泛素结合酶E2T基因干扰影响人卵巢癌细胞株SKOV3增殖的作用与机制

目的观察泛素结合酶E2T(UBE2T)基因感染对人卵巢癌细胞株SKOV3增殖的影响,并探讨其机制。方法构建UBE2T⁃shRNA、携带UBE2T、NC⁃shRNA基因的慢病毒载体,将其转染至人卵巢癌细胞株SKOV3,分别记为沉默组、转染组、阴性对照组;并取未转染的人卵巢癌细胞株SKOV3,记为空白对照组,每组设置3个复孔,制成细胞悬液,细胞浓度均调整为1×105个/mL。培养72 h。检测细胞形态、增殖抑制率及AKT等相关蛋白表达。结果沉默组细胞显著减少、连接疏松且有形态改变;沉默组细胞增殖抑制率、G1期细胞占比均高于其余3组(P<0.05),S期和G2期细胞占比、UBE2T、AKT、Cyclin D1 mRNA及蛋白表达、p⁃AKT水平均低于其余3组(P<0.05),转染组细胞增殖抑制率、G1期细胞占比均低于阴性对照组与空白组(P<0.05),S期和G2期细胞占比、UBE2T、蛋白激酶B(AKT)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)mRNA及蛋白表达、磷酸化⁃AKT(p⁃AKT)水平均高于阴性对照组与空白组(P<0.05)。结论UBE2T表达下调可抑制人卵巢癌细胞株SKOV3增殖,而UBE2T基因过表达则可促进人卵巢癌细胞株SKOV3增殖。

泛素结合酶UBE2T基因在布鲁氏菌感染过程中的作用

[目的]探讨泛素结合酶E2T(UBE2T)在布鲁氏菌感染过程中的功能。[方法]构建UBE2T基因过表达载体pLVX-puro-UBE2T,对其进行PCR和EcoRⅠ/BamHⅠ双酶切验证,并将其转染小鼠巨噬细胞RAW264.7,利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测UBE2T基因过表达效果。设计并合成3条UBE2T基因沉默表达的siRNA(UBE2T-379-siRNA、UBE2T-599-siRNA和UBE2T-661-siRNA),将其转染小鼠巨噬细胞RAW264.7,利用qRT-PCR检测UBE2T基因沉默表达效果。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)试验,检测UBE2T沉默或过表达对RAW264.7细胞活性的影响。利用qRT-PCR,检测M5-90感染对RAW264.7细胞UBE2T基因相对表达量的影响,以及对过表达或沉默表达UBE2T基因的RAW264.7细胞中含pyrin结构域NOD样受体家族3(NLRP3)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶1(Caspase-1)基因相对表达量的影响。用布鲁氏菌M5-90菌株感染过表达和沉默UBE2T基因的RAW264.7细胞,用活菌计数法检测UBE2T沉默或过表达对RAW264.7细胞内布鲁氏菌增殖的影响,利用相应的试剂盒检测细胞乳酸脱氢酶(LDH)水平、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)活性及白细胞介素6(IL-6)、IL-18、IL-1β和γ-干扰素(IFN-γ)等细胞因子的水平。[结果]成功构建了UBE2T基因过表达载体pLVX-puro-UBE2T,过表达效果良好。3条siRNA中,UBE2T-661-siRNA的干扰效果最佳,其对UBE2T基因的沉默效率为84%。UBE2T沉默或过表达对RAW264.7细胞活性无影响。M5-90感染可提高RAW264.7细胞UBE2T的表达量;沉默UBE2T可提高M5-90介导的NLRP3和Caspase-1的表达,而过表达UBE2T会抑制M5-90介导的NLRP3表达,提高M5-90介导的Caspase-1表达。沉默表达UBE2T可抑制胞内M5-90的增殖,而过表达UBE2T可促进胞内M5-90的增殖。沉默表达UBE2T可抑制M5-90介导的LDH水平,提高Caspase-3活性及IFN-γ、IL-6和IL-1β水平;而过表达UBE2T可提高M5-90介导的LDH水平,抑制Caspase-3的活性及IFN-γ、IL-1β水平。[结论]泛素结合酶UBE2T对胞内布鲁氏菌增殖具有正调控作用。

泛素结合酶E2T增强鼻咽癌细胞放疗敏感性的机制研究

目的 探讨泛素结合酶E2T(UBE2T)对鼻咽癌细胞放疗敏感性的影响及相关分子机制。方法 采用qRT-PCR检测鼻咽癌细胞CNE2及正常鼻咽上皮细胞NP69中UBE2T的表达水平。将UBE2T小干扰RNA序列(UBE2T-siRNA)及其阴性对照序列(NC-siRNA)转染至CNE2细胞,联合或不联合放射治疗,并分为Control组、NC-siRNA组、UBE2T-siRNA组、放疗组、NC-siRNA+放疗组、UBE2T-siRNA+放疗组。采用CCK-8检测各组细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡情况;Western blot检测Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达水平。结果 CNE2细胞中UBE2T mRNA表达水平高于NP69细胞(P<0.05);与Control组比较,NC-siRNA组细胞中UBE2T mRNA表达水平无明显变化(P>0.05),UBE2T-siRNA组细胞中UBE2T mRNA表达水平显著降低(P<0.05)。与Control组比较,放疗组、UBE2T-siRNA组细胞增殖活性均降低,细胞凋亡率均升高(P<0.05);与放疗组和UBE2T-siRNA组比较,UBE2T-siRNA+放疗组细胞增殖活性降低,细胞凋亡率升高(P<0.05)。与Control组比较,放疗组、UBE2T-siRNA组细胞中Wnt3α、β-catenin、c-myc蛋白表达均降低(P<0.05);与放疗组和UBE2T-siRNA组比较,UBE2T-siRNA+放疗组细胞中Wnt3α、β-catenin、c-myc蛋白表达均降低(P<0.05)。结论 UBE2T通过调控Wnt/β-catenin信号通路增强鼻咽癌细胞的放疗敏感性。

喉鳞状细胞癌中泛素结合酶E2C、胞浆磷蛋白-1表达与预后相关性

目的探讨泛素结合酶E2C(UBE2C)、胞浆磷蛋白-1(STMN1)在喉鳞状细胞癌(简称喉鳞癌)中的表达水平及与预后的相关性。方法选取2015年2月至2017年2月在该院进行手术治疗中取得的97例喉鳞癌组织标本作为喉鳞癌组,另外选取对应的癌旁组织标本作为癌旁组。采用免疫组化法检测UBE2C和STMN1在不同组织标本中的表达情况;通过χ^(2)检验分析UBE2C、STMN1表达与喉鳞癌患者临床病理特征的关系;采用多因素Cox回归分析影响喉鳞癌患者预后的相关因素。结果喉鳞癌组UBE2C阳性率高于癌旁组,差异有统计学意义(P<0.05);喉鳞癌组STMN1阳性率高于癌旁组,差异有统计学意义(P<0.05)。临床分期为Ⅲ~Ⅳ期、T分期为T_(3)~T_(4)期、有淋巴结转移的喉鳞癌患者UBE2C、STMN1阳性率均高于临床分期为Ⅰ~Ⅱ期、T分期为T_(1)~T_(2)期、无淋巴结转移的喉鳞癌患者(P<0.05)。UBE2C阴性的喉鳞癌患者5年生存率明显高于UBE2C阳性的喉鳞癌患者,差异有统计学意义(P<0.05);STMN1阴性的喉鳞癌患者5年生存率明显高于STMN1阳性的喉鳞癌患者,差异有统计学意义(P<0.05)。单因素分析结果显示,临床分期为Ⅰ~Ⅱ期、无淋巴结转移、UBE2C阴性、STMN1阴性的喉鳞癌患者5年生存率明显高于临床分期分期为Ⅲ~Ⅳ期、有淋巴结转移、UBE2C阳性、STMN1阳性的喉鳞癌患者(P<0.05)。多因素Cox回归分析结果显示,临床分期为Ⅲ~Ⅳ期、有淋巴结转移、UBE2C阳性、STMN1阳性表达是喉鳞癌患者预后的危险因素(P<0.05)。结论UBE2C、STMN1在喉鳞癌患者中主要呈阳性表达,且与喉鳞癌患者预后密切有关,有望成为喉鳞状细胞癌预后评估的指标。

胆囊癌患者胆囊癌组织泛素结合酶E2T蛋白表达及其临床意义探讨

目的探讨胆囊癌患者胆囊组织泛素结合酶E2T(UBE2T)蛋白表达及其临床意义。方法2015年1月~2017年12月收治的胆囊癌患者50例,手术后同时取癌组织和癌旁胆囊组织,另取良性疾病胆囊组织50例,采用Western blot法检测胆囊组织UBE2T蛋白相对表达水平,采用多因素Logistic回归模型分析影响生存的危险因素。结果胆囊癌组织UBE2T蛋白表达量为(2.9±0.4),显著高于癌旁组织(1.5±0.3,P<0.05)或正常胆囊组织(1.7±0.3,P<0.05);不同TNM肿瘤分期、浸润深度、淋巴结转移、远处转移和病理学分级癌组织UBE2T表达差异存在统计学意义(P<0.05);术后中位随访21.0个月,Logrank分析显示,31例UBE2T高表达和19例低表达胆囊癌患者中位生存时间分别为12.0个月和25.0个月(P<0.05);多元Logistic回归分析显示,TNM分期高[OR(95%CI)为1.9(1.5~2.4)]、UBE2T高表达[OR(95%CI)为2.5(2.1~2.9)]、肿瘤浸润程度高[OR(95%CI)为2.3(1.8~3.0)]、淋巴结转移程度高[OR(95%CI)为1.2(1.0~1.8)]、远处转移[OR(95%CI)为2.1(1.7~2.8)]和病理学分级高[OR(95%CI)为1.6(1.3~2.2)]是胆囊癌患者术后生存的危险因素(P<0.05)。结论胆囊癌患者胆囊组织UBE2T蛋白表达显著升高,可能与不良预后相关,有必要进行深入研究。

泛素结合酶E2T在消化系统肿瘤中的表达

目的探讨泛素结合酶E2T(UBE2T)在消化系统肿瘤中的表达及其临床意义。方法应用组织芯片技术结合免疫组织化学方法,检测并分析UBE2T在由37例恶性消化系统肿瘤组织及11例消化系统正常组织制成96个点的组织芯片中的表达情况。结果 UBE2T在消化系统恶性肿瘤的高表达率为86.5%(32/37),明显高于正常组织的9.1%(1/11),差异有统计学意义(P<0.001)。结论 UBE2T在消化系统恶性肿瘤组织中呈高表达,可能与消化系统肿瘤的发生相关。

泛素结合酶E2变体1与恶性肿瘤发生及转移的研究进展

泛素结合酶E2变体1(ubiquitin-conjugating enzyme E2 variant 1,Ube2v1)属于泛素结合酶E2的一种变体蛋白(Ube2v),Ube2v1主要参与调控炎症及癌症的发生。目前有关Ube2v1的研究涉及多种肿瘤,多与肿瘤预后相关。有望成为肿瘤治疗的潜在靶点。在此就近年来Ube2v1在恶性肿瘤方面的研究进展作一综述。

敲减泛素结合酶E2T的表达抑制肺癌细胞A549生长、侵袭和裸鼠成瘤性

目的:探讨敲减泛素结合酶E2T(UBE2T)的表达对肺癌细胞A549生长、侵袭和裸鼠成瘤性的影响,初步阐明其作用机制。方法:靶向UBE2T基因的慢病毒载体(shRNA1、shRNA2、shRNA3)及阴性对照慢病毒载体(shRNA-NC)转染人非小细胞肺癌(NSCLC)A549细胞系,筛选干扰效果较好的shRNA3进行后续实验。CCK-8法、流式细胞术、Transwell小室法检测细胞的增殖、凋亡及侵袭能力,Western blot法检测相关蛋白表达。检测小鼠体内的成瘤质量,免疫组化法检测瘤体组织中Ki67、VEGF蛋白表达情况。结果:与shRNA-NC组相比,UBE2T-shRNA3组各时间点的细胞增殖率、穿膜细胞数及Ki67、VEGF、N-cad蛋白表达明显下降(P<0.05),细胞凋亡率、p21、cleaved cas3/cas3、cleaved cas9/cas9明显上升(P<0.05)。体内实验结果显示,与shRNA-NC组相比,UBE2T-shRNA3组小鼠的瘤体质量及Ki67、VEGF蛋白阳性表达率明显下降(P<0.05)。结论:敲减UBE2T的表达可抑制肺癌细胞A549的增殖、侵袭,促进细胞凋亡,抑制裸鼠成瘤。

泛素偶联酶E2C及非转移细胞基因2与乳腺癌临床病理特征关系及其在预后评估中的临床价值

目的探讨乳腺癌病人组织中人类泛素偶联酶E2C(UBE2C)及非转移细胞基因2(NME2)的表达,并分析其作为乳腺癌预后评估模型的临床应用价值。方法通过基因表达谱数据动态分析(GEPIA)在线网站分析1085例乳腺癌组织和291例正常对照组织中UBE2C、NME2表达;利用Kaplan-Meier Plotter在线网站分析UBE2C、NME2表达与乳腺癌病人(1070例)生存情况。选取2018年1月~2019年12月本院127例乳腺癌病人为研究对象。检测组织中UBE2C、NME2水平,并分析与乳腺癌病人临床病理特征的关系;采用多因素Cox回归模型对乳腺癌不良预后的危险因素进行分析;采用受试者工作特征曲线评估模型对乳腺癌不良预后的诊断效能。结果GEPIA在线网站数据提示,乳腺癌组织中UBE2C、NME2蛋白表达水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);生存曲线分析显示,UBE2C、NME2表达水平增加,病人生存率降低(Logrank P分别为0.029,0.013)。乳腺癌组织中UBE2C、NME2阳性表达率在不同淋巴结转移、临床分期以及病理分级的病人中进行比较,差异有统计学意义(χ^(2)=7.826,4.116,5.460,P=0.005,0.042,0.019;χ^(2)=4.400,6.211,11.63,P=0.036,0.013,0.001);回归模型分析显示,淋巴结转移、临床分期Ⅲ~Ⅳ期、病理分级G3级及UBE2C阳性表达、NME2阳性表达是乳腺癌病人不良预后的危险因素(P=0.031,0.018,0.016,0.019,0.001),由此构建模型组曲线下面积(AUC)0.835,灵敏度为0.7403,特异度为0.9412;验证组AUC为0.826,灵敏度为0.8800,特异度为0.8400。结论乳腺癌病人组织中UBE2C、NME2升高,与淋巴结转移、临床分期、病理分级及乳腺癌不良预后密切相关。由此构建的预警模型对预测乳腺癌不良预后具有重要的临床价值。

UBE2T通过JAK-STAT通路促进甲状腺乳头状癌细胞增殖

目的:探讨泛素结合酶E2T(ubiquitin-binding enzyme E2T,UBE2T)在人甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcino-ma,PTC)中的表达情况及其对患者预后的影响,同时探讨UBE2T在PTC细胞中的功能,旨在识别其可能的调控机制,为未来PTC的靶向治疗策略提供理论依据。方法:采用癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库,系统分析UBE2T在PTC中的表达及其与患者预后的关系。通过Western blot技术检测UBE2T在甲状腺肿瘤组织和癌旁正常组织中的表达。在PTC细胞系(TPC-1、KTC-1)中进行UBE2T敲减实验,借助CCK-8、平板克隆、划痕和Transwell实验评估细胞增殖、迁移和侵袭能力,并通过Western blot检测相关蛋白水平的变化。结果:TCGA数据库生物信息学分析表明,PTC组织中UBE2T显著升高,且其表达与患者无疾病间隔、淋巴结转移相关(P<0.01)。UBE2T敲减导致TPC-1和KTC-1细胞增殖活力显著下降,同时抑制细胞迁移和侵袭,诱导STAT磷酸化下调。敲减UBE2T的细胞系加入STAT激活剂后,细胞增殖显著提高。结论:敲减UBE2T能抑制PTC细胞系TPC-1和KTC-1的增殖、迁移和侵袭,UBE2T通过调控JAK-STAT信号通路促进细胞增殖,提示UBE2T有可能成为PTC的治疗靶点。

UBE2T通过调节性T细胞诱导肝细胞癌的放疗抵抗

目的 探索泛素结合酶2T(UBE2T)对肝细胞癌放疗敏感性的影响及机制。方法 采用空白对照载体或过表达UBE2T慢病毒载体转染小鼠Hepa1-6肝癌细胞建立对照组(LV-Control)和过表达组(LV-UBE2T),qPCR以及Western blotting检测上述细胞UBE2T表达情况;对两组细胞进行射线照射(IR)处理,克隆形成实验检测UBE2T过表达对Hepa1-6肝癌细胞放疗敏感性影响;分别在裸鼠和C57BL/6小鼠皮下注射上述细胞建立肝癌皮下荷瘤小鼠模型,对皮下瘤予IR处理,建立LV-Control组、LVControl+IR组、LV-UBE2T组和LV-UBE2T+IR组,5~6只/组,观察皮下瘤生长速度及体积。通过CIBERSORT算法分析肝癌免疫细胞浸润情况与UBE2T表达量的关系。流式细胞术检测上述4组小鼠的肝癌中CD4+T细胞以及调节性T细胞(Tregs)浸润情况。比色法测定细胞培养上清液中葡萄糖及乳酸的含量;癌症和肿瘤基因图谱(TCGA)的公共数据分析肝癌UBE2T表达量与糖酵解水平和Tregs浸润关系。Western blotting检测UBE2T表达与糖酵解相关蛋白HK1、LDHA表达相关关系。体外共培养模型联合流式细胞术以及qPCR验证UBE2T过表达肝癌与Tregs关系。结果 qPCR、Western blotting结果显示过表达组中UBE2T表达显著升高(P<0.0001)。克隆形成实验、裸鼠肝癌皮下瘤实验显示UBE2T过表达导致肝细胞癌放疗抵抗(P<0.05),UBE2T导致的放疗抵抗在C57BL/6小鼠肝癌皮下瘤模型上更显著(P<0.01)。CIBERSORT分析提示UBE2T高表达组肝癌中树突状细胞(P<0.01)、滤泡辅助性T细胞(P<0.001)、M2型巨噬细胞(P<0.01)、单核细胞(P<0.05)、总体淋巴细胞(P<0.05)以及Tregs(P<0.0001)浸润比例上调。流式细胞术显示过表达UBE2T小鼠肝癌免疫微环境中Tregs数量上调(P<0.05),IR导致UBE2T组CD4+T细胞以及Tregs浸润增加(P<0.01或P<0.001)。与对照组细胞培养上清液相比,过表达UBE2T组的培养上清液葡萄糖浓度降低(P<0.05),乳酸浓度上调(P<0.01)。GSEA分析提示UBE2T高表达肝癌与糖酵解水平(P<0.001)、Tregs浸润水平呈正相关(P<0.001)。Western blotting显示糖酵解相关蛋白HK1、LDHA表达水平与UBE2T表达水平相关。体外共培养模型显示UBE2T过表达肝癌使Tregs细胞内乳酸含量上调(P<0.001),增殖能力增加(P<0.05)以及免疫抑制功能上调(Il-10,P<0.05;TGF-β,P<0.001)。结论 UBE2T介导的肝癌细胞放疗抵抗可能与肝癌细胞糖酵解水平提高介导的免疫微环境中Tregs富集相关。

大豆E2泛素结合酶基因GmUBC1的克隆及在拟南芥中的异源表达

E2泛素结合酶(ubiquitin-conjugating enzyme)参与植物的抗逆、生长发育等多种生物途径的调控,其功能研究在拟南芥(Arabidopsis thaliana)中的报道较多,但在重要经济作物大豆(Glycine max)中鲜有报道。本研究从大豆“南农94-16”中克隆了1个与大豆子叶折叠突变体可能相关的基因Glyma.12G161200,序列分析结果表明该基因编码一个E2泛素结合酶,因此将其命名为GmUBC1。该基因编码区全长为462 bp,编码一个含153个氨基酸的蛋白,预测其分子量为17.25 kDa,等电点为6.74。利用qRT-PCR技术对GmUBC1在大豆不同组织中的表达模式及其对不同非生物胁迫和激素处理的响应模式进行分析,发现该基因在开花后40 d种子中表达量最高,在PEG、低温、JA和ABA处理下表达下调。亚细胞定位分析发现GmUBC1蛋白在整个细胞内都有表达。进一步在拟南芥中异源表达GmUBC1,发现转基因株系的千粒重和总氨基酸含量显著提高,表明异源过表达GmUBC1可以调控种子重量和氨基酸含量,为大豆品质改良提供了基因资源。

泛素结合酶E2T 对卵巢癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的:探究沉默泛素结合酶E2T(UBE2T)对卵巢癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响。方法:实时荧光定量PCR检测UBE2T在人正常卵巢细胞系IOSE80和人卵巢癌细胞系HO8910和A2780中的表达;通过小干扰RNA技术对卵巢癌细胞进行si-UBE2T转染,Western blot检测转染效率。CCK8实验检测UBE2T对卵巢癌细胞增殖能力的影响;划痕愈合实验以及Transwell实验检测UBE2T对卵巢癌细胞迁移和侵袭的影响。结果:与IOSE80相比,HO8910和A2780细胞中UBE2TmRNA表达均升高(P<0.001);转染后,与对照组相比,si-UBE2T组的蛋白表达降低,细胞的增殖、迁移及侵袭能力也降低(P<0.05)。结论:沉默UBE2T能够抑制卵巢癌细胞增殖、迁移以及侵袭,UBE2T可能是卵巢癌治疗的潜在研究靶点。

泛素结合酶E2-EPF高表达质粒的构建及对绒癌细胞JEG-3生长功能的初步探讨

目的:构建泛素结合酶E2-EPF高表达质粒,初步探讨E2-EPF在绒癌细胞增殖中的作用。方法:基因克隆技术构建pcDNA(3.1+)-E2-EPF高表达质粒,通过瞬时转染将质粒导入绒癌细胞JEG-3中,使E2-EPF高表达;流式细胞仪检测及细胞增殖实验初步研究E2-EPF高表达对绒癌细胞生长速率的影响。结果:E2-EPF高表达质粒构建成功,瞬时转染后细胞E2-EPFmRNA升高约8.4倍,JEG-3细胞的生长速率显著高于对照组(P<0.05),处于G2-M期和S期细胞显著增加。结论:E2-EPF参与细胞的生长调控,促进E2-EPF表达可以加速绒癌细胞JEG-3的生长速率。

泛素结合酶E2S在肝细胞肝癌中的表达及其与预后的关系

目的探讨泛素结合酶E2S(UBE2S)在肝细胞肝癌(HCC)中的表达及预后意义。方法利用Oncomine、GEPIA分析UBE2S在HCC组织中的表达情况,利用GEPIA分析UBE2S与HCC患者生存期的相关性,通过STRING工具分析UBE2S的蛋白相互作用网络。结果UBE2S mRNA在HCC组织中高表达,且与HCC预后呈负相关(P<0.001),UBE2S蛋白在HCC组织中的表达高于正常肝组织。结论UBE2S在HCC组织中高表达,其表达水平与肝癌的预后有明显关联。

宫颈鳞癌组织中泛素偶联酶E2、食管癌相关基因4表达情况与预后的关系

目的探究宫颈鳞癌组织中泛素偶联酶E2(UBE2C)、食管癌相关基因4(ECRG4)表达水平及其与病人预后关系。方法选取2010年6月至2014年6月天门市第一人民医院收治的宫颈鳞癌病人73例、宫颈上皮瘤变病人62例、因子宫肌瘤需行全子宫切除术病人54例为研究对象。术中分别收集宫颈鳞癌病人宫颈鳞癌组织、宫颈上皮瘤变病人瘤变组织和子宫肌瘤病人正常宫颈组织。分别采用实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)和免疫组织化学染色法检测UBE2C、ECRG4 mRNA和蛋白表达水平。分析二者表达水平与病人临床病理特征及预后关系。结果正常宫颈组织、宫颈上皮内瘤变组织、宫颈鳞癌组织中UBE2C mRNA[(1.01±0.29)、(1.97±0.63)、(3.64±1.21)]表达水平、UBE2C蛋白高表达率(20.37%、51.61%、68.49%)依次显著升高(P<0.05),ECRG4 mRNA[(1.02±0.31)、(0.75±0.26)、(0.51±0.19)]表达水平、ECRG4蛋白高表达率(66.67%、43.55%、26.03%)依次显著降低(P<0.05)。UBE2C、ECRG4蛋白在低、中、高分化宫颈鳞癌病人癌组织中高表达率比较,差异有统计学意义(P<0.05)。UBE2C、ECRG4蛋白在Ⅰ~Ⅱ、Ⅲ期FIGO分期及有无淋巴结转移病人癌组织中高表达率比较,差异有统计学意义(P<0.05)。宫颈鳞癌组织中UBE2C mRNA与ECRG4 mRNA表达水平呈负相关(P<0.05)。UBE2C蛋白高表达组病人5年总生存率明显低于UBE2C蛋白低表达组,ECRG4蛋白高表达组病人5年总生存率明显高于ECRG4蛋白低表达组,均差异有统计学意义(34.00%比65.22%,73.68%比33.33%,P<0.05)。FIGO分期Ⅲ期、淋巴结转移、UBE2C高表达、ECRG4低表达均是影响宫颈鳞癌病人发生不良预后的独立危险因素(P<0.05)。结论宫颈鳞癌组织中UBE2C mRNA及蛋白表达水平明显升高,ECRG4 mRNA及蛋白表达水平明显降低,与病人5年总生存率低有关,可能是影响宫颈鳞癌病人发生不良预后的独立危险因素。

泛素结合酶E2C通过特异性结合β-微管蛋白参与调控肝细胞癌进展

目的筛选泛素结合酶E2C(UBE2C)的底物蛋白,并探讨其在肝细胞癌进展中的作用。方法构建带有Halotag标签的UBE2C过表达质粒,将UBE2C与Halotag在人高转移肝癌细胞系HCCLM3中融合表达,通过Halolink树脂沉淀UBE2C结合的底物蛋白,并联合SDS-PAGE和质谱对底物蛋白进行鉴定。在人肝癌细胞系Huh-7中过表达UBE2C,通过qRT-PCR、蛋白质印迹分析和细胞免疫荧光实验检测UBE2C过表达对其底物蛋白表达的影响,利用细胞核质分离结合蛋白质印迹分析及TOP flash/FOP flash荧光素酶报告基因实验检测UBE2C过表达对Wnt信号通路的影响,并进一步通过qRT-PCR和蛋白质印迹分析验证UBE2C过表达对Wnt信号通路下游基因表达的影响。结果Halotag共沉淀产物经SDS-PAGE和银染后所获得差异条带的质谱鉴定结果显示,β-微管蛋白是UBE2C结合的底物蛋白。与对照组相比,过表达UBE2C降低了Huh-7细胞中β-微管蛋白在蛋白水平的表达(P<0.01),但对其在mRNA水平的表达没有影响(P>0.05)。同时,过表达UBE2C促进了β-联蛋白入核(P<0.05),提高了TOP flash/FOP flash荧光素酶活性(P<0.01),增强了Wnt信号通路下游基因JNK、细胞周期蛋白D1和基质金属蛋白酶7的表达(P均<0.05)。结论UBE2C通过特异性结合β-微管蛋白降低肝癌细胞中β-微管蛋白水平,从而提高Wnt信号通路活性,促进其下游基因表达,进而参与调控肝细胞癌的进展。

泛素结合酶E2C与肿瘤发生的研究进展

泛素结合酶E2C(UBE2C)属于E2酶家族中的成员,它在泛素-蛋白酶体途径中具有重要的生物学作用,泛素结合酶E2C是细胞周期进展和周期蛋白降解所必需的。泛素结合酶E2C在多种肿瘤组织中高度表达,与肿瘤的发生发展密切相关。本文就结合国内外最新报道,对泛素结合酶E2C与肿瘤相关性研究进展作一综述。

UBE2C基因在肾透明细胞癌中的临床预后价值及分子机制探究

目的 探讨泛素结合酶E2C(UBE2C)在肾透明细胞癌(KIRC)中的表达模式、临床预后价值以及调节KIRC的分子机制。方法 通过肿瘤基因组图谱数据库(TCGA)和人类蛋白质表达图谱数据库(HPA)分析UBE2C基因在KIRC组织和正常组织中的表达差异。结合KIRC患者的临床信息,利用单因素及多因素Cox回归模型分析UBE2C基因在KIRC患者中的预后价值。通过基因富集分析(GSEA)了解UBE2C基因调控KIRC的分子机制。计算KIRC患者中的浸润免疫细胞含量,并评估UBE2C基因表达水平与免疫细胞浸润含量的相关性。结果 KIRC组织中的UBE2C基因和蛋白表达水平均高于正常肾组织(P<0.05)。KIRC组织中UBE2C表达与肿瘤位置、组织学分级、病理分期及TNM分期有关(P<0.05)。单因素及多因素Cox回归分析结果显示,UBE2C可作为预测KIRC患者总生存期(OS)的独立预后因素(P<0.05)。GSEA结果表明,UBE2C可能参与调节细胞因子-细胞因子受体相互作用、细胞周期检查点、ECM糖蛋白等多条信号通路。UBE2C基因表达水平与KIRC肿瘤微环境中Treg细胞、T细胞、Th17细胞、B细胞、CD8+T细胞和巨噬细胞浸润等显著相关。UBE2C同免疫检查点分子PDCD1(PD1)、CTLA4、CD27、LAG3等表达水平也显著相关。结论 UBE2C可作为KIRC患者的一个风险预后因子,同时UBE2C可能作为KIRC治疗的潜在靶点。

泛素结合酶E2在卵巢癌中的研究进展

蛋白质的泛素化修饰发生于赖氨酸残基的侧链,多泛素化修饰的蛋白质被蛋白酶体识别进而降解,调节蛋白质的稳定性和活性,从而调节多种信号通路。泛素激活酶(E1)、泛素结合酶(E2)、泛素连接酶(E3)这三种关键的酶共同参与该过程。E2含高度保守的泛素结构域,调控各反应蛋白的稳定性及蛋白间的相互作用,是泛素化过程中必不可少的中间环节。卵巢癌是女性生殖道常见的恶性肿瘤,发病率逐年上升,死亡率居女性生殖道恶性肿瘤之首。E2参与细胞凋亡、DNA修复及细胞周期调节,激活促癌信号通路,促进卵巢癌发生发展。本文就E2在卵巢癌中的研究进展作一综述。