用间接免疫荧光法检测大鼠的抗泰泽氏菌抗体

用大鼠来源的泰泽氏菌芽孢RJ株经口服感染3周龄Wistar系大鼠,获得该菌抗原和抗血清,建立了检测泰泽氏病的免疫荧光法,并证实该法具有特异性。用该法检测不同饲养环境中的大鼠,结果:饲养在隔离器内的SPF级大鼠的抗体阳性率为0(0/28),饲养在开放系统内的普通级大鼠的抗体阳性率为40.9％(36/88),而饲养在同一开放系统内的普通级小鼠的阳性率仅为3％。这种差异是否反映了不同种类动物来源的菌株具有不同的抗原性,尚待进一步研究。

某实验动物科技机构人员泰泽氏菌感染的血清学调查

用泰泽氏菌RJ株作IFA抗原进行人员泰泽氏菌感染的血清学调查,结果发现,与实验动物有密切接触的饲养人员组的泰泽氏菌抗体阳性率和抗体滴度高于辅助人员组和无关人员组。

实验动物泰泽氏菌、肺支原体、兔出血症病毒检测方法的评价

泰泽氏菌、肺支原体、兔出血症病毒是实验动物重要的致病病原体,可引起呼吸系统、消化系统疾病,对动物的生产和动物实验可产生不良影响。本文对上述国家检测标准规定必须检测且有检测难度的三种病原体进行方法学总结,以获得更好特异性和敏感性的诊断方法;提出传统方法初检、PCR方法复检的方法以提高检测结果的准确性和可靠性。

套式PCR方法在泰泽氏菌检测中的应用和验证

用泰泽氏菌RJ株感染的大鼠肝组织匀浆腹腔注射Scid小鼠和BALB/c小鼠,提取注射后小鼠肝、肾、肺、脾的DNA,PCR扩增,核酸杂交。根据泰泽氏菌的保守序列合成引物扩增泰泽氏菌的基因组DNA,建立了泰泽氏菌的套式PCR方法,并将此方法应用于Scid小鼠和BALB/c小鼠以及可疑样品的检测,其中Scid小鼠的肝、肾组织和BALB/c小鼠的肝组织及可疑组织得到特异性扩增带,其他动物样品和组织DNA均为阴性结果。进一步对该DNA片段进行核酸杂交,结果证实,凡PCR套式扩增为阳性的,均有杂交带。因此,泰泽氏菌套式PCR方法在实际检测中是切实可行,其具有敏感性和特异性高的优点。

大鼠泰泽氏菌套式PCR方法的建立和初步应用

根据泰泽氏菌 r DNA序列设计出二对特异引物 ,以标准菌 RJ株和大肠杆菌、溶血性链球菌、嗜肺巴氏杆菌纯化的 DNA为模板 ,进行套式 PCR反应。结果用外引物扩增 ,泰泽氏菌和大肠杆菌均出现 62 5 bp的反应带 ,其它细菌无反应带 ;而用内引物第二次扩增 ,只有泰泽氏菌出现 1 96bp的特异扩增带。将 PCR方法应用于人工免疫抑制的 SD大鼠 ,检出率为 3 0 % ( 9/ 3 0 ) ,同时将此 3 0份血清用间接免疫荧光法 ( IFA)进行检测 ,结果未检出阳性样品。结果提示 ,套式 PCR方法具有特异性强、敏感性高 ,简便快速的特点。

泰泽氏菌TaqManMGB探针荧光定量PCR方法的建立及应用

目的建立泰泽氏菌的TaqMan小沟结合物（MGB）探针荧光定量PCR检测方法。方法针对泰泽氏菌16SrRNA基因的保守区设计特异性引物和探针，建立MGB探针荧光定量PCR方法，并验证该方法的特异性、敏感性和稳定性。对2008--2011年采集的1156份临床样本进行检测，同时进行普通PCR检测作为对照。结果泰泽氏菌TaqManMGB探针荧光定量PCR方法具有高度特异性，与肝螺杆菌、幽门螺杆菌、空肠弯曲菌、侵肺巴斯德氏菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌之间无交叉反应，检测灵敏度达2．2copy／μl。标准曲线显示各浓度范围内具有良好线性关系，相关系数为0．999，斜率为-3．204，PCR效率为100％。对1156份临床样本进行检测，荧光定量PCR检出101份泰泽氏菌阳性样本，而普通PCR则仅检出44份。荧光定量PCR方法从临床样本中检出泰泽氏菌DNA仅需2h。结论TaqManMGB探针荧光定量PCR方法具有特异、灵敏和稳定性，适于泰泽氏菌的快速检测。

布鲁氏菌和幽门螺杆菌等6种病原菌16S rRNA和cagA等基因的克隆与鉴定

目的克隆并鉴定布鲁氏菌的16SrRNA、支原体的16SrRNA、泰泽氏菌的16SrRNA、空肠弯曲菌的flaA、肝螺杆菌的flaB和幽门螺杆菌的cagA基因,为建立实时荧光定量PCR检测方法作准备。方法设计、合成布鲁氏菌的16SrRNA、支原体的16SrRNA、泰泽氏菌的16SrRNA、空肠弯曲菌flaA、肝螺杆菌flaB和幽门螺杆菌的cagA基因的特异性引物;PCR扩增、克隆16SrRNA、flaA、flaB和cagA基因;对重组质粒进行酶切鉴定、PCR鉴定和测序分析。结果布鲁氏菌的16SrRNA、支原体的16SrRNA、泰泽氏菌的16SrRNA、空肠弯曲杆菌的flaA、肝螺杆菌的flaB和幽门螺杆菌的ca-gA基因PCR扩增产物分别在612bp、600bp、922bp、637bp、1545bp和1168bp处出现特异性目的条带,结果均与预期扩增的目的片段大小一致。将PCR产物分别与pMD18-T载体连接并转化感受态细菌大肠埃希菌JM109。对重组质粒pT-BC16SrRNA、pT-MP16SrRNA、pT-CP16SrRNA、pT-CJflaA、pT-HHflaB和pT-HPcagA分别进行酶切鉴定及PCR鉴定,结果均可见特异性目的条带。测序结果显示,布鲁氏菌的16SrRNA、支原体的16SrRNA、泰泽氏菌的16SrRNA、空肠弯曲菌的flaA、肝螺杆菌的flaB和幽门螺杆菌的cagA基因序列与GenBank中细菌相应序列同源性高达100%,说明上述6种致病菌的16SrRNA、flaA、flaB和cagA基因已成功克隆。结论成功克隆了布鲁氏菌16SrRNA、支原体的16SrRNA、泰泽氏菌的16SrRNA、空肠弯曲菌的flaA、肝螺杆菌的flaB和幽门螺杆菌的cagA基因,为建立实时荧光定量PCR检测方法奠定了基础。

发现小鼠泰泽氏病

泰泽氏病是由毛样杆菌(Bacillus piliformis)引起的多种实验动物、家畜、野生动物共患的兽疫传染病。1994年11月,军事医学科学院实验动物中心遇秀玲副研究员等人在临床送检的实验小鼠中,发现疑似泰泽氏菌病例,并对其进行了系统地病理学检测。结果从肝细胞、回肠、盲肠、近端结肠检出泰泽氏菌。HE染色,油镜下在上述细胞中可见毛发样丝状。

兔场三种严重腹泻病的鉴别诊断与防治

在大规模饲养条件下,饲养管理不当、疫病预防不到位、疾病治疗不及时等诸多因素,可致兔场疾病发病率上升,其中兔腹泻病发病率占80%左右,且多为传染性。兔轮状病毒病、产气荚膜梭菌病和泰泽氏菌病均为家兔严重性腹泻传染病,死亡率分别约为40%、10%、90%,一旦发生,可大面积感染,造成严重的经济损失。本文就这三种疾病的流行特点、临床症状、剖检变化、实验室诊断及防治进行概述,为此类病的快速诊断、早期治疗提供参考。

规模化兔场家兔腹泻性传染病及防治措施

家兔腹泻病原种类繁多，病情复杂，近年来又不断有新病原出现，同时还存在多种病原混合感染，使之成为一个引人注目的全国性问题。腹泻通常见于仔幼兔，种兔时有发生。但近年来，在规模化养殖场中，仔幼兔的腹泻性传染病逐渐增多，已成为仔幼兔生长受阻和死亡率高的重要原因。据调查，兔场腹泻传染病的病因多种多样，主要有以下几种。

散养兔腹泻防治

1病因引起家兔腹泻的原因较复杂,既包括病原因素,也包括管理及环境等因素。1.1病原因素大肠杆菌、沙门氏菌、魏氏梭菌、泰泽氏菌、巴氏杆菌、球虫等可损害兔的肠黏膜,引起腹泻。