癌的发生、发展和不良预后密切有关,有可能成为子宫内膜癌的辅助治疗。

利用GEO数据集分析UBE2T在肺癌中的表达及临床意义

目的探究UBE2T基因在肺癌中的表达情况及其与肺癌的临床病理特征和预后的关系。方法搜索NCBI的GEO数据库中的肺癌公共数据集,下载肺癌组织中的UBE2T表达数据和临床病理信息。分析UBE2T的表达与肺癌临床病理特征(年龄、T分期、N分期、M分期和病理分型)和复发、预后的关系。运用GSEA方法分析受UBE2T调控的基因。结果UBE2T在肺癌组织的表达水平高于正常组织的表达水平,差异有统计学意义(肺癌组织表达水平1.222±0.1214,正常组织表达水平-1.645±0.0783,P<0.05);肺癌组织UBE2T的表达与T分期、N分期、病理分型和复发有关(P<0.05),与性别、年龄和M分期无关(P>0.05)。UBE2T高表达组的5年总生存率和5年无病生存率分别为32.672%和27.513%,分别低于低表达组的66.767%和62.019%,差异有统计学意义(P<0.05)。GSEA结果显示UBE2T高表达样本富集了MYC信号通路、DNA修复因子、有丝分裂纺锤体、G2M检查点、mTORC1复合物、E2F转录因子和有丝分裂相关的基因集。结论UBE2T在肺癌组织中高表达,且与肺癌的多个临床病理特征有关,有潜力作为肺癌判断预后的标志物和治疗的靶向分子。

UBE2T在原发性肝癌中的表达及临床意义

目的分析泛素结合酶E2T(Ubiquitin-conjugating enzyme E2T,UBE2T)在原发性肝癌中的表达及其与肝癌患者临床病理学参数和预后的关系。方法从癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库下载正常肝组织和肝癌组织中UBE2T基因mRNA二代测序数据及临床病理资料,分析UBE2T在癌组织和正常组织中的表达差异,阐明UBE2T mRNA表达水平与肝癌患者临床病理学参数的相关关系。采用Kaplan-Meier进行预后分析,利用Cox比列风险回归模型研究与肝癌患者预后相关的因素,并根据基因集富集分析(Gene set enrichment analysis,GSEA)结果预测UBE2T参与肝癌发生、发展的可能调控通路。结果 UBE2T mRNA在肝癌组织中表达明显高于癌旁组织(P<0.01);UBE2T高表达与Grade分级、TNM分期、有无血管侵袭等密切相关(P<0.01),且提示肝癌患者的预后不良;TNM分期、血管侵袭、UBE2T表达水平均是影响肝癌患者预后的独立危险因素。结论 UBE2T的高表达与肝癌患者的临床病理因素及预后显著相关,可以作为潜在的判断肝癌患者预后的标志物和肿瘤治疗的靶标。

UBE2T基因表达对鼻咽癌细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响

目的探讨泛素结合酶E2T(UBE2T)基因表达对鼻咽癌细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响。方法选取鼻咽癌细胞系5-8F细胞,随机分为对照组、空白转染组和si-UBE2T组,其中空白转染组细胞转染空白载体,si-UBE2T组细胞转染UBE2T特异性siRNA载体,采用MTT法检测各组细胞增殖情况,采用Transwell迁移侵袭试验检测各组细胞迁移和侵袭,Western blotting法检测各组细胞UBE2T蛋白表达。结果 si-UBE2T组UBE2T蛋白相对表达量为(0. 354±0. 051),明显低于对照组和空白转染组(P <0. 05);si-UBE2T组培养第1 d、3 d和6 d吸光度值均低于对照组和空白转染组(P <0. 05);对照组和空白转染组培养第1d、3d和6d吸光度值比较差异无统计学意义(P> 0. 05);si-UBE2T组细胞迁移率和穿膜细胞数分别为(0. 322±0. 040)%和(85. 12±12. 06)个,明显低于对照组和空白转染组(P <0. 05);对照组和空白转染组UBE2T蛋白相对表达量、细胞迁移率和穿膜细胞数比较差异无统计学意义(P> 0. 05)。结论 UBE2T基因表达可促进鼻咽癌5-8F细胞增殖、侵袭及转移,有望成为鼻咽癌分支靶向治疗的靶标。

UBE2T对肝癌细胞增殖、克隆形成及细胞周期的影响及机制研究

目的 通过检测肝癌组织中泛素结合酶E 2T(ubiquitin binding enzyme E2T, UBE2T)表达,探究其对肝癌细胞增殖、克隆形成及细胞周期的影响及其潜在分子机制。方法 采用实时荧光定量PCR实验(qRT-PCR)检测50例临床肝癌组织及其癌旁正常组织中UBE2T相对表达量;通过转染靶向UBE2T基因的shRNA干扰慢病毒载体GV248-shUBE2T-1,GV248-shUBE2T-2及阴性对照GV248-NC至肝癌HepG2细胞,构建UBE2T基因稳定干扰细胞系,并验证其转染敲降效率;采用细胞增殖实验、克隆形成实验及细胞周期实验分别检测敲低UBE2T表达对肝癌细胞增殖、克隆形成及细胞周期的影响;蛋白免疫印迹实验检测PI3K/AKT信号通路关键靶基因PI3K和AKT磷酸化水平。结果 临床50例肝癌组织中UBE2T相对表达量为2.012±0.489,显著高于癌旁正常组织的1.102±0.533,差异有统计学意义(t=8.896,P<0.01)。与阴性对照组(1.000±0.001)相比,转染干扰慢病毒载体的shUBE2T-1组(0.201±0.003)和shUBE2T-2组(0.246±0.005)中UBE2T表达明显降低,差异有统计学意义(F=518.800,P <0.001)。shUBE2T-1组(0.392±0.028)和shUBE2T-2组(0.368±0.026)细胞增殖速率明显低于对照组(0.519±0.031),差异有统计学意义(F=24.477,P=0.001);shUBE2T-1组(5.018±0.521)和shUBE2T-2组(5.906±0.485)细胞克隆形成速率明显低于对照组(9.312±0.479),差异有统计学意义(F=62.819,P<0.001),并将细胞周期显著阻滞在G1期。shUBE2T-1组和shUBE2T-2组细胞中PI3K磷酸化水平为0.285±0.030和0.267±0.029,AKT磷酸化水平为0.454±0.037和0.411±0.039,均分别低于对照组的1.005±0.026和1.004±0.031,差异有统计学意义(F=659.930, 255.517,均P<0.001),但其本底表达保持不变。结论 肝癌中UBE2T显著高表达,其可能通过诱导PI3K,AKT的磷酸化进而参与调控PI3K-AKT信号通路来促进肝癌细胞增殖。

UBE2C和UBE2T与胰腺癌患者预后及免疫细胞浸润的关系

目的探讨泛素结合酶E2C(UBE2C)和E2T(UBE2T)与胰腺癌患者预后及免疫细胞浸润的关系。方法检索Oncomine、GEPIA2.0、EMBL-EBI数据库分析两基因在胰腺癌中的表达情况,利用GEPIA、Kaplan-Meierplotter数据库探索两基因的表达与胰腺癌患者预后的相关性。利用Oncomine及cBioPortal数据库筛选共表达基因,使用FunRich软件进行富集分析。利用String数据库和Cytoscape软件综合分析与两基因相互作用的蛋白及调控网络。使用Cytoscape筛选核心(Hub)基因,并利用GEPIA进行预后分析。使用TIMER数据库分析两基因的表达与免疫细胞浸润的相关性。结果UBE2C和UBE2T在胰腺癌中表达上调,高表达两基因的患者总生存期和无病生存期显著缩短(P均<0.05)。两基因的表达与患者的分期、分级、巨噬细胞浸润等有关(P均<0.05)。在胰腺癌中UBE2C与UBE2T的表达显著相关(P<0.05),与两基因共表达的基因主要富集于丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶激活功能;主要参与细胞周期、纺锤体组装过程;主要位于染色体结构中;在细胞周期、Aurora-B信号通路中富集。筛选的10个Hub基因为PBK、CEP55、BIRC5、MELK、CDK1、NUSAP1、TPX2、BUB1、TOP2A和BUB1B,与胰腺癌患者预后相关(P<0.05)。两基因的表达与巨噬细胞浸润呈负相关关系(P<0.05)。结论UBE2C和UBE2T与胰腺癌患者的预后及多种免疫细胞如T细胞、巨噬细胞的浸润有关,可能通过调控细胞周期、DNA复制过程进而调控胰腺癌的进程。

肺腺癌放射敏感性受泛素结合酶2T抑制作用的研究

目的探讨泛素结合酶2T(UBE2T)对肺腺癌放射敏感性的影响及其可能的机制。方法收集2019年3月至2021年12月在遵义医科大学第二附属医院经病理证实, 且经单纯放射治疗的各期肺腺癌患者45例, 按实体肿瘤疗效评价(RECIST)1.1标准进行疗效评价, 分为放疗敏感组(25例)、放疗抵抗组(20例), 前者为完全缓解+部分缓解, 后者为疾病稳定+疾病进展。免疫组化(IHC)检测通过染色强度和阳性细胞数计分, 结合卡方检验分析患者石蜡标本UBE2T表达水平与放射敏感性间的相关性。利用人肺腺癌细胞, 构建慢病毒UBE2T干扰(UBE2Tsh)的A549细胞和UBE2T过表达的SPC-A-1细胞, 行放射及克隆形成实验检测细胞的存活分数, 多靶单击模型拟合生存曲线。免疫荧光技术检测DNA双链损伤(DSB)标记物γH2AX聚焦点水平(γH2AX聚焦点数/单个细胞)。蛋白质印迹法检测UBE2T、γH2AX、Rad51蛋白表达。流式细胞术检测细胞周期变化和凋亡率。二分类变量资料统计采用Fisher’’s精确概率法, 计量资料采用t检验。结果 UBE2T高表达同肺腺癌患者放疗抵抗相关(P<0.05)。慢病毒UBE2T干扰提高A549细胞的放射敏感性, 放射增敏比(SER)为1.795, UBE2T过表达降低SPC-A-1细胞的放射敏感性, SER为0.293。UBE2Tsh A549细胞照射后细胞核内γH2AX聚焦点数显著增加(P<0.01), γH2AX蛋白表达量增加(P<0.01), Rad51蛋白表达量降低(P<0.001), UBE2T过表达SPC-A-1细胞γH2AX蛋白表达量降低(P<0.05), Rad51蛋白表达量增加(P<0.001)。UBE2Tsh A549细胞照射后G2期细胞占比减少(P<0.01), 细胞凋亡增加(P<0.001)。结论 UBE2T可能通过增强肺腺癌细胞放疗所致DNA双链损伤修复, 诱导细胞周期G2期阻滞, 减少细胞凋亡介导放疗抵抗。

基于TCGA数据乳腺癌组织UBE2T表达临床意义分析

目的既往研究发现,泛素结合酶E2T(ubiquitin-conjugating enzyme E2T,UBE2T)在多种肿瘤中表达升高,然而UBE2T在乳腺癌中是否存在高表达及意义尚不清楚。本研究探讨UBE2T表达水平在乳腺癌中的临床意义和可能的机制。方法从癌症基因组图谱(the cancer genome atlas,TCGA)数据库下载正常乳腺组织和乳腺癌组织中UBE2T基因mRNA二代测序数据及临床信息资料,分析UBE2T mRNA表达水平与乳腺癌临床病理学参数的相关性及对预后的影响。采用Cox回归多因素分析探讨影响乳腺癌患者预后的因素,采用基因集富集分析(gene set enrichment analysis,GSEA)方法预测UBE2T可能的调控通路。结果 UBE2T mRNA在乳腺癌组织中表达量为9.28~3 963.54,中位374.18,显著高于正常乳腺组织中UBE2T表达量8.54~216.13,中位40.44,差异有统计学意义(P<0.001),而且UBE2T表达水平与乳腺癌患者年龄、分子分型、T分期、TNM分期、雌激素受体(estrogen receptor,ER)、孕激素受体(progesterone receptor,PR)和人表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor 2,HER2)状态以及病理类型存在显著相关,均P<0.05。进一步分析发现,UBE2T低表达的患者生存预后优于UBE2T高表达的患者,χ~2=7.490,P=0.006。Cox多因素分析结果表明,年龄、分子分型、N分期、M分期和UBE2T表达水平等均是影响乳腺癌患者预后的独立预后因素,P<0.05。GSEA分析表明,UBE2T低表达的组织中存在RIGGINS_TAMOXIFEN_RESISTANCE_DN信号通路(FDR=0.199,P<0.001)和ERB2_UP.V1_DN路通(FDR=0.235,P<0.001)相关基因富集。结论乳腺癌组织中存在UBE2T mRNA水平表达上调,而且UBE2T的表达水平与患者临床病理因素显著相关,其高表达是乳腺癌预后不良因素,其可作为预后判断的分子标记,是潜在的治疗靶点。

沉默UBE2T基因表达对A549细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭能力的影响

目的探讨沉默泛素结合酶E2T(UBE2T)基因表达对A549细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭等生物学行为的影响。方法体外培养A549细胞,分别构建三组shRNA-UBE2T质粒载体(UBE2T-shRNA1组、UBE2TshRNA2组和UBE2T-shRNA3组)以及shRNA-NC(shRNA-NC组),并以脂质体转染法转染A549细胞,以转染空载体的细胞作为对照组。采用逆转录–聚合酶链反应(RT-PCR)法检测转染效率;使用克隆形成实验、流式细胞术、Transwell实验、划痕实验检测沉默UBE2T表达对A549细胞增殖、凋亡、侵袭以及迁移等生物学行为的影响;使用蛋白印迹(Western blot)检测A549细胞增殖、凋亡相关蛋白表达及PI3K/AKT信号通路蛋白表达。结果转染后,UBE2T-shRNA1组、UBE2T-shRNA2组和UBE2T-shRNA三组UBE2T mRNA表达水平明显下调(均P<0.05),且以UBE2T-shRNA3组下调最多(P<0.05)。与对照组及shRNA-NC组比较,UBE2T-shRNA3组克隆形成率、A549细胞侵袭数、划痕愈合率,Ki67蛋白表达、PCNA蛋白表达及p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT比值均显著降低(均P<0.05),A549细胞凋亡率及Bax/Bcl-2、Cleaved caspase-3/Caspase-3比值显著增加(均P<0.05)。对照组与shRNA-NC组上述各指标比较,差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论shRNA干扰UBE2T构建稳定低表达UBE2T的A549细胞模型可靠,UBE2T表达下调可以促进A549细胞凋亡,并抑制其增殖、侵袭和转移能力。其机制可能与抑制PI3K/AKT信号通路激活相关。