保存时间对血浆胞外囊泡及囊泡蛋白的影响

目的:探讨不同保存时间对血浆胞外囊泡(extracellular vesicles,EVs)及肿瘤相关蛋白PD-L1表达的影响。方法:使用离心和免疫吸附的方法,选取回顾性研究常用的-80℃存放1个月、1年、3年、5年的血浆EVs与新鲜血浆EVs进行对比;使用透射电镜对提取的EVs的形态进行观察;用NTA检测各组EVs的大小及数量;用ELISA试剂盒测定EVs上肿瘤标志性蛋白PD-L1的表达情况。结果:不同存储时间的血浆总蛋白水平及平均粒径大小无显著差异。而保存时间超过1年,EVs形态出现变形、聚集和碎裂等变化。随着保存时间的延长,EVs上的标志性蛋白CD63逐年减少。保存3年和5年的样本中肿瘤标志蛋白PD-L1水平明显降低。结论:存储时间对EVs表面蛋白及肿瘤标志蛋白影响较大。在以EVs为对象的研究中,需尽量采用随访设计,提取新鲜的血浆样本进行检测。在回溯性研究中,尽量选取样本库中保存一年以内的样本进行检测。

小麦面筋蛋白质酶解产物用作啤酒发泡蛋白的研究

为改善啤酒的泡沫性能,作者分别采用木瓜蛋白酶、胃蛋白酶以及碱性蛋白酶对小麦面筋蛋白进行适度酶解改性,并对其产物用作啤酒发泡蛋白的可行性进行了研究。结果表明,经适度酶解作用后,小麦面筋蛋白在pH 4.5条件下溶解性和泡沫性能得到显著改善(p<0.05),且小麦面筋蛋白酶解产物在啤酒环境中热稳定性较好,经30 min的热处理,含100 mg/L小麦面筋蛋白酶解产物的啤酒浊度与加热前相比增加不显著(p>0.05)。小麦面筋蛋白胃蛋白酶酶解产物和碱性蛋白酶酶解产物对啤酒初始泡持性的改善效果都较好,但胃蛋白酶酶解产物对酵母蛋白酶A作用较敏感,对纯生啤酒货架期内泡持性的改善效果不太理想,而碱性蛋白酶酶解产物可明显改善纯生啤酒货架期内的泡沫稳定性。

大米发泡蛋白酶法制备工艺

以大米浓缩蛋白为原料制备大米发泡蛋白。采用响应面分析法对大米发泡蛋白的酶解法制备工艺条件进行优化,并测定大米发泡蛋白的蛋白质得率、氮溶解指数、起泡性及起泡稳定性。优化的工艺条件是碱性蛋白酶/底物0.01943U/g、反应时间57min、料液比1︰7.27、温度60℃、pH7.5。在此条件下获得的大米发泡蛋白发泡力为131mL,起泡性为162%,起泡稳定性在30min内保持100%,大米发泡蛋白的得率为34%,蛋白质纯度为88.05%,在pH2～12范围内氮溶解指数均高于90%。

突触后致密蛋白95(PSD95)和突触小泡蛋白在神经元成熟过程中的分布

目的探讨突触后致密蛋白95(PSD95)和突触小泡蛋白(SYP)在原代培养不同时间神经元中的表达。方法采用免疫荧光技术检测原代培养3 d(3DIV)、7DIV和14DIV大脑皮层神经元内的PSD95和SYP的表达。结果 PSD95在3DIV时主要分布在神经元胞体;7DIV时分布在胞体、突起末端和分支处;14DIV时分布在胞体和呈斑点状分布在神经元突起上。SYP在3DIV时无明显表达,7DIV时分布在神经元细胞核内,14DIV时分布在细胞核内和呈斑点状分布在突起上。结论随着培养神经元和突触的发育至成熟,PSD95和SYP最初主要位于神经元胞体和细胞核内,最终大都呈斑点状密集分布在突起上。表明PSD95和SYP虽产生部位不同,但最终都与突触的形成和成熟密切相关。

运动训练对局灶性脑梗死大鼠神经功能、细胞超微结构及突触小泡蛋白表达的影响

目的:研究运动训练对脑梗死大鼠神经功能、脑组织缺血半影区细胞超微结构及突触小泡蛋白(synap-tophysin,SYN)含量变化的影响。方法:用90只SD成年大鼠制作左侧大脑中动脉栓塞模型,术后24 h随机分成卒中训练组、卒中未训练组,假手术组大鼠只暴露分离血管、神经。卒中训练组大鼠每天予以抓握、平衡、旋转等训练;卒中未训练组则置于普通笼内饲养,除可自由进食与自主活动外,不予以任何针对性训练,并分别在造模后3、7、21及35 d时进行神经功能评分。以免疫组织化学方法检测脑组织缺血半影区SYN免疫阳性产物的表达,用W estern b lot方法测定SYN蛋白表达含量的变化,用透射电子显微镜观察缺血半影区神经细胞超微结构的变化。结果:造模后3 d,神经功能评分两组无显著性差异(P>0.05),而造模后7、21和35 d,卒中训练组大鼠的神经功能评分均优于卒中未训练组(P<0.05)。在细胞线粒体、核和粗面内质网等超微结构方面,卒中训练组亦多于未训练组;在造模后3和7 d时,卒中训练组、未训练组和假手术组SYN蛋白的表达无显著性差异(P>0.05),卒中训练组SYN蛋白的表达则在21和35 d时均明显多于卒中未训练组和假手术组(P<0.05)。结论:运动训练能提高脑梗死大鼠平衡、抓握与行走能力,改善神经功能,其机制可能与保护缺血半影区神经细胞线粒体等超微结构,上调脑组织缺血半影区SYN蛋白的表达有关。

33.5kDa胆汁泡蛋白促成核活性及其对泡形态学影响的研究

目的探讨３３．５ｋＤａ泡蛋白在胆固醇成核过程中的作用。方法利用超速离心技术结合ＰＡＧＥ电泳及区带定位法制备３３．５ｋＤａ泡蛋白；并将其加入Ｓｍａｌ模拟胆汁及综合模拟胆汁作为试验组，相应地以人体白蛋白为对照组，用偏光显微镜观察胆固醇成核时间，在透射电镜下观察模拟胆汁泡的大小、形态及数量。结果Ｓｍａｌ试验组成核时间为３．８３±０．３１天，对照组为１２．３３±０．５６天（Ｐ＜０．００１）；综合试验组平均成核时间为３．１７±０．１７天，而对照组长达１０．３３±０．２１天（Ｐ＜０．００１）。随着时间的推移，Ｓｍａｌ试验组及综合试验组泡逐渐增大、聚集、融合，最终形成巨大复层泡。两组均较相应的对照组变化显著（Ｐ＜０．０５）。结论３３．５ｋＤａ泡蛋白具有很强的促进泡形成、聚集、融合及胆固醇单水结晶析出的作用（成核活性约为０．３１０）。

米渣发泡蛋白的理化性质及形态结构

比较并分析了米渣蛋白（RDP）、脱酰胺米渣蛋白（RDDP）、米渣发泡蛋白（RDFP）的理化性质及形态结构。结果表明在pH2～12，RDP的溶解度较低，RDDP的溶解度在pH2～4．5减小，在pH4．5—12则增加，RDFP的溶解度均高于90％。与RDP相比，RDDP与RDFP的起泡力在pH8～10分别增加39％与126％以上，且在pH9．5时分别达到最高值56％和196％。RDP的乳化性稳定，RDDP先减小后增大，RDFP则一直增大。RDDP与RDFP的必需氨基酸总量分别比RDP减少8．29％与7．7％，疏水值分别增加9．14％与30％。RDP、RDDP、RDFP均存在糖蛋白和α-螺旋、β-折叠片等二级结构，且数量依次减少。RDP结构紧密，聚集呈球状，RDDP分裂为相对较小的块状聚集体，RDFP为大块片层结构。RDFP具有良好的发泡性，可以作为一种蛋白质发泡粉用于食品工业。

胆宁片对胆汁33.5kDa泡蛋白含量和结构的影响

目的:探讨胆宁片对胆石症患者胆汁中33.5kDa泡蛋白含量及其结构的影响。方法:2008年1月—2010年3月对60例胆囊切除病例和40例胆总管探查病例进行前瞻性临床研究,其中60例胆囊切除病例随机分为3组:胆固醇结石胆宁片组(n=20)、胆固醇结石对照组(n=20)、胆色素性结石组(n=20),另外设立正常对照组(n=20)。通过酶联免疫吸附法检测每份胆汁中33.5kDa泡蛋白含量,比较各组之间的差异。40例胆总管探查病例分为研究组和对照组(n=20),通过蔓陀螺凝集素探针(DSA)介导的蛋白印迹法检测胆汁中33.5kDa泡蛋白糖链条带DSA结合率,比较2组糖链结构的变化。结果:胆固醇结石组胆汁中33.5kDa泡蛋白含量显著高于胆色素结石组和正常对照组,胆固醇结石胆宁片治疗组胆汁33.5kDa泡蛋白含量较对照组显著降低(P<0.01)。胆固醇结石治疗组泡蛋白糖链条带DSA结合率较对照组显著下降(P<0.05)。结论:胆宁片能降低胆固醇结石患者胆汁中33.5kDa泡蛋白含量,并通过改变糖链结构而使其促成核活性发生变化。

龟龄集对大鼠海马结构内突触小泡蛋白年龄变化的影响

目的 :研究大鼠海马结构内突触小泡蛋白年龄变化的影响。方法 :实验用 Wistar大鼠、免疫组织化学结合图像分析法。结果 :2 4月龄大鼠齿状回多形层、海马 CA3辐射层内突触小泡蛋白免疫反应产物的灰度值明显大于 18月龄鼠 ( P<0 .0 0 1,P<0 .0 0 5) ;12月龄鼠经 6和 12个月服用龟龄集后 ,齿状回多形层、海马 CA3辐射层内突触小泡蛋白免疫反应产物的灰度值均比同龄对照组显著降低 ( P<0 .0 5)。结论 :大鼠海马结构内突触小泡蛋白随着年龄的增加而减少 ;服用龟龄集可延缓神经元的衰老 ,防止海马结构内突触小泡蛋白的丢失 。

胆宁片对胆汁33．5kDa泡蛋白糖链结构的影响

目的探讨胆宁片对胆汁33．5 kDa泡蛋白糖链结构的影响。方法按随机序贯原则将胆石症患者分成治疗组(10例)和对照组(10例),治疗组术后第3天口服胆宁片治疗,对照组术后则不服用。取手术当天(外参对照组)及术后第3、10天的T管胆汁,通过蔓陀螺凝集素探针(DSA)介导的Western印迹法分析两组患者胆汁中33．5 kDa泡蛋白糖链天线数目的变化情况。结果治疗组术后3 d的胆汁33．5 kDa泡蛋白糖链Western印迹染色条带亮度降低;治疗组术后10 d与外参对照组的33．5 kDa泡蛋白糖链条带DSA结合率糖链显著下降(P＜0．05)。结论33．5 kDa泡蛋白糖链天线数目变化的时间(用药后7 d)要早于文献报道的变化时间(14 d),进一步证实了33．5 kDa泡蛋白糖链数目的增加导致泡蛋白含量及促成核活性改变的推测。

碱性成纤维细胞生长因子对谷氨酸毒性损伤豚鼠视网膜内突触小泡蛋白表达的影响

目的:探讨过量谷氨酸毒性损伤豚鼠视网膜内突触小泡蛋白(SYP)的表达及碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对其表达的影响。方法:豚鼠随机分成谷氨酸钠损伤组、对照组和bFGF治疗组。采用免疫组织化学方法和图像分析技术,对各组豚鼠视网膜内SYP免疫反应产物的表达进行检测。结果:对照组豚鼠视网膜内SYP的表达为强阳性,主要定位于外网状层和内网状层,损伤组视网膜相应区域内阳性反应产物的光密度值明显低于对照组,bFGF治疗后SYP的阳性表达明显高于损伤组,且与对照组相比,无显著性差异。结论:bFGF可抑制过量谷氨酸钠诱发的视网膜内SYP的表达减少,上调SYP的表达,对视神经损伤有显著地促功能修复作用。

胆汁泡蛋白酶联免疫吸附检测法的建立与初步临床应用

目的 建立胆汁泡蛋白快速检测法 ,作为防治胆石症临床研究的指标。方法 提取 3 3 .5kd胆汁泡蛋白 ,建立酶联免疫吸附检测法 (ELISA)标准曲线 ,并应用ELISA药盒测定正常人、胆石症患者胆汁和血清中泡蛋白含量 ,同时观察利胆冲剂、胆通胶囊等对泡蛋白的影响。结果 ELISA曲线方程为Y =0 .0 3 5X(r=0 .99) ;胆固醇性结石组胆囊胆汁和血清 3 3 .5kd泡蛋白含量分别为 (2 13 .4± 70 .1)mg/L、(179.8± 97.9)mg/L ,明显高于胆色素性结石症、非胆石症胆道疾病组以及正常人组 (P <0 .0 5) ,而后三者之间没有显著差异 (P >0 .0 5) ;利胆冲剂治疗两周后 ,胆汁和血清泡蛋白含量显著降低 ,而对照组和胆通胶囊治疗组未见明显变化。结论 胆汁泡蛋白的含量在不同人群差异显著 ;利胆冲剂等药物能降低胆汁和血清 3 3 .5kd泡蛋白含量 。

胆汁泡蛋白成核活性及其氨基酸序列分析的研究

分离胆汁泡蛋白,研究其成核活性和末端氨基酸序列。方法:应用超速离心法分离胆石症患者胆汁泡,运用SDS-PAGE电泳分离其中胆汁泡蛋白,并经HPLC系统纯化,研究其成核活性和N-端氨基酸序列。结果:分离到一种分子量为33.5kd的胆汁泡蛋白,其促成核活性为0.30,N-端氨基酸具有较多的极性氨基酸(天冬酰、苏、丝和谷氨酰等)。结论:33.5kd胆汁泡蛋白有明显的促成核活性,其N-端极性氨基酸可能参与促成核机制。

龟龄集对大鼠小脑皮质和脊髓前角内突触小泡蛋白变化的影响

目的研究龟龄集对大鼠小脑皮质和脊髓前角内突触小泡蛋白表达的影响,探讨龟龄集抵抗中枢神经系统衰老的机制。方法采用神经行为结合免疫组织化学和图像分析的方法,检测了小脑皮质和脊髓颈膨大、腰膨大前角内突触小泡蛋白的含量及其意义。结果喂药组小脑皮质和脊髓颈、腰膨大前角内突触小泡蛋白的含量均明显高于对照组（P〈0.01~P〈0.001）。结论龟龄集可延缓神经元的衰老,防止中枢神经系统内突触小泡蛋白的丢失,维持动物正常的运动及其运动的灵活性。

胆汁泡蛋白ELISA检测法的建立与初步临床应用

目的 建立胆汁泡蛋白快速检测法 ,筛选有效的胆石症防治手段。方法 获取 33.5kd胆汁泡蛋白 ,通过微量抗原免疫法获得高效价抗体 ,建立ELISA标准曲线 ;并应用ELISA法测定正常人、胆石症患者胆汁和血清中泡蛋白含量 ,同时观察不同溶石防石药物如利胆冲剂、胆酸钠等对泡蛋白的影响。结果 建立了ELISA标准曲线 ,其曲线方程为Y =0 .0 35X(r=0 .99) ;正常人胆汁和血清中 33.5kd泡蛋白含量都明显较胆固醇结石患者低 (0 .0 0 7± 0 .0 0 3)mg/mlvs(0 .0 5 0± 0 .0 11)mg/ml,(0 .0 15± 0 .0 10 )mg/mlvs(0 .0 45± 0 .0 2 1)mg/ml,P <0 .0 5 ;利胆冲剂治疗 2周后 ,胆汁和血清泡蛋白含量显著降低 ,而对照组和胆酸钠治疗组未见明显变化。结论 在不同人群胆汁泡蛋白的含量差异有显著性 ;利胆冲剂等溶石防石药物能降低胆汁和血清 33.5kd泡蛋白含量 ,改变胆汁致石性 。

啤酒泡沫中发泡蛋白的研究进展

大量研究表明 ,啤酒泡沫产生的关键因素是啤酒中所含的发泡蛋白 ,发泡蛋白的性质和数量很大程度上决定着啤酒泡沫的质量。通过对发泡蛋白定义、特性和与泡沫质量的关系 ,以及泡沫质量测定方法、改进措施等方面的介绍 ,说明了发泡蛋白对啤酒泡沫质量的决定性作用及研究发泡蛋白的现实意义。

人胰腺癌组织胚胰腺泡蛋白表达的免疫组织化学研究

用ＡＢＣ免疫组织化学法，以单克隆抗体Ｊ（２８）检测胰腺癌等组织中的胚胰腺泡蛋白（ＦＡＰ）。结果：正常胰腺（５例）基本无ＦＡＰ表达；慢性胰腺炎阳性率为６０．００％（６／１０），强度为；胚胎胰腺６例中全部为阳性强度；胰腺癌阳性率为７３．６８％（１４／１９），强度为；而肝胰壶腹癌（１例）、胰岛细胞瘤（１例）及胰腺转移性腺癌（５例）无ＦＡＰ表达。胰腺癌ＦＡＰ表达强度较慢性胰腺炎强（Ｐ＜０．０５）。本研究表明ＦＡＰ在胚胎胰腺中存在，正常胰腺消失，胰腺癌及慢性胰腺炎时可以再表达，其表达可能与胰腺细胞的增殖分化有关。

过量谷氨酸钠对豚鼠视网膜内突触小泡蛋白表达的影响

目的探讨过量谷氨酸钠对豚鼠视网膜内突触小泡蛋白表达的影响及其意义。方法实验组给予腹腔注射谷氨酸钠3g·kg-1·d-1,连续7d,对照组注射等量生理盐水,分别在注射后10天取材。采用免疫组织化学方法和图像分析技术,对两组豚鼠视网膜内突触小泡蛋白的免疫反应产物进行检测。结果对照组豚鼠视网膜内突触小泡蛋白的表达为强阳性,主要定位在外网状层和内网状层,实验组视网膜相应区域内阳性反应产物表达的光密度值明显低于对照组(P<0．01)。结论过量谷氨酸可明显抑制视网膜突触小泡蛋白的表达,这可能是造成视觉功能障碍的重要原因。

单克隆抗体J28免疫印渍与花生凝集素印渍检测胚胰腺泡蛋白的比较

20例胚胎胰腺、5例胰腺癌、4例正常胰腺提取物行聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、单克隆抗体J28免疫印渍和花生凝集素印渍,结果发现考马斯亮蓝染色后胚胎胰腺和胰腺癌提取物有一相同条带,分子量约为110000,这一条带即是胚胰腺泡蛋白(FAP,它可与单克隆抗体J28和花生凝集素结合,正常胰腺无此条带。花生凝集素还可以和胰腺癌组织中分子量更小的糖蛋白结合,说明FAP分子上有单克隆抗体J28和花生凝集素的不同位点。

突触泡蛋白2研究进展

突触泡蛋白2(SV2)是一类跨膜糖蛋白,定位于脊椎动物神经元及内分泌细胞,与神经递质的释放、内分泌泡胞吐作用、突触泡稳态的维持、神经肌肉接头的形成及肾上腺素能受体α2C的定位密切相关。最近还发现SV2是肉毒神经毒素BoNT/A的受体,介导BoNT/A进入神经元。SV2可作为突触泡标记蛋白,广泛应用于生物学研究及肿瘤诊断。此外,SV2还是抗癫痫药物的作用靶标。