小麦E3泛素连接酶TaRING1互作靶标筛选与验证

【目的】为探究TaRING1在小麦与条锈菌互作过程中的作用,解析其作用机理,为小麦条锈病的绿色防控提供理论依据。【方法】利用酵母双杂交技术筛选TaRING1的互作靶标蛋白,并通过荧火素酶互补实验(LCA)及双分子荧光互补(BiFC)验证互作,通过泛素化实验对TaRING1的泛素功能进行验证,通过烟草瞬时表达及小麦原生质体转化分析靶标TaRIP92的亚细胞定位。【结果】以TaRING1作为诱饵,利用酵母双杂交技术筛选到互作靶标TaRIP92,并通过LCA及BiFC验证TaRING1与TaRIP92互作,通过体外泛素化实验证明TaRING1可以泛素化底物TaRIP92,烟草瞬时表达及小麦原生质体转化发现TaRIP92蛋白定位于线粒体。【结论】TaRING1通过与线粒体蛋白TaRIP92互作并对其进行泛素化。

泛素连接酶LRSAM1对人神经胶质母细胞瘤细胞生物学行为的影响及其可能机制

目的探讨泛素连接酶LRSAM1在CD166降解中的作用及其对人神经胶质母细胞瘤细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法人神经胶质母细胞瘤U-87 MG细胞,采用免疫共沉淀法检测LRSAM1与CD166是否存在结合;将对数生长期U-87 MG细胞分为pcDNA3.1-LRSAM1组、pcDNA3.1-NC组和空白对照组,pcDNA3.1-LRSAM1组和pcDNA3.1-NC组细胞分别转染pcDNA3.1-LRSAM1质粒载体和pcDNA3.1空质粒载体,空白对照组细胞正常培养,采用实时荧光定量PCR法检测3组细胞LRSAM1 mRNA相对表达量,采用Western blot法检测LRSAM1蛋白相对表达量,采用免疫荧光染色法检测LRSAM1与CD166表达情况,采用细胞克隆形成实验检测细胞集落形成数目,采用Annexin V-FITC/PI染色检测细胞凋亡率,采用细胞划痕试验检测细胞划痕愈合率,采用Transwell小室实验检测侵袭细胞数。结果 U-87 MG细胞中LRSAM1与CD166存在结合。pcDNA3.1-LRSAM1组细胞LRSAM1 mRNA和蛋白相对表达量(3.26±0.28、0.72±0.06)均高于空白对照组(1.00±0.03、0.18±0.01)和pcDNA3.1-NC组(0.99±0.02、0.19±0.02)(P<0.05),转染成功。U-87 MG细胞LRSAM1与CD166共定位,pcDNA3.1-LRSAM1组LRSAM1荧光染色强度增加,CD166荧光染色强度减弱;转染后pcDNA3.1-LRSAM1组细胞集落形成数目[(69.21±7.54)个]、侵袭细胞数[(33.71±4.17)个]均少于空白对照组[(142.38±14.61)、(68.87±9.42)个]和pcDNA3.1-NC组[(152.40±15.92)、(75.54±9.06)个](P<0.05),细胞凋亡率[(17.41±2.03)%]高于空白对照组[(8.07±0.79)%]和pcDNA3.1-NC组[(8.45±0.88)%](P<0.05),细胞划痕愈合率[(30.16±4.10)%]低于空白对照组[(58.22±5.82)%]和pcDNA3.1-NC组[(62.09±7.13)%](P<0.05);空白对照组与pcDNA3.1-NC组各指标比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论过表达LRSAM1可抑制人神经胶质母细胞瘤U-87 MG细胞增殖、侵袭与迁移,促进细胞凋亡,其机制可能与LRSAM1结合CD166有关。

SCF泛素连接酶的体外泛素化体系构建与检测

为研究蛋白质的体外泛素化过程,利用大肠杆菌表达系统异源表达和纯化APPBP1/UBA3(E1)、UBC12(E2)、Cullin1-Rbx1(E3)和Nedd8(neural precursor cell expressed developmentally down-regulated protein 8)蛋白,制备FITC-Cysteine绿色荧光素标记的泛素Ub(Ubiquitin),构建了SCF泛素连接酶的体外泛素化体系,同时实现快速检测SCF泛素连接酶中Cullin1蛋白的自泛素化修饰。结果表明,建立的体外SCF E3自泛素化活性反应体系具有较高的可操作性和便利性。

线粒体泛素连接酶1对大鼠心肌细胞H9C2缺氧损伤的实验研究

目的 观察线粒体泛素连接酶1(mitochondrial ubiquitin ligase 1,Mul1)对心肌细胞缺氧损伤的影响。方法构建大鼠源Mul1基因过表达和敲减的慢病毒载体,分别转染大鼠心肌细胞H9C2。将阴性对照组、Mul1过表达组、Mul1过表达空载体组、Mul1敲减组和Mul1敲减空载体组细胞分别进行常规培养(5%CO_(2)、21%O_(2))和缺氧培养(5%CO_(2)、94%N_(2)、1%O_(2))后,利用倒置显微镜观察各组细胞形态变化,利用CBM智能细胞检测平台动态观察细胞存活率,透射电镜观察心肌细胞超微结构。结果 与相应的各常规培养组相比,缺氧培养后各组H9C2细胞存活率均下降、细胞形态明显改变,细胞器受到损伤。缺氧培养后,与阴性对照组和Mul1过表达空载体组相比,Mul1过表达组细胞状态差,细胞存活率下降(P均<0.05);Mul1敲减组与阴性对照组和Mul1敲减空载体组相比细胞状态较好,存活率上升(P均<0.05);电镜观察结果显示,与阴性对照组和Mul1过表达空载体组相比,Mul1过表达组细胞结构损伤加重,大部分线粒体嵴断裂或溶解呈空泡状、胞质内容物明显减少;Mul1敲减组细胞结构损伤程度较阴性对照组和Mul1敲减空载体组减轻,大部分线粒体结构正常,偶见嵴断裂现象。结论 Mul1可加重缺氧诱导的心肌细胞结构损伤,使心肌细胞存活力下降。

大豆E3泛素连接酶基因GmHOS1a和GmHOS1b生物信息学分析和敲除载体构建

HIGH EXPRESSION OF OSMOTICALLLY RESPONSIVE GENES 1(HOS1)是植物中多种信号途径的整合因子,在植物发育、胁迫反应、光形态建成和开花调控中发挥至关重要的作用,是很有潜力的作物工程育种目标基因,但其在大豆中的功能尚未被揭示。为了揭示其在大豆中的功能,本研究利用反向遗传学,成功克隆了两个大豆HOS1基因,GmHOS1a和GmHOS1b,并通过生物信息学技术,对其蛋白结构、表达模式和功能进行了分析。进化树和结构域分析表明,GmHOS1a和GmHOS1b具有N端的环指结构域和与ELYS高度相似的保守基序,与拟南芥和水稻HOS1蛋白高度同源。亚细胞定位结果显示,GmHOS1a和GmHOS1b定位在细胞核中。Quantitative Real-time PCR(qRT-PCR)结果表明,GmHOS1a和GmHOS1b的基因表达模式相似,均在三出复叶中高度表达。48 h光周期RNA-sequencing(RNA-seq)和qRT-PCR分析表明,GmHOS1a和GmHOS1b基因的表达具有生物钟昼夜节律性,其中GmHOS1a的表达量显著高于GmHOS1b,GmHOS1a见光后表达量升高,黑暗前表达量达到峰值。为进一步探索GmHOS1a和GmHOS1b蛋白的功能,利用CRISPR/Cas9系统构建了9个GmHOS1a和GmHOS1b基因敲除载体,通过发根检测实验,筛选出6个高效工作载体,可供后续遗传转化实验使用。本研究为阐明该基因的功能和作用机理奠定了理论基础,并提供了可供遗传转化的载体材料。

泛素连接酶SMURF1催化ADAR1的多聚泛素化修饰

既往研究发现,SMAD特异性E3泛素蛋白连接酶1(SMAD specific E3 ubiquitin protein ligase 1,SMURF1)通过其E3泛素连接酶活性介导自噬进程,然而SMURF1的泛素化底物蛋白质仍有待进一步挖掘。本文利用免疫共沉淀(Co-IP)联合蛋白质谱分析捕获并鉴定THP-1细胞中SMURF1的相互作用蛋白质集合物,发现在THP-1细胞中SMURF1可与222种蛋白质物理性结合,RNA腺苷脱氨酶1(adenosine deaminase acting on RNA 1,ADAR1)具有较高的肽段结合分数。构建SMURF1过表达载体并转染到HEK-293T细胞中,Co-IP和Western印迹检测验证外源性SMURF1与内源性ADAR1存在相互作用。qRT-PCR和Western印迹检测结果显示,在HEK-293T细胞中过表达SMURF1后ADAR 1 mRNA水平差异无统计学意义、蛋白质水平明显降低(P<0.05)。用放线菌酮(CHX)分别处理正常和过表达SMURF1的HEK-293T细胞,Western印迹检测显示,过表达SMURF1后ADAR1的半衰期缩短(P<0.05)。进一步在HEK-293T细胞中共转染泛素(Ub)过表达载体和SMURF1过表达载体,通过Co-IP和Western印迹检测结果证实,过表达SMURF1后ADAR1的多聚泛素化水平显著增加(P<0.05)。在蛋白酶体抑制剂(MG132)作用后,Western印迹检测结果表明,蛋白酶体降解途径受抑制后SMURF1对ADAR1的负调控作用减弱(P<0.05)。本研究表明,SMURF1可以与ADAR1相互作用,催化ADAR1的多聚泛素化修饰并介导其蛋白酶体途径降解,为探索SMURF1通过影响ADAR1蛋白质稳定性而具备的多种生物学功能提供理论基础。

甘蔗E3泛素连接酶基因PRT1的生物信息学及表达模式分析

为探究甘蔗PROTEOLYSIS 1(PRT1)基因与黑穗病菌的互作关系,以甘蔗割手密种和栽培品种为研究对象,通过RT-PCR技术对ScPRT1(GenBank登录号:MT747433)基因进行克隆,生物信息学分析、定量PCR、亚细胞定位和基因共表达网络分析。生物信息学分析表明,该基因的cDNA全长为1621 bp,包含一个长度为1260 bp,编码419个氨基酸的完整开放读码框;其编码蛋白的分子量为46.56 ku,为酸性、不稳定的亲水蛋白,无信号肽,具有核定位信号;该蛋白包含2个RING结构域和1个ZZ结构域;ScPRT1蛋白的高级结构元件多为无规则卷曲。定量PCR结果显示,ScPRT1在皮、叶片、芽中的表达量相差不大,在蔗髓中表达量最高。同时该基因的表达受脱落酸胁迫后显著上调;受黑穗病菌胁迫后,在甘蔗抗黑穗病品种中上调表达,在感黑穗病品种中下调表达,都达到了显著水平。亚细胞定位结果揭示,ScPRT1定位于细胞核。寄主甘蔗和病原黑穗病菌的基因共表达网络中,与甘蔗ScPRT1共表达的黑穗病菌基因中,有3个为N端具有芳香族氨基酸残基的黑穗病菌效应蛋白,这暗示它们之间存在直接的相互作用。以上结果表明,ScPRT1在甘蔗激素信号传导以及响应黑穗病菌侵染过程中发挥重要作用。

E3蛋白泛素连接酶WWP1调控TLR4介导的炎症性肠病炎性聚集中的作用

目的 探讨E3蛋白泛素连接酶WWP1调控TLR4介导的炎症性肠病炎性聚集中的作用及机制。方法 构建髓系细胞中特异性敲除E3蛋白泛素连接酶WWP1基因的小鼠,检测WPP1基因是否被敲除,随后进行分组,分为WWP敲除组(WWP1^(+/+))和WWP未敲除组(WWP1-/-),两组小鼠再分别喂养菊聚糖硫酸钠(DSS)建立炎症性肠病模型(DSS组)和喂养生理盐水(无菌水组),每组小鼠共10只,喂养7 d,每天检测小鼠结肠炎的临床症状,结束后处死小鼠,测量结肠长度,评估小鼠结肠炎损伤情况,Elisa检测小鼠结肠黏膜组织炎性因子IL-6、IL-10、TNF-α水平,采用RT-qPCR和Western blot检测TLR4表达水平。同时使用基因沉默方法敲除RAW 264.7细胞的WWP1基因,使用LPS刺激构建结肠炎症情况下的巨噬细胞环境,检测WWP1+组与WWP1-组细胞中IL-6、IL-10、TNF-α和TLR4、WWP1表达水平。结果 WWP1^(+/+)组和RAW264.7细胞沉默组中WWP1-mRNA表达均明显下调,提示成功敲除WWP1基因。DSS组WWP1-/-小鼠体质量减轻程度明显大于DSS组WWP1^(+/+)小鼠,DSS组WWP1-/-小鼠的DAI值明显大于DSS组WWP1^(+/+)小鼠,DSS组WWP1^(+/+)小鼠结肠长度明显长于DSS组WWP1-/-小鼠;与WWP1-/-相比,WWP1^(+/+)的小鼠组织病理损伤程度更轻,结肠炎的症状更轻,同时小鼠IL-6、TNF-α表达水平明显更低,IL-10表达水平明显更高,炎症损伤程度更轻,RT-qPCR和Western blot检测结肠组织和细胞中TLR4的表达也显示,与WWP1-/-相比,WWP1^(+/+)的小鼠TLR4表达水平明显更低,在细胞株中,WWP1+组TLR4表达水平明显更低(P<0.05)。结论 E3蛋白泛素连接酶WWP1可以对炎症性肠病中炎性聚集起到保护作用,这种保护作用的发挥可能是通过TLR4通路实现的。

E3泛素连接酶ARIH1功能的研究进展

ARIH1是一种新发现的E3泛素连接酶,属于RBR家族,具有多种生物学功能,并与许多疾病的发生发展密切相关,如参与调控癌组织的进展,抑制细菌病毒等的增殖,调节代谢等,但仍有很多功能及机制有待研究人员去挖掘和探索。文章旨在对近年ARIH1蛋白的功能研究进展进行综述,为研究人员提供可能的研究方向和目标。

卵巢癌组织中泛素连接酶SIAH2、HIF-1α蛋白的表达观察

目的观察泛素连接酶SIAH2、低氧诱导因子1α(HIF-1α)蛋白在卵巢癌组织中的表达变化,探讨其临床意义。方法卵巢癌患者57例、卵巢囊肿患者55例、卵巢交界性肿瘤患者40例,手术时留取肿瘤组织(其中35例卵巢癌患者手术时一并留取癌旁组织)。采用免疫组化法对57例卵巢癌患者、55例卵巢囊肿患者、40例卵巢交界性肿瘤患者肿瘤组织中的SIAH2、HIF-1α蛋白进行定性检测。采用Western blotting法对35例卵巢癌患者肿瘤组织及癌旁组织中的SIAH2、HIF-1α蛋白进行定量检测。结果卵巢囊肿、卵巢交界性肿瘤、卵巢癌患者肿瘤组织SIAH2蛋白和HIF-1α蛋白的阳性表达率分别为7.27%和10.9%、47.5%和42.5%、78.9%和80.7%,两两相比,P均<0.05;卵巢癌患者肿瘤组织中SIAH2蛋白与HIF-1α蛋白的阳性表达率呈正相关(r=0.402,P<0.05);卵巢癌患者肿瘤组织中SIAH2、HIF-1α蛋白的阳性表达率与肿瘤分化程度、FIGO分期和淋巴结转移有关(P均<0.05)。35例卵巢癌患者肿瘤组织、癌旁组织中SIAH2蛋白的相对表达量分别为2.518±0.18、2.016±0.142,两者相比,P<0.05;35例卵巢癌患者肿瘤组织、癌旁组织中HIF-1α蛋白的相对表达量分别为1.41±0.14、0.75±0.13,两者相比,P<0.05;卵巢癌患者肿瘤组织中SIAH2蛋白与HIF-1α蛋白的表达量呈正相关(r=0.408,P<0.05)。结论卵巢癌患者肿瘤组织中SIAH2蛋白和HIF-1α蛋白高表达;SIAH2蛋白和HIF-1α蛋白可能与卵巢癌的发生及转移有关,且二者可能具有协同作用。

泛素连接酶hHrd1在人乳腺癌组织表达的意义

目的探讨一种泛素连接酶hHrd1在人乳腺癌发病中的病理意义。方法应用免疫组织化学SP法研究正常人乳腺组织、乳腺增生症、乳腺纤维腺瘤、原发性乳腺癌组织中hHrdl的表达。结果人乳腺癌组织hHrd1蛋白表达水平明显强于正常人乳腺组织、乳腺增生症、乳腺纤维腺瘤。导管内癌(或伴早浸)与浸润性导管癌相比,表达水平低,差异有显著性意义(P<0.05)。人乳腺浸润性导管癌组织hHrd1表达与肿瘤大小有关(P<0.05),与组织学分级、淋巴结是否转移无关(P>0.05)。结论泛素连接酶hHrd1参与人乳腺癌的发生。

泛素连接酶WWP1和Smurfs在前列腺癌组织中的表达及其与骨转移的关系

目的探讨泛素连接酶E3 WWP1(WW domain containing E3 ubiquitiin pProtein ligase 1)、Smurf1(smad ubiquitination regulatory factor 1)、Smurf2在前列腺癌骨转移中的作用。方法采用免疫组织化学法和实时定量PCR法分别对良性前列腺增生(对照组)、前列腺癌不伴骨转移患者(无转移组)及前列腺癌伴骨转移患者(转移组)前列腺癌组织中泛素连接酶E3 WWP1、Smurf1、Smurf2进行检测。结果与对照组相比,前列腺癌患者肿瘤组织中泛素连接酶E3 WWP1、Smurf1、Smurf2免疫组织化学染色累积光密度值及mRNA表达显著增高,且具有统计学意义(P<0.05);与无转移组相比,转移组患者前列腺癌肿瘤组织中泛素连接酶E3WWP1、Smurf1、Smurf2免疫组织化学染色累积光密度值及mRNA表达显著增高,且具有统计学意义(P<0.05)。结论泛素连接酶E3 WWP1、Smurf1、Smurf2表达增高是前列腺癌发生发展及侵袭转移过程中的可能机制之一。

E3泛素连接酶Siah-1与糖尿病血管内皮损伤的关系研究

目的探讨E3泛素连接酶Siah-1与糖尿病血管内皮损伤的关系。方法器官浴槽和血管张力系统测定雄性C57BL/6小鼠,以及雄性db/db糖尿病小鼠的离体胸主动脉血管张力;蛋白质印迹法(Western blot)和酶联免疫吸附法(ELISA)测定小鼠Siah-1和连环蛋白(β-catenin)水平。结果糖尿病小鼠离体胸主动脉血管对乙酰胆碱(Ach)引发的舒张反应低于正常小鼠(t=24.270,P=0.000),Siah-1抑制剂孵育30 min的糖尿病小鼠对Ach引发的舒张反应与正常小鼠无明显差异(t=1.991,P=0.327)。各组小鼠对硝普钠(SNP)引发的血管舒张呈现良好的反应,差异无统计学意义(F=0.145,P=0.541)。经Siah-1抑制剂处理的糖尿病小鼠Siah-1浓度明显降低(t=5.483,P=0.017),而β-catenin浓度明显升高(t=6.670,P=0.023)。在有β-catenin抑制剂的情况下,使用Siah-1抑制剂的糖尿病小鼠血管内皮舒张反应明显低于正常小鼠(t=1.441,P=0.378)。结论 E3泛素连接酶Siah-1参与了糖尿病血管内皮损伤的过程,其机制可能与对β-catenin信号通路的影响有关。

泛素连接酶Pellino1蛋白研究进展

Pellino1蛋白是近年来新发现的一种泛素连接酶,在固有免疫细胞和获得性免疫细胞中参与蛋白降解、蛋白间相互作用等,与炎症和自身免疫密切相关。本文就Pellino1蛋白的研究进展作一综述。

泛素连接酶LNX1促进外源PBK的泛素化和降解

目的研究LNX1对其相互作用蛋白PBK的泛素化和降解。方法克隆、原核表达、纯化了一系列重组人LNX1截断体蛋白和LNX1全长蛋白;在体外泛素化体系中研究其对PBK的泛素化,哺乳动物细胞内研究其对外源PBK的泛素化和降解。结果在体外泛素化体系中LNX1泛素化PBK,并研究了不同LNX1截断体对PBK泛素化的影响;发现在哺乳动物细胞内外源LNX1促进外源PBK的泛素化,进而导致其通过蛋白酶体降解。结论研究发现了LNX1对外源PBK的泛素化和降解,为研究LNX1的生理功能提供了重要线索。

泛素连接酶LNX1的表达、活性测定和功能初探

目的:在大肠杆菌中表达重组人泛素连接酶LNX1,并研究其对钾离子通道蛋白Kv1.4的泛素化作用。方法:构建人LNX1重组蛋白原核表达载体pGEX-LNX1,在大肠杆菌中通过IPTG诱导表达重组蛋白,表达产物经GSTrap FF纯化,并通过体外泛素化(in vitroubiquitination)方法测定其泛素连接酶活性,同样用体外泛素化方法研究其对含有Kv1.4的C端的人工底物的泛素化。结果:获得了纯化的有泛素连接酶活性的重组人LNX1蛋白,重组LNX1可以在体外泛素化体系中泛素化含有Kv1.4的C端的人工底物。结论:重组人LNX1原核表达成功,具有泛素连接酶活性,并催化Kv1.4的泛素化。

泛素连接酶MDM2促进外源NOLC1的泛素化和降解

目的研究泛素连接酶MDM2对其调节因子NOLC1的泛素化和降解。方法克隆原核表达了NOLC1全长蛋白和其核定位信号区域,在体外泛素化体系中利用有泛素连接酶活性的重组MDM2研究其对NOLC1的泛素化。在哺乳动物细胞中,研究MDM2对外源转染的NOLC1的降解。结果在体外泛素化体系中MDM2泛素化NOLC1全长和其核定位信号区域;在哺乳动物细胞中,MDM2促进外源NOLC1降解超过70%,且NOLC1的降解通过蛋白酶体途经实现。结论 MDM2促进外源NOLC1的泛素化和降解,为研究MDM2-TP53-NOLC1之间的相互调节提供了新的线索。

CARP1基因克隆、表达及其泛素连接酶活性的鉴定

目的:克隆并表达caspase-8/10相关RING结构域蛋白1(CARP1)基因,检测其泛素连接酶活性。方法:提取结肠癌HCT116细胞总RNA,RT-PCR扩增CARP1基因,将其克隆到真核表达载体pcDNA3-Flag中,序列正确的阳性克隆进行扩增,提取质粒转染至293T细胞中进行瞬时表达,通过体内泛素化检测其泛素化酶活性,通过萤光素酶报告基因的方法检测其对NF-κB转录活性的影响,利用细胞生长曲线检测CARP1基因对结肠癌细胞生长的影响。结果:免疫印迹实验表明CARP1基因在293T细胞中获得有效表达;免疫共沉淀实验表明,当CARP1存在时,受体相互作用蛋白1(RIP1)被泛素化;萤光素酶实验结果表明CARP1抑制肿瘤坏死因子α(TNFα)引起的NF-κB报道基因的激活;通过生长曲线发现CARP1能促进结肠癌细胞系HCT116生长,并能部分抵抗顺铂抑制细胞生长的作用。结论:构建的人CARP1基因真核表达载体在293T细胞中获得表达,表达产物具有RIP1泛素连接酶的活性,可抑制TNFα引起的NF-κB报告基因的激活,并且促进结肠癌细胞的生长,为进一步的基因功能研究奠定了基础。

泛素蛋白连接酶1在大鼠颈动脉球囊损伤后新生内膜中的表达及意义

目的 研究胞质泛素蛋白连接酶1（KPC1）在大鼠颈动脉球囊损伤后的蛋白表达情况,探讨其在新生内膜形成过程中的生物学功能.方法 将成年雄性SD大鼠（450 ～ 500 g）随机分为假手术组和颈动脉球囊损伤模型组,建模后以左侧损伤动脉为实验组,同时以假手术组的左侧正常颈动脉为对照组.实验组大鼠于损伤后1d、3d、7d、14d、28d分别处死并取材,采用Western blot检测KPC1蛋白、内膜增殖细胞核抗原（PCNA）表达情况,以qRT-PCR检测KPC1的mRNA表达,苏木精-伊红（HE）染色后比较内膜增生程度;采用体外培养血管平滑肌细胞（VSMC）建立增殖模型,运用Western blot及qRT-PCR检测其KPC1蛋白、KPC1 mRNA表达特征.结果 Western blot结果显示,颈动脉球囊损伤后实验组KPC1蛋白表达水平明显低于正常对照组（P＜0.05）,而PCNA蛋白表达量明显高于正常对照组（P＜0.05）;qRT-PCR检测结果显示,实验组KPC1的mRNA水平明显低于对照组（P＜0.05）;HE染色结果示颈动脉球囊损伤后1d、3d时光镜下血管内膜增生不明显;7d时光镜下可见新生内膜,增生的VSMC向内膜下迁移,管腔开始狭窄;14d时,可见明显新生内膜,VSMC排列紊乱,内弹力膜断裂,管腔明显狭窄,内膜厚度超过中膜;28d时,血管内膜继续不规则增生,血管腔狭窄程度继续加重,狭窄超过50％.体外培养并模拟VSMC增殖,提取细胞进行Western blot和qRT-PCR检测显示,KPC1蛋白、KPC1 mRNA表达在血小板源性生长因子-BB刺激增殖后开始逐渐减低.结论 抑制KPC1基因表达可促进损伤内膜增生,其作用机制可能与促进VSMC增殖有关.

泛素连接酶Hrd1促进α1-抗胰蛋白酶Z型突变体降解及细胞存活

目的：α1-抗胰蛋白酶（AAT）缺乏症是一种常染色体隐性遗传病，其特征是错误折叠的AAT突变体在肝细胞内质网内聚集及血清AAT水平降低，并由此引发肝脏及肺部疾病。AAT的Z型突变（ATZ）是造成AAT缺乏的最常见突变类型。有研究已经证实泛素-蛋白酶体通路参与ATZ的降解。Hrd1是一种定位于内质网膜的泛素连接酶（E3），本文旨在研究Hrd1是否可以通过内质网相关降解通路促进ATZ的降解。