泽泻醇A保护血脑屏障改善脑缺血/再灌注损伤的作用和机制研究

目的 探讨泽泻醇A(alisol A, AA)通过抑制基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase 9, MMP-9)改善皮层血脑屏障(blood brain barrier, BBB)障碍介导的脑缺血/再灌注损伤(cerebral ischemia-reperfusion injury, CIRI)。方法 构建小鼠全脑缺血/再灌注(global cerebral ischemia-reperfusion, GCI/R)体内动物模型,AA灌胃干预7 d(30 mg·kg^(-1)),改良神经功能缺损评分(modified neurological severity score, mNSS)、旷场和Y迷宫实验检测神经功能,磁共振波谱(magnetic resonance spectroscopy, MRS)检测皮层相关代谢物质水平,透射电镜(transmission electron microscope, TEM)观察皮层BBB超微结构,蛋白免疫印迹法和免疫组织化学检测皮层MMP-9蛋白表达,分子对接分析AA与MMP-9结合的可能性。结果 相较于假手术组(Sham), GCI/R组小鼠mNSS评分升高、旷场总路程和中心路程占总路程比值均减少、Y迷宫交替率降低(P<0.01),而AA干预组(GCI/R+AA)较GCI/R组小鼠mNSS评分降低、旷场总路程和中心路程占总路程比值增加、Y迷宫交替率增加(P<0.01)。MRS检测发现GCI/R组小鼠大脑皮层γ-氨基丁酸、N-乙酰天门冬氨酸表达降低,胆碱、肌醇和牛磺酸表达升高(P<0.01);GCI/R+AA组小鼠γ-氨基丁酸、N-乙酰天门冬氨酸表达升高,胆碱、肌醇和牛磺酸表达降低(P<0.01)。TEM发现GCI/R组小鼠脑微血管基膜塌陷、管腔变窄;内皮细胞被激活、质膜褶皱且间隙变大,紧密连接破坏;星形胶质细胞终足肿胀。GCI/R+AA组小鼠血管管腔充盈;内皮细胞质膜平整,紧密连接完好;星形胶质细胞终足相对正常。蛋白免疫印迹和免疫组织化学检测发现GCI/R组小鼠皮层MMP-9表达水平明显升高(P<0.01),GCI/R+AA组明显降低(P<0.05)。分子对接发现AA与MMP-9可通过TYR-50和ARG-106两个基团结合,结合能为-6.24 kcal·mol^(-1)。结论 AA治疗可改善GCI/R小鼠皮层CIRI,其机制可能是通过抑制MMP-9升高造成BBB损伤。

泽泻醇B对HepG2细胞体外糖吸收的影响初探

目的:探索泽泻醇B对HepG2细胞糖吸收的影响。方法:以不同浓度的泽泻醇B处理HepG2细胞,经CCK-8法(Cell Counting Kit-8细胞计数试剂,CCK-8),评估泽泻醇B对细胞增殖的影响。将不同培养基培养的HepG2细胞分别采用药物处理后,加入2-NBDG(2-[N-7-硝基苯并-2-氧杂-1,3-二唑-4-氨基]-2-脱氧葡萄糖,2-NBDG)为葡萄糖荧光示踪剂,用流式细胞仪测定细胞荧光强度,以此评估泽泻醇B对HepG2细胞糖吸收的影响。结果:CCK-8实验结果表明:在1~10μmol/L范围内,泽泻醇B对HepG2细胞增殖的情况影响较小。糖吸收测定实验结果表明:在模拟的条件下,泽泻醇B表现出对HepG2细胞糖吸收有不同程度的促进作用。结论:初步确定泽泻醇B可促进HepG2细胞的糖吸收,提示了泽泻醇B可能是泽泻降血糖的有效成分之一。

泽泻炮制过程中23-乙酰泽泻醇B的转化

目的 分析泽泻中三萜类成分在炮制加工过程中的变化.方法 采用超临界流体色谱分离技术（SFC）及HPLC测定方法,对泽泻加工炮制前后的三萜类成分的变化进行研究.结果 在泽泻药材加工成生泽泻饮片的烘干（70℃）过程中,有少量23-乙酰泽泻醇B转化成了24-乙酰泽泻醇A和泽泻醇B；而在泽泻盐制（190～200℃）及麸制（160～170℃）过程中,23-乙酰泽泻醇B则大量转化为24-乙酰泽泻醇A和泽泻醇B,两者又进一步转化成了泽泻醇A.结论 在高温炮制过程中,泽泻药材中三萜类主成分23-乙酰泽泻醇B出现两条转变途径,一条是氧环开裂并重排生成24-乙酰泽泻醇A,进一步脱乙酰基转化成泽泻醇A；另一条是先脱乙酰基生成泽泻醇B,继而氧环开裂转化成泽泻醇A.

泽泻醇提物对亚临床性甲状腺功能减退症母鼠甲状腺功能及仔鼠神经功能的作用及其机制

目的 探讨泽泻醇提物对亚临床性甲状腺功能减退症(SCH)母鼠甲状腺功能及仔鼠神经功能的作用及其可能的机制。方法 取85只8周龄SPF级Wistar雌鼠,其中15只行假手术处理作为假手术组,另70只采用甲状腺切除+皮下注射左旋甲状腺素(L-T4)制备SCH模型,造模成功62只,随机分为模型组(n=15,等体积生理盐水)、低剂量泽泻醇提物组(n=15,9 g/kg泽泻醇提物灌胃)、高剂量泽泻醇提物组(n=16,36 g/kg泽泻醇提物灌胃)、L-T4组(n=16,4.5μg/kg L-T4灌胃),1次/d,干预时间为妊娠10 d(E10)至仔鼠出生后21 d(P21)。E17时,采用电化学发光法检测母鼠血清促甲状腺素(TSH)、甲状腺素(T4)水平。P21时,ELISA法检测仔鼠海马组织神经生长因子(NGF)、脑源性神经营养因子(BDNF)水平,Westernblotting检测仔鼠海马组织原肌球蛋白受体激酶A(TrkA)、p-TrkA、环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)、p-CREB蛋白表达水平。P40时,采用定位巡航实验测定仔鼠的逃避潜伏期;P41时,采用空间探索实验检测仔鼠穿越平台的次数。结果 E17时,5组母鼠的血清T4比较差异无统计学意义(P>0.05);低、高剂量泽泻醇提物组及L-T4组母鼠血清TSH水平明显低于模型组,高剂量泽泻醇提物组、L-T4组血清TSH水平明显低于低剂量泽泻醇提物组(P<0.05),而高剂量泽泻醇提物组与L-T4组血清TSH水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。P21时,低、高剂量泽泻醇提物组及L-T4组仔鼠海马组织NGF、BDNF、p-TrkA、p-CREB水平明显高于模型组,高剂量泽泻醇提物组、L-T4组海马组织NGF、BDNF、p-TrkA、p-CREB水平明显高于低剂量泽泻醇提物组(P<0.05),而高剂量泽泻醇提物组与L-T4组海马组织NGF、BDNF水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。低、高剂量泽泻醇提物组及L-T4组仔鼠逃避潜伏期短于模型组,穿越平台次数多于模型组(P<0.05);高剂量泽泻醇提物组、L-T4组仔鼠逃避潜伏期短于低剂量泽泻醇提物组,穿越平台次数多于低剂量泽泻醇提物组(P<0.05);高剂量泽泻醇提物组与L-T4组仔鼠逃避潜伏期、穿越平台次数比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 泽泻醇提物可改善SCH母鼠甲状腺功能,促进仔鼠神经因子表达,并提高仔鼠的学习与记忆功能,其机制可能与激活TrkA信号通路表达有关。

23-乙酰泽泻醇改善脂多糖诱导的急性肺损伤的作用机制

目的探讨23-乙酰泽泻醇对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的急性肺损伤的作用机制。方法8~10周龄C57BL6J雄性小鼠24只,体质量为23.5~27.5g,将其按照随机数字表法分为对照组、模型组(LPS组)、23-乙酰泽泻醇组、LPS+23-乙酰泽泻醇组,每组各6只。小鼠气管内注射200μg LPS诱导急性肺损伤模型;采用苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色、肺脏湿重/干重比值和炎性指数评价急性肺炎程度;采用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)试剂盒检测促炎性细胞因子肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1(interleukin-1,IL-1)和白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)的水平;采用试剂盒检测丙二醛(malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶2(mitochondrial superoxide dismutase2,SOD2)和谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,Gpx)的水平/活性;采用Western blot法检测相关信号分子的改变。结果HE染色结果显示,LPS组小鼠肺组织炎性浸润明显增多,肺脏湿重/干重比值和炎性指数高于对照组;LPS组小鼠肺脏组织中TNF-α、IL-1和IL-6的水平明显高于对照组;LPS组小鼠的ROS和MDA含量高于对照组,SOD2和Gpx的活性明显低于对照组。LPS+23-乙酰泽泻醇组小鼠的肺脏湿重/干重比值和炎性指数低于LPS组;炎性细胞因子的水平低于LPS组;ROS和MDA含量低于LPS组。但是SOD2和Gpx的活性明显高于LPS组。Western blot法检测结果显示,LPS组小鼠肺脏组织中JNK1/2显著上调,P-ERK1/2明显增加;而LPS+23-乙酰泽泻醇组肺脏组织中JNK1/2和P-ERK1/2的表达低于LPS组。结论23-乙酰泽泻醇可以通过抑制JNK1/2-ERK1/2减轻LPS诱导的急性肺损伤。23-乙酰泽泻醇可能成为治疗急性肺损伤的治疗手段。

基于转录组与体外实验揭示泽泻醇B抑制神经胶质瘤细胞增殖作用的机制

目的:分析人脑胶质瘤细胞系T98G对泽泻醇B的反应及其作用机制。方法:泽泻醇B处理人脑胶质瘤细胞T98G后,通过细胞计数试剂盒(CCK-8)分析细胞活力,划痕、侵袭和迁移实验评估细胞运动能力。用10、20μmol/L泽泻醇B处理T98G细胞,利用高通量测序技术获得基因表达谱,并对差异表达基因(DEGs)进行生物信息学分析。结合转录组测序分析结果和细胞表型,筛选出肿瘤相关靶点进行qPCR和Western Blot验证。结果:体外研究显示与空白对照组比较,泽泻醇B能有效抑制人脑胶质瘤细胞T98G增殖、侵袭和迁移。转录组测序结果显示泽泻醇B 10μmol/L组中,有差异表达基因3 235个,其中上调基因1 502个,下调基因1 733个;泽泻醇B 20μmol/L组中,有差异基因4 957个,其中上调基因2 362个,下调基因2 595个。KEGG通路结果显示,泽泻醇B 10、20μmol/L组差异表达基因共富集通路包括MAPK信号通路、细胞周期、肿瘤microRNAs、P53信号通路、DNA复制,其中MAPK信号通路差异基因富集数量最多。qPCR显示DEGs mRNA表达量变化与转录组测序基本一致。结论:泽泻醇B能有效抑制神经胶质瘤细胞增殖、侵袭及迁移,其发挥抗细胞增殖作用机制可能与抑制MAPK信号通路上GRB2、AKT1、ERK1/2等关键靶点表达和磷酸化有关;其抑制T98G细胞侵袭和迁移的能力可能与下调MMP1和MMP3蛋白表达,升高TIMP3蛋白表达有关。

基于网络药理学结合细胞实验探究泽泻醇B抗鼻咽癌的作用及机制

目的:通过网络药理学分析预测泽泻醇B作用于鼻咽癌的相关靶点和通路,探究作用机制并通过实验进行验证。方法:通过Pubchem、Pharmmapper、GeneCards等数据库搜索并获得泽泻醇B对鼻咽癌和EB病毒的相关作用靶点,并取得它们之间的交集靶点,之后运用Cytoscape软件构建出“药物—靶点—疾病—通路”关系网络,最后采用David数据库对靶点进行基因本体(GO)功能富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析。CCK-8法及平板克隆实验检测泽泻醇B对鼻咽癌CNE-2细胞株在不同浓度的条件下的增殖抑制情况。Western blotting对预测出的通路靶点蛋白的表达进行验证。结果:网络药理学研究结果显示,泽泻醇B抗鼻咽癌的潜在作用靶点共有71个,根据degree值从高到低排列筛选出相关性最强的10个靶点。GO功能注释得到分子功能条目544个,按照P值升序排列结果得到前15条显著富集的条目。KEGG分析显示与PI3KAkt信号通路密切相关;涉及的关键基因包括Akt1、MAPK1、HSP90AA1、MAPK14等。CCK-8及平板克隆实验的结果显示,泽泻醇B能有效地抑制鼻咽癌细胞增殖,并且抑制效果随着药物作用时间延长与药物浓度的增加而增强,western blotting实验结果显示,泽泻醇B可明显下调Akt蛋白和PI3K蛋白表达水平(P<0.05)。结论:泽泻醇B可以有效地抑制鼻咽癌CNE-2细胞增殖,其抗鼻咽癌机制可能与抑制PI3K-Akt信号通路活性有关。

RP-HPLC法检测甜梦口服液(甜梦合剂)中淫羊藿苷、紫丁香苷和23-乙酰泽泻醇B的含量

目的建立同时检测甜梦口服液(甜梦合剂)中的淫羊藿苷、紫丁香苷和23-乙酰泽泻醇B含量的RP-HPLC法。方法利用Shimadzu CLC ODS C 18(4.6 mm×250 mm,5μm)分离甜梦口服液中3种成分(淫羊藿苷、紫丁香苷和23-乙酰泽泻醇B)。测定波长:淫羊藿苷为271 nm、紫丁香苷为265 nm和23-乙酰泽泻醇B为207 nm;柱温30℃,进样体积10μl。流动相:0.3%磷酸溶液(流动相A)-乙腈(流动相B),洗脱程序:0~4 min(95%A)、4~7 min(95%~78%A)、7~10 min(78%~38%A)、10~16 min(38%~26%A)、16~23 min(26%~19%A)、23~28 min(19%A)、28~28.5 min(19%~95%A)。外标法检测3种成分的含量。结果紫丁香苷、23-乙酰泽泻醇B和淫羊藿苷分别在0.1962~19.62μg/ml,0.7544~75.44μg/ml和0.1966~19.66μg/ml质量浓度范围内存在良好的线性关系,线性系数R 2均大于0.995;平均加标回收率分别为99.47%,98.68%和100.26%;仪器精密度和方法重复性RSD(n=6)均在5.0%以内。结论建立的RP-HPLC法具有线性范围广、检测结果准确等优点,可以用于甜梦口服液(甜梦合剂)供试品的质量控制。

基于TRPM2/Akt/GSK3β通路探讨24-乙酰泽泻醇A保护脑缺血再灌注损伤脑微血管内皮细胞的机制

目的:探讨24-乙酰泽泻醇A(24A)改善小鼠脑缺血再灌注后脑微血管内皮细胞(BMECs)损伤的作用机制。方法:将45只雄性10周龄C57BL/6小鼠按随机数字表法分为假手术组、模型组、24A组,每组15只。模型组、24A组采用20 min双侧颈总动脉结扎后再灌注的方法构建小鼠脑缺血再灌注损伤(CI/RI)模型,假手术组小鼠只分离颈总动脉和迷走神经,不结扎。24 A组采用24 A灌胃,剂量为30 mg/(kg·d);假手术组和模型组则给予等体积的生理盐水进行灌胃,3组均灌胃1次/d,连续干预7 d。分别采用神经功能缺损评分(mNSS)评估小鼠神经功能受损程度;采用新物体识别测试(NORT)和水迷宫(MWM)评价小鼠认知功能;采用免疫荧光法检测内皮细胞CD31表达;采用Western blot法检测脑组织闭锁小带蛋白1(ZO-1)、闭合蛋白(Occludin)、紧密连接蛋白-5(Claudin-5)、磷酸化核因子κB(p-NF-κB)、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、瞬时受体电位离子通道-2(TRPM2)、磷酸化苏氨酸蛋白激酶(p-AKT)、磷酸化糖原合成酶激酶-3(p-GSK3β)蛋白表达水平。结果:①神经功能:与假手术组比较,模型组mNSS在第1、3、5、7天均明显升高(P<0.05);与模型组比较,24A组第3、7天mNSS明显降低(P<0.05)。②认知功能:与假手术组比较,模型组NORT 1、24 h识别指数明显降低(P<0.05);与模型组比较,24A组NORT 1、24 h识别指数明显升高(P<0.05)。与假手术组比较,模型组干预后第2~4天逃避潜伏期明显延长,穿越目标平台次数明显减少(P<0.05);与模型组比较,24A组干预后第3、4天逃避潜伏期明显缩短,穿越目标平台次数明显增加(P<0.05)。③内皮细胞CD31、ZO-1、Occludin、Claudin-5蛋白表达:假手术组CD31荧光表达较为密集,呈现红色荧光;与假手术组比较,模型组CD31荧光表达明显降低(P<0.05);与模型组比较,24A组CD31荧光表达明显升高(P<0.05)。与假手术组比较,模型组ZO-1、Occludin、Claudin-5蛋白表达量明显下降(P<0.05);与模型组比较,24A组ZO-1、Occludin、Claudin-5蛋白表达量明显升高(P<0.05)。④p-NF-κB、IL-1β、TNF-α、TRPM2、p-Akt、p-GSK3β蛋白表达:与假手术组比较,模型组p-NF-κB、IL-1β、TNF-α、TRPM2表达明显增加,p-Akt、p-GSK3β表达明显降低(P<0.05);与模型组比较,24A组p-NF-κB、IL-1β、TNF-α、TRPM2蛋白表达水平明显下降,p-Akt、p-GSK3β表达明显增加(P<0.05)。结论:24A可有效改善CI/RI小鼠的神经功能、认知功能,降低炎症反应,改善BMECs损伤,其机制可能与TRPM2/Akt/GSK3β通路的调控有关。

泽泻醇A对体外葡萄糖吸收的影响

目的:探讨泽泻醇A对人肝癌细胞(HepG2细胞)葡萄糖吸收活性的影响。方法:使用CCK-8法(Cell Counting Kit-8)测定HepG2细胞活力,利用2-NBDG(2-Deoxy-2-[(7-nitro-2,1,3-benzoxadiazol-4-yl)amino]-D-glucose)法测定细胞对葡萄糖的吸收能力,采用不同培养基培养HepG2细胞,通过流式细胞仪检测细胞荧光强度,从而考察不同浓度的泽泻醇A对HepG2细胞葡萄糖吸收的影响。结果:CCK-8实验结果表明,在1~10μmol/L范围内,泽泻醇A对HepG2细胞活力无明显影响。糖吸收实验结果表明泽泻醇A在不同程度上具有促进HepG2细胞对葡萄糖吸收的能力。结论:泽泻醇A可在一定程度上促进HepG2细胞对葡萄糖的吸收,提示泽泻醇A可能为泽泻降血糖的活性成分之一。

泽泻醇B对脂肪细胞分化的影响实验研究

目的:观察泽泻醇B对3T3-L1前脂肪细胞(小鼠胚胎成纤维细胞)成脂分化的影响,并探讨其可能的作用机制。方法:以含有10%热灭活胎牛血清和5%青霉素-链霉素溶液的DMEM培养基处理3T3-L1前脂肪细胞,将其作为对照组;采用CCK-8试剂(Cell Counting Kit-8)于450 nm波长处,经酶标仪检测1μmol/L、5μmol/L和10μmol/L的泽泻醇B对3T3-L1前脂肪细胞增殖的影响。通过诱导3T3-L1前脂肪细胞分化为脂肪细胞,利用油红O染色法观察细胞内生成的脂滴,并对分化细胞进行脂含量测定。以胰岛素、3-异丁基-1-甲基黄嘌呤(3-isobutyl-1-methylxanthine,IBMX)和地塞米松(Dexamethasone,DXMS)处理的细胞作为对照组,经1μmol/L、5μmol/L和10μmol/L罗格列酮处理的细胞作为阳性对照组,观察1μmol/L、5μmol/L和10μmol/L泽泻醇B对脂肪细胞内脂滴的影响,并于510 nm波长下,测定不同浓度泽泻醇B对脂肪细胞中脂含量的影响。结果:1μmol/L、5μmol/L和10μmol/L的泽泻醇B对3T3-L1前脂肪细胞的增殖无明显影响,但会抑制脂肪细胞内脂滴的形成,且呈浓度依赖性地抑制细胞内的脂质积累。结论:1μmol/L、5μmol/L和10μmol/L泽泻醇B对3T3-L1前脂肪细胞分化起抑制作用,可能为泽泻降血脂的活性成分之一。

HPLC-ELSD测定五苓散中2种泽泻醇的含量

目的采用HPLC-ELSD测定五苓散中泽泻醇A24-乙酸酯、泽泻醇B23-乙酸酯的含量。方法色谱柱：大连依利特Hy-persilC18柱（4．6mm×250mm，5μm）；流动相：乙腈-水（75：25）；检测器：Alhech2000型蒸发光散射检测器；流速为0．8mL·min^-1；柱温：室温；ELSD气体：高纯氮气；流速为2、0L·min^-1；漂移管温度：82℃。结果在五苓散中测定出的泽泻醇A24-乙酸酯、泽泻醇B23-乙酸酯分别在0．330～1．980μg（r=0.9995），0.624～4.680μg（r=0.9994）内呈良好的线性关系。平均回收率分别为101.4％，99.6％，RSD分别为1.7％，3.0％（n=6）。结论采用本法测定五苓散中泽泻醇A24-乙酸酯、泽泻醇B23-乙酸酯的含量，方法简便、可靠、重复性好。

基于p53DNA的泽泻醇抗肿瘤分子机制研究

研究泽泻醇类化合物23-乙酰泽泻醇B(alisol B 23-acetate,23B)、24-乙酰泽泻醇A(alisol A 24-acetate,24A)混合物(24A∶23B含量比=1∶1)与抑癌基因p53DNA的作用机理,探讨泽泻醇类化合物抗肿瘤作用的分子机制。紫外-可见吸收光谱法、荧光光谱法与分子模拟联用探讨23B,24A及24A-23B混合物与p53DNA的作用方式。紫外光谱显示泽泻醇单体与其混合物部分嵌插入p53DNA,他们使p53DNA紫外吸收降低的程度为:24A∶23B(1∶1)> 23B> 24A。荧光光谱显示泽泻醇单体及其混合物与p53DNA的相互作用模式均为嵌插结合,结合强度为:24A∶23B(1∶1)> 23B> 24A。分子模拟显示,泽泻醇单体及其混合物与p53DNA结合能的大小顺序为:24A∶23B (1∶1)> 23B> 24A,23B与p53DNA f链的腺嘌呤脱氧核苷酸(DA4)形成1个氢键,24A-23B复合物与p53DNA的DA4、胸腺嘧啶脱氧核苷酸(DT19)形成4个氢键。24A,23B及其混合物与p53DNA结合的强度顺序:24A∶23B (1∶1)> 23B> 24A,表明24A和23B对抗癌靶点p53DNA具有协同作用,三者与p53DNA的作用方式均为部分嵌插结合。同时,泽泻醇化合物母环C14-和结构中的空间位阻,p53DNA f链的DA4中磷酸上的氧原子为泽泻醇类化合物与p53DNA相互作用的关键结合位点,是该类泽泻醇发挥抗肿瘤作用的活性中心。24A侧链C19-上的羟基,p53DNA f链的DA4中腺嘌呤上的氮原子和氧原子,e链的DT19中胸腺嘧啶上的氧原子为泽泻醇类化合物协同增效作用的关键。

泽泻药材的质量标准研究Ⅰ——泽泻中2种泽泻醇的HPLC测定法

采用高效液相色谱法以乙腈—水 (6 5∶35 )为流动相 ,测定了 15种产地泽泻药材及 13种市售饮片中泽泻醇A 2 4—乙酸酯、泽泻醇B 2 3—乙酸酯的含量 ,本法简便、灵敏 。

不同炮制方法对泽泻中泽泻醇B23-乙酸酯的影响

目的探讨不同炮制方法对泽泻中泽泻醇B23-乙酸酯的影响。方法采用RP-HPLC法。反相HypersilODSC18柱(200mm×4.6mm,5μm),以乙腈-水(70∶30)为流动相,检测波长为208nm。结果樟帮麸炒法的质量分数为0.1565%,生品为0.155%,而其他炮制品质量分数均低于生品。结论不同炮制方法、辅料对泽泻各炮制品中泽泻醇B23-乙酸酯含量有一定的影响。

泽泻醇类化合物调血脂作用及分子机制的研究

目的研究泽泻调脂效应物质泽泻醇类化合物23-乙酰泽泻醇B、24-乙酰泽泻醇A对高脂小鼠调血脂作用及其分子机制。方法建立高脂小鼠模型,检测泽泻醇给药后的总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C),检测了脂代谢关键酶卵磷脂胆固醇酰基转移酶(LCAT)的活性,通过同源建模得到LCAT分子结构,采用分子模拟进行了泽泻醇与LCAT相互作用的研究。结果泽泻醇降低TG、TC水平,升高HDL-C水平,起到调血脂作用。泽泻醇降低LCAT活性,与LCAT的结合区域在Leu201~Phe305范围内。结论泽泻醇升高HDL-C的机制可能非通过提高LCAT活性实现,Leu201~Phe305区域可能为其抑活位置。Ile227、Arg217、Gly229 3个氨基酸可能是2者与该蛋白相互作用的关键氨基酸残基。

泽泻醇提取物对高血糖小鼠血液生化指标及胰岛素的影响(英文)

目的:探讨泽泻醇提取物(rhizomaalismaticextract,RAE)对正常动物及糖尿病动物的血糖、血脂、胰淀粉酶及胰岛素的影响,为泽泻用于治疗糖尿病及康复措施的介入提供理论依据。方法:选择雄性昆明种小鼠29只,按随机抽签法分为4组:生理盐水组、格列齐特组、RAE10g/kg组、RAE20g/kg组。给小鼠尾静脉注射四氧嘧啶90mg/kg,造成高血糖动物模型。用自动生化分析仪测定血糖、血脂和胰淀粉酶。放免法测定血清胰岛素。光镜下观察胰腺和胰岛的组织学变化。结果:RAE一次灌胃20g/kg,可使正常小鼠血糖明显降低犤对照组(7.6±1.1)mmol/L;RAE20.0g/kg组(5.6±1.5)mmol/L,(t=2.329,P<0.01)犦。重复治疗7d,RAE10,20g/kg使四氧嘧啶小鼠血糖降低犤对照组,RAE10g/kg组,RAE20g/kg组血糖值分别为(21.9±2.8),(15.7±5.7),(9.3±3.9)mmol/L(t=2.329,P<0.05,t=3.118,P<0.01)犦。光镜下观察:四氧嘧啶小鼠胰岛数量减少,形态也明显缩小,而用RAE治疗动物的胰岛组织学未见明显变化。RAE20g/kg还使正常小鼠犤对照组,RAE20g/kg组的胰岛素水平分别为(16.4±4.0),(24.6±8.1)μU/L犦及四氧嘧啶小鼠的胰岛素水平犤对照组,RAE20g/kg组的胰岛素水平分别为(13.5±4.3),(20.1±9.1)μU/L犦增加。结论:RAE具有明显的降血糖和降血脂作用。

泽泻不同采收期23-乙酰泽泻醇B含量变化

对福建龙海产泽泻不同采收期的23-乙酰泽泻醇B含量变化分析,结果表明:1月至3月含量差异不明显,4月份采收的样品含量明显增高。

泽泻中23-乙酰泽泻醇B的含量测定研究

目的 主要是确定泽泻的最佳采收时间、最佳炮制工艺、制定泽泻的定量标准 ,确保泽泻临床用药安全有效。方法 采用高效液相色谱法测定各样品中 2 3 -乙酰泽泻醇B的含量。结果 2 3 -乙酰泽泻醇B的平均回收率为 98.80 % ,符合分析要求。泽泻中 2 3 -乙酰泽泻醇B的含量以不低于 0 .0 5 0 %为宜。

24-乙酰泽泻醇A对氧化型低密度脂蛋白诱导巨噬细胞脂代谢因子ABCA1、CD36及炎症因子CD147、MMP-9的影响

目的通过体外实验探讨24-乙酰泽泻醇A对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导大鼠腹腔巨噬细胞脂代谢因子ATP结合盒转运体A1(ABCA1)、B族清道夫受体(CD36)和炎症因子细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(CD147)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)蛋白表达的影响。方法分别采用50 mg/L ox-LDL和10 mg/L Dil-ox-LDL诱导巨噬细胞,10 mg/L 24-乙酰泽泻醇A进行干预。荧光显微镜观察细胞内Dil-ox-LDL蓄积情况;蛋白免疫印迹检测细胞ABCA1、CD36、CD147、MMP-9蛋白的表达。结果 10 mg/L Dil-ox-LDL诱导后大鼠腹腔巨噬细胞内有大量的Dil-ox-LDL蓄积,10 mg/L 24-乙酰泽泻醇A干预后,细胞内Dil-ox-LDL蓄积明显减轻。与对照组比较,50 mg/L ox-LDL诱导后大鼠腹腔巨噬细胞ABCA1、CD36和CD147、MMP-9蛋白表达明显增加,10 mg/L 24-乙酰泽泻醇A干预后,ABCA1蛋白表达进一步上升(P<0.01),CD36、CD147和MMP-9蛋白表达被明显抑制(P<0.05或P<0.01)。结论 24-乙酰泽泻醇A上调巨噬细胞的脂代谢因子ABCA1和抑制CD36的表达,减少胆固醇蓄积,同时抑制炎症因子CD147和MMP-9的分泌。