重组腺相关病毒载体的泛素化机制及其应用

重组腺相关病毒(rAAV)载体是基因治疗临床应用载体之一,但目前rAAV基因药物的临床疗效还不甚理想,提高载体的转导效率是rAAV基因药物研发的主攻方向之一。近来研究发现,泛素-蛋白酶体系统在rAAV载体的胞内传递过程中具有非常重要的作用,调控该过程可显著提高rAAV载体在多种细胞和组织中的基因转导效率。

泛素-蛋白酶体途径与恶性肿瘤的发生

泛素-蛋白酶体是细胞中重要的非溶酶体蛋白降解途径,通过调控细胞周期和细胞凋亡相关蛋白的活性,激活或抑制原癌基因及抑癌基因的表达,从而直接或间接影响各种恶性肿瘤的发生。目前,泛素-蛋白酶体途径(ubiquitin-proteasome pathway,UPP)已经成为肿瘤预防和研究抗肿瘤药物的新靶点。

泛素-蛋白酶体系统在类风湿关节炎研究中的应用进展

类风湿关节炎(rheumatoidarthritis,RA)是以反复发作的关节滑膜炎为特征的慢性系统性疾病,该病可能与蛋白酶对蛋白的作用失衡等有关。泛素-蛋白酶体系统是细胞内蛋白质降解的主要途径,其主要通过降解错误折叠的蛋白质来维持细胞稳态,其功能异常会导致细胞稳态失调,从而引发包括RA在内的多种疾病。本文对泛素-蛋白酶体系统进行了概述,并对泛素-蛋白酶体系统在RA发生发展中的作用、泛素-蛋白酶体系统与RA相关的信号通路、泛素-蛋白酶体抑制剂在RA治疗中的应用进行了综述。

羟脑苷脂(CRBN)在来那度胺抗骨髓瘤活性中的分子机制

羟脑苷脂(Cereblon,CRBN)是一种具有离子蛋白酶活性的大脑相关蛋白,可与DNA损伤结合蛋白-1(DDB1)、滞蛋白4(Cullin4,Cul4A或Cul4B)和调节因子Cullins 1(RoC1)相互作用形成功能性E3泛素连接酶复合物(CRBN-CRL4),结合底物后通过泛素-蛋白酶体途径进行蛋白水解。它也是免疫调节剂(IMiD)抗骨髓瘤作用的必需靶蛋白。来那度胺与CRBN结合时会招募新的底物,使其结合在CRBN-CRL4上,导致其泛素化和蛋白酶体依赖的降解增加,从而产生抗骨髓瘤活性。与该复合物结合的底物有IKZF1、IKZF3蛋白和谷氨酰胺合成酶(GS)等,来那度胺处理后的IKZF1和IKZF3的CRBN依赖性降解也是H2O2介导的氧化应激的结果。除了泛素化依赖外,来那度胺还能通过介导非泛素依赖性途径,以竞争性阻止CRBN结合CD147-MCT1,以调节其抗肿瘤活性;其还能通过调节miRNA水平,CRBN结合下游蛋白AGO2的表达在多发性骨髓瘤(MM)细胞中起作用。来那度胺抗骨髓瘤活性的分子机制有很多种,本文从泛素化途径和非泛素化途径2方面就CRBN在来那度胺抗骨髓瘤活性的分子机制作一综述。

Skp2在人类恶性肿瘤中的研究进展

Skp2是泛素连接酶复合物的底物识别序列 ,对正常细胞周期起调控作用 ,在多数恶性肿瘤中表达增高。研究发现Skp2与肿瘤的预后、恶性进程、治疗均有密切关系。现就Skp2与恶性肿瘤的关系作一综述。

MG132诱导人血管平滑肌细胞凋亡及对caspase3表达的影响

目的观察蛋白酶体抑制剂MG132对人脐静脉血管平滑肌细胞(VSMC)的致凋亡作用及其对凋亡相关的天冬氨酸特异的半胱氨酸蛋白酶3(caspase3)表达的影响。方法采用多个浓度(2.5,5,10μmol/L)的蛋白酶体抑制剂MG132处理人脐静脉VSMC48h;DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡;流式细胞术分析细胞周期和细胞凋亡率;反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测caspase3基因转录水平;免疫细胞化学检测细胞caspase3蛋白表达。结果蛋白酶体抑制剂MG132处理48h后细胞凋亡率增加;RT-PCR检测发现细胞内凋亡相关基因caspase3mRNA表达上调;免疫细胞化学检测细胞caspase3蛋白表达水平升高。结论蛋白酶体抑制剂MG132能够诱导人脐静脉VSMC凋亡,其作用呈量-效关系;MG132诱导VSMC凋亡的机制可能与MG132抑制泛素-蛋白酶体途径(UPP)活性,促进caspase3基因转录,使细胞内caspase3增加而促进细胞凋亡。

树突状细胞中Rab40b/c相互作用蛋白质的鉴定研究

目的改进串联亲和纯化质谱(TAP-MS)技术,鉴定并验证Rab40b和Rab40c在树突状细胞中的相互作用蛋白质。方法用分子克隆技术构建融合蛋白基因e Xact-6×His-EYFP-Rab40b和e Xact-6×His-EYFP-Rab40c的表达载体,采用慢病毒感染建立融合蛋白e Xact-6×His-EYFP-Rab40b和e Xact-6×His-EYFP-Rab40c稳定表达的树突状细胞系。改进串联亲和纯化技术,通过e Xact-6×His标签进行新型串联亲和纯化和q TOF液质检测,运用Comp PASS算法过滤和GO富集分析,鉴定Rab40b和Rab40c的相互作用蛋白,并采用免疫共沉淀验证。结果成功构建e Xact-6×His-EYFP-Rab40b和e Xact-6×His-EYFP-Rab40c融合蛋白稳定表达的树突状细胞系。采用新型串联亲和纯化方法,鉴定获得26个Rab40b高可信相互作用蛋白和16个Rab40c高可信相互作用蛋白。Rab40b、Rab40c分别与Elongin B、Elongin C、Cullin5具有相互作用。结论成功建立新型串联亲和纯化方法。Elongin B、Elongin C、Cullin5是Rab40b、Rab40c的相互作用蛋白。

泛素-蛋白酶体抑制剂在动脉粥样硬化中的作用

动脉粥样硬化（atherosclerosis，AS）是危害人类健康的常见基础疾病，与卒中、高血压、冠状动脉疾病和糖尿病关系密切。AS以血管内膜损伤为前提，平滑肌细胞过度增殖、炎性细胞浸润、氧化应激、细胞凋亡等多种机制共同参与。在真核细胞生物中，大多数蛋白质通过泛素一蛋白酶体系统（ubiquitin—proteasome system,UPS）降解。越来越多的证据表明，UPS与AS的发生、发展及并发症的发生有关。文章对UPS与AS的关系及泛素蛋白酶抑制剂对AS的影响进行了综述。

Skp2基因沉默对子宫内膜癌HEC-1A细胞p27蛋白表达及细胞增殖的影响

RNA干扰（RNAi）是一项新的使基因表达阻断的技术，一种广泛使体外基因失活或沉默的方法，足在转录水平抑制基因表达的一种研究基因功能的有力工具，不仅可用于研究基因功能，同时也为基因治疗提供丁一个新的重要技术。S期激酶相关蛋白2（S-phase kinase-associated protein2，Skp2）是泛素连接酶复合物的组成部分F-box蛋自家族成员之一，通过特异性结合磷酸化的底物，引起底物的泛素化降解，对细胞周期的调控起重要作用，在肿瘤研究中日益受到关注。

胃癌外周血TWA1 mRNA的表达与预后价值

目的检测胃癌(GC)患者外周血TWA1 mRNA表达水平,分析其与患者长期预后的关系。方法选择2016年6月至2017年6月于西宁市第二人民医院诊治的97例GC患者,实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测外周血TWA1表达量,随访并记录患者无进展生存期(PFS)。受试者工作特征(ROC)曲线判定TWA1 mRNA的阈值,分组比较TWA1 mRNA不同表达患者的PFS情况。Cox回归模型评估TWA1 mRNA水平对GC患者预后的预测价值。结果随访(20.91±5.76)个月,随访率为94.79%(91/94),平均PFS(21.83±5.13)个月。TWA1 mRNA对GC患者PFS判定的曲线下面积为0.781(95%CI:0.687~0.875,P<0.001),截断值为1.27。TWA1 mRNA高表达患者的PFS显著短于低表达患者(χ~2=14.415,P<0.01)。淋巴结转移(HR=3.328,95%CI:2.098~5.971,P=0.044)、TNMⅢ~Ⅳ期(HR=3.400,95%CI:1.114~4.795,P=0.011)及外周血TWA1 mRNA高表达(HR=7.429,95%CI:1.711~32.263,P=0.007)是影响患者PFS的独立危险因素。结论外周血TWA1的表达与GC患者PFS显著相关,TWA1 mRNA水平对GC患者随访预后情况具有较好的预测价值。