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宫颈癌预后与泛素蛋白1及免疫细胞群表达特征的关联性 被引量:1
1
作者 马宁 张越 《海军医学杂志》 2023年第3期279-284,共6页
目的研究宫颈癌患者外周血免疫细胞群及癌组织内泛素蛋白1(UBQLN1)表达水平与其预后的关系。方法将2018年6月至2020年1月在晋城大医院行宫颈癌根治术联合术后规范化治疗的98例宫颈癌患者纳为观察组,同时将同期于同一医院行健康体检的60... 目的研究宫颈癌患者外周血免疫细胞群及癌组织内泛素蛋白1(UBQLN1)表达水平与其预后的关系。方法将2018年6月至2020年1月在晋城大医院行宫颈癌根治术联合术后规范化治疗的98例宫颈癌患者纳为观察组,同时将同期于同一医院行健康体检的60例同年龄段女性纳为对照组。术前采集2组研究对象外周静脉血,检测CD4^(+)T、CD8^(+)T细胞以及CD28^(+)T细胞表达水平,并于术中收集观察组患者宫颈癌及癌旁组织,采用免疫组化法检测UBQLN1表达水平。随访至2022年1月,统计观察组患者宫颈癌复发率。分析外周血免疫细胞群及宫颈癌组织内BUQLN1表达水平与其临床病理特征及预后之间的关系。结果观察组外周血CD8^(+)T细胞占比高于对照组,CD4^(+)/CD8^(+)比值低于对照组,观察组宫颈癌组织内UBUQLN1阳性率高于癌旁组织,差异均有统计学意义(P<0.05)。宫颈癌临床分期为ⅡA期的患者外周血CD4^(+)T细胞占比以及CD4^(+)/CD8^(+)比值低于Ⅰ期,CD8^(+)T细胞占比低于Ⅰ期,宫颈癌淋巴转移者CD4^(+)T细胞占比以及CD4^(+)/CD8^(+)比值低于无淋巴转移者,CD8^(+)T细胞占比水平高于无淋巴转移者,宫颈癌病灶直径≥4 cm者的外周血CD4^(+)T细胞占比及CD4^(+)/CD8^(+)比值均低于<4 cm者,低分化者癌灶组织内UBQLN1阳性检出率高于中高分化者,差异均有统计学意义(P<0.05)。随访至2022年1月,共29例宫颈癌患者确诊为复发,复发者外周血CD4^(+)T细胞占比以及CD4^(+)/CD8^(+)比值均低于未复发者,CD8^(+)T细胞占比以及UBQLN1阳性检出率均高于未复发者,差异有统计学意义(P<0.05)。绘制受试者操作特征(ROC)曲线提示,外周血免疫细胞群CD4^(+)/CD8^(+)比值在预测宫颈癌术后复发中的效能最高,其曲线下面积(area under curve,AUC)=0.951,95%CI(0.905~0.997),CD4^(+)、CD8^(+)、CD28^(+)T细胞单独应用时在预测宫颈癌术后复发时,CD4^(+)效能最高,其AUC=0.829,95%CI(0.746~0.912)。癌变组织内UBQLN1阳性表达在预测宫颈癌术后复发中的AUC=0.880,95%CI(0.784~0.935)。结论宫颈癌患者外周血免疫细胞群水平及癌灶组织内UBQLN1阳性表达对预测患者术后复发情况具有一定价值,可作为宫颈癌术后复发预测的潜在指标。 展开更多
关键词 宫颈癌 根治术 术后规范化治疗 复发 外周血免疫细胞群 泛素蛋白1
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重组泛素样特异性蛋白酶1在大肠杆菌中的表达条件优化与分离纯化 被引量:2
2
作者 张叶明 付正豪 陈云雨 《锦州医科大学学报》 CAS 2020年第6期1-4,30,共5页
目的确定重组泛素样特异性蛋白酶1(ubiquitin-like specific protease 1,Ulp1)在大肠杆菌中的最佳表达条件并进行分离纯化。方法采用DNA重组技术,构建重组质粒Ulp1-pET-28a,并转化到Escherichia coli BL21(DE3)细胞中,以IPTG诱导Ulp1原... 目的确定重组泛素样特异性蛋白酶1(ubiquitin-like specific protease 1,Ulp1)在大肠杆菌中的最佳表达条件并进行分离纯化。方法采用DNA重组技术,构建重组质粒Ulp1-pET-28a,并转化到Escherichia coli BL21(DE3)细胞中,以IPTG诱导Ulp1原核表达,并从诱导时间、诱导温度和IPTG诱导浓度方面确定其最佳表达条件,再以亲和层析法分离纯化Ulp1。结果SDS-PAGE分析表明,工程菌诱导温度为30℃、诱导时间为6 h、IPTG浓度为0.2 mmol/L时Ulp1表达量最高,表达量约为350 mg/L且成功进行了Ulp1的分离纯化。结论本研究成功进行了Ulp1原核表达条件的优化与分离纯化,为Ulp1在生物工程中的酶切应用奠定了实验基础。 展开更多
关键词 泛素样特异性蛋白酶1 原核表达 表达优化 亲和层析
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类泛素化蛋白酶1基因的表达与肝癌细胞株侵袭转移的关系
3
作者 刘延 李湘竑 杨定华 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期309-313,共5页
目的:研究类泛素化蛋白酶-1(sentrin-specific protease-1,SENP-1)基因在不同侵袭潜能肝细胞肝癌细胞株及人永生化肝细胞中mRNA和蛋白的表达水平及其与肝癌细胞侵袭能力的关系。方法:使用RT-PCR、Real-time PCR、Western blotting和免... 目的:研究类泛素化蛋白酶-1(sentrin-specific protease-1,SENP-1)基因在不同侵袭潜能肝细胞肝癌细胞株及人永生化肝细胞中mRNA和蛋白的表达水平及其与肝癌细胞侵袭能力的关系。方法:使用RT-PCR、Real-time PCR、Western blotting和免疫荧光方法对肝癌细胞株MHCC97L(低侵袭性)、MHCC97H和HCCLM3(高侵袭性)、SMMC-7721和HepG2(无明显侵袭性)SENP-1 mRNA和蛋白表达水平进行检测,以人永生化肝细胞株HL-7702为对照,分析SENP-1的表达与肝癌细胞株侵袭转移能力的关系。结果:RT-PCR和Real-time PCR检测结果显示,SENP-1 mRNA(F=5.658;P=0.042)和蛋白(F=88.909,P=0.000)在肝癌细胞株中的表达随着肝癌细胞株侵袭潜能的增高而增高;Western blotting检测结果显示,5种肝癌细胞株SENP-1蛋白水平均显著高于人永生化肝细胞株;免疫荧光法观察发现,SENP-1蛋白在肝癌细胞株内主要为胞质表达,部分胞核表达。结论:SENP-1基因在肝癌细胞株中的高表达可能具有促进肝癌细胞侵袭转移的作用。 展开更多
关键词 泛素蛋白酶-1基因 肝细胞癌 侵袭 转移
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泛素蛋白连接酶1在大鼠颈动脉球囊损伤后新生内膜中的表达及意义
4
作者 杨波 林新铎 +6 位作者 王星人 唐俊明 杨建业 张蕾 曹腾 姜峰波 王家宁 《实验动物与比较医学》 CAS 2016年第3期161-167,共7页
目的 研究胞质泛素蛋白连接酶1(KPC1)在大鼠颈动脉球囊损伤后的蛋白表达情况,探讨其在新生内膜形成过程中的生物学功能.方法 将成年雄性SD大鼠(450 ~ 500 g)随机分为假手术组和颈动脉球囊损伤模型组,建模后以左侧损伤动脉为实验组... 目的 研究胞质泛素蛋白连接酶1(KPC1)在大鼠颈动脉球囊损伤后的蛋白表达情况,探讨其在新生内膜形成过程中的生物学功能.方法 将成年雄性SD大鼠(450 ~ 500 g)随机分为假手术组和颈动脉球囊损伤模型组,建模后以左侧损伤动脉为实验组,同时以假手术组的左侧正常颈动脉为对照组.实验组大鼠于损伤后1d、3d、7d、14d、28d分别处死并取材,采用Western blot检测KPC1蛋白、内膜增殖细胞核抗原(PCNA)表达情况,以qRT-PCR检测KPC1的mRNA表达,苏木精-伊红(HE)染色后比较内膜增生程度;采用体外培养血管平滑肌细胞(VSMC)建立增殖模型,运用Western blot及qRT-PCR检测其KPC1蛋白、KPC1 mRNA表达特征.结果 Western blot结果显示,颈动脉球囊损伤后实验组KPC1蛋白表达水平明显低于正常对照组(P<0.05),而PCNA蛋白表达量明显高于正常对照组(P<0.05);qRT-PCR检测结果显示,实验组KPC1的mRNA水平明显低于对照组(P<0.05);HE染色结果示颈动脉球囊损伤后1d、3d时光镜下血管内膜增生不明显;7d时光镜下可见新生内膜,增生的VSMC向内膜下迁移,管腔开始狭窄;14d时,可见明显新生内膜,VSMC排列紊乱,内弹力膜断裂,管腔明显狭窄,内膜厚度超过中膜;28d时,血管内膜继续不规则增生,血管腔狭窄程度继续加重,狭窄超过50%.体外培养并模拟VSMC增殖,提取细胞进行Western blot和qRT-PCR检测显示,KPC1蛋白、KPC1 mRNA表达在血小板源性生长因子-BB刺激增殖后开始逐渐减低.结论 抑制KPC1基因表达可促进损伤内膜增生,其作用机制可能与促进VSMC增殖有关. 展开更多
关键词 胞质泛素蛋白连接酶1(KPC1) 新生内膜 血管平滑肌细胞(VSMC) 增生
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小泛素相关修饰蛋白特异性蛋白酶1对脐静脉内皮细胞增殖、迁移和凋亡的影响
5
作者 高瞻 王华 +5 位作者 肖凤君 曹晓培 孙慧燕 杨月峰 哈小琴 王立生 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期411-416,共6页
目的探讨小泛素相关修饰蛋白特异性蛋白酶1(SENP1)对脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖、迁移及凋亡的影响。方法用20个感染复数的p LKO.1-SENP1-小发夹RNA(shRNA)-绿色荧光蛋白(GFP)干涉慢病毒(SENP1干涉组)和p PIG-U6-随机序列(scramble)-GF... 目的探讨小泛素相关修饰蛋白特异性蛋白酶1(SENP1)对脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖、迁移及凋亡的影响。方法用20个感染复数的p LKO.1-SENP1-小发夹RNA(shRNA)-绿色荧光蛋白(GFP)干涉慢病毒(SENP1干涉组)和p PIG-U6-随机序列(scramble)-GFP对照慢病毒(GFP-SC对照组)感染HUVEC。病毒感染HUVEC 48 h后,用流式细胞仪检测慢病毒的感染效率,实时荧光定量PCR(RT-PCR)和Western蛋白质印迹法检测HUVEC内SENP1基因和蛋白表达水平。用CCK8试剂盒检测细胞增殖能力,Transwell小室法检测细胞的迁移能力,流式细胞仪分析细胞凋亡率。结果 GFP-SC对照组和SENP1干涉组感染效率均>97%。与GFP-SC对照组比较,SENP1干涉组HUVEC SENP1基因和蛋白表达水平显著降低(P<0.01)。CCK8法测定结果表明,SENP1干涉组HUVEC增殖能力较GFP-SC对照组明显降低(P<0.01)。SENP1干涉组细胞迁移过Transwell小室的细胞数量明显低于GFP-SC对照组(P<0.01)。用低浓度血清(含2%胎牛血清)培养基诱导细胞凋亡24 h,SENP1干涉组细胞凋亡率即已升高到GFP-SC对照组的2倍左右(P<0.05);诱导凋亡至48 h,SENP1干涉组细胞凋亡率升高到对照组的3.2倍左右(P<0.05)。结论 HUVEC内SENP1表达水平的降低不仅可以显著抑制细胞增殖和迁移能力,亦可促进细胞凋亡。 展开更多
关键词 脐静脉内皮细胞 泛素相关修饰蛋白特异性蛋白酶1 细胞增殖 细胞迁移 细胞凋亡
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类泛素蛋白酶1及低氧诱导因子-1α在人卵巢癌组织中的表达及意义的探索
6
作者 王伟 《黄冈职业技术学院学报》 2015年第6期129-133,共5页
目的:观察类泛素蛋白酶1和低氧诱导因子-1α在卵巢癌中的表达情况,并探讨类泛素蛋白酶1和低氧诱导因子-1α在卵巢癌中的表达相关性及其与卵巢癌临床病理特征之间的联系。方法:利用免疫组织化学的方法分别对卵巢的非肿瘤性病和肿瘤组织... 目的:观察类泛素蛋白酶1和低氧诱导因子-1α在卵巢癌中的表达情况,并探讨类泛素蛋白酶1和低氧诱导因子-1α在卵巢癌中的表达相关性及其与卵巢癌临床病理特征之间的联系。方法:利用免疫组织化学的方法分别对卵巢的非肿瘤性病和肿瘤组织类泛素蛋白酶1及HIF-1α的表达进行了检测。结果:HIF-1α在非肿瘤性病卵巢组织中未见表达,在良性和交界性卵巢肿瘤组织中见少量表达。恶性卵巢肿瘤表达明显较高,在高级别恶性肿瘤中的表达明显高于低级别恶性肿瘤。肿瘤分化程度越低,HIF-1α的表达越显著。结论:人卵巢癌中存在SENP1和HIF-1α蛋白的高表达可能参与了卵巢癌的发生和进展及其恶性演进过程。联合检测SENP-1和HIF-1α的表达可能对人卵巢癌的分级、分期和预后判断有重要参考意义。 展开更多
关键词 卵巢癌 泛素蛋白酶1 低氧诱导因子1
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下调含植物同源结构域和环指结构域泛素样蛋白1(UHRF1)的水平可抑制肾癌769-P细胞增殖并促进其凋亡 被引量:2
7
作者 焦点 郑甲 +6 位作者 魏铭 郑国旭 席文锦 秦卫军 杨安钢 王禾 温伟红 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期75-78,共4页
目的利用针对含植物同源结构域和环指结构域泛素样蛋白1(UHRF1)的小干扰RNA(siRNA)在肾癌769-P细胞中下调UHRF1的表达,探讨其对769-P细胞增殖和凋亡的影响。方法根据人UHRF1的mRNA序列设计并合成2对针对UHRF1的siRNA,用脂质体将其瞬时... 目的利用针对含植物同源结构域和环指结构域泛素样蛋白1(UHRF1)的小干扰RNA(siRNA)在肾癌769-P细胞中下调UHRF1的表达,探讨其对769-P细胞增殖和凋亡的影响。方法根据人UHRF1的mRNA序列设计并合成2对针对UHRF1的siRNA,用脂质体将其瞬时转染入769-P细胞。利用实时定量PCR检测UHRF1 mRNA的水平,Western blot法检测UHRF1的蛋白水平;利用MTT法检测细胞增殖,异硫氰酸荧光素标记的膜联素Ⅴ/碘化丙啶(annexinⅤ-FITC/PI)染色结合流式细胞术检测细胞凋亡。结果 UHRF1 siRNA可显著抑制UHRF1的mRNA和蛋白水平,下调769-P细胞UHRF1水平后,细胞增殖显著减弱,细胞凋亡显著增加。结论下调UHRF1的表达可抑制肾癌细胞的增殖并促进其凋亡。 展开更多
关键词 含植物同源结构域和环指结构域泛素蛋白1(UHRF1) 小干扰RNA(siRNA) 肾细胞癌 细胞增殖 细胞凋亡
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泛素样含PHD和环指域蛋白1(UHRF1)的功能及其参与肿瘤发生发展机制的研究进展 被引量:8
8
作者 魏飞龙 焦点 +4 位作者 郑国旭 魏铭 王磊 杨安钢 温伟红 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期858-862,共5页
泛素样含PHD和环指域蛋白1(UHRF1)是UHRF家族的重要成员。生理情况下,UHRF1参与调节淋巴细胞的发育和功能,并在维持子细胞的甲基化状态、细胞生长以及维持基因组稳定等方面也发挥重要作用。UHRF1在多种肿瘤中呈高表达,且其表达与患者的... 泛素样含PHD和环指域蛋白1(UHRF1)是UHRF家族的重要成员。生理情况下,UHRF1参与调节淋巴细胞的发育和功能,并在维持子细胞的甲基化状态、细胞生长以及维持基因组稳定等方面也发挥重要作用。UHRF1在多种肿瘤中呈高表达,且其表达与患者的临床病理特征及不良预后密切相关。UHRF1可通过表观遗传学机制对多种肿瘤抑制基因的表达调控而实现对肿瘤细胞的生长、侵袭转移、氧化应激及DNA损伤修复等特性的调节。鉴于UHRF1在肿瘤中的特异性高表达及对细胞生长的重要作用,UHRF1有望作为抗肿瘤治疗的有效靶点。 展开更多
关键词 泛素样含PHD和环指域蛋白1(UHRF1) UHRF1 肿瘤 综述
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电击死大鼠骨骼肌肌肉细胞特异性泛素蛋白连接酶1-mRNA表达的法医学研究 被引量:1
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作者 袁增琼 万立华 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期39-42,共4页
目的 :研究电击死早期骨骼肌肌肉细胞特异性泛素蛋白连接酶1(muscle-specific RING finger protein 1,MuRF1)-mRNA随时间的变化归律及其在鉴别生前电击死与死后电击中的应用。方法:60只健康的Wistar大鼠,雌雄不限,每组20只。电击死组大... 目的 :研究电击死早期骨骼肌肌肉细胞特异性泛素蛋白连接酶1(muscle-specific RING finger protein 1,MuRF1)-mRNA随时间的变化归律及其在鉴别生前电击死与死后电击中的应用。方法:60只健康的Wistar大鼠,雌雄不限,每组20只。电击死组大鼠用220 V交流电的两极分别连接右前肢与左后肢,通电90 s致死,于电击死后0、1、3、6 h取材;死后电击组大鼠采用颈椎脱臼法处死后,分别于0、1、3、6 h电击90 s取材;空白对照组大鼠直接颈椎脱臼法处死,不进行电击,于死后0、1、3、6 h取材。用RT-PCR技术检测各组大鼠左后肢腓肠肌、胫骨前肌MuRF1-mRNA表达水平。结果:电击死组大鼠左后肢腓肠肌MuRF1-mRNA表达量于死后即刻升高,1、3 h下降,与空白对照组相比差异有统计学意义(P=0.000、P=0.000、P=0.000),6 h低于空白对照组(P=0.925);电击死组大鼠左后肢胫骨前肌MuRF1-mRNA表达量于死后即刻升高,1 h达峰值,3 h开始降低,与空白对照组相比差异均有统计学意义(P=0.000、P=0.000、P=0.000);死后电击组左后肢腓肠肌、胫骨前肌较空白对照组高,但升高不如电击死组显著;电击死组、死后电击组左后肢胫骨前肌MuRF1-mRNA含量均较腓肠肌高。结论:大鼠电击死6 h内左后肢骨骼肌MuRF1-mRNA在Ⅰ型肌纤维、Ⅱ型肌纤维中的表达量不同,且其表达具有时间规律性,可为电击死早期死亡时间推断提供一定的参考依据,还可以作为生前电击死与死后电击鉴别的辅助指标。 展开更多
关键词 法医病理学 电击死 骨骼肌 肌肉细胞特异性泛素蛋白连接酶1
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E3泛素连接酶1对SOX2蛋白稳定性的影响 被引量:1
10
作者 郭平 孙潇智 +4 位作者 刘玉杰 李资益 杨婧 管恒毓 廖兵 《检验医学》 CAS 2021年第4期430-436,共7页
目的探讨WW结构域的E3泛素蛋白连接酶1(WWP1)和E3泛素蛋白连接酶2(WWP2)对3种转录因子[八聚体结合转录因子4(OCT4)、性别决定区Y-box蛋白2(SOX2)和NANOG蛋白]水平的影响。方法通过质粒转染,在HEK 293FT细胞中分别共表达OCT4、SOX2、NANO... 目的探讨WW结构域的E3泛素蛋白连接酶1(WWP1)和E3泛素蛋白连接酶2(WWP2)对3种转录因子[八聚体结合转录因子4(OCT4)、性别决定区Y-box蛋白2(SOX2)和NANOG蛋白]水平的影响。方法通过质粒转染,在HEK 293FT细胞中分别共表达OCT4、SOX2、NANOG和WWP1或WWP2。通过免疫印迹法检测WWP1或WWP2过表达对OCT4、SOX2、NANOG蛋白水平的影响。通过GST pull-down实验和免疫共沉淀实验分析WWP1与SOX2蛋白间的相互作用;运用体外蛋白质泛素化修饰实验证明WWP1是否为SOX2的特异E3泛素连接酶。结果在WWP1与OCT4、WWP1与SOX2及WWP2与OCT4共表达体系中,WWP1或WWP2均呈剂量依赖性地下调对应的共表达蛋白OCT4或SOX2水平,且以WWP1与SOX2共表达体系中SOX2蛋白的表达下调最为明显。在其他共表达体系中,WWP1或WWP2对对应的共表达蛋白均无明显的下调作用。溶酶体抑制剂氯喹可部分阻止SOX2蛋白水平的降低。放线菌酮(CHX)处理24 h后,WWP1与SOX2共表达体系中的SOX2蛋白水平的下降速度快于单独过表达SOX2(P<0.05)。WWP1可以通过与SOX2蛋白的直接相互作用催化SOX2蛋白的泛素化修饰。结论WWP1是SOX2蛋白新的E3泛素连接酶,可促进SOX2蛋白经泛素-溶酶体途径降解,进而下调SOX2蛋白的表达。 展开更多
关键词 WW结构域的E3泛素蛋白连接酶1 性别决定区Y-box蛋白2 泛素化修饰 蛋白质降解
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小泛素蛋白样修饰蛋白1在大鼠低氧性肺动脉高压发病中的作用 被引量:2
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作者 田华 戴爱国 +3 位作者 符代炎 谭双香 胡瑞成 朱黎明 《中国呼吸与危重监护杂志》 CAS 2010年第1期48-52,共5页
目的探讨大鼠低氧性肺动脉高压(HPH)形成过程中小泛素蛋白样修饰蛋白1(SUMO-1)在肺内表达的动态变化规律及在HPH发病机制中的作用。方法40只Wistar大鼠随机分为常氧对照组、低氧3d组、低氧7d组、低氧14d组及低氧21d组,每组8只。常压间... 目的探讨大鼠低氧性肺动脉高压(HPH)形成过程中小泛素蛋白样修饰蛋白1(SUMO-1)在肺内表达的动态变化规律及在HPH发病机制中的作用。方法40只Wistar大鼠随机分为常氧对照组、低氧3d组、低氧7d组、低氧14d组及低氧21d组,每组8只。常压间断低氧暴露复制HPH大鼠模型。检测各组大鼠的平均肺动脉压(mPAP)、右心室肥大指数(RVHI)、血管形态学指标[管壁面积/管总面积(WA%)];原位杂交、RT-PCR检测肺内SUMO-1 mRNA表达,免疫组化、Western blot检测其蛋白表达水平。结果低氧7d至21d,大鼠肺小动脉开始出现明显血管重塑并逐渐加重,低氧7d时WA%和mPAP显著高于对照组;低氧14d时WA%、mPAP较7d时进一步增加,RVHI显著高于对照组;低氧21d时WA%、RVHI较14d时进一步增加。SUMO-1 mRNA和蛋白在对照组肺小动脉壁呈弱阳性表达;低氧3d后显著增高;低氧14d达高峰;低氧21d后mRNA表达减弱但仍然高于对照组,蛋白表达继续保持高水平。SUMO-1 mRNA和蛋白表达与mPAP、WA%、RVHI均呈正相关(P均<0.01)。结论慢性低氧诱导肺内SUMO-1表达增加在HPH的发病过程中发挥一定的作用。 展开更多
关键词 低氧 肺动脉高压 泛素蛋白样修饰蛋白1
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泛素相关小修饰蛋白-1在大鼠脑发育过程中的差异性表达
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作者 程珊珊 陆菡 +1 位作者 薛庆生 于布为 《上海医学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第8期683-687,I0001,共6页
目的探讨泛素相关小修饰蛋白(SUMO)-1在Sprague-Dawley(SD)大鼠脑发育过程中的不同表达及其意义。方法采用实时定量聚合酶链反应、Western印迹法分析及免疫组织化学法检测SUMO-1蛋白在大鼠脑发育不同时期的表达。结果胚胎期15 d(E15)、... 目的探讨泛素相关小修饰蛋白(SUMO)-1在Sprague-Dawley(SD)大鼠脑发育过程中的不同表达及其意义。方法采用实时定量聚合酶链反应、Western印迹法分析及免疫组织化学法检测SUMO-1蛋白在大鼠脑发育不同时期的表达。结果胚胎期15 d(E15)、胚胎期18 d(E18)、新生期(P0)、1周龄(P7)、2周龄(P14)、6月龄(P180)大鼠的SUMO-1 mRNA水平分别为26.106 8±0.427 5、25.234 0±1.076 2、23.340 1±0.327 6、22.683 3±0.695 3、20.546 9±1.757 2、16.708 5±2.927 4。与E15大鼠比较,P7、P14、P180大鼠脑组织中SUMO-1 mRNA水平均显著降低(P值均<0.05),P180大鼠的SUMO-1 mRNA水平又显著低于P7、P14大鼠(P值分别<0.05、0.01),P7大鼠与P14大鼠间SUMO-1 mRNA水平的差异无统计学意义(P>0.05)。E15、E18、P0大鼠脑组织中结合状态SUMO-1蛋白的表达量较高,出生后随着生长发育,P7及P14大鼠结合状态SUMO-1蛋白的表达量较E15大鼠降低,P180大鼠结合状态SUMO-1蛋白的表达量较E15大鼠显著降低。E18大鼠小脑组织外颗粒层(EGL)、浦肯野细胞层(PCL)中均有SUMO-1表达;P14大鼠EGL、PCL、内颗粒层(LGL)中均有SUMO-1表达;与E18大鼠比较,P14大鼠PCL中SUMO-1蛋白的含量显著减少(P<0.05)。SUMO-1蛋白在发育早期的海马原基中已有表达,与E18大鼠比较,P14大鼠海马中SUMO-1蛋白的含量显著增多(P<0.05)。E18大鼠含有丰富神经干细胞的室管膜区(VZ)+室管膜下区(SVZ)内的SUMO-1蛋白含量很高,在皮质板区(CP)内也有表达;与E18大鼠比较,P14大鼠VZ+SVZ的SUMO-1蛋白含量显著减少(P<0.05);E18大鼠VZ+SVZ的SUMO-1蛋白含量显著高于同时期脑组织的其他部位(P值均<0.01)。结论在SD大鼠脑发育的不同时期,SUMO-1在空间及数量上的表达均有差异。 展开更多
关键词 泛素相关小修饰蛋白-1 脑发育 免疫组织化学
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水稻组蛋白单泛素化连接酶基因(OsHUB1)的克隆及其表达分析
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作者 刘云霄 向鹏 罗红丽 《海南大学学报(自然科学版)》 CAS 2014年第2期134-141,共8页
对模式植物拟南芥的研究发现,AtHUB1基因参与调控植物对灰霉病的抗性.为了研究水稻的抗病机理,笔者利用同源搜索从水稻数据库中获得了目标基因的序列,并通过RT-PCR技术从水稻中克隆了组蛋白单泛素化连接酶基因,命名为OsHUB1.该片段包含1... 对模式植物拟南芥的研究发现,AtHUB1基因参与调控植物对灰霉病的抗性.为了研究水稻的抗病机理,笔者利用同源搜索从水稻数据库中获得了目标基因的序列,并通过RT-PCR技术从水稻中克隆了组蛋白单泛素化连接酶基因,命名为OsHUB1.该片段包含1个2 655 bp的开放阅读框,编码了1个885氨基酸的多肽.与NCBI数据库的比对结果表明:OsHUB1的氨基酸序列与短柄草(Brachypodium distachyon)、葡萄(Vitis vinifera)、杨树(Populus tomentosa)、大豆(Glycine max)和拟南芥(Arabidopsis thaliana)的泛素E3连接酶的同源性分别为78%,68%,68%,67%和62%.这些不同来源的组蛋白单泛素化连接酶都含有一个高度保守的RING指结构域.半定量表达分析结果表明:OsHUB1基因能够被水杨酸(SA)和茉莉酸(JA)诱导表达,说明OsHUB1基因可能通过SA和JA介导的信号转导途径参与水稻的抗病反应. 展开更多
关键词 蛋白泛素化连接酶OsHUB1 水稻 表达分析
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可溶性泛素样特异性蛋白酶1的表达及活性鉴定
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作者 冯丽丽 陈海燕 +3 位作者 刘毓侠 郭彦 周国利 任银玲 《生物技术通讯》 CAS 2017年第5期629-633,共5页
目的:高效可溶性表达泛素样特异性蛋白酶1(ULP1)。方法:根据大肠杆菌密码子的偏好性优化合成编码ULP1的基因片段序列,将其克隆到原核表达载体p GEX-6P-1中,转化大肠杆菌BL21(DE3),用0.5 mmol/L IPTG于37℃诱导表达8 h,观察重组蛋白ULP1... 目的:高效可溶性表达泛素样特异性蛋白酶1(ULP1)。方法:根据大肠杆菌密码子的偏好性优化合成编码ULP1的基因片段序列,将其克隆到原核表达载体p GEX-6P-1中,转化大肠杆菌BL21(DE3),用0.5 mmol/L IPTG于37℃诱导表达8 h,观察重组蛋白ULP1的表达情况;优化诱导时间及IPTG浓度,并鉴定重组蛋白ULP1的生物学活性。结果:重组蛋白ULP1表达的最佳条件为37℃、0.1 mmol/L的IPTG诱导表达5 h,目的蛋白以可溶性表达为主;Western印迹结果表明,重组蛋白ULP1能够被His单克隆抗体识别,重组蛋白ULP1能够特异性酶切SUMO-GFP。结论:表达了具有生物学活性的SUMO蛋白酶ULP1。 展开更多
关键词 泛素样特异性蛋白酶1(ULP1) SUMO蛋白 表达 纯化 生物学活性
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小泛素样修饰蛋白1假基因3通过蛋白激酶B信号通路影响非小细胞肺癌细胞系H1299增殖和凋亡
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作者 徐亮 杨剑烨 +1 位作者 杨飞燕 杨国彪 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第3期410-417,共8页
目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)小泛素样修饰蛋白1假基因3(SUMO1P3)对非小细胞肺癌细胞增殖和凋亡的影响。方法用Real-time PCR方法测定非小细胞肺癌细胞系H1299中SUMO1P3表达变化。在H1299细胞中转染SUMO1P3小干扰RNA(siRNA),Real-time... 目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)小泛素样修饰蛋白1假基因3(SUMO1P3)对非小细胞肺癌细胞增殖和凋亡的影响。方法用Real-time PCR方法测定非小细胞肺癌细胞系H1299中SUMO1P3表达变化。在H1299细胞中转染SUMO1P3小干扰RNA(siRNA),Real-time PCR方法测定下调效果,MTT法和5-乙炔基-2’-脱氧尿苷(Ed U)法检测细胞增殖,PI单染法测定细胞周期,膜联蛋白V-FITC(annexin V-FITC)/PI法检测细胞凋亡,TUNEL法检测细胞凋亡,Western blotting方法检测剪切的Caspase-3(c-Caspase-3)、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、P27、磷酸化磷脂酰肌醇-3激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)蛋白表达。Akt信号激活剂处理转染SUMO1P3 siRNA后的H1299细胞,同样利用上述方法测定细胞增殖、凋亡和周期变化。样本数均为9。结果SUMO1P3在非小细胞肺癌细胞中表达上调。转染SUMO1P3 siRNA后的H1299细胞中SUMO1P3表达水平降低,细胞增殖能力下降,细胞G0/G1期比例升高,细胞凋亡率升高,细胞中c-Caspase-3和P27蛋白水平升高,cyclin D1、p-PI3K和p-Akt蛋白水平下降。Akt信号激活剂可以逆转SUMO1P3 siRNA对H1299细胞增殖抑制、周期阻滞和凋亡促进作用。结论下调SUMO1P3抑制非小细胞肺癌H1299细胞增殖并诱导细胞凋亡,作用机制与降低Akt信号通路激活水平有关。 展开更多
关键词 泛素样修饰蛋白1假基因3 蛋白激酶B 免疫印迹法
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泛素蛋白连接酶复合体KPC的研究进展 被引量:1
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作者 杨波 林新铎 +4 位作者 唐俊明 杨建业 张蕾 姜峰波 王家宁 《医学综述》 2016年第21期4161-4165,共5页
泛素蛋白酶体途径是真核生物体内最重要的蛋白质降解途径之一,其中,目标蛋白的泛素化过程涉及泛素激活酶、泛素结合酶和泛素蛋白连接酶(E3)。目标蛋白识别中起关键作用的是E3,Kip1泛素-促进复合体(KPC)是一种E3复合体,由KPC1和KPC2组成,... 泛素蛋白酶体途径是真核生物体内最重要的蛋白质降解途径之一,其中,目标蛋白的泛素化过程涉及泛素激活酶、泛素结合酶和泛素蛋白连接酶(E3)。目标蛋白识别中起关键作用的是E3,Kip1泛素-促进复合体(KPC)是一种E3复合体,由KPC1和KPC2组成,KPC1在C端含有一个环指结构域作为催化亚基,是E3不可缺少的组成部分,KPC2含有一个类泛素结构域和两个泛素相关结构域。KPC广泛存在于真核生物中,在神经系统疾病、血液系统疾病、肿瘤疾病等方面起着重要的调控作用。 展开更多
关键词 泛素蛋白酶体途径 泛素蛋白连接酶 胞质泛素蛋白连接酶1 胞质泛素蛋白连接酶2
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血清UCH-L1蛋白在新生大鼠缺氧缺血性脑病评估中的价值 被引量:5
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作者 瞿色华 单连强 +1 位作者 董淮富 陈信 《蚌埠医学院学报》 CAS 2017年第11期1433-1436,共4页
目的:探讨血清泛素羧基末端水解酶-1(UCH-L1)蛋白在新生大鼠缺氧缺血性脑病中的价值。方法:将168只新生大鼠随机分为对照组、手术组及缺氧缺血性脑损伤(HIBD)组,每组56只;各组组内又随机分为7个亚组:6 h组、12 h组、24 h组、48 h组、72 ... 目的:探讨血清泛素羧基末端水解酶-1(UCH-L1)蛋白在新生大鼠缺氧缺血性脑病中的价值。方法:将168只新生大鼠随机分为对照组、手术组及缺氧缺血性脑损伤(HIBD)组,每组56只;各组组内又随机分为7个亚组:6 h组、12 h组、24 h组、48 h组、72 h组、96 h组及7 d组,每亚组8只;HIBD组采用改良Rice法制备HIBD模型。各组大鼠于不同时间点处死取血,采用ELISA法检测血清中UCH-L1表达水平的变化。结果:不同时间点3组大鼠间UCH-L1蛋白表达水平差异均有统计学意义(P<0.01),HIBD组UCH-L1蛋白表达水平显著高于对照组和手术组(P<0.01),而对照组与手术组间UCH-L1蛋白表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。HIBD组大鼠各时间点UCH-L1蛋白表达水平差异有统计学意义(P<0.01);HIBD组血清UCH-L1蛋白在6 h时检测水平明显升高,48 h到达峰值,后逐渐下降,且脑组织损伤越严重,血清UCH-L1蛋白表达水平越高。结论:UCH-L1蛋白血清表达水平与脑组织损伤的严重程度表现一致,可作为检测指标应用于评估脑组织损伤的严重程度。 展开更多
关键词 脑缺血 脑缺氧 血清泛素羧基末端水解酶-1蛋白 大鼠
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啤酒酵母Ubr1野生型和缺失型菌株的比较蛋白组学分析 被引量:11
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作者 彭健 张耀婷 +9 位作者 李慧 肖小龙 韦超盈 周宇筝 卢爱 张礼铭 周梅 陈杰 丁成明 夏赞贤 《中国现代医学杂志》 CAS 北大核心 2017年第21期18-24,共7页
目的寻找并验证Ubr1泛素化底物蛋白大规模筛选方法的可行性。方法通过对啤酒酵母RJD347(Ubr1野生型)和AVY26(Ubr1缺失型)的差异蛋白质组学比较,分析酵母中可能存在的Ubr1直接或间接作用的底物蛋白。进一步通过外源表达实验验证差异蛋白... 目的寻找并验证Ubr1泛素化底物蛋白大规模筛选方法的可行性。方法通过对啤酒酵母RJD347(Ubr1野生型)和AVY26(Ubr1缺失型)的差异蛋白质组学比较,分析酵母中可能存在的Ubr1直接或间接作用的底物蛋白。进一步通过外源表达实验验证差异蛋白与Ubr1之间的相关性。结果组学研究得到249个差异表达蛋白,其中145个蛋白在AVY26(Ubr1缺失型)中表达上调。选取其中40个并外源表达验证5个差异蛋白MLC2、SCD6、AR G1、HO G1及R TF1与Ubr1具有相关性,受泛素连接酶Ubr1的泛素化调控。结论建立Ubr1泛素化底物候选蛋白库,同时验证出5个潜在Ubr1泛素化底物蛋白。 展开更多
关键词 啤酒酵母 泛素连接酶E3成分N-识别蛋白1 泛素 蛋白质组学
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Elafin在人支气管上皮细胞系16HBE胞质内对黏蛋白5AC生成的影响 被引量:1
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作者 魏华生 尤列.皮尔曼 +1 位作者 维克多.科罗索夫 周向东 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2011年第7期809-813,共5页
目的探讨Elafin在胞质内对表皮生长因子(EGF)诱导的黏蛋白(MUC)5AC生成的影响及其作用机制。方法体外培养人支气管上皮细胞系16HBE,将已构建好的pEGFP-N1-Elafin载体通过LipofectamineTM2000转染到16HBE细胞中,以转染空质粒载体的16HBE... 目的探讨Elafin在胞质内对表皮生长因子(EGF)诱导的黏蛋白(MUC)5AC生成的影响及其作用机制。方法体外培养人支气管上皮细胞系16HBE,将已构建好的pEGFP-N1-Elafin载体通过LipofectamineTM2000转染到16HBE细胞中,以转染空质粒载体的16HBE细胞作为对照,均给予外源性EGF作为刺激物共同孵育。以RT-PCR和ELISA分别检测细胞内黏蛋白(MUC)5AC mRNA水平和MUC5AC含量。间接免疫荧光细胞化学法结合激光共聚焦显微镜检测细胞核中核因子(NF)-κB的活性。免疫共沉淀法结合Western blot检测SUMO-1-p-IκBα含量。结果转染重组质粒的细胞中MUC5ACmRNA水平、MUC5AC的含量(0.36±0.09)以及NF-κB的活性显著低于转染空载体的对照组细胞(MUC5AC的含量0.55±0.07)(P<0.01),而SUMO-1-p-IκBα的含量则显著高于后者(P<0.01)。结论 Elafin能够通过促进p-IκBα的类泛素化阻止NF-κB的活化,从而下调MUC5AC的生成。 展开更多
关键词 ELAFIN 核因子-ΚB 泛素样修饰蛋白-1 泛素 蛋白5AC
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膀胱癌甲基化相关蛋白UHRF1的表达及临床意义
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作者 林谦 章庆华 +2 位作者 付承林 夏青青 王琼英 《浙江临床医学》 2020年第1期23-24,共2页
目的探讨泛素样含PHD和环指域蛋白1(UHRF1)在膀胱癌组织中的表达及其与膀胱癌临床病理特征的关系.方法采用免疫荧光方法,检测82例膀胱癌组织及56例癌旁正常组织中UHRF1的表达,并分析其与膀胱癌临床病理特征的关系.结果膀胱癌组织中UHRF... 目的探讨泛素样含PHD和环指域蛋白1(UHRF1)在膀胱癌组织中的表达及其与膀胱癌临床病理特征的关系.方法采用免疫荧光方法,检测82例膀胱癌组织及56例癌旁正常组织中UHRF1的表达,并分析其与膀胱癌临床病理特征的关系.结果膀胱癌组织中UHRF1的表达率为78.0%,明显高于癌旁正常组织的表达率10.7%,差异有统计学意义.其表达与组织学分级、临床分期、是否肌层浸润密切相关(P<0.05),与年龄、性别、组织学类型无明显相关(P>0.05).结论UHRF1在膀胱癌组织中表达明显高于正常组织,与组织学分级、临床分期、肌层浸润密切相关. 展开更多
关键词 膀胱癌 泛素样含PHD和环指域蛋白1 免疫荧光
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