泰乐星在碳糊电极上的伏安行为研究及应用

目的研究表面活性剂增敏作用下泰乐星（TLS）在碳糊电极（CPE）上的电化学行为，建立一种测定TLS的电化学分析方法。方法用循环伏安法（cyclic voltammetry，CV）和线性扫描伏安法（linear sweep vohammetry，LSV）探讨了TLS在CPE上的电化学行为及其影响因素。结果阴离子表面活性剂十二烷基苯磺酸钠（SDBS）存在下TLS在CPE上有一显著的不可逆氧化峰，峰电位（Ep）为0．735V。结论TLS氧化峰电流与其浓度在1．2×10^-5～1．0×10^-3mol／L范围内呈良好的线性关系，r=0．9974，检出限1．7×10^-7mol／L，以此建立TLS含量的电化学分析方法。测定结果RSD1．6—2．4％，加样回收率98．6％-101．1％。该方法简便快捷，测定结果令人满意。

泰乐星提取方法的研究

采用三种不同方法对泰乐星发酵液进行预处理 ,其中 GSL U絮凝剂效果最好。最适加量为1.0 % ,絮凝 p H7.5。采用离子交换、大网格树脂吸附和有机溶剂萃取三种方法提取泰乐星 ,并进行比较 ,实验得出后两种方法较为合适。吸附法中 ,筛选了 BZ- 84大网格吸附树脂 ,其最适吸附 p H为 8.5～ 9.0 ,用有机溶剂 BT解吸 ,解吸收率达 97%～ 99%。溶剂萃取法中 ,选用乙酸丁酯为萃取剂 ,适宜的萃取 p H为 8.5～ 9.0 ,适当提高萃取温度有利于萃取。

甲基丙二酰CoA羧基转移酶对泰乐星合成的影响

对不同碳源条件下泰乐星发酵过程中甲基丙二酰ＣｏＡ羧基转移酶的活力进行了测定。发现发酵过程中甲基丙二酰ＣｏＡ羧基转移酶的比活力与泰乐星形成速率有关，即该酶的活力高，泰乐星的形成速率大，说明甲基丙二酰ＣｏＡ羧基转移酶是泰乐星合成中的一种关键酶。另外，菜籽油为碳源条件下测得的甲基丙二酰ＣｏＡ羧基转移酶的活力比淀粉为碳源条件下该酶的活力高，此结果从酶活水平分析了菜籽油为碳源可提高泰乐星产量的原因。

发酵中途补加乙醇对泰乐星产量的作用

以泰乐星(Tylosin)产生菌 E 为供试株,在二级式发酵的末级分别于第二天至第四天加入1.0%(V/V)的乙醇、丙醇和丁醇。结果加乙醇的处理较对照提高泰乐星产量15%,添加丙醇和丁醇的处理却没有类似的正效应。

透明颤菌血红蛋白基因在弗氏链霉菌中的表达及其对菌体生长和泰乐星合成的影响

质粒 p IJ4 0 2 6和 p RK4 0 4 - vhb分别含有红霉素抗性基因启动子 (Perm E)和透明颤菌血红蛋白基因 (vhb) ,先用 PCR分别扩增二者 ,再用 SOE- PCR(Splicing by overlap extension PCR)将不含自身启动子的vhb基因置于 Perm E之下 ;将 SOE- PCR产物克隆到链霉菌整合性载体 p SET15 2上 ,构建成 vhb基因表达载体 p WQ2 0 0 4。通过大肠埃希氏菌 -链霉菌属间接合转移的方式将 p WQ2 0 0 4导入弗氏链霉菌 (Streptomycesfradiae)中 ,利用 p WQ2 0 0 4上 Φ C31整合性位点使 vhb基因整合到弗氏链霉菌染色体上。PCR验证表明 ,vhb基因已整合到染色体上 ,CO结合差光谱分析则表明 vhb基因在弗氏链霉菌中成功表达。摇瓶与上罐发酵显示

发酵中途补加沸石和氯化钙对提高泰乐星产量的作用

以泰乐星(Tylosin)产生菌 AE33和33131为供试菌株,研究了摇瓶发酵中途补加沸石和CaCl_2 对提高泰乐星产量的作用,并优选出这些补料的最佳配比和添加时间,按照这一补料方案可使摇瓶效价较对照高1～2倍左右。这个结果对泰乐星的工业发酵具有重要的参考价值。

大孔吸附树脂提取泰乐星的研究

用几种典型的大孔吸附树脂对发酵过滤液中泰乐星吸附 ,筛选出 H- 3型树脂为吸附剂。静态实验表明 ,H- 3型大孔吸附树脂对泰乐星吸附量可达 15 5 .9m g/ g干树脂 ,最佳吸附 p H在 7.5～ 8.0 ,吸附剂投入量 7%～ 8% (w/ v) ,吸附时间 6 h为最适宜吸附条件。其吸附等温线服从 Freundlich吸附等温式。以甲醇 -柠檬酸缓冲液体系做洗脱剂 ,解吸率达 84.6 %。选出以 D2 90大孔碱性树脂为脱色剂。动态实验确定吸附流速2 BV/ h,洗脱流速 1BV/ h,洗脱峰集中。浓缩结晶纯度可达 97% ,总收率 6 5 %。

纳滤膜技术在泰乐星提炼过程中的应用

泰乐星提炼过程中原工艺脱色液用薄膜真空浓缩 ,本试验改进为耐溶媒纳滤膜浓缩 ,料液不需要加热即可浓缩 ,防止了料液的高温分解破坏 ,浓缩收率明显提高 ;在浓缩的同时 ,部分小分子杂质可以随水分子一起通过纳滤膜而除掉 ,成品质量明显提高 ,解决了用原工艺成品酪胺、溶解度不合格的质量问题 ;省去了原工艺浓缩中费用较高的蒸汽、冰盐水 ,经济效益可观。现纳滤工艺已成功地运用到泰乐星大生产中。

HPLC法测定泰乐星中的相关物质

目的建立泰乐星中相关物质的测定方法。方法采用高效液相色谱法,紫外检测器,检测波长290nm;C18不锈钢色谱柱(200mm×4.6mm,5μm);柱温35℃;流动相为200g/L高氯酸钠∶乙腈(60∶40)并用1mol/L HCl调节pH至2.5;流速1.0ml/min;进样量20μl,峰面积归一化法计算。结果各相关物质峰保留时间及峰面积的RSD分别为0.65%和2.25%;各峰的分离度均不小于1.5。结论本法简便、灵敏、专属。

气雾法治疗鸡慢性呼吸道病

气雾法治疗鸡病,药物能迅速从呼吸系统进入血液,从而达到治疗全身疾病的目的 尤其是药物直接大量附着在气囊表面上,从而能彻底杀灭气囊上的病原体,这是其他给药途径所不及的,也是气雾给药法之所以能以极小的药量就可以迅速治愈呼吸道病的根本所在。多年实践发现,用泰乐星-50剂气雾治疗鸡慢性呼吸道病效果更好,成本更低,经多次试用,效果相当稳定。