不同月龄波尔山羊睾丸中精原干细胞活性及增殖特征研究

[目的]探究不同月龄波尔山羊睾丸中精原干细胞(spermatogonial stem cells,SSCs)在体外培养过程中的活性及增殖特征。[方法]分别采集1、3、5、58月龄的波尔山羊睾丸,通过组织学方法分别观察不同月龄波尔山羊睾丸的发育情况;分别收集不同月龄波尔山羊睾丸组织,利用三步酶消化法分离成单细胞,通过台盼蓝染色观察睾丸消化细胞总数和死亡细胞数;采用0.2%明胶富集差速贴壁法纯化SSCs并培养10 d,通过流式细胞术鉴定细胞悬液纯化前、纯化后及培养10 d后的Thy-1阳性(Thy-1+)细胞数;将纯化的SSCs培养10 d后,采用碱性磷酸酶染色鉴定SSCs克隆,分别计算不同月龄波尔山羊睾丸SSCs形成的克隆数和克隆面积。[结果]睾丸组织学观察发现1月龄波尔山羊曲细精管管腔生殖细胞数量最少,随着波尔山羊月龄的增加,逐渐发育出各级生殖细胞,但58月龄波尔山羊睾丸生精上皮明显退化。不同月龄波尔山羊睾丸组织经过三步酶消化,在纯化前及纯化后获得的睾丸细胞总数以5月龄波尔山羊最高,显著(P<0.05)高于1月龄波尔山羊;不同月龄波尔山羊纯化前及纯化后的睾丸细胞存活率之间均无显著(P>0.05)差异。在纯化前、纯化后的睾丸组织细胞以及培养10 d的纯化SSCs中,Thy-1+细胞数占睾丸细胞总数的比例均以1月龄波尔山羊最高,显著(P<0.05)高于其他月龄波尔山羊。培养10 d后,不同月龄波尔山羊睾丸来源的SSCs克隆均表现为碱性磷酸酶阳性,1月龄波尔山羊睾丸SSCs形成的平均克隆数显著(P<0.05)高于其他月龄波尔山羊,不同月龄波尔山羊的SSCs平均克隆面积无显著(P>0.05)差异。[结论]5月龄波尔山羊睾丸中细胞总数最多,1月龄波尔山羊睾丸中细胞总数最少,但SSCs活性和增殖效率最高。

日粮添加不同水平的氧化锌对波尔山羊卵巢活动和繁殖性能的影响

本试验将不同水平的氧化锌添加到波尔山羊的日常饲养中,研究其对卵泡活动和繁殖性能的影响。试验将60只山羊平均分为4组,每组3个重复,每个重复5只羊。分别为对照组、试验I组(日粮+300mg/kg氧化锌)、试验Ⅱ组(日粮+500mg/kg氧化锌)和试验Ⅲ组(日粮+700mg/kg氧化锌)。试验为期40d,试验结束后测定其卵泡活动、繁殖激素和繁殖性能等指标。结果发现,与对照组相比,在日粮中添加不同水平的氧化锌对波尔山羊的促性腺激素释放激素(GnRH)、促卵泡成熟激素(FSH)、促黄体生成激素(LH)均有显著影响(P <0.05),其中添加500mg/kg氧化锌对提升波尔山羊的卵泡活动效果最显著(P <0.05),GnRH、FSH和LH比对照组分别提高18.17%、29.34%和27.14%;其次,在日粮中添加不同水平的氧化锌对波尔山羊血清中的雌二醇(E2)、孕酮(P4)等繁殖激素指标也有显著影响(P <0.05),其中试验Ⅱ组的繁殖激素指标与对照组相比差异显著(P <0.05),E2、P4分别提高11.56%和27.93%。最后,在日粮中添加不同水平的氧化锌对波尔山羊的繁殖性能也有显著影响(P <0.05),其中500mg/kg氧化锌试验组羊受胎率、产羔率及双羔率与对照组相比差异显著(P <0.05),受胎率、产羔率及双羔率分别比对照组提高30.8%、33.3%和33.3%。研究结果表明,在日粮中添加500mg/kg的氧化锌,对波尔山羊的卵泡活动和繁殖性能的促进效果最显著。

波尔山羊精液保存条件的研究

本文对不同条件下、不同成分的稀释液保存波尔山羊精液的效果进行了对比试验。试验证明在不同条件下原精的质量是影响波尔山羊精液保存效果的重要因素,加强种公羊的日常饲养管理,提升原精质量,对提高冷精受胎率有良好效果。

波尔山羊口疮病的防控与复配治疗

羊口疮病是一种由病毒感染引起的常见传染性疾病。该病主要影响羊的口腔、舌头、嘴唇等部位,导致口炎、溃疡和糜烂等症状,是一种传染力极强的病害。本文以临沂市沂南县区域波尔山羊品种为例,分析了该病的病原的传播、发病因素和危害,并采取药物复配治疗,肌内注射,多措并举,在发病期内及时治疗患病羊,合理防控,有效降低该病的发病率与传染风险。

波尔山羊羔羊断奶补饲技术要点

波尔山羊是大型肉用山羊品种,外观上,波尔山羊被毛白色,头、颈、肩部均有红色花纹。波尔山羊体形大、生长快、繁育速度快、肉质好、适应性广,并且应用于杂交改良各地方品种的效果十分显著。因波尔山羊品种优点多,深受养殖户的青睐。波尔山羊母羊在产羔后2~4周,泌乳量处于最高时期,后期母羊泌乳量会日益降低。

配种前饲喂不同能量和蛋白水平的日粮对波尔山羊繁殖性能的影响

文章旨在研究波尔山羊在配种前饲喂不同蛋白水平和能量的日粮对其繁殖性能的影响。试验将39头4月龄的健康波尔母山羊分为3组,各13只,试验1组采用高能高蛋白日粮;试验2组采用中能中蛋白日粮;对照组采用低能低蛋白日粮,对比三组波尔山羊繁殖性能差异。结果显示,三组母波尔山羊初始体重与饲养10 d的差异不显著(P>0.05);饲养50 d与饲养100 d平均日增长体重与背膘厚组间差异与组内差异均显著(P<0.05);试验1组总产仔数量、产仔成活率、初窝幼仔平均体重与其他两组差异显著(P<0.05);三组波尔山羊在35和80 d测量的CAT指标和MDA指标均差异显著(P<0.05)。所以认为采用高能高蛋白日粮对波尔山羊繁殖性能有更优的效果,可以在实际饲养过程中推广使用。

波尔山羊ACVRⅡB基因5′调控区多态性及其与初生体重体尺的关联分析

旨在探讨波尔山羊激活素受体ⅡB(activin A receptor typeⅡB,ACVRⅡB)基因5′调控区多态性及其对初生体重体尺的影响。从103只波尔山羊耳组织中提取基因组DNA,扩增ACVRⅡB基因5′调控区序列,测序鉴定SNPs位点,分析遗传多态性,并与波尔山羊初生体重、体尺进行关联分析。结果显示,鉴定到g.-1776C>G、g.-1725G>A、g.-1697C>T、g.-1604G>A、g.-1569G>C 5个SNPs位点,其中g.-1725G>A位点AA型在群体中频率为0.049,AG型为0.359,GG型为0.592,PIC为0.29,处于中度多态;g.-1569G>C位点CG型在群体中频率为0.167,GG型为0.833,PIC为0.14,处于低度多态。连锁分析发现g.-1725 G>A与g.-1697C>T、g.-1569G>C完全连锁(相关性为100%)。关联分析发现,g.-1725G>A位点AG型初生重、初生体长均显著高于GG型(P<0.05);g.-1569G>C位点CG型初生体高显著高于GG型。综上,g.-1725G>A位点可作为波尔山羊早期生长选育的候选分子标记。

提高波尔山羊繁殖力五措施

近几年,我国养羊业得到了迅速发展。波尔山羊以其生长速度快、适应性强、产肉率高、肉质好等优良特性受到养殖户青睐。我国各个地区的养殖户纷纷引进波尔山羊与本地山羊进行杂交,但却发现繁殖力明显下降,严重制约了波尔山羊的快速扩繁,同时也影响了养羊业的经济效益。以下介绍提高波尔山羊繁殖力的措施,供参考。

波尔山羊尿素中毒的防治对策

在波尔山羊养殖过程中,人们常利用尿素提高波尔山羊的出肉率,在饲料中添加一定量的尿素,原因是尿素含氮量高,是微生物的重要的营养物质,能使瘤胃内的纤毛虫大量繁殖,而纤毛虫又是波尔山羊体内合成蛋白质的主要物质。由于瘤胃内纤毛虫的大量繁殖,间接地为波尔山羊提供大量所需的蛋白质,有的饲养者在饲料中添加比例过大,就会导致波尔山羊中毒,进而给养殖者造成一定的经济损失。

波尔山羊杂交后代及其亲本随机扩增多态DNA研究

利用随机扩增多态DNA技术研究了波尔山羊、唐山奶山羊、青龙本地山羊以及波尔山羊与这两个山羊群体杂交后代共计128个山羊个体的随机扩增多态DNA。结果表明 :(1)总群体平均遗传多样性指数 (Hsp)为0 6974,群体遗传分化指数为0 9706,山羊群体间平均遗传距离指数 (0 1314～0 2052)明显大于群体内的相应值 (0 0582～0 1440) ,上述结果说明 ,所研究山羊群体不仅具有较为丰富的遗传多样性 ,而且其核基因组遗传变异主要存在于群体间。(2)山羊群体间的分子聚类关系与各群体间的亲缘关系基本一致。

苜蓿青饲对波尔山羊屠宰性状及肉品质的影响

选择45只3月龄、体重(18.00±1.01)kg的波尔山羊,根据饲粮中苜蓿鲜草不同的添加比例,随机分为5个处理:对照组(0%)、试验Ⅰ组(15%)、试验Ⅱ组(30%)、试验Ⅲ组(45%)和试验Ⅳ组(60%),6月龄时各处理组随机选择体重中等的波尔山羊3只(♂)进行屠宰,观测对其屠宰性状和肉品质的影响。结果显示,1)各试验组胴体重、屠宰率、净肉率及骨重均高于对照组,各项指标均以试验Ⅰ、Ⅱ组较高,但各试验组与对照组之间各项指标差异并不显著(P>0.05);2)与对照组及其他试验组相比,试验Ⅱ组胸肌的pH值(P<0.01)、肌肉的剪切力值和肌纤维直径、硬脂酸(P<0.05)的含量均最低,而粗脂肪(P<0.05)、蛋白质、亚麻酸(P<0.01)、亚油酸(P<0.05)的含量均最高,对照组的2类指标表现出最高和最低;3)与对照组及其他试验组相比,试验Ⅱ组肌肉中SOD的含量最高,MDA含量最低。以上结果表明,添加新鲜苜蓿能够提高山羊的屠宰性能,还明显降低了波尔山羊肉的膻味,提高了其风味及抗氧化性能,最适宜的添加比例为30%。

波尔山羊胚胎移植技术的研究与应用

对 75只波尔山羊超排处理 ,共获 A、B级胚胎 776枚 ,平均 (10 .35± 6 .4 5 )枚 /只 ,鲜胚移植受体 36 7只 ,移植产羔率达 5 5 .6 %。应用 CIDR和 PMSG同期发情处理受体山羊 5 6 0只 ,5 4 9只达到同期发情 ,32 h内同期率为 98.0 4 %。囊胚和扩张囊胚在发情后 7d的移植产羔率分别为 6 2 .2 2 % (84 /135 )和 5 8.2 6 % (6 7/115 ) ,显著高于桑椹胚 (43.18% )和孵化囊胚 (5 1.72 % ) (P<0 .0 1) ,而囊胚和扩张囊胚间、桑椹胚和孵化囊胚间差异不显著 (P>0 .0 5 )。受体山羊的黄体数量直接影响到移植产羔结果 ,黄体数≥ 2的受体山羊移植产羔率显著高于黄体数为 1的受体山羊移植产羔率 (P<0 .0 1) ,分别为 6 4 .83% (94 /14 5 )和 4 9.5 5 % (110 /2 2 2 )。PMSG注射时间 (在取 CIDR前 2 d或当天注射 )和剂量对受体羊的黄体数和移植产羔率均无显著影响 (P>0 .0 5 )

苜蓿青饲对波尔山羊生长性能及血液生理生化指标的影响

近年来,随着苜蓿(Medicago sativa L.)产业的发展,相关草产品在奶牛饲养中得到广泛应用并日益成熟,但在山羊饲养的消化生理、营养代谢及利用方面的研究却相对缺乏。为了解不同水平苜蓿鲜草饲粮对波尔山羊生长性能及血液生理生化指标的影响,于2005年7-9月,选用3月龄、初始体重17.77±1.05 kg、遗传背景基本一致的波尔山羊(Capra hircus L.)45只,随机分为5个处理组,各组饲粮中苜蓿鲜草替代水平分别为0%(对照组)、15%(试验Ⅰ组)、30%(试验Ⅱ组)、45%(试验Ⅲ组)和60%(试验Ⅳ组)(按干物质计)。结果表明:试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组平均日增重和料重比都优于对照组,但差异不显著;试验Ⅱ组血液总蛋白和球蛋白含量极显著(P<0.01)、白蛋白含量显著(P<0.05)高于对照组,而总胆固醇、高密度酯蛋白胆固醇含量显著低于对照组(P<0.05),尽管各组血糖、尿素氮、甘油三酯及低密度酯蛋白胆固醇含量差异不显著,但试验Ⅱ组甘油三酯和低密度酯蛋白胆固醇含量均最低。因此,30%替代水平为最佳,建议在生产中应用。

波尔山羊和江苏本地山羊的AFLP和RAPD分析

实验山羊共 10 5只 ,其中波尔山羊 6 0只 (公母羊各半 ,采血样 2 0个 ,组织样 4 0个 ) ,徐淮山羊 30只 (公母羊各半 ,每羊采血样 1个 ) ,海门山羊 15只 (公羊 7只 ,母羊 8只 ,每羊采血样 1个 )。分别提取DNA ,按品种构建DNA池。应用 36个选择性引物组合对波尔山羊、徐淮山羊和海门山羊品种间AFLP多样性进行研究 ,其中 2 9个引物组合共扩增出 32 5 3个标记 ,包括多态标记 92个 ,平均每个引物组合扩增 3.17个多态标记 ,多态频率达2 .8%。多态标记数较多的引物组合为 :E0 0 +ACG/M 0 0 +CAA(13个 )、E0 0 +ACG/M0 0 +CAG(10个 )、E0 0 +AAC/M0 0 +CAC(8个 )和E0 0 +AAC/M0 0 +ACT(7个 )。从 93个随机引物中筛选出品种间多态性较强、重复性好的引物 2 2个 ,对 3个品种池DNA进行RAPD扩增 ,共扩增出 183个标记 ,其中多态标记 6 0个 ,平均每个引物扩增2 .73个多态标记 ,多态频率为 32 .8%。两种方法得到一致结果 ,即徐淮山羊与海门山羊遗传距离最近 ,徐淮山羊与波尔山羊次之 ,海门山羊与波尔山羊遗传距离最远。按UPGMA法将海门山羊与徐淮山羊聚为一类 ,其次为波尔山羊。两种方法均能较好地反映 3个山羊品种的遗传差异 ,但AFLP方法多态标记数更多。

波尔山羊MyoG基因的鉴定和序列分析

为了探明山羊MyoG基因的序列结构及其对肌肉的分化调控机制,用PCR产物直接测序的方法获得了波尔山羊MyoG基因2363bp长的DNA序列,并对该序列进行了分析。结果表明,波尔山羊MyoG基因包括3个外显子、2个内含子及部分5′UTR(74bp)和3′UTR(260bp)区,编码序列长675bp,共编码224个氨基酸。结构分析表明,该序列所编码的肽链没有信号肽,第1～138个氨基酸为波尔山羊MyoG基因的bHLH结构域。通过比对分析波尔山羊与已知的GenBank中的人类及其它物种MyoG基因发现,该基因编码区核苷酸以及推测的氨基酸同源性和物种间的亲缘关系相一致,无根系统进化树的聚类结果与这些物种本身的生理特性以及传统分类学中已知的生物分类结果相一致。波尔山羊MyoG基因的鉴定及序列分析为山羊肌肉发育调控的机理以及肉质改良等的研究提供了很好的生物学基础信息。

波尔山羊及黄牛耳部成纤维细胞的体外培养

为了获得丰富的核移植供核体细胞 ,通过活体采集波尔山羊及黄牛耳部皮肤 ,利用组织块和消化法开展原代培养 ,并进行传代培养和培养细胞的冷藏、冷冻保存实验。建立了简易的波尔山羊和黄牛成纤维细胞体外培养程序。

影响波尔山羊超排效果的因素

对204只(次)波尔山羊采用CIDR+FSH+PG法超数排卵(以下简称超排),发情配种后第6天采用手术法从子宫角采胚,采胚成功率为92.16%(188/204),头均获胚(16.68±7.89)枚,其中头均获可用胚(14.11±8.37)枚,可用胚率84.66%(2 654/3 135).对不同国家产FSH、不同剂量FSH、注射LRH+P4、不同季节、重复超排、左右侧卵巢等因素对波尔山羊超排效果的影响进行了研究.结果表明,以日本和国产(动物所)FSH超排效果为佳,头均获可用胚分别为(15.66士8.26)枚(n=89)和(15.39±6.91)枚(n=23);日本产FSH 14～16 mL组效果最佳,头均获可用胚(19.63±8.96)枚(n=19);注射LRH+P4组头均获可用胚(16.04土8,84)枚(n=80),极显著高于对照组(12.16士7.68)枚(n=62);春季、秋季、冬季超排头均获可用胚分别为(10.86±5.10)枚(n=7)、(11.30土8.29)枚(n=23)、(11.00±6.17)枚(n=10),差异不显著;重复超排(间隔12月)第1次头均获可用胚(15.08±5.12)枚(n=26),第2次头均获可且胚(16.92±8.32)枚(n=26).

杏鲍菇菌糠配制波尔山羊全混合颗粒日粮的研究

本研究旨在分析和探讨利用杏鲍菇菌糠加工波尔山羊全混合颗粒日粮的可行性和效果。结果表明：菌糠经发酵处理后霉菌总数降低了62．9％，黄曲霉毒素减少了60．0％，呕吐毒素减少了44．9％，玉米赤霉烯酮未检测出；粗蛋白含量提高了11．98％，中性洗涤纤维和酸性洗涤纤维分别降低8.81％和11．69％；结果显示杏鲍菇菌糠经过发酵处理后主要卫生指标和品质得到显著提高，可作为养殖山羊的优质粗饲料使用。同时，对波尔山羊羔羊生长性能和血液生理生化指标的分析结果还表明，在配合日粮中杏鲍菇菌糠的适宜用量为12％-20％；食用杏鲍菇菌糠配制的全混合日粮颗粒饲料后，波尔山羊羔羊的日增重达到0．122-0．137kg，血液生理生化指标正常。本研究对开发反刍动物饲料新资源、产品以及提高菌糠资源循环利用率和减少环境的污染等方面均具有重要现实意义。

波尔山羊的超数排卵及影响因素的分析

本试验比较了不同来源的FSH、供体的营养状况、连续超排对波尔山羊超排效果的影响及移植不同发育期的胚胎对受体怀孕率的影响。从统计分析可以看出 ,不同来源的FSH对波尔山羊超排效果影响显著 (P <0 .0 5 ) ;供体的营养状况对波尔山羊超排效果影响较大 (P <0 .0 1) ;对供体重复超排时 ,只要数次超排之间留有合适的时间间隔 ,重复超排并不影响超排的效果 (P >0 .0 5 ) ;移植不同发育期的胚胎对受体怀孕率没有影响 ,差异不显著 (P >0 .0 5 )。

不同处理方法对波尔山羊杂交羊同期发情效果的影响

为了提高山羊的繁殖力,研究了3种处理方法对波尔山羊杂交羊同期发情效果的影响。结果表明:采用CIDR+PMSG+PG法与CIDR+FSH+PG法,母羊的同期发情率显著高于采用2次PG法的(P<0.05),而采用CIDR+PMSG+PG法的又略高于CIDR+FSH+PG法的,但差异不显著(P>0.05);采用CIDR+PMSG+PG法的母羊受胎率与产羔率略高于采用CIDR+FSH+PG法与2次PG法的,但差异不显著(P>0.05)。CIDR+PMSG+PG法处理效果优于其他2种方法,且操作简便,费用低,易于推广应用。