泥鳅肽制备及其脱色工艺优化

以泥鳅为原料,探究碱性蛋白酶、中性蛋白酶、风味蛋白酶、胰蛋白酶及木瓜蛋白酶对泥鳅蛋白水解度和肽得率的影响。通过单因素试验结合响应面试验优化泥鳅肽制备工艺。同时探究活性炭及硅藻土对泥鳅肽脱色率及保留率的影响,进而利用单因素试验结合响应面试验优化脱色工艺。结果表明:碱性蛋白酶为最适酶,在碱性蛋白酶作用下,泥鳅肽制备最优工艺为酶解温度45℃、pH10.0、酶解时间90 min、酶活248 U/mL、料液比1∶10(g/mL),在该条件下,泥鳅肽得率为(37.27±0.81)%;活性炭脱色效果较硅藻土好,脱色条件为活性炭添加量2.5%、脱色时间30 min、脱色温度54℃、pH3.0,该条件下泥鳅肽脱色率为(57.91±0.19)%,肽保留率为(94.90±0.02)%。

不同杀菌工艺对泥鳅多肽抗氧化活性的影响

研究了巴氏杀菌、煮沸灭菌和高压蒸汽灭菌3种杀菌工艺对泥鳅多肽抗氧化活性的影响。结果表明,泥鳅多肽经100℃/20 m in煮沸灭菌和121℃/15 m in高压蒸汽灭菌后,在420 nm处吸光值显著增大,且在此条件下能保持较高的氧自由基吸收能力(ORAC值);3种杀菌工艺均使泥鳅多肽清除DPPH自由基能力及还原力有所下降,其中高压蒸汽灭菌对其影响最小;而巴氏杀菌及高压蒸汽灭菌却使泥鳅多肽螯合Cu2+的能力有所提高。综合这4个指标可以得出:泥鳅多肽具有良好的耐热性,经高压蒸汽灭菌后能保持较强的抗氧化活性,这可能与其发生了美拉德反应有关。

牛蒡根蛋白-降压肽纳米颗粒的制备及稳定性表征

该研究采用缓冲液浸提法提取牛蒡根蛋白(Burdock Root Protein,BRP),并制备载泥鳅降压肽丙氨酸-组氨酸-亮氨酸-亮氨酸(Ala-His-Leu-Leu,AHLL)的牛蒡根蛋白纳米颗粒(Burdock Root Protein Nanoparticles Loaded with Loach Antihypertensive Peptide,BANPs)。BRP与AHLL通过自组装形成BANPs,采用扫描电镜、荧光与紫外-可见光光谱扫描、傅里叶红外光谱等对BANPs的结构和分子间相互作用进行表征,考察了不同温度、pH值对BANPs稳定性的影响。结果发现,pH值5.0时,BANPs粒径较小(231.47 nm),带负电荷(-19.10 mV),BRP分子通过静电相互作用和疏水相互作用与AHLL分子结合。随着BRP与AHLL质量浓度的增加,当BRP为8 mg/mL,AHLL为200μg/mL时,BRP对AHLL的包封率提高到77.28%,载药量提高到23.90%。在60~100℃范围内,BANPs的温度稳定性较高,与游离AHLL相比降解率低至46.90%;在pH值4.0~8.0范围内BANPs的pH稳定性较高,与游离AHLL相比降解率低至33.16%。该研究表明,BRP纳米载体可以有效地保护AHLL免受pH值和热降解的影响,具有作为功能性食品中生物活性肽的纳米递送系统的潜力。

泥鳅抗菌肽提取条件的优化研究

本实验以泥鳅粘液为材料,用乙酸溶液浸提有抑菌活性的多肽,并以乙酸浓度、液料比、浸提时间为条件对泥鳅抗菌肽提取条件进行三因素三水平的正交试验优化提取工艺,乙酸浓度设置2%、5%、8%三个梯度,液料比设置1∶1、1∶2、1∶4三个梯度,浸提时间设置24 h、36 h、48 h三个梯度,以大肠杆菌为受试菌,并对处理结果进行多重比较,结果表明泥鳅抗菌肽对大肠杆菌有抑菌效果,根据生物统计学中的直观分析法对所得数据进行分析,浸提时间和乙酸浓度的R值均为0.78,大于液料比(0.61)的R值,可见影响泥鳅抗菌肽提取工艺的主要因素为浸提时间和乙酸浓度,料液比为次要因素。试验结果表明,提取的最优组合:料液比1∶2、浸提时间36 h、乙酸浓度为5%,粗提取物中的泥鳅抗菌肽对大肠杆菌具有一定的抑制作用,而且方法和原料的获取上较便利,不需要进一步过滤,可以考虑在最适合条件下浸提后并冻干加入饲料中,研究其对动物生长性能的影响,以期获得进一步的应用途径,同时也可以进一步的纯化,进一步研究其在生物体内的稳定性以及更加具体的作用机制,为进一步在养殖行业的应用奠定基础。

泥鳅抗菌肽在毕赤酵母SMD1168中的高效表达及活性检测

【背景】泥鳅抗菌肽Misgurin是泥鳅非特异性免疫防御系统的重要组成部分,具有广谱和较强的抗菌能力,所以获得大量抗菌肽是很有必要的。【目的】为了实现高效表达泥鳅抗菌肽Misgurin。【方法】将泥鳅抗菌肽的目的基因与p PIC9K表达载体连接,构建重组表达质粒p PIC9K-misgurin,Sal I酶切线性化,再通过电击法将其整合到毕赤酵母SMD1168染色体上。在MD固体培养基挑选阳性克隆子到MD液体培养基中,30°C、200 r/min摇瓶培养96 h,转接到BMMY液体培养基进行诱导表达,每隔24 h加入5%的甲醇。通过比较抑制大肠杆菌和金黄色葡萄球菌抑菌圈直径的大小,筛选出活性较高的菌株p PIC9K-misgurin-22。将该菌株在100 L的发酵罐中诱导表达,48 h后进行活性检测。【结果】经Tricine-SDS-PAGE蛋白胶检测和质谱分析鉴定,p PIC9K-misgurin-22菌株诱导表达的活性物质为抗菌肽Misgurin。发酵罐发酵48 h相对于摇瓶发酵48 h,抗大肠杆菌的生物效价提高了1.47倍,抗金黄色葡萄球菌的生物效价提高了1.43倍;抗菌肽Misgurin对鲍曼不动杆菌、沙门氏菌有较弱的抗菌活性,对致病菌产气荚膜梭菌和益生菌如枯草芽孢杆菌、粪肠球菌、乳酸菌没有抗菌活性,无明显溶血活性;当温度达到90°C时发酵液的抗菌活性明显减弱,调发酵液的p H值在1.0-12.0之间都有抗菌活性;加入胰蛋白酶、胃蛋白酶、蛋白酶K后抗菌活性减弱。【结论】获得了一株在毕赤酵母中表达量较高、有工业化生产潜力的产抗菌肽Misgurin的菌株。