唾液腺腺泡细胞癌中NR4A3基因重排及NOR-1蛋白表达分析

目的:探讨NR4A3基因重排和NOR-1蛋白表达在唾液腺腺泡细胞癌中的表达及在鉴别诊断中的价值。方法:收集2020年5月—2024年1月于上海交通大学医学院附属第九人民医院口腔病理科诊断的唾液腺癌119例,包括腺泡细胞癌(acinic cell carcinoma,AciCC)63例,黏液表皮样癌(mucoepidermoid carcinoma,MEC)31例,分泌性癌(secretory carcinoma,SC)25例。分别使用荧光原位杂交和免疫组织化学染色检测NR4A3基因重排和NOR-1蛋白表达情况,采用SPSS 18.0软件包对数据进行统计学分析。结果:AciCC主要发生于大唾液腺。与MEC和SC相比,AciCC好发于女性(P=0.006)。NR4A3基因重排在AciCC、MEC和SC中的阳性率分别为76.2%(48/63)、0%(0/10)和0%(0/7),NOR-1蛋白表达在AciCC、MEC和SC中的阳性率分别为92.1%(58/63)、9.7%(3/31)和0%(0/25),差异具有统计学意义(P<0.001)。单独使用NR4A3基因重排诊断AciCC时,灵敏度和特异度分别为76.2%和100%。单独使用NOR-1蛋白表达诊断AciCC时,灵敏度和特异度分别为92.1%和94.6%。联合使用NR4A3基因重排和NOR-1蛋白表达诊断AciCC时,灵敏度和特异度分别为96.8%和94.6%,曲线下面积为0.896,诊断价值最优。结论:AciCC好发于女性,主要发病部位为大唾液腺。NR4A3基因重排仅见于AciCC中,在诊断工作中具有100%的特异性,但敏感性较低。NOR-1蛋白表达检测具有很好的灵敏度和特异度,可作为鉴别AciCC、MEC和SC的初筛和替代方法。联合使用NR4A3基因重排和NOR-1蛋白表达检测具有最优的诊断价值。

梅毒血清固定患者中NOD样受体蛋白3和Toll样受体4表达与Th1/Th2相关细胞因子的相关性研究

目的探究梅毒血清固定患者中NOD样受体蛋白3(NLRP3)、Toll样受体4(TLR4)表达与辅助性T细胞1/辅助性T细胞2(Th1/Th2)相关细胞因子的相关性。方法选取2021年2月至2022年4月川北医学院附属三台医院收治的197例梅毒患者作为研究对象。将进行驱梅治疗后血清转阴者纳入转阴组(n=88),未进行驱梅治疗者纳入梅毒组(n=45),接受驱梅治疗后血清固定者纳入固定组(n=64)。另选取同期进行体检的健康人作为对照组(n=53)。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测外周血单个核细胞(PBMCs)中NLRP3、TLR4 mRNA相对表达水平;采用酶联免疫吸附试验法检测Th1/Th2相关细胞因子的表达水平;采用Pearson法分析TLR4、NLRP3 mRNA与Th1/Th2相关细胞因子的相关性。结果各组PBMCs中TLR4、NLRP3 mRNA表达水平比较,梅毒组>转阴组>对照组>固定组,差异具有统计学意义(P<0.05);各组白介素(IL)-2、γ干扰素(IFN-γ)水平比较,对照组>转阴组>梅毒组>固定组,差异具有统计学意义(P<0.05);各组IL-1β、IL-4、IL-10及IL-18水平比较,对照组<转阴组<梅毒组<固定组,差异具有统计学意义(P<0.05);梅毒血清固定患者TLR4、NLRP3 mRNA表达与IFN-γ、IL-2呈正相关,与IL-1β、IL-4、IL-10、IL-18呈负相关(P<0.05)。结论梅毒血清固定患者NLRP3、TLR4 mRNA表达水平显著降低,且与Th1/Th2相关细胞因子密切相关。

血清内皮细胞特异性分子1、视黄醇结合蛋白4及脂蛋白相关磷脂酶A2水平变化对脑梗死患者疗效有影响

目的:探究血清内皮细胞特异性分子1(ESM-1)、视黄醇结合蛋白4(RBP-4)、脂蛋白相关磷脂酶A2(Lp-PLA2)水平与脑梗死患者颈动脉粥样硬化斑块稳定性、神经功能缺损的相关性,并分析各指标对疗效的预测价值。方法:收集脑梗死患者127例,入院时采用酶联免疫吸附试验测定血清ESM-1、Lp-PLA2水平,采用免疫增强比浊法检测血清RBP-4水平,入院后均给予重组组织型纤溶酶原激活剂(rt-PA)静脉溶栓治疗,根据溶栓后第7天美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分分为早期有效组、无效组与恶化组,分析各血清指标与斑块稳定性、NIHSS评分、脑梗死面积的相关性,并采用多元线性回归方程分析各指标对疗效的预测价值。结果:早期恶化组血清ESM-1、RBP-4、Lp-PLA2水平高于早期无效组和有效组,且早期无效组高于早期有效组(P均<0.05);不稳定斑块患者血清ESM-1、RBP-4、Lp-PLA2水平高于稳定斑块患者和无斑块患者,且稳定斑块患者高于无斑块患者(P均<0.05);神经功能重度缺损患者血清ESM-1、RBP-4、Lp-PLA2水平高于神经功能中度和轻度缺损患者,且中度患者高于轻度缺损患者(P均<0.05);大面积脑梗死患者血清ESM-1、RBP-4、Lp-PLA2水平高于中面积和小面积脑梗死患者,且中面积高于小面积脑梗死患者(P均<0.05);血清ESM-1、RBP-4、Lp-PLA2水平与斑块稳定性呈负相关,与NIHSS评分、脑梗死面积呈正相关(P均<0.05);血清ESM-1、RBP-4、Lp-PLA2水平与疗效显著相关(P均<0.05)。结论:血清ESM-1、RBP-4、Lp-PLA2水平可能成为评估脑梗死患者颈动脉粥样硬化斑块稳定性、神经功能缺损情况及疗效的生物学标志物。

分泌型卷曲相关蛋白4在肝细胞癌中的表达及其与患者临床病理指标和预后的关系

目的:探讨分泌型卷曲相关蛋白4(sFRP4)在肝细胞癌(HCC)中的表达及其与患者临床病理指标和预后的关系。方法:免疫组织化学法检测95例手术切除的HCC组织及癌旁组织中sFRP4蛋白的表达,分析sFRP4蛋白表达水平与患者临床病理指标及预后的关系,Cox比例风险回归模型分析影响HCC患者预后的因素。结果:sFRP4蛋白在HCC组织中的阳性表达率为48.42%(46/95),在癌旁组织中的阳性表达率为85.26%(81/95),sFRP4蛋白在HCC组织中的阳性表达率低于癌旁组织(χ^(2)=24.596;P<0.01)。sFRP4蛋白在不同组织学分级(χ^(2)=11.877,P<0.05)、组织学亚型(χ^(2)=3.873,P<0.05)及微血管侵犯(χ^(2)=6.493,P<0.05)的HCC组织中表达水平差异有统计学意义,s FRP4蛋白阴性组患者累积总生存期(OS)和累积无病生存期(PFS)显著短于阳性组(均为P<0.01)。多因素分析显示sFRP4蛋白表达水平[HR=0.238,95%CI(0.138,0.412),P<0.01]、中国肝癌临床分期[HR=2.438,95%CI(1.256,4.730),P<0.01]是影响HCC患者手术切除后PFS的独立风险因素,sFRP4蛋白表达水平[HR=0.226,95%CI(0.109,0.467),P<0.01]、组织学分级[HR=2.236,95%CI(1.199,4.170),P<0.05]是影响HCC患者手术切除后OS的独立风险因素。结论:sFRP4蛋白在HCC组织及癌旁组织中,以及不同病理特征的HCC组织中表达水平有差异,sFRP4蛋白阴性组患者预后较差,sFRP4蛋白表达水平是HCC患者手术切除后预后的独立风险因素。

白细胞介素-4及其受体基因多态性与哮喘儿童血清白细胞介素-4和总免疫球蛋白E含量的相关性

目的探讨白细胞介素-4(IL-4)-基因-589-位点及其受体基因多态性与哮喘患儿IL-4和总免疫球蛋白E(TIgE)含量的相关性。方法选取2017年9月至2020年12月上海市嘉定区中医医院儿科收治的90例哮喘发作患儿作为实验组,另入取同期90名健康体检儿童作为空白组,两组均应用聚合酶链反应(PCR)和DNA测序法进行基因分型。同时采用酶联免疫吸附试验法(ELISA)法检测两组血清IL-4、TIgE水平,比较两组IL-4-基因-589位点C/T和IL-4R-基因-rs1801275位点A/G基因多态性检测结果、血清IL-4在IL-4-基因-589位点C/T和IL-4R-基因-rs1801275位点A/G不同基因型含量变化、血清TIgE在IL-4-基因-589位点C/T和IL-4R-基因-rs1801275位点A/G不同基因型含量变化。结果两组IL-4R-基因-rs1801275位点基因型频率和等位基因频率、IL-4-基因-589位点基因型频率比较差异无统计学意义;实验组C等位基因频率低于空白组,T等位基因频率高于空白组,差异有统计学意义(P<0.05)。两组TT血清IL-4含量均高于CT、CC,CT均高于CC,且实验组CC、CT、TT血清IL-4含量均高于空白组,差异有统计学意义(P<0.05)。两组GG血清IL-4含量高于AA、AG,AG高于AA,且实验组AA、AG、GG血清IL-4含量均高于空白组,差异有统计学意义(P<0.05)。两组TT血清TIgE含量高于CT、CC,CT高于CC,且实验组CC、CT、TT血清TIgE含量均高于空白组,差异有统计学意义(P<0.05)。两组GG血清TIgE含量均高于AA、AG,AG均高于AA,且实验组AA、AG、GG血清TIgE含量均高于空白组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论哮喘患儿IL-4基因-589位点和IL-4R-基因-rs1801275位点基因多态性与健康儿童相比未显示出明显差异,TT和GG基因型哮喘患儿IL-4和TIgE水平较其他对应基因型升高,哮喘发作机制需进一步研究。

胆绿素还原酶A rs699512和肝细胞溶质载体有机阴离子转运蛋白家族成员1B1 rs4149015位点基因多态性与新生儿不明原因高胆红素血症易感性相关性研究

目的:分析胆绿素还原酶A(BLVRA)rs699512和肝细胞溶质载体有机阴离子转运蛋白家族成员1B1(SLCO1B1)rs4149015位点基因多态性与新生儿不明原因高胆红素血症(HB)易感性的相关性。方法:选取不明原因HB新生儿90例为HB组,另选取同期健康新生儿90例为对照组。比较两组临床资料以及BLVRA rs699512、SLCO1B1 rs4149015位点基因型分布和等位基因频率。比较不同BLVRA rs699512、BLVRA rs699512基因型患儿血清胆红素水平。分析BLVRA rs699512、SLCO1B1 rs4149015位点基因多态性与HB易感性的关系。结果:HB组患儿总胆红素和结合胆红素水平明显高于对照组(均P<0.05)。两组BLVRA rs699512、SLCO1B1 rs4149015位点基因型分布比较差异有统计学意义(均P<0.05)。HB组患儿BLVRA rs699512位点GG基因型分布高于对照组,AA基因型分布低于对照组,G等位基因频率高于对照组(均P<0.05)。HB组患儿SLCO1B1 rs4149015位点AA基因型分布高于对照组,GG基因型分布低于对照组,A等位基因频率高于对照组(均P<0.05)。BLVRA rs699512中GG基因型总胆红素和结合胆红素水平高于AA基因型(均P<0.05)。SLCO1B1 rs4149015中AA基因型总胆红素和结合胆红素水平均高于GG基因型(均P<0.05)。BLVRA rs699512位点GG基因型与HB发生呈正相关,AA基因型与HB发生呈负相关(r=0.671、-0.608,均P<0.05)。SLCO1B1 rs4149015位点AA基因型与HB发生呈正相关,GG基因型与HB发生呈负相关(r=0.695、-0.633,均P<0.05)。结论:不明原因HB新生儿BLVRA rs699512位点GG基因型与SLCO1B1 rs4149015位点AA基因型会增加易感性,临床可建立早期防治体系以改善患儿预后。

UCP3对民猪前脂肪细胞产热相关基因表达的影响

为了探究解偶联蛋白3(UCP3)在民猪不同组织中的表达情况以及对民猪前脂肪细胞中线粒体相关基因和ATP合成酶相关基因表达的影响,采集1月龄民猪的背部脂肪组织作为研究材料,通过酶消化法分离前脂肪细胞进行体外培养,同时采集腋下脂肪、胸部脂肪、背部脂肪、腹股沟脂肪、肾周脂肪和肌内脂肪构建组织表达谱。通过体外转染UCP3基因的过表达载体或干扰片段的方法,采用实时荧光定量PCR技术检测MCU家族基因(MCU、MICU1、MICU2)、ATP合成酶(ATP5B、ATP5E)和1,4,5-三磷酸肌醇受体1型基因(ITPR1)的表达情况以及不同脂肪组织中UCP3基因的表达情况。结果显示:采用酶消化法可以在背部脂肪组织中快速获得足量的前脂肪细胞,细胞边缘折光性良好,边界清晰,形态与成纤维细胞相似。UCP3基因在不同脂肪组织中均有表达,在背部脂肪组织中表达量最高,在腹股沟脂肪中表达量最低。过表达UCP3基因后,MCU家族基因和ITPR1基因表达水平显著升高,ATP5B基因表达水平显著下降。干扰UCP3基因后,MCU家族基因和ITPR1基因表达水平显著降低,ATP合成酶基因表达水平显著升高。结果说明:UCP3基因在不同脂肪组织中存在表达差异,可促进MCU家族基因和ITPR1基因表达、抑制ATP5B基因表达。

泡沫细胞相关基因4兔抗人多克隆抗体的制备

目的探讨制备泡沫细胞相关基因4多克隆抗体的方法。方法将从人胎肝文库经聚合酶链反应扩增获得的泡沫细胞相关基因4基因全长cDNA序列,通过生物信息学分析,预测泡沫细胞相关基因4编码氨基酸序列的二级结构、抗原决定簇、功能结构域,并进行了多序列比对,并根据蛋白质的亲疏水性、二级结构、偶联难度及实验难度等,确定泡沫细胞相关基因4抗原13肽PKLVKEEVFWRNY,采用固相多肽合成法合成该抗原片段,偶联后经过基础免疫,6次加强免疫,经追踪检测,于第四次免疫后10～14天颈动脉放血,分离血清,冷冻抽干,-20℃保存而制备了泡沫细胞相关基因4兔抗人多克隆抗体。结果用固相多肽合成法成功制备了泡沫细胞相关基因4兔抗人多克隆抗体,该抗体经间接酶联免疫吸附测定法检测其效价为1∶16000,Westernblot检测可见40kDa处有目的带,用免疫组织化学方法从HepG2细胞中检测到泡沫细胞相关基因4蛋白表达,证实该抗体具有较好的反应性和特异性。结论固相多肽合成法省时、省力、制备的抗体效价高;泡沫细胞相关基因4兔抗人多克隆抗体的制备,为进一步研究泡沫细胞相关基因4蛋白在动脉粥样硬化中的功能作用奠定了基础。

Bcl-2相关的永生基因4对胃癌干细胞自我更新能力的调控作用

目的:探讨Bcl-2相关的永生基因4(Bcl-2 associated athanogene 4,BAG4)在胃癌干细胞(gastric cancer stem cells,GCSCs)自我更新能力中的调控作用。方法:采用成球培养法分离/富集GCSCs,并对其生物学特征进行鉴定。采用慢病毒干扰技术构建沉默BAG4表达的MGC803胃癌细胞系,以平板克隆形成和成球实验分别检测沉默BAG4对胃癌细胞克隆形成和成球能力的影响。结果:成球培养法成功分离/富集出球细胞(sphere cell,SC)。与普通单层贴壁细胞相比,MGC803-SC高表达干性相关基因Sox2、Oct4和Bmi1,具有更强的克隆形成能力(198±17 vs.92±11,P<0.001),诱导分化后干性标志物CD44表达下降,在体外具有更强的侵袭能力(185±18 vs.84±11,P<0.01)。上述实验结果证实MGC803-SC具有GCSCs特性。BAG4在GCSCs中的表达水平明显高于普通贴壁胃癌细胞,沉默BAG4明显降低胃癌细胞的克隆形成和成球能力。结论:沉默BAG4基因能有效抑制GCSCs的自我更新能力,有望成为胃癌靶向治疗的新靶标。

再生基因4(REG4)真核表达载体的构建及其蛋白在HEK293T细胞中的表达、纯化

目的构建再生基因4(regenerating gene 4,REG4)的真核表达载体,转染人胚肾细胞293T(human embryonic kidney 293T cells,HEK 293T),获得重组人再生胰岛衍生蛋白IV(regenerating islet-derived protein IV,Reg IV)。方法根据NCBI数据库REG4基因序列进行基因优化、合成,将其克隆至pCDNA3.4载体并进行双酶切和测序鉴定,通过转染试剂聚乙烯亚胺(polyethylenimine,PEI)将pCDNA3.4-REG4质粒瞬时转染至HEK 293T细胞(实验组),同时以pEGFP-C1质粒作为转染对照组,未转染重组质粒的HEK 293T细胞作为空白对照组。荧光显微镜观察转染对照组转染效率,分别收集实验组及空白对照组细胞和细胞培养液上清,十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)与免疫印迹试验(Western-Blot,WB)检测Reg IV蛋白表达水平。通过镍柱及丙烯葡聚糖凝胶S-400(Sephacryl S-400)柱进行蛋白纯化,SDS-PAGE及WB对纯化后重组蛋白进行鉴定。结果经测序和双酶切鉴定,重组质粒pCDNA3.4-REG4构建成功。转染对照组(pEGFP-C1质粒)荧光显微镜观察结果显示转染效率约50%,表明转染成功。WB结果显示仅在实验组(pCDNA3.4-REG4质粒)的细胞中检测到RegIV蛋白。镍柱纯化时目的蛋白无法与镍柱填料有效结合,SephacrylS-400凝胶柱层析纯化获得了此重组蛋白。结论成功构建了REG4基因真核表达载体并在HEK 293T细胞中成功表达,为深入研究Reg IV蛋白的作用机理及开发潜在的抗癌靶向药物奠定了基础。

藏红花素通过跨膜受体蛋白/发状分裂相关增强子1信号通路对缺氧诱导的视网膜神经节细胞凋亡的影响

目的探讨藏红花素对缺氧诱导的视网膜神经节细胞凋亡的作用及其可能机制。方法于2021年1月至2022年1月采用不同浓度藏红花素处理视网膜神经节细胞RGC-5,四甲基噻唑蓝(MTT)法检测细胞存活情况并筛选合适浓度。培养RGC-5细胞并用氯化钴(CoCl_(2))处理建立缺氧模型,分为缺氧组、藏红花素组、阳性对照(抗坏血酸)组和藏红花素+跨膜受体蛋白信号通路抑制剂(DAPT)组,另设对照组。Cell counting kit-8法检测细胞存活情况;采用流式细胞术检测细胞凋亡率;钙荧光探针(Flou-4)实验检测各组细胞钙离子水平;实时定量PCR法检测跨膜受体蛋白(Notch1)、发状分裂相关增强子1(Hes-1)mRNA表达情况;蛋白质印迹法检测凋亡蛋白B细胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)、Bcl-2相关蛋白(Bax)、钙依赖性蛋白酶家族1(Cal⁃pain1)蛋白表达情况。结果藏红花素组细胞活力0.83±0.08高于缺氧组0.45±0.04,细胞凋亡率(17.92±1.21)%低于缺氧组(51.82±5.36)%,钙离子水平0.27±0.04低于缺氧组0.76±0.05,差异有统计学意义(P<0.05);藏红花素+DAPT组细胞活力0.50±0.06低于藏红花素组0.83±0.08,细胞凋亡率(36.50±3.50)%高于藏红花素组(17.92±1.21)%,钙离子水平0.65±0.05高于藏红花素组0.27±0.04,差异有统计学意义(P<0.05)。与缺氧组比较,藏红花素组Bcl-2蛋白表达水平升高,Notch1、Hes-1mRNA表达、Bax和Calpain1蛋白表达水平降低(P<0.05)。与藏红花素组比较,藏红花素+DAPT组Bcl-2蛋白表达水平降低,Notch1、Hes-1mRNA表达、Bax和Calpain1蛋白表达水平升高(P<0.05)。结论藏红花素对体外培养的缺氧RGC-5细胞凋亡有一定的抑制作用,可能是通过抑制钙离子内流,阻滞Notch1/Hes-1通路,提高细胞内抑凋亡蛋白Bcl-2表达水平发挥作用。

补体C3、C4及免疫球蛋白与传染性单核细胞增多症患儿EBV-DNA载量关系及联合诊断效能

目的探讨补体C3、C4及免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)A、IgG、IgM与传染性单核细胞增多症(infec-tious mononucleosis,IM)患儿EB病毒(epstein-barrvirus,EBV)-DNA载量的关系及联合诊断效能。方法选取2020年6月至2023年12月收治的76例IM患儿作为研究组,另按照1:1原则选择76例健康儿童作为对照组。比较2组不同性别、年龄、病程、系统损伤个数、EBV-DNA载量患儿血清补体C3、C4及IgA、IgG、IgM水平,采用Spearman分析IM患儿病程、系统损伤个数、EBV-DNA载量与血清补体C3、C4及IgA、IgG、IgM的相关性,绘制受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线分析各指标单一及联合诊断IM的效能。结果与对照组比较,研究组血清补体C3.C4及IgA、IgG、IgM水平较高(P<0.01);研究组血清补体C3、C4及IgA、IgG、IgM水平比较:急性期>恢复期,1个系统损伤<多于1个系统损伤,EBV-DNA高载量>中等载量低载量,差异有统计学意义(P<0.01);IM患儿病程与血清补体C3、C4及IgA、IgG、IgM呈负相关,系统损伤个数、EBV-DNA载量与血清补体C3、C4及IgA、IgG、IgM呈正相关(P<0.01);血清IgA、IgG、IgM联合补体C3和(或)C4及五者联合诊断IM的曲线下面积(areaundercurve,AUC)优于各指标单一诊断的AUC,其中IgA+IgG+IgM+补体C4+补体C3联合为最佳组合,敏感度为0.908、特异度为0.842。结论IM患儿血清补体C3、C4及IgA、IgG、IgM水平异常升高,且与患儿病程、系统损伤个数、EBV-DNA载量密切相关;血清补体C3、C4及IgA、IgG、IgM联合诊断IM具有较高的价值。

细胞周期蛋白依赖性激酶4在胶质瘤中的表达及临床意义

目的探讨细胞周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)在胶质瘤中的表达及临床意义。方法对基因型-组织表达(GTEx)、癌症基因组图谱(TCGA)和中国脑胶质瘤基因组图谱(CGGA)数据库中的资料进行挖掘和分析,提取胶质瘤中CDK4的RNA转录组数据。比较胶质瘤组织和正常脑组织中CDK4 mRNA表达水平,分析CDK4表达水平与胶质瘤分级的关系。根据TCGA和CGGA数据库中CDK4表达水平中位数,将患者分为CDK4高表达组与CDK4低表达组,比较两组患者的生存情况。采用Cox回归模型分析胶质瘤患者预后的影响因素。绘制受试者工作特征(ROC)曲线,分析CDK4对胶质瘤患者预后的预测价值,构建列线图,并进行验证。根据TCGA数据库中CDK4表达水平中位数,将患者分为CDK4高表达组与CDK4低表达组,对两组患者进行差异基因分析,对差异基因进行基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析。结果胶质瘤组织中CDK4 mRNA表达水平明显高于正常脑组织(P﹤0.01)。CDK4表达水平与胶质瘤分级呈正相关。CDK4高表达组胶质瘤患者的总生存期短于CDK4低表达组。CDK4表达水平是胶质瘤患者预后的独立影响因素(P﹤0.01),对胶质瘤患者预后具有较好的预测效能。GO富集分析显示,差异基因与有丝分裂、离子通道、跨膜转运等有关,KEGG富集分析显示,差异基因主要富集于神经活性配体-受体相互作用、钙信号通路、环腺苷酸(cAMP)信号通路、细胞周期通路等。结论CDK4基因在胶质瘤的诊断和临床治疗中具有重要意义。

HepG2细胞Six4蛋白表达对细胞增殖、迁移和上皮-间充质转化的影响

目的体外观察敲除HepG2细胞Six同源盒蛋白4(Six4)对细胞增殖、迁移和上皮-间充质转化的影响。方法采用Six4慢病毒shRNA感染HepG2细胞,筛选基因敲除细胞和正常对照细胞,采用CCK-8和5-乙炔基-2'-脱氧尿嘧啶核苷(EDU)染色检测细胞增殖,采用Transwell小室实验检测细胞迁移,采用Western blot法检测蛋白表达。结果基因敲除细胞吸光度、EdU染色阳性率和侵袭细胞数分别为(1.19±0.22)、(31.63±7.43)%和(65.71±10.02)个,均显著低于正常对照细胞【分别为(2.18±0.30)、(76.51±8.84)%和(120.14±11.85)个,P<0.05】;基因敲除细胞E-cadherin表达显著强于,而N-cadherin、Vimentin和Six4蛋白表达显著弱于正常对照组细胞,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论HepG2细胞SIX4对细胞活力和上皮-间充质转化有重要影响,可能成为潜在的治疗靶点需要进一步研究。

ATP结合盒亚家族B成员4(ABCB4)基因突变相关性肝硬化合并胆囊结石1例报告

ATP结合盒亚家族B成员4(ABCB4)基因突变疾病谱涉及进行性家族性肝内胆汁淤积3型、胆石症、妊娠期肝内胆汁淤积症、门静脉高压、肝硬化,甚至原发性肝脏、胆道恶性肿瘤等多种疾病。本院肝胆内科收治1例青年男性患者,入院初步诊断为胆囊结石,计划腹腔镜胆囊切除术,术前检查发现该患者肝功能异常、肝硬化、脾大、食管静脉轻度曲张,后进一步行二代测序明确诊断为ABCB4基因突变相关性肝硬化合并胆囊结石,给予熊去氧胆酸胶囊利胆治疗后,肝功能逐渐恢复正常。

血清单核细胞趋化蛋白-4、C-反应蛋白、乳酸脱氢酶联合预测重症肺炎支原体肺炎患儿心肌损害的效果

目的探析血清单核细胞趋化蛋白-4(MCP-4)、C-反应蛋白(CRP)、乳酸脱氢酶(LDH)预测重症肺炎支原体肺炎患儿心肌损害的价值。方法选取2018年1月至2022年12月安徽省明光市人民医院诊治的重症肺炎支原体肺炎(MPP)患儿为研究对象,根据心肌损害情况分为心肌损害组(30例)和无心肌损害组(38例),比较两组血清MCP-4、CRP、LDH水平。绘制受试者操作特征(ROC)曲线分析血清MCP-4、CRP、LDH单独及三项指标联合试验预测重症MPP患儿发生心肌损害的价值。结果心肌损害组患儿血清MCP-4、CRP、LDH、肌酸激酶同工酶和肌钙蛋白Ⅰ水平高于无心肌损害组,差异有统计学意义(P<0.05)。ROC曲线结果显示,血清MCP-4、CRP、LDH水平对重症MPP患儿发生心肌损害均有一定预测价值,且以三项指标并联试验的预测价值最高。并联联合试验的敏感度为93.33%,临床漏诊率不足7%;虽然为联合试验预测的特异度(47.06%)相对较低,但考虑到临床对低漏诊率的需求,三项指标的联合试验仍然具有一定的临床应用价值。结论重症MPP患儿血清MCP-4、CRP、LDH水平与其发生心肌损害密切相关,三者并联联合或可作为预测患儿心肌损害风险的指标。

以IgE和嗜酸粒细胞升高伴多发淋巴结肿大为主要表现的IgG4相关性疾病1例报告

目的探讨以IgE和嗜酸粒细胞升高伴多发淋巴结肿大为主要表现的IgG4相关性疾病的临床特点和治疗方案。方法回顾性分析1例以IgE和嗜酸粒细胞升高伴多发淋巴结肿大为主要表现的IgG4相关性疾病患者的临床资料、诊疗经过并复习相关文献。结果患者男性,24岁,双侧腹股沟淋巴结肿大2年余入院。结合临床表现、血IgG4检验、病理结果,诊断为IgG4相关性疾病。治疗方案给予强的松20 mg,1次/日,枸橼酸托法替布片5 mg,2次/日,根据复查血检验指标和超声结果调整剂量,最终随访患者症状明显改善。结论lgG4相关性疾病常表现为显著升高的血清IgG4水平和肿块样病灶,合并IgE和嗜酸粒细胞升高的较少见,但近期研究发现IgE和嗜酸性粒细胞在IgG4相关性疾病中发挥了重要作用。治疗方案以糖皮质激素为一线药物,靶向药物如托法替布可能有潜在的治疗作用,拓展了IgG4相关性疾病治疗的新思路。

生长相关蛋白43基因修饰脂肪间充质干细胞对视网膜色素变性的修复及保护

背景:研究发现基因治疗和细胞移植治疗视网膜色素变性有效果,而且二者相结合治疗视网膜色素变性效果更为显著,但其作用机制有待深入研究。目的:探讨生长相关蛋白43基因修饰脂肪间充质干细胞对视网膜色素变性大鼠视网膜的保护作用。方法:分离和培养视网膜色素变性大鼠脂肪间充质干细胞,以生长相关蛋白43慢病毒载体转染脂肪间充质干细胞。将60只视网膜色素变性大鼠分3组干预,实验组视网膜下腔注射生长相关蛋白43慢病毒载体转染的脂肪间充质干细胞,对照组注射脂肪间充质干细胞,假手术组注射PBS,注射后3,7,14,21 d,观察眼球组织脂肪间充质干细胞变化及视网膜生长相关蛋白43表达;注射后28 d,观察视网膜Rho蛋白、GS蛋白表达及外核层厚度。结果与结论:(1)实验组脂肪间充质干细胞移植后,随着时间的延长,生长相关蛋白43表达量逐渐升高,不同时间点间两两比较差异均有显著性意义(P<0.05);(2)实验组、对照组Rho蛋白和GS蛋白表达量高于假手术组(P<0.05);实验组Rho蛋白表达量高于对照组(P<0.05),GS蛋白表达量低于对照组(P<0.05);(3)实验组、对照组视网膜外核层厚度高于假手术组(P<0.05),实验组视网膜外核层厚度高于对照组(P<0.05);(4)结果表明,生长相关蛋白43基因修饰的脂肪间充质干细胞,对视网膜色素变性大鼠模型视网膜具有保护作用。

8例B细胞淋巴瘤的T细胞基因CD4 V4突变及其相关蛋白的表达

【目的】检测B细胞淋巴瘤组织中T细胞的CD4V4基因突变情况及其相应病例的Fas/FasL、CD4、bcl 2和CyclinD1蛋白表达特征。【方法】PCR SSCP技术筛选检测 5 6例B细胞淋巴瘤CD4分子的V4外显子突变状况。用免疫组化方法检测有突变的B细胞淋巴瘤组织中L2 6 ,UCHL1,CD3,Fas ,FasL ,bcl 2和CyclinD1蛋白表达情况。【结果】 8例 / 5 6例(14 2 % )T细胞CD4V4外显子有变异。其中小淋巴细胞性淋巴瘤 (smalllymphocytelymphoma,SLL)和淋巴母细胞性淋巴瘤(lymphoblasticlymphoma ,LBL)的Fas,FasL和CD4蛋白均为弱或无表达 ;滤泡性淋巴瘤 (follicularlymphoma ,FL) 3项均强表达 ;3例弥漫性大B细胞淋巴瘤 (diffuselargeBcelllymphoma ,DLBL)和 1例套细胞淋巴瘤 (mantlecelllymphoma ,MCL)Fas和FasL强表达 ,CD4无或弱表达。Fas和FasL双强表达的 4例 ,均有bcl 2和 /或CyclinD1过表达。【结论】B细胞淋巴瘤中CD4V4基因有突变 ,并提示这种突变与细胞死亡和细胞周期调控异常有关。

角质形成细胞增生行为与p16^(INK4a)蛋白表达和基因失活的相关性研究

目的:探讨角质形成细胞(KC)增生行为与p16INK4a蛋白表达及其基因失活的相关性。方法:对20例皮肤鳞状细胞癌、24例基底细胞癌、18例Bowen病、12例光线性角化病以及8例脂溢性角化病共计82例患者中具不同增生行为的KC,分别应用免疫组化检测其p16INK4a蛋白表达;应用聚合酶链反应(PCR)、PCR-单链构象多态性以及PCR-限制性内切酶分析方法分别检测p16INK4a基因外显子1和外显子2的缺失、突变和甲基化。结果:p16INK4a蛋白表达的阳性率和表达强度随着KC恶性程度的增加而降低,基因缺失和甲基化是皮肤癌p16INK4a基因失活的主要方式,p16INK4a蛋白失表达与其基因失活是一致的。结论:p16INK4a基因失活在KC恶性转化中起重要作用;p16INK4a基因有可能成为皮肤癌诊断与治疗的一种新靶位。