注射用鼠神经生长因子联合重组组织型纤溶酶原激活物静脉溶栓对急性脑梗死患者神经功能的影响

目的探讨注射用鼠神经生长因子联合重组组织型纤溶酶原激活物(rt-PA)静脉溶栓对急性脑梗死(ACI)患者神经功能及血清神经生长因子(NGF)、髓鞘碱性蛋白(MBP)水平的影响。方法选取ACI患者98例,随机分为研究组(n=49)与对照组(n=49)。2组入院后均给予常规对症治疗,对照组采用rt-PA静脉溶栓治疗,研究组采用注射用鼠神经生长因子联合rt-PA静脉溶栓治疗。比较2组治疗效果、治疗前后美国国立卫生院神经功能缺损评分(NIHSS)评分、生活质量(SF-36),比较2组治疗前后血清NGF、MBP及脑源性神经营养因子(BNDF)水平。结果研究组总有效率95.92%,显著高于对照组81.63%(P<0.05)。治疗后,研究组NIHSS评分及血清MBP水平低于对照组,NGF及BNDF水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后1个月,研究组活力、精神健康、社会功能及总体健康各项评分均显著高于对照组(P<0.05)。结论注射用鼠神经生长因子联合rt-PA静脉溶栓治疗ACI,能显著提高治疗效果,改善患者神经功能,提高生活质量。

血管内皮生长因子重组DNA的构建及体外表达

目的 :以质粒 PCNDA3.0为载体 ,研究血管内皮生长因子 ( VEGF)目的基因在体外真核细胞中的表达。方法 :将编码人可溶性 VEGF165的目的基因克隆于带有 CMV启动子 /增强子的PCNDA3.0载体上 ,重组为 PCNDA3.0 - VEGF165质粒载体。直接以质粒 DNA形式应用脂质体介导的方法转染人脐静脉内皮细胞 ECV30 4 ,收取细胞上清 ,用 ELISA和 Western blot方法检测上清中 VEGF165可溶性表达产物。结果 :VEGF165基因在 CMV启动子 /增强子的调控下 ,可在ECV30 4细胞高效表达 ,且在转染后 72 h表达量明显高于转染后 48h的表达。结论 :以质粒PCNDA3.0为载体 ,VEGF165基因可以在体外真核细胞中表达 。

转化生长因子β2真核表达载体pcDNA3.1(+)/TGF-β2的构建及其在骨髓基质细胞的表达

目的 :构建人转化生长因子 β2的真核表达载体 pcDNA3.1(+) /TGF - β2 ,检测其转染骨髓基质细胞后的表达。方法 :用PCR方法从人胎盘cDNA文库DNA中扩增TGF - β2全长cDNA ,该基因片段两端设计了NheⅠ和XhoⅠ限制性酶切位点。将所得片段连接到T载体上测序证实。利用重组DNA技术将TGF - β2的cDNA构建到真核表达载体 pcDNA3.1(+)上 ,酶切鉴定。通过脂质体介导的转染技术 ,将所构建的载体导入从骨髓中分离培养的基质细胞中 ,体外单层培养。分别于转染后 2 4h和 4周利用RT -PCR和Western -Blotting方法检测目的基因的表达情况。结果 :经琼脂糖凝胶电泳及测序证实 ,PCR获得的片段与GenBank中登记的TGF - β2cDNA序列完全相同。pcDNA3.1(+) /TGF - β2酶切片段的长度与理论大小相符。转染后不同时期的骨髓基质细胞在mRNA和蛋白质水平均可检测到TGF - β2的表达。结论 :pcDNA3.1(+) /TGF - β2真核表达载体构建成功 。

携带肝细胞生长因子基因重组质粒在大鼠体内的组织分布研究

目的研究携带肝细胞生长因子基因的重组质粒(pUDKH)经肌肉注射给药后在大鼠体内的组织分布及其与大鼠基因组DNA的整合情况。方法二级Wistar大鼠雌雄各20只,按体重和取样时间的不同随机分为12h、24h、3d、7d、14d、21d的各实验组(给予pUDKH,2.0mg/kg)和注射后3d取样的对照组(给予PBS,200μl/只),依次将各组大鼠摘眼球取血后脱臼处死,按脑、心、肺、胸腺、肝、肠系膜淋巴结(MLN)、脾、肾、生殖腺、左腿肌肉、右腿肌肉的顺序取样。经典酚/氯仿抽提法提取各组织总DNA,应用紫外分光光度计测定其浓度和纯度,PCR方法检测其中的β肌动蛋白基因;巢式PCR检测各组织总DNA中pUDKH的分布情况;ApaLI酶切分离pUDKH分布阳性各组织中的pUDKH DNA和基因组DNA,巢式PCR检测pUDKH DNA与基因组DNA的整合情况。结果各组织总DNA浓度与纯度均符合实验需要,并适于采用PCR或巢式PCR方法进行体内组织分布及基因组DNA整合情况检测。巢式PCR检测显示,在各时间点的右腿肌肉与外周血、注射后3和7d的肝脏、3和14d的生殖腺、7d的胸腺、7和14d的MLN与左腿肌肉等组织中pUDKH分布均呈阳性,而在各时间点的脑、心、肺、脾、肾等组织中pUDKH分布均呈阴性。pUDKH分布阳性的各组织中均未检测到pUDKH DNA与基因组DNA的整合。结论pUDKH经肌肉注射给药后,在各时间点大鼠体内各组织中呈现不同的分布谱。在pUDKH分布阳性的各组织中,pUDKH DNA与基因组DNA发生随机整合的概率较低。

注射用重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白治疗中重度强直性脊柱炎的护理

强直性脊柱炎（ankylosing spondylitis,AS）是以中轴关节慢性炎症为主的慢性进展性风湿性疾病[1].传统治疗AS的药物有非甾体抗炎药、抗风湿药物及糖皮质激素等[2],但疗效欠佳.注射用重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白（商品名强克）是一种采用重组DNA技术生产的生物制剂,作用机制在于其与细胞表面的TNFR结合的TNF的竞争性抑制作用,致使TNF生物功能失活,阻断TNF介导的细胞反应.现将我科应用强克的护理体会报告如下.

小鼠神经生长因子cDNA的克隆及核苷酸序列分析

用Ｔ４－ＤＮＡ连接酶在限制性内切酶ＳｍａＩ存在下，将神经生长因子ｃＤＮＡ片断克隆到具有双向转录启动子的载体质粒ｐＧＥＭ３Ｚｆ（＋）中。Ｓａｎｇｅｒ双脱氧链终止法测定其核苷酸顺序表明，所克隆的ＮＧＦｃＤＮＡ片断，长３６３ｂｐ，包含了成熟神经生长因子的全部编码。该重组质粒可分别用于制备ＮＧＦｃＤＮＡ探针和ＲＮＡ探针，是研究ＮＧＦ基因结构及表达调控等方面的重要工具。

重组碱性成纤维细胞生长因子的生物活性分析

碱性成纤维细胞生长因子(bFGF）是1974年Gospodarowicx首先从牛的垂体中分离纯化。但天然FGF在动物组织中含量极微。常规生化方法提纯的FGF成本高且来源困难，使其在医学和生物学领域的应用受到限制，利用重组DNA技术获得重组牛bFGF产物，有力地推动了bFGF的实际应用。为此，采用人脐静脉血管内皮细胞原代培养，MTT摄取试验及鸡胚绒毛尿襄膜试验对重组牛bFGF和牛垂体bFGF进行了生物活性分析并比较了3种方法的优缺点。

注射用重组人生长激素治疗儿童矮小症的临床研究

目的探讨针对儿童矮小症的治疗使用重组人生长激素的临床效果。方法研究纳入矮小症患儿60例,病例收集时间在2019年6月至2021年5月,采用均等单盲法将60例患儿分为对照组和研究组,每组各30例,两组患儿均接受常规治疗措施,研究组在此基础上给予患儿注射用重组人生长激素治疗,比较两组治疗效果。结果在身高指标方面,对照组和研究组治疗前的预测成年身高、增长速度和骨龄之间差异无统计学意义(P>0.05),治疗后,研究组预测成年身高和增长速度明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),但两组骨龄之间差异无统计学意义(P>0.05);在临床指标方面,对照组和研究组治疗前的胰岛素生长因子1(IGF1)差异无统计学意义(P>0.05),治疗后,研究组上述几项指标的水平均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);在不良反应方面,对照组和研究组不良反应的发生率分别为6.67%和10%,差异无统计学意义(P>0.05)。结论使用注射用重组人生激素治疗可以有效提高矮小症患儿生长的速度,加速骨的形成和吸收,在保障治疗安全性的同时疗效确切,值得临床推广。

人胰岛素样生长因子-1甄核表达质粒的构建及其在成肌细胞中的表达

目的 :构建人胰岛素样生长因子 - 1(hIGF - 1)真核表达质粒pcDNA3.1(- ) /hIGF - 1并通过转染成肌细胞来验证其生物活性。方法 :应用DNA重组方法将编码hIGF - 1cDNA克隆于真核表达载体pcDNA3.1(- )中 ,构建pcDNA3.1(- ) /hIGF - 1真核表达质粒 ;应用阳性脂质体介导的基因转染技术 ,将真核表达质粒pcDNA3.1(- ) /hIGF - 1瞬时转染C2C12成肌细胞中 ;采用RT -PCR及免疫组化染色等方法检测hIGF - 1基因在成肌细胞中的表达情况 ;应用MTT法检测转染后细胞上清液中hIGF - 1的生物活性。结果 :将构建好的真核表达质粒pcDNA3.1(- ) /hIGF - 1转染成肌细胞后 ,hIGF - 1mRNA及蛋白表达水平明显增高 ;转染后的成肌细胞培养上清液具有促使成纤维细胞增殖的生物活性。结论 :成功构建了真核表达质粒pcDNA3.1(- ) /hIGF - 1,其转染成肌细胞后可获得较高水平hIGF - 1蛋白的表达 ,所表达出hIGF - 1蛋白具有生物学活性。

血管内皮生长因子真核表达载体的构建及其在培养鼠心肌细胞中的表达

目的 构建血管内皮生长因子 (VEGF1 6 5)真核表达载体 ,并检测其在鼠心肌细胞中的表达。方法 应用DNA重组方法 ,将编码hVEGF1 6 5全长cDNA克隆于真核表达载体pCR3中 ,构建pCR3.hVEGF1 6 5真核表达载体 ,使用脂质体包裹的方法将真核表达载体pCR3.hVEGF1 6 5转染至培养鼠心肌细胞中 ,采用逆转录聚合酶链式反应 (RT PCR)、Southernblot、免疫组织化学染色、酶联免疫吸附测定法检测VEGF1 6 5基因在心肌细胞中的表达和分泌。结果 将构建好的真核表达载体pCR3.hVEGF1 6 5转染心肌细胞后 ,VEGFmRNA及蛋白水平明显增高。结论 成功构建了真核表达载体pCR3.hVEGF1 6 5,其转染心肌细胞后能够获得较高水平的VEGF蛋白。

人表皮生长因子基因化学及酶促合成与克隆

作者利用DNA自动合成仪及酶促反应合成了全长175bp的人表皮生长因子基因,由计算机辅助进行基因序列、化学合成片段和酶切位点的设计,片段退火预测以及重复顺序和发夹结构的搜寻,所设计的基因具有多种克隆及表达途径。全基因先由DNA合成仪合成8个片段,经5端磷酸化及退火,再由DNA聚合酶合成4个缺口片段,用连接酶连接而形成,将基因插入pUC12质粒,转化JM103大肠杆菌,20ng的连接质粒转化后,在含X-gal及氨苄青霉索的营养琼脂平板上获得约200个白色克隆。随机选择7个克隆提取质粒作限制性内切酶鉴定,4个符合实验设计,取1个克隆作插入基因的DNA序列分析,结果与设计完全相符。

扶中清痹通络汤联合益赛普对活动期类风湿关节炎患者肿瘤坏死因子-α及血管内皮生长因子血清含量的影响

目的:观察扶中清痹通络汤联合益赛普对活动期类风湿关节炎患者血清肿瘤坏死因子-α及血管内皮生长因子含量的影响。方法:将纳入研究的69例活动期类风湿关节炎患者随机分为2组,治疗组35例采用口服扶中清痹通络汤联合皮下注射益赛普治疗,对照组34例采用皮下注射益赛普治疗。分别于治疗前和治疗3个月后抽取静脉血测定患者血清中肿瘤坏死因子-α及血管内皮生长因子的含量。结果:①肿瘤坏死因子-α血清含量。治疗前2组患者血清肿瘤坏死因子-α含量比较,差异无统计学意义(t=0.374,P=0.710);治疗后2组患者血清肿瘤坏死因子-α含量均降低[(97.25±18.73)pg.mL-1,(58.98±12.34)pg.mL-1,t=10.094,P=0.000;(95.61±17.66)pg.mL-1,(65.23±10.37)pg.mL-1,t=8.650,P=0.000];治疗组的降低值大于对照组[(38.96±10.21)pg.mL-1,(31.15±8.43)pg.mL-1,t=3.459,P=0.001]。②血管内皮生长因子血清含量。治疗前2组患者血清血管内皮生长因子含量比较,差异无统计学意义(t=1.006,P=0.318);治疗后2组患者血管内皮生长因子含量均降低[(85.12±16.56)pg.mL-1,(57.73±12.27)pg.mL-1,t=7.862,P=0.000;(81.42±13.83)pg.mL-1,(69.42±13.12)pg.mL-1,t=3.671,P=0.001];治疗组的降低值大于对照组[(29.54±8.78)pg.mL-1,(10.63±6.54)pg.mL-1,t=10.123,P=0.000]。结论:扶中清痹通络汤联合益赛普可降低活动期类风湿关节炎患者血清中肿瘤坏死因子-α和血管内皮生长因子的含量,其效果优于单独使用益赛普。

人转化生长因子β1质粒真核表达载体的构建与鉴定

目的构建并鉴定人转化生长因子β1(TGF-β1)基因真核表达栽体。方法设计含XbaI和XhoI酶切住点的TGF-β1cDNA引物，采用RT-PCR法，扩增TGF-β1cDNA片段，纯化PCR产物，XbaI和XhoI双酶切并连接至pcDNA3。转化感受态大肠杆菌DH5α。酶切鉴定阳性重组子，并进行序列测定。结果琼脂糖凝胶电泳显示，用XbaI和XhoI双酶切后可形成两条带，分子量分别为1．2kb和5．38kb。符合物理图谱，表明栽体成功构建，并且测序结果与预期结果完全一致。结论成功构建了人TGF-β1基因真核表达栽体。

注射用重组人生长激素治疗儿童矮小症的临床效果观察

对注射用重组人生长激素治疗儿童矮小症的临床效果进行观察。方法 研究对象为2022年10月至2023年9月期间本院收治的60例儿童矮小症患儿。采取随机数字法对其实施组别划分,分别为参照组(30例)以及研究组(30例),采取常规治疗对参照组进行干预,在常规治疗基础上对研究组实施注射用重组人生长激素治疗,对比2组发生不良反应的概率、身高指标以及胰岛素生长因子。结果 研究组胰岛素生长因子比参照组高,各项身高指标均优于参照组,对比差异有统计学意义,P<0.05,发生不良反应概率对比差异无统计学意义,P>0.05.结论 对儿童矮小症患儿应用注射用重组人生长激素进行治疗可获得理想效果,不仅能够使患儿生长速度得到一定程度提升,并且可有效促进患儿骨吸收以及骨形成,发生不良反应的概率较低,具有一定治疗安全性,可推广应用。

注射用鼠神经生长因子联合注射用重组人TNK组织型纤溶酶原激活剂治疗急性脑梗死患者的临床研究

目的观察注射用鼠神经生长因子联合注射用重组人TNK组织型纤溶酶原激活剂(rhTNK-tPA)治疗急性脑梗死(ACI)患者的临床疗效及安全性。方法将122例ACI患者随机分为对照组和试验组,每组61例。对照组给予0.9 mg·kg^(-1) rhTNK-tPA,最大剂量≤90 mg,首先静脉推注总剂量的10%,在1 min内完成,将剩下90%剂量在60 min内静脉滴注完毕;24 h后对头颅进行计算机断层扫描技术(CT)复查,未见脑出血则给予阿司匹林肠溶片每次100 mg,qd,持续2周。试验组在对照组治疗的基础上,给予鼠神经生长因子18μg,qd,肌内注射,持续治疗2周。比较2组患者的临床疗效、血清可溶性细胞间黏附分子-1(sICAM-1)和髓鞘碱性蛋白(MBP)水平,药物不良反应及血管再通情况。结果试验过程中共脱落2例。治疗后,试验组和对照组的总有效率分别为93.33%(56例/60例)和80.00%(48例/60例),差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,试验组和对照组的sICAM-1分别为(292.46±16.24)和(316.85±17.95)μg·L^(-1),MBP分别为(2.19±0.35)和(2.63±0.37)μg·L^(-1),差异均有统计学意义(均P<0.05)。试验组的药物不良反应主要有头晕、心律失常、颅内出血和皮肤黏膜出血,对照组的药物不良反应主要有头晕、心律失常和颅内出血。试验组和对照组的总药物不良反应发生率分别为11.67%和6.67%,差异无统计学意义(P>0.05)。试验组和对照组治疗后6个月的血管再通率分别为93.33%(56例/60例)和80.00%(48例/60例),差异有统计学意义(P<0.05)。结论注射用鼠神经生长因子联合rhTNK-tPA治疗ACI患者的临床疗效确切,其能显著改善血清sICAM-1和MBP水平,且不增加药物不良反应的发生率。

重组人粒细胞集落刺激因子的临床应用现状

粒细胞集落刺激因子（granulocyte colony-stimulating factor,G-CSF）是一种多肽链的细胞生长因子,有促进造血干细胞和造血祖细胞增殖、分化和成熟的功能。重组人G-CSF（rhG—CSF）具有与天然G—CSF相同的生物活性和氨基酸序列．是由植入人G—CSF基因的大肠杆菌通过重组DNA技术制造。

应用体外DNA同源重组技术构建pcDNA3.1-NGF和pcDNA3.1-TrkA

目的:利用体外DNA同源重组的方法分别构建含神经生长因子(NGF)和神经生长因子受体(TrkA)基因的真核表达载体。方法:在引物5'加上一段与载体克隆位点两端碱基序列相同的序列,PCR扩增目的基因NGF和TrkA,线性载体片段和目的基因片段经T4 DNA聚合酶的外切产生互补的单链DNA,然后37℃退火实现体外同源重组,转化并鉴定;将重组质粒转染293A细胞,免疫印迹鉴定目的基因的表达情况。结果:成功构建真核载体pcDNA3.1-NGF和pcDNA3.1-TrkA,转染细胞后的表达产物相对分子质量分别是31×103和140×103。结论:与常规重组技术相比,体外DNA同源重组技术是一种高效的DNA重组方法,且不需考虑目的片段的限制性酶切位点。

注射用重组人成纤维细胞生长因子-21食蟹猴急性毒性试验研究

目的观察食蟹猴单次sc注射用重组人成纤维细胞生长因子-21(RH-FGF-21)的急性毒性反应。方法 8只健康食蟹猴,随机分成RH-FGF-21组和对照组,RH-FGF-21组6只,对照组2只,均雌雄各半,分别单次sc最大给药浓度和最大给药体积的供试品RH-FGF-21(9.0 mg/kg)和最大体积的对照品灭菌注射用水(1.0 m L/kg),给药后连续观察21 d。在给药前适应期和给药后观察期内进行动物的一般观察(外观、行为、饮食、反应能力、分泌物和排泄物等)、死亡情况、体质量变化、肛温、进食量、眼科和心电图检查、血液学和血液生化学检测、尿液观察和分析;观察期结束安乐死全部存活动物,进行组织病理学检查。结果动物体质量、肛温、进食量、心电图检查和眼科检查与同期对照组比较均未见明显异常;血液学检测、血液生化检测、尿液观察和分析结果、组织病理学检查也未见由药物引起的异常变化。结论在本试验条件下未发现由药物引起的急性毒性症状,9.0 mg/kg可认为是食蟹猴单次sc RH-FGF-21的最大给药量。