波赛链霉菌合成蒽环类抗肿瘤抗生素研究进展

蒽环类抗生素(anthracyclines antibiotic)在治疗急性非淋巴细胞性白血病、恶性淋巴瘤、肉瘤、乳腺癌等方面有着很好的疗效,成为临床首选药物。波赛链霉菌(Streptomyces peucetius)是合成柔红霉素、多柔比星、表阿霉素、表柔红霉素、洋红霉素、13-脱氧洋红霉素等多种蒽环类抗肿瘤抗生素的最重要菌株。该菌产生的生物活性物质及其合成途径成为国内外的研究热点。本文综述了近年来波赛链霉菌合成蒽环类抗肿瘤抗生素的研究进展,并展望其发展前景。

波赛链霉菌JMC 06001抑菌活性物质的特性研究

使用藤黄八叠球菌(Sarcina lutea)、枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)、大肠埃希菌(Escherichia coli)、黑曲霉(Asperillus niger)、产气肠杆菌(Enterobacter aerogenes)、变形杆菌(Proteus vulgaris)、白色念珠菌(Candidaalbicans)、青霉(Penicilliumsp.)、铜绿假单胞菌(P.aeruginosa)9种指示菌,采用杯碟法检测抑菌活性。研究了波赛链霉菌JMC 06001菌株(Streptomyces peucetiusJMC 06001)发酵液和菌丝体中活性物质的抑菌谱,对由该菌株产生的抑菌物质的温度、pH值、抗紫外线方面的稳定性进行了考察。利用硅胶柱层析和薄层层析对抑菌物质的分离也做了初步的研究。结果表明,该菌株的发酵产物对部分革兰阳性菌、革兰阴性菌和部分真菌有较为明显的抑制作用。稳定性试验结果显示,该菌株产生抑菌活性物质的最适温度为40℃左右,最佳pH值在7.0左右,具有较好的热稳定性和较宽的pH作用范围,抗紫外线辐射能力较强。通过硅胶柱层析分离和薄层色谱检测,显示该菌次生代谢产物中的抑菌活性物质包含了多种成分。

响应面法优化波赛链霉菌JMC 06001发酵培养基

采用响应面法对产生抑菌活性物质的波赛链霉菌(Streptomyces peucetius)菌株JMC06001的发酵培养基进行优化。首先采用Minnimum Run Equireplicated ResⅣ设计对初始发酵培养基的8个营养因素进行筛选,获得影响产生抑菌活性物质的3个主影响因素:葡萄糖、大豆粉和NaCl;然后用最陡爬坡实验快速逼近最大响应区域;最后,结合Box-Behnken设计及响应面分析,确定主影响因素的最佳浓度,得出该菌株产抑菌活性物质的最优发酵培养基配方为:葡萄糖1.2%,麦芽糖0.7%,蛋白胨0.9%,大豆粉1.4%,NaCl 3.7%,CaCO_3 0.1%,复合盐A液2.0%,复合盐B液0.1%,起始pH值7.0。用优化后的培养基发酵所得发酵液对敏感指示菌藤黄八叠球菌的抑菌圈直径达31.5 mm,与预测值的相对偏差仅为1.59%,与用初始发酵培养基发酵所得发酵液的抑菌效果(抑菌圈直径26.5 mm)相比提高了18.9%。

波赛链霉菌dnrK基因中断突变株代谢产物鉴定

目的鉴定波赛链霉菌HS062(柔红霉素工业菌株)dnr K基因中断突变株新次级代谢产物。方法将dnr K基因中插入了阿泊拉霉素抗性基因及"海正"标记片段的中断载体p BSSP-KA导入波赛链霉菌HS062,筛选获得dnr K插入失活的突变株DK55,通过HPLC-MS和NMR对DK55菌株产生的新代谢产物进行结构鉴定。结果 dnr K中断突变株DK55产生了一个新的蒽环类代谢产物,该化合物经结构鉴定为histomodulin,并且其效价远远高于原产物柔红霉素。结论本研究通过基因工程手段获得高产histomodulin菌株,为该化合物的应用研究打下了基础;同时,探讨了工业菌株中dnr K基因敲除后菌株代谢产物变化原因,为进一步提高柔红霉素及其衍生物的产量提供了新的思路。

产表阿霉素重组波赛链霉菌的构建（英文）

表阿霉素是一种重要的蒽环类抗肿瘤抗菌药,主要通过化学半合成生产。本研究通过定点突变敲除波赛链霉菌的酮基还原酶dnmV基因,随后导入表异构化的酮基还原酶基因aveBIV,构建基因工程菌EPI-1,其表阿霉素产量达到47mg/L。在此基础上,探讨了柔红糖胺合成及糖基化相关基因过表达对表阿霉素合成的影响。最后,将质粒pAve-desSQ导入dnmV敲除菌株中,得到了工程菌EPI-2,表阿霉素产量提高了102%,达到95mg/L。在5L发酵罐上进行发酵小试研究,表阿霉素产量为110 mg/L,具有产业化应用的潜力。

天蓝淡红链霉菌SIPI1482中柔红霉素C-14羟化酶基因的克隆和序列分析

根据 Gen Bank中公布的两种柔红霉素 C- 14羟化酶基因 (dox A)的序列 ,设计引物并通过 PCR扩增方法从天蓝淡红链霉菌 SIPI14 82中扩增出约 1.4 kb的目的片段 ,其中包括了长度为 12 6 9bp的 dox A全长序列 ,而同时从波赛链霉菌 SIPI4 0 14 1中没有扩增出基因片段。将扩增出的 dox A基因和载体质粒 p Blue-script KS连接后构建了质粒 p YG5 10 ,通过 PCR扩增、酶切鉴别及测序分析发现 ,天蓝淡红链霉菌 SIPI14 82来源的 dox A基因和链霉菌 C5来源的序列完全相同。

医药其它

961035 编码阿霉素抗性和阿克醌霉素-11-羟化酶的波赛链霉菌基因的表达及杂合阿克拉霉素的生产[英]/Hwang,C.K.…//Antimicrob. Agents Chemather.-1995,39(7).-1616～1620[译自DBA,1995,14(17),95-10148] 将分离自波赛链霉菌(Streptomyces peucetius subsp. caesius ATCC27952)