波吉卵囊藻对凡纳滨对虾生长、抗氧化及肠道菌群的影响

【目的】研究定向培养波吉卵囊藻(Oocystis borgei)的养殖水体对凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)早期生长性能、抗氧化能力及肠道微生物的影响,为波吉卵囊藻在对虾健康养殖中的应用提供基础。【方法】以消毒海水中接种波吉卵囊藻为实验组,以未接种的为对照组进行凡纳滨对虾养殖。将凡纳滨对虾幼虾随机分配到实验组及对照组养殖桶中,养殖20 d后测定对虾生长性能指标,解剖取肝胰腺和鳃测定抗氧化指标,取肠道进行微生物多样性测定和分析。【结果】1)定培波吉卵囊藻对凡纳滨对虾增重率和特定生长率无显著影响(P>0.05),但显著提高了对虾的肝体比(P<0.05);2)与对照组相比,实验组对虾肝胰腺和鳃中的超氧化物歧化酶(SOD)活性和总抗氧化能力(T-AOC)极显著提高(P<0.01),鳃中的谷胱甘肽(GSH)和酸性磷酸酶(ACP)活性也有显著升高(P<0.05);3)与对照组相比,实验组对虾肠道菌群的Shannon和Chao 1指数显著降低(P<0.05),肠道中变形菌门丰度显著降低(P<0.05),有益菌红杆菌科丰度增加,有害弧菌属含量降低。【结论】在养殖水体中培养波吉卵囊藻可提高凡纳滨对虾早期的肝体比,增加抗氧化能力,调节肠道菌群组成,减少有害弧菌含量。

波吉卵囊藻对氮和磷营养盐需求的研究

通过单因子实验和正交实验方法,研究了对虾高位池一种优良藻株波吉卵囊藻 Oocystis borgei 对和营养盐需求。结果表明:波吉卵囊藻在 N P NO3浓度为-N 11.32 mg.L-1和 PO4浓度为-P 1.29 mg.L-1 时,比增长率最大值μ (max 出现最佳值,各种密度波吉卵囊藻培养均能得到较好的生长效果。相对于相对) 增长常数 K和平均倍增时间 G,μmax可 更好地反映微藻种群对多因子的适应性和在对虾池塘中的竞争能力。

波吉卵囊藻(Oocystis borgei)对Cu^(2+)、Zn^(2+)吸附研究

研究波吉卵囊藻(Oocystis borgei)对Cu2+、Zn2+的吸附动力学及温度、光照度和盐度对Cu2+、Zn2+吸附效果的影响。结果表明,波吉卵囊藻对Cu2+、Zn2+的吸附经历了快速、中速和慢速3个吸附步骤,快速吸附在实验0.5 h内完成,中速吸附在实验8 h内完成,8 h后为慢速吸附。温度为25～30℃时,波吉卵囊藻对Cu2+、Zn2+的吸附量分别为5.61 mg/g、6.92 mg/g。光照度大于或等于3000 lx时,藻细胞对Cu2+有较好的吸附效果;光照度大于或等于2 000 lx时,藻细胞对Zn2+有较好的吸附效果。盐度为25～30时,藻细胞对Cu2+吸附量为5.93 mg/g,盐度为20时,藻细胞对Zn2+吸附量为6.97 mg/g。因此,当温度为30℃,盐度低于25,光照度大于2000 lx时,波吉卵囊藻可以很好的消除对虾养殖水体中重金属离子污染,保持良好的养殖水环境。

植物生长调节剂对波吉卵囊藻生长的影响

本文研究了不同浓度的植物生长调节剂,即6-苄氨基嘌呤(6-BA)、 2.4二氯苯氧乙酸(2.4-D)对波吉卵囊藻Oocystis borgei的生长和代谢影响。结果表明:6-BA在0.1-0.5 mg. L-1和2.4-D在0.1-7 mg.L-1的浓度范围内,对波吉卵囊藻的生长、干重、叶绿素a含量、光全作用强度和呼吸作用强度都有一定的促进作用,可作为虾塘波吉卵囊藻定向培育的生长调节剂。 6-BA和2.4-D的最佳浓度分别是0.5mg.L-1和1.5 mg.L-1。

不同条件下波吉卵囊藻对氨氮的吸收速率

在实验室条件下模拟多种氮源共存的虾池水环境,利用稳定同位素示踪剂,研究温度、光照、盐度、pH、藻浓度对波吉卵囊藻氨氮吸收速率的影响。结果表明:温度、光照和藻浓度对波吉卵囊藻氨氮吸收速率影响极显著(P<0.01)。当温度为20℃,照度为4 500 lx,藻浓度为5.5×105/mL,波吉卵囊藻对氨氮均有最大的吸收速率,分别为1.114、1.400、1.482μg g-1 h-1。单因素方差分析得出波吉卵囊藻吸收氨氮的最优组合为:温度20℃,照度4 500lx,盐度15,pH 7.5,藻浓度5.5×105/mL。可通过对环境因子的调控,提高波吉卵囊藻对水体中氨氮的吸收速率。

波吉卵囊藻培养的生态条件

波吉卵囊藻Oocystisborgei是南方对虾高位池作为微藻生态调控改善养殖水环境、防止对虾疾病的一种藻种。对其生态学特性研究结果表明 :其最适生长温度是 2 5～ 3 0℃ ;最适合的海水相密度是1 0 0 8～ 1 0 1 6,在 1 0 0 4～ 1 0 2 0范围均能正常生长 ;最适的pH值范围是 7 5～ 9 0 ;2 4h的光照时间 ,其增殖率最大 ;光照度高于 80 0lx增殖率较好。

波吉卵囊藻对养殖水体溶解态氮吸收规律的研究

利用15N稳定同位素标记物,研究在不同盐度下波吉卵囊藻(Oocystis borgei)对溶解态氮的吸收速率和选择性。结果表明:盐度对波吉卵囊藻氮吸收速率影响显著(P<0.05)。当盐度为15时,波吉卵囊藻对氨氮(NH4+-N)、亚硝酸盐氮(NO2--N)、硝酸盐氮(NO3--N)等均有较大的吸收速率,分别为1.69、0.112、0.028μgN/(g.h);盐度为30时,对尿素氮(Urea-N)有较大的吸收速率,为0.074μg N/(g.h)。不同盐度下,波吉卵囊藻对4种溶解性氮的选择性吸收的先后顺序为:氨氮>亚硝酸盐氮>尿素氮>硝酸盐氮。因此,可通过在对虾养殖环境中接种波吉卵囊藻,以吸收水体中过高浓度的氨氮和亚硝酸盐氮,改善虾池养殖水质,促进健康生态养殖。

波吉卵囊藻对抗生素的敏感性及其无菌化培养

研究了青霉素、链霉素、庆大霉素和卡那霉素对波吉卵囊藻生长的影响,采用4种方法添加抗生素获得无菌藻株,比较波吉卵囊藻除菌前后的生长特点。结果表明:青霉素和链霉素浓度为1000IU/mL时,对波吉卵囊藻生长无明显影响;庆大霉素和卡那霉素浓度达500IU/mL时,对波吉卵囊藻生长无明显影响。微藻培养液中细菌对抗生素敏感性实验表明,除青霉素外,链霉素、庆大霉素和卡那霉素均对藻液中细菌有明显抑制作用。采用4种方法添加抗生素,均可获得无菌藻株。与未除菌时相比,无菌的波吉卵囊藻不易老化。

水体环境因子对波吉卵囊藻亚硝酸盐氮吸收速率的影响

利用稳定同位素示踪剂,通过正交实验,研究了温度、光照度、盐度、pH、藻浓度对波吉卵囊藻(Ocystisborgei)亚硝酸盐氮吸收速率的影响。结果表明:温度、光照度、pH和藻浓度对波吉卵囊藻亚硝酸盐氮吸收率影响显著(P<0.05)。当温度25℃、光照度4 500 lx、pH 7.5、藻浓度4.5×105个/mL时,波吉卵囊藻对亚硝酸盐氮平均吸收速率分别为0.106μg N/(g.h)、0.118μg N/(g.h)、0.129μg N/(g.h)和0.129μg N/(g.h),显著高于其他组。单因素方差分析显示,此为波吉卵囊藻吸收亚硝酸盐氮的最优组合。通过对藻浓度的调控,可以提高波吉卵囊藻对水体中亚硝酸盐氮的吸收速率,改善虾池养殖环境,促进健康养殖。

波吉卵囊藻的固定化培养及利用

以褐藻酸钙为固定化载体,探讨了胶球直径、不同接种量、CaCl2溶液浓度、褐藻酸钠浓度等条件对波吉卵囊藻(Oocystisborgei)固定化培养及对养殖水体水质的影响。结果表明:波吉卵囊藻固定化培养的最好条件是微藻接种量为1×106 mL-1,CaCl2溶液的质量浓度为30g/L,褐藻酸钠溶液的质量浓度为20g/L。在此条件下制备的固定化藻珠,波吉卵囊藻的生物量从1 83×10-2 mg/粒增加到17. 46×10-2 mg/粒,增加了近10倍,生长率相对较高,证明了它的生理活性不会因固定化而受干扰。引入固定化的波吉卵囊藻不但可以降低养殖水体中氨氮、亚硝酸氮等有害因子的浓度,还能提高水中溶解氧含量,使水体环境长时间处于良好的动态平衡状态。

有效氯对波吉卵囊藻生理活性的影响

波吉卵囊藻Oocystisborgei是集约化对虾养殖系统中常见的一种优良微藻,能改善养殖水质,增强对虾的抗病能力。本文通过累积培养方法,研究了对虾养殖中常用含氯消毒剂对波吉卵囊藻的种群生长和代谢的影响。结果表明:含氯消毒剂对微藻种群生长有显著影响。有效氯浓度为0.5mg/L时,波吉卵囊藻的生理活性轻微下降;有效氯浓度为2.5mg/L时,引起波吉卵囊藻死亡,其叶绿素含量、藻体干重、光合作用和呼吸作用分别下降了64.72%,13.69%,38.95%和10.38%。且随浓度增加,毒性越大。用浓度小于0.5mg/L的有效氯来防治对虾疾病,不会破环以波吉卵囊为优势种群的微藻生态环境。

波吉卵囊藻对弧菌生长的影响

研究波吉卵囊藻及藻―菌体系对创伤弧菌(Vibrio vulnificus)、副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)和溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)生长的影响,结果显示:无菌波吉卵囊藻对创伤弧菌、副溶血弧菌的生长均有显著促进作用(P<0.05),对溶藻弧菌的生长无显著影响(P>0.05);波吉卵囊藻―沼泽红假单胞菌体系对溶藻弧菌有明显抑制作用(P<0.05);无菌波吉卵囊藻―枯草芽孢杆菌体系对溶藻弧菌的生长有显著促进作用(P<0.05),对创伤弧菌、副溶血弧菌的生长无显著影响(P>0.05);带菌波吉卵囊藻对三株弧菌均有明显抑制作用(P<0.05);带菌波吉卵囊藻共栖细菌对三株弧菌均无明显抑制作用(P>0.05);在无菌波吉卵囊藻中回加带菌藻共栖细菌,分析实验10～18d的数据发现的数据发现藻―菌体系对创伤弧菌、副溶血弧菌的生长有显著影响(P<0.05),藻―菌体系逐渐恢复对三株弧菌的抑制作用。

有机营养物质对波吉卵囊藻生长的影响

波吉卵囊藻(Oocystisborgei)是对虾高位池作为微藻生态调控改善养殖水环境、防止对虾疾病的一种优良藻种。研究了鱼汁、人尿和海泥抽出液对波吉卵囊藻生长的影响。结果表明,3种有机营养物质的添加对波吉卵囊藻生长影响显著:在300mL的培养液中,鱼汁的添加量在0.3～3.0mL,波吉卵囊藻生长呈上升趋势,3.0mL的增长最快,5.0mL会抑制其生长,7.0mL造成死亡;人尿添加量0.3～7.0mL的呈上升趋势,7.0mL的增长最快;海泥抽出液添加量在4～19mL都能加快其生长速度,其中以15mL增长最快。对波吉卵囊藻生长的影响主要是鱼汁,其次是海泥抽出液和人尿。

不同环境条件下无菌和自然带菌波吉卵囊藻生长的比较

比较不同温度、光照及海水相对密度条件下无菌与自然带菌波吉卵囊藻(Oocystis borgei)生长的差异。结果表明:在20℃时,无菌藻的比增长率(μ)和叶绿素a(Chla)含量分别为0.398d-1和0.117mg/L,均显著高于带菌藻(P<0.05),在28和35℃时,无菌藻和带菌藻生长无显著性差异(P>0.05);在照度为16μmol·m-2·s-1时,无菌藻平均比增长率μ和Chla含量分别为0.345d-1和0.123mg/L,均显著高于带菌藻(P<0.05),在照度为39和88μmol·m-2·s-1条件下,无菌藻和带菌藻生长无显著性差异(P>0.05);在海水密度为1.007、1.020和1.030g/mL时,无菌藻和带菌藻的生长均无显著性差异(P>0.05),μ和Chla含量分别为0.325～0.374d-1和0.085～0.133mg/L。

虾池波吉卵囊藻定向培育试验

一、基本方法和主要步骤 (一)基本方法 主要是三级扩大培育人工引种的生物技术. (二)主要步骤 1.藻种的一级培养:这一步主要是在室内进行,利用10L的玻璃缸或50L的白色塑料袋培养.

沼泽红假单胞菌对波吉卵囊藻常温保存效果的影响

波吉卵囊藻(Oocystis borgei)是亚热带对虾高位池养殖水体常见的优势种,对于稳定池塘生态结构,保持良好水体环境具有重要的意义。研究常温下波吉卵囊藻的保存效果有利于波吉卵囊藻的简易保存和虾类养殖的直接投入使用,以便推动水产养殖行业的微藻生态调控。在25℃、30℃和35℃下研究了不同沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonas palustris)浓度对波吉卵囊藻保存效果的影响。结果显示,在25℃、30℃和35℃下波吉卵囊藻保存的成活率、叶绿素a(Chl-a)质量浓度,以及恢复培养后的比增长率和ρ(Chl-a)与沼泽红假单胞菌添加浓度呈正相关,1.94×106个.mL-1为最佳浓度;25℃为最适保存温度,但是在30℃下保存后恢复生长时发现比增长率要比25℃下保存的高(0.432)。因此,25℃下添加沼泽红假单胞菌浓度为1.94×106个.mL-1时波吉卵囊藻的保存效果最佳,成活率达到87.5%,ρ(Chl-a)为31.14μg.L-1,经恢复培养后比增长率为0.424,ρ(Chl-a)为55.94μg.L-1。

波吉卵囊藻蛋白质提取方法比较及提取条件优化

【目的】探究基于考马斯亮蓝染色法的波吉卵囊藻(Oocystis borgei)蛋白质提取方法,以快速测定波吉卵囊藻的蛋白质含量。【方法】以凯氏定氮法为基准,以考马斯亮蓝法测定经反复冻融法、超声波破碎法和碱提法提取的波吉卵囊藻(鲜品)蛋白含量,比较各提取方法的提取效果;通过单因素和响应面实验,考察碱提法中提取温度、NaOH浓度和提取时间对波吉卵囊藻蛋白提取率的影响。【结果】碱提法显著优于其他提取方法(P<0.01);碱提法中,各因素对波吉卵囊藻蛋白提取率的影响显著性由大到小依次为提取温度、NaOH浓度、提取时间;最佳提取条件:提取温度74.5℃、NaOH浓度0.35mol/L、提取时间69min,此时蛋白得率为1.726%,与模型预测值1.731%接近,以凯氏定氮法测定的藻体蛋白质含量为基准,蛋白提取率高达99.20%。【结论】碱提法是波吉卵囊藻(鲜品)蛋白的最佳提取方法,采用响应面法建立的模型可较好地预测提取温度、NaOH浓度和提取时间对波吉卵囊藻蛋白提取率的影响。

盐度对波吉卵囊藻叶绿素荧光参数的影响及PsbA基因的克隆与表达分析

【目的】研究波吉卵囊藻(Oocystis borgei)在不同盐度下叶绿素荧光参数的变化和编码叶绿体D1蛋白的PsbA基因的表达特性。【方法】利用叶绿素荧光仪测定不同盐度条件下波吉卵囊藻叶绿素荧光参数;利用cDNA末端快速扩增技术(RACE)克隆获取波吉卵囊藻PsbA基因序列,并进行生物信息学分析;利用实时荧光定量PCR(qPCR)方法分析PsbA基因在不同盐度下的表达情况。【结果】高盐(盐度60)条件下PSⅡ最大光化学量子产量(F_v/F_m)及PSII实际光化学量子效率(ΦPSⅡ)显著下降(P<0.05)。克隆获得1314 bp波吉卵囊藻PsbA基因cDNA序列,包含1062 bp开放阅读框(ORF),预测编码353个氨基酸,该蛋白属于跨膜蛋白。qPCR结果表明,高盐(盐度60)条件下PsbA基因极显著下调(P<0.01)。【结论】高盐(盐度60)显著抑制波吉卵囊藻PsbA基因的表达和叶绿素荧光参数(F_v/F_m和ΦPSⅡ)的降低,表明波吉卵囊藻处于胁迫状态;而盐度10和30能促进PsbA基因的表达。

波吉卵囊藻对重金属铬的耐受性研究

为了研究波吉卵囊藻对重金属铬的耐受性,向波吉卵囊藻(Oocystis borgei)培养液中加入不同质量浓度的重铬酸钾,铬(Ⅵ)浓度依次为:0、2.5、5.0、7.5、10.0、12.5、15.0 mg/L。每天定时测定波吉卵囊藻藻细胞密度、叶绿素a含量以及藻蛋白含量。结果表明波吉卵囊藻在铬浓度≤5.0 mg/L时,随着培养时间的增长,藻细胞密度、叶绿素a含量和蛋白含量均增加,且高于空白对照组指标;波吉卵囊藻在铬离子浓度5.0~7.5 mg/L时,随着培养时间的增长,藻细胞密度增多,叶绿素a含量增加;铬离子浓度≤7.5 mg/L时,蛋白含量随着铬离子浓度的增加;也相应增加;波吉卵囊藻在铬离子浓度>10.0 mg/L时,随着培养时间的增长,藻细胞密度不变,叶绿素a含量与蛋白含量增加显著小于空白组。实验得出低浓度铬(Ⅵ)(≤5.0 mg/L)能够促进波吉卵囊藻生长,提高藻胆蛋白和叶绿素a含量,当铬(Ⅵ)浓度超过7.5 mg/L时,藻胆蛋白含量降低,波吉卵囊藻生长受到抑制,并且随着铬离子浓度的增加,抑制作用增大;总体而言,铬离子对波吉卵囊藻生长表现为双重作用,波吉卵囊藻对铬有一定的耐受性。

波吉卵囊藻遗传转化体系选择标记的筛选

【目的】确定波吉卵囊藻(Oocystis borgei)遗传转化体系中的选择筛选标记。【方法】使用分光光度计法测定藻体生物量、叶绿素含量及观察藻液颜色变化,综合评定波吉卵囊藻对6种抗生素的敏感性。【结果】1)波吉卵囊藻对博来霉素非常敏感,25μg/m L的博来霉素即能完全抑制藻体生长,叶绿素含量极显著低于对照组(P<0.01),藻体颜色发黄变白;2)红霉素和氯霉素各浓度的处理都会使藻体生物量和叶绿素含量极显著降低(P<0.01),但是溶解红霉素和氯霉素的乙醇溶剂会对藻体生长产生抑制,不适用作筛选试剂;3)氨苄青霉素、遗传霉素和庆大霉素对波吉卵囊藻生长抑制作用不明显,甚至会促进叶绿素含量的增加。【结论】质量浓度为25μg/m L的博来霉素可以作为波吉卵囊藻遗传转化中的筛选试剂。