EGCG对A549细胞炎性反应模型UBC9表达的影响

目的观察泛素连接酶9(ubiquitin conjugating enzyme 9,UBC9)在表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate,EGCG)作用的脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导A549细胞中的表达,探讨UBC9与EGCG抗炎性反应机制的相关性。方法根据筛选结果随机分为对照组、EGCG组、LPS组、EGCG+LPS组4个组,MTT检测不同浓度的EGCG(50~400μg/ml)和LPS(10~50μg/ml)对A549细胞增殖活性的影响,筛选最佳作用浓度,进一步通过免疫组化染色法、蛋白质印迹法和Realtime-PCR检测分析各处理组UBC9蛋白及其mRNA的相对表达量。结果 MTT显示,200μg/ml的EGCG细胞增殖抑制作用最强(F=1618.18,P<0.001),LPS 25μg/ml细胞增殖活性最明显(F=237.38,P<0.001)。免疫组化与蛋白质印迹检测均显示,与对照组比较,EGCG下调A549细胞UBC9蛋白表达(P<0.001),LPS则上调UBC9表达量(P<0.001),与LPS组比较,EGCG+LPS组UBC9蛋白表达明显降低(P<0.001)。同样,Realtime-PCR显示,与对照组比较,EGCG组UBC9 mRNA表达下调(F=89.34,P<0.001),LPS组UBC9 mRNA表达上调(F=225.00,P<0.001),与LPS组比较,EGCG+LPS组UBC9mRNA的表达受到抑制,显著降低(F=625.00,P<0.001)。结论 EGCG下调LPS刺激的炎性反应模型的UBC9的表达,其抗炎机制可能与抑制UBC9蛋白与mRNA表达有关。