小麦条锈菌泛肽-核糖体蛋白S27a基因的鉴定与表达分析

从小麦条锈菌吸器cDNA文库中鉴定到一个泛肽-核糖体蛋白S27a(Ubiquitin-ribosomal protein S27a,UBRS27a)基因,命名为PsUBRS27a。该基因开放阅读框为480bp,编码包含159个氨基酸残基的蛋白质,其氨基酸序列含有典型的UBRS27a蛋白所具有的ubiquitin和Ribosomal_S27结构域;序列比对发现UBRS27a蛋白在不同物种中高度保守,但PsUBRS27a蛋白在进化上与柄锈菌属的UBRS27a蛋白亲缘关系最近;种内多态性分析发现PsUBRS27a基因在不同小麦条锈菌菌系中的序列非常保守,无核苷酸变化;实时荧光定量PCR结果表明,PsUBRS27a基因在条锈菌侵染小麦过程中呈上调表达趋势,高峰期为接种后168h。

泛肽、核糖体蛋白及泛肽-核糖体蛋白S27a与肿瘤的关系

泛肽-核糖体蛋白S27a(Ubiquitin-ribosomal protein S27a,UBRS27a)是泛肽和核糖体蛋白的融合蛋白,N端为泛肽,C端由含C2-C2型锌指结构域的高度保守核糖体蛋白S27a构成。在真核细胞中表达时,被酶解成泛肽和核糖体蛋白。该多功能核糖体蛋白在各种活性增殖细胞和瘤组织中高度表达,在多种类型的肿瘤细胞中,该基因的过量表达是一个典型特征。本实验室对该蛋白在家蚕中的作了初步研究,也发现RPS27a在活性增殖细胞中表达量很高。大多数核糖体蛋白的功能还没有完全探明,它们不仅仅在组装成核糖体时起作用,往往还有核糖体外的功能。回顾了最近几年有关该融合蛋白以及与它相关的泛肽途径、核糖体蛋白与肿瘤之间的关系。通过对它们的研究,有可能预示肿瘤的发生和发展,并为肿瘤临床诊断提供依据,为恶性肿瘤的治疗提供靶点。

人泛素-核糖体蛋白27a原核表达载体构建及表达

目的构建并表达携带谷胱甘肽S-转移酶(GST)标签的人泛素-核糖体蛋白S27a(UBRPS27a)原核表达载体。方法利用反转录聚合酶链反应从HL-60细胞中扩增RPS27A基因全长,克隆至pMD-19T载体中,酶切回收后插入原核表达载体pGEX4T-1,构建重组表达载体pGEX4T1-RPS27A,转化大肠埃希菌BL21,以异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导表达GST-UBRPS27a融合蛋白。结果经测序与酶切鉴定,重组质粒pGEX4T1-RPS27A构建正确;经重组质粒转化的BL21细菌诱导4h后可高效表达UBRPS27a融合蛋白。结论成功构建UBRPS27a原核表达载体,为进一步研究其结构、功能及其在肿瘤发生发展中的作用奠定了基础。

rhGLP-1(7-36)对人肝HL-7702细胞系Akt、P70S6K蛋白的影响

目的观察重组人胰高血糖素样肽-1(7-36)[recombinant human glucagon like peptide-1(7-36),rhGLP-1(7-36)]对人肝HL-7702细胞系蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)、核糖体蛋白S6激酶(ribosomal protein S6 kinase,P70S6K)表达的影响,探讨其作用机制。方法选用处于对数生长期的人肝HL-7702细胞系,实验组用含100 nM浓度rhGLP-1(7-36)的培养基分别处理0 min、10 min、60 min、90 min;对照组用不含100 nM浓度rhGLP-1(7-36)的培养基分别处理相同的时间。用蛋白质免疫印迹法(Western Blot)分别检测各组Akt蛋白、P70S6K蛋白的表达水平。结果与对照组相比,实验组10 min、60 min、90 min时Akt蛋白、P70S6K蛋白的表达水平无明显变化;10 min、60 min、90 min时p-AktThr308蛋白、p-AktSer473蛋白及磷酸化P70S6K蛋白表达水平均升高,其中,10 min、60 min时差异无统计学意义(P>0.05),90 min时差异有统计学意义(t=-5.596,P=0.011;t=-5.405,P=0.012;t=-5.597,P=0.011)。结论 rhGLP-1(7-36)促进肝脏细胞中Akt蛋白和P70S6K蛋白的磷酸化与时间有关,该结果为研究GLP-1对肝细胞的直接作用提供依据。

过表达血红素加氧酶-1、金属硫蛋白2A、泛素蛋白B、核糖体蛋白S27a对HepG2细胞增殖和侵袭力的影响

目的研究过表达目标蛋白(HMOX-1、MT2A、UBB、RPS27a)对人肝癌HepG2细胞增殖和侵袭力的影响。方法用目标蛋白的过表达质粒转染HepG2细胞株,用空载体转染HepG2作为对照组。应用MTT法测定细胞体外增殖能力;Transwell实验检测各组细胞的体外侵袭力。结果 MTT法结果提示过表达目标蛋白后,HepG2细胞株增殖能力较对照组明显增强,差异有统计学意义(P<0.05);Transwell实验结果表明,过表达HMOX1、RPS27a后,HepG2细胞侵袭能力较对照组明显增加,差异有统计学意义(P<0.05);过表达MT2A、UBB后,HepG2细胞侵袭能力与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论过表达目标蛋白可增强HepG2细胞的增殖和侵袭能力。