泰山虫草菌丝体与天然冬虫夏草化学成分初步分析

目的:与天然冬虫夏草做对比,对泰山虫草菌丝体的多糖、水溶性蛋白、核苷类成分及无机元素进行了分析。方法:采用硫酸-苯酚法、Folin-酚试剂法、双波长薄层扫描法、原子吸收分光光度法、凯氏定氮法及荧光光谱法测定了上述各成分的含量。结果:泰山虫草菌丝体中多糖的含量为3.14%,低于冬虫夏草中多糖含量(5.89%);水溶性蛋白的含量二者相当,分别为0.795%和0.783%;泰山虫草菌丝体中核苷类成分腺苷、尿苷、次黄嘌呤核苷和次黄嘌呤含量分别为0.230%、0.908%、0.515%和0.097%,明显高于冬虫夏草中核苷类成分的含量,分别是冬虫夏草的8.21、3.75、11.7、5.7倍;钙、铁、锌、硒和锰微量元素的含量分别为100、53.6、12.2、0.12和1.50μg/g,其它无机元素氮、磷、镍的含量高于冬虫夏草样品,铝、汞等有害元素含量接近或低于冬虫夏草样品。结论:泰山虫草菌丝体中富含多糖、蛋白质、核苷类成分及微量元素等营养物质,尤其泰山虫草菌丝体中主要有效成分核苷类成分明显高于冬虫夏草,是很有开发利用价值的食品或药物新资源。

泰山虫草菌丝体与冬虫夏草有效成分的TLCS分析

以腺苷、尿苷、次黄嘌呤核苷、虫草素及次黄嘌呤为指标,测定泰山虫草菌丝体与天然冬虫夏草中相应成分的含量,探索泰山虫草代替天然冬虫夏草开发药物或保健食品的可能性。采用80%乙醇超声提取,在GF254硅胶板上点样后,以薄层色谱扫描法(TLCS)测定上述各种成分的含量。首次证明泰山虫草菌丝体核苷类及次黄嘌呤等有效成分含量明显高于冬虫夏草。其腺苷、尿苷、次黄嘌呤核苷、次黄嘌呤含量分别是冬虫夏草的8.25倍、3.76倍、11.8倍和1.55倍。2种虫草中有效成分的含量均表现为尿苷>次黄嘌呤核苷>腺苷>次黄嘌呤>虫草素。说明泰山虫草可以作为冬虫夏草代用品进行综合开发利用。TLCS法简捷快速,重现性、稳定性良好,能有效地对虫草中的有效成分进行定性定量分析。

泰山虫草C-2最优液体培养条件筛选

在泰山虫草资源调查过程中,采集、分离获得一株泰山虫草菌(Cordycepssp.)。对其进行人工驯化栽培,发现其生长周期短,发菌快,适应性强。利用正交试验设计法筛选其最佳液体发酵培养基及条件,用SAS数据处理软件系统对菌丝生物量、多糖进行方差分析,并测定发酵液中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)等酶的活性。结果表明,泰山虫草最优的菌丝体发酵培养基组合是:马铃薯20%、蔗糖2%、豆粉2%、胶体几丁质0.5%、无机盐0.1%KH2PO41、2 h光照。

泰山虫草无性型的分子研究

目的:从基因水平确定泰山虫草的无性型。方法:以rDNA ITS区为分子指标,采用PCR扩增、测序及与其它已知虫草ITS区的序列对比的方法。结果:经GenBank的Blast搜索,该序列与细脚拟青霉(Paecilomyces te-nuipes)的ITS序列完全相同(100%)。结论:首次对泰山虫草的无性阶段进行比较分析,从分子水平证明泰山虫草为棒束孢(Isariafarinosa),是淡黄虫草无性型,不是冬虫夏草的无性型(中国被毛孢Hirsutella sinensis)。

泰山虫草菌丝体液体发酵培养基的优化及其有效成分含量测定

以(NH4)2SO4作为氮源进行单因素试验,通过改变(NH4)2SO4的含量以构成不同的碳氮比,以菌丝干重为指标,确定最佳碳氮比,得出其最佳碳氮比在3.0到4.0之间。以玉米粉、葡萄糖、黄豆粉、酵母膏添加剂为考察因素进行L9(34)正交试验,确定最佳培养基配方,得到其最佳培养基配比为:玉米粉3.0%,葡萄糖1.5%,黄豆粉1.0%,酵母膏0.8%,菌丝体的最大生长量平均在1.29g/100ml。以薄层色谱扫描法(TLCS)测定泰山虫草菌丝体与天然冬虫夏草中腺苷、尿苷、次黄嘌呤核苷、次黄嘌呤成分的含量,结果表明:泰山虫草菌丝体核苷类有效成分及次黄嘌呤含量明显高于冬虫夏草。其腺苷、尿苷、次黄嘌呤核苷、次黄嘌呤的含量分别是冬虫夏草的8.25、3.76、11.8和1.55倍。两种虫草中核苷类成分的含量均表现为尿苷>次黄嘌呤核苷>腺苷>次黄嘌呤。

泰山虫草对黄粉虫的侵染特性研究

报道了用泰山虫草分生孢子悬浮液接种活体黄粉虫，提取被侵染的黄粉虫体液，并测定不同侵染时间虫体液中酶活性的动态变化。结果表明：泰山虫草分生孢子能成功的侵染黄粉虫并长出子座；接种第2—4d后即可导致黄粉虫体内活性发生不同程度的变化，说明黄粉虫具有独特的防御病原微生物的侵染机制。

泰山虫草深层发酵菌种生产试验简报

用摇瓶常规培养泰山虫草菌种，周期长、接种操作繁琐，费时费力、生产规模小。深层发酵生产菌种，培养基营养丰富，菌丝生长速度快，周期短，菌龄一致，接种操作简便，一次性生产菌种量多、成本低，易于大规模工厂化生产虫草。因此，我们对泰山虫草深层发酵菌种生产进行研究，为深层发酵法菌种生产及工厂化生产虫草提供理论依据。

泰山虫草菌丝体培养性状及培养条件试验

本文对泰山虫草 3号菌丝体培养特性及培养温度、pH值、光照、营养进行观察研究 ,初步给出其菌丝培养所需最适营养、温度。

泰山虫草子实体形态特征与rDNA变异位点分析

用光学显微镜和扫描电镜对采自泰山的虫草子实体可孕部分进行形态观察,结果表明泰山虫草在子实体形态、子囊的排列方式、子囊的包埋方式、子囊壳的形态等与九州虫草完全一致。对虫草核糖体DNA的18S、28S、ITS区克隆测序,并进行序列比对后发现两种虫草的碱基差异较小,其同源性高达99%,符合种内遗传特性。结合形态学和分子生物学两方面的特征,初步推断两者可能都是九州虫草。

QuEChERS提取-高效液相色谱法测定泰山虫草中4种黄曲霉毒素的含量

取泰山虫草样品2.50g,加入7.5mL水和含0.1%(体积分数)乙酸的乙腈混合溶液10mL,涡旋振荡1min,再加入无水硫酸镁4.0g和氯化钠1.0g,离心,取上清液1.0 mL于含150mg无水硫酸镁、50mg N-丙基乙二胺、50mg C18填料、12mg石墨化碳黑的2mL分散固相萃取管中,涡旋振荡30s,取上清液经过0.22μm有机滤膜进行过滤,采用高效液相色谱法测定其中4种黄曲霉毒素的含量。结果表明:4种黄曲霉毒素的质量浓度在一定范围内与其峰面积之间呈线性关系,检出限(3S/N)在0.06～0.20μg·kg-1之间。按照标准加入法进行加标回收试验,测得回收率在92.4%～102%之间,测定值的相对标准偏差(n=6)在2.7%～3.5%之间。

3株泰山虫草无性型的分子生物学研究

[目的]研究3株泰山虫草无性型的分子生物学特性。[方法]以野生泰山虫草子实体分离出的3个菌株为材料,通过对rDNAITS区的扩增、克隆和测序来鉴定虫草的无性型。[结果]3个菌株不是同1种,COA1为蛹草拟青霉,COA2为球孢白僵菌,COA3为细脚棒束孢,由此推断泰山虫草只是以地理位置得名。[结论]研究了3株泰山虫草无性型的分子生物学特性。

泰山虫草滴丸的制备及质量评价

目的研究泰山虫草滴丸的最佳制备工艺,并对滴丸的外观特征、丸重差异、有效物质溶出速度等指标进行评价。方法采用先醇提再水提的方法提取泰山虫草子实体中的有效成分,浸膏与聚乙二醇混合后以下行滴制法制备滴丸;分别采用分光光度法和高效液相色谱法测定滴丸中多糖和腺苷的含量,并考察其溶出速度。结果泰山虫草滴丸的处方工艺条件为:泰山虫草浸膏∶PEG2000∶PEG6000=2∶1∶1,熔融后滴至5℃液体石蜡中;虫草滴丸中多糖与核苷溶出速度明显优于泰山虫草粉末。结论所确定的的工艺处方及制备方法能符合滴丸的质量要求;制备滴丸剂有利于有效成分的快速溶出。

一种快速有效提取干燥泰山虫草总DNA的方法

采用改进的CTAB法提取干燥的泰山虫草基因组DNA。通过提高CTAB和氯化钠的浓度、减少温育时间和抽提蛋白质的步骤,从而得到高质量的基因组DNA。该方法不但有效地去除了多糖和色素的干扰,而且大大节省了时间,提取的总DNA可以进行后续的PCR分析。

泰山虫草人工驯化栽培成功

1998～2002年,山东省泰安市农业科学研究所将采集到的野生泰山虫草进行人工驯化并获得成功。利用活虫体、虫蛹、人工培养基等作基料,成功培育出了泰山虫草;

泰山虫草的高效液相色谱指纹图谱建立及谱效关系研究

目的建立泰山虫草药材的高效液相色谱指纹图谱及其抗肿瘤活性的谱效关系,为其质量控制提供依据。方法采用高效液相色谱法建立了12批泰山虫草药材指纹图谱,采用抗肿瘤实验比较不同批次生理活性差异,采用灰色关联度分析其谱效关系。结果确定共有峰11个,采用对照品对6个特征峰进行了指认。抗肿瘤活性表明各批虫草对人鼻咽癌细胞株CNE-2均有抑制作用,谱效关系研究发现各共有峰与药效的关联序为9>7>3>4>11>10>6>1>5>2>8。结论所建立的HPLC指纹图谱检测方法快速简便,并确定了抗肿瘤活性成分,有利于全面评价泰山虫草的品质。

活虫体人工培养泰山蛹虫草技术试验

由于冬虫夏草具较高的医药价值和保健价值，使其成为中草药的珍品，长期以来倍受医药工作者和广大消费者的关注。山东省泰安市农业科学研究院以野生泰山虫草材料进行人工驯化，获得成功，培育出了泰山虫草栽培新品种。经中国中医研究院中药研究所化验分析，人工培养的泰山虫草含冬虫夏草的特征性成分虫草素达2‰，为天然虫草素的2倍。所含Fe、Cu、Zn、K、Mo、Cr、Se、Co等人体必需元素也大大高于野生虫草，泰山虫草完全可以作为野生虫草的替代品，有很高的开发应用价值和市场前景。现将活虫体人工培养泰山蛹虫草技术试验报告如下。

泰山蛹虫草多糖对免疫抑制小鼠肠道菌群及分泌型免疫球蛋白A的影响

目的:研究泰山蛹虫草多糖对免疫抑制小鼠肠道菌群和肠黏膜分泌型免疫球蛋白A(secretory immunoglobulin A,s Ig A)的影响。方法:将60只雄性昆明小鼠随机平均分为5组,空白对照组和环磷酰胺(cyclophosphamide,CY)模型组的小鼠灌胃蒸馏水,3个蛹虫草多糖组分别以100、200、300 mg/(kg?d)(以体质量计,下同)剂量的泰山蛹虫草多糖灌胃小鼠19 d。第20天,空白对照组小鼠腹腔注射生理盐水,其余4组小鼠均腹腔注射100 mg/kg的CY。观察蛹虫草多糖对小鼠肠道菌群和肠黏膜s Ig A水平的影响。结果:与CY模型组比较,3个蛹虫草多糖组小鼠肠道的双歧杆菌、乳酸杆菌数量均极显著增加(P<0.01),而大肠杆菌、肠球菌数量均显著或极显著降低(P<0.05或P<0.01);3个蛹虫草多糖组小鼠的肠道s Ig A含量均极显著升高(P<0.01)。结论:泰山蛹虫草多糖对CY所致的免疫抑制小鼠肠道菌群紊乱有拮抗作用;泰山蛹虫草多糖也能促进肠黏膜s Ig A的分泌,在一定程度上拮抗CY所致的肠黏膜免疫抑制。

泰山蛹虫草多糖对免疫抑制小鼠血清蛋白含量和体内抗氧化能力的影响

目的:研究泰山蛹虫草多糖(Cordyceps taishanensis polysaccharide,CTP)对免疫抑制小鼠血清蛋白含量和抗氧化能力的影响。方法:通过对小鼠灌服多糖实验,观察CTP对小鼠血清总蛋白、白蛋白及球蛋白含量和抗氧化能力的影响。结果:与环磷酰胺(Cyclophosphamide,CY)模型组比较,三个CTP组的血清总蛋白、球蛋白和白蛋白含量均极显著增高(p<0.01);三个CTP组的红细胞SOD活性和血清CAT活性均显著提高(p<0.01或p<0.05),红细胞MDA含量均极显著减少(p<0.01)。结论:CTP能显著提高CY所致的免疫损伤小鼠的血清蛋白含量,在一定程度上CTP能减轻CY对小鼠肝脏的损害作用;CTP也能改善CY所致免疫损伤小鼠的抗氧化能力。