洋川芎内酯I通过调控Nrf2表达对脂多糖诱导的星形胶质细胞活化及功能的影响

目的探讨洋川芎内酯I对脂多糖(LPS)诱导的星形胶质细胞的活化及功能的影响及其机制。方法以不同浓度洋川芎内酯I(20、50、100μmol/L)及核因子E2相关因子2(Nrf2)特异性通道阻滞剂ML385(10μmol/L)干预LPS(1μg/mL)诱导的星形胶质细胞。采用CCK-8法检测星形胶质细胞活性,免疫荧光法检测细胞GFAP表达,Western blot法检测细胞神经胶质酸性蛋白(GFAP)、Nrf2、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达,Grisse法检测培养上清液中一氧化氮(NO)水平,比色法检测细胞超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)水平。结果与对照组比较,LPS组星形胶质细胞活性升高(P<0.01),GFAP荧光强度增加,GFAP、iNOS蛋白表达及MDA、NO水平升高(P<0.01),Nrf2蛋白表达和SOD活性降低(P<0.01);与LPS组比较,LPS+洋川芎内酯I各浓度组细胞活性降低(P<0.01),MDA、NO水平降低(P<0.05,P<0.01),SOD活性升高(P<0.01),LPS+洋川芎内酯I 50μmol/L组GFAP荧光强度减弱,GFAP、iNOS蛋白表达降低(P<0.01),Nrf2蛋白表达升高(P<0.01),LPS+ML385组细胞活性升高(P<0.01),GFAP荧光强度增加,GFAP、iNOS蛋白表达及MDA、NO水平升高(P<0.05,P<0.01),Nrf2蛋白表达和SOD活性降低(P<0.05);与LPS+洋川芎内酯I组比较,LPS+洋川芎内酯I+ML385组细胞活性升高(P<0.01),GFAP荧光强度增加,GFAP、iNOS蛋白表达及MDA、NO水平升高(P<0.05,P<0.01),Nrf2蛋白表达和SOD活性降低(P<0.01)。结论洋川芎内酯I可抑制LPS刺激引起的星形胶质细胞过度活化,上调Nrf2表达,减少星形胶质细胞氧化应激产物的分泌,从而起到调控星形胶质细胞功能的作用。

石墨相氮化碳二维纳米片载洋川芎内酯Ⅰ应用于缺血性脑卒中大鼠的治疗研究

目的:探讨石墨相氮化碳(g-C_(3)N_(4))二维纳米片负载洋川芎内酯I(SEI)对缺血性脑卒中大鼠的治疗作用。方法:利用三聚氰胺通过热相反应生成层状g-C_(3)N_(4),热剥酸剥后得到薄层g-C_(3)N_(4)纳米片并进行表征;将SEI负载到g-C_(3)N_(4)纳米片上,通过紫外可见吸收光谱测定上清中的SEI,计算g-C_(3)N_(4)负载SEI质量比,测定SEI-g-C_(3)N_(4)复合纳米片在1 h、3 h、6 h、12 h、24 h和48 h的药物释放情况;SD大鼠大脑中动脉闭塞(MCAO)造模前48 h通过脑立体定位注射SEI-g-C_(3)N_(4)复合纳米片,造模后24 h进行神经行为学评分,评分结束后取材分别进行TTC染色、TUNEL染色和HE染色。结果:通过表征实验,制备的g-C_(3)N_(4)纳米片尺寸小(约100 nm)、比表面积大、分散性好、表面带正电荷(33.3 mV);紫外可见吸收光谱测定结果显示,g-C_(3)N_(4)已成功负载SEI,且SEI/g-C_(3)N_(4)质量比为15.06;药物释放结果显示,24 h时SEI的释放率接近50%;与sham组相比,MCAO组神经功能缺失评分显著升高(P<0.0001),表明造模成功;与MCAO组相比,MCAO+SEI组神经功能缺失评分减少(P>0.05),MCAO+SEI-g-C_(3)N_(4)组神经功能缺失评分减少(P<0.001);与MCAO+SEI组相比,MCAO+SEI-g-C_(3)N_(4)组神经功能缺失评分减少(P<0.01);TTC染色结果表明,与sham组相比,MCAO组的脑梗死面积显著增加(P<0.0001);与MCAO组相比,MCAO+SEI组梗死面积减少(P<0.0001),MCAO+SEI-g-C_(3)N_(4)组脑梗死面积显著减少(P<0.0001);与MCAO+SEI组相比,MCAO+SEI-g-C_(3)N_(4)组脑梗死面积减少(P<0.001);TUNEL染色结果表明,与sham组相比,MCAO组的凋亡率升高(P<0.0001),表明造模成功;与sham组相比,MCAO+SEI-g-C_(3)N_(4)组凋亡率升高(P>0.05);与MCAO组相比,MCAO+SEI-g-C_(3)N_(4)组凋亡率减少(P<0.001);体内生物安全性实验结果表明,与sham组相比,SEI组、SEI-g-C_(3)N_(4)组大鼠体重无统计学差异,且皮层脑组织结构和细胞形态无明显病理性变化。结论:成功制备了生物安全性较好的SEI-g-C_(3)N_(4)复合纳米片,且其能够减少MCAO大鼠的脑梗死面积,抑制细胞凋亡,减轻脑组织病理性变化,并且能改善大鼠的神经行为功能,表明SEI-g-C_(3)N_(4)复合纳米片可用于治疗缺血性脑卒中大鼠。

反相高效制备液相色谱法制备洋川芎内酯H和I

从川芎中分离制备洋川芎内酯H和洋川芎内酯I对照品.用8倍量80%乙醇回流提取川芎药材,得到川芎浸膏经D-101大孔吸附树脂、硅胶柱色谱及反相高效制备液相色谱分离,获得两个化合物单体.经核磁共振波谱分析,确定其分别为洋川芎内酯H和洋川芎内酯I,两者纯度均高于98%,可作为对照品进行定量分析.该方法操作简单,重现性好,上样量大,能够同时获得大量的高纯度的目标成分,为洋川芎内酯H和洋川芎内酯I单体的制备研究提供了一种新的方法.

阿魏酸、洋川芎内酯H和洋川芎内酯I对红细胞的影响

目的 :研究当归中阿魏酸、洋川芎内酯 H和洋川芎内酯 I对红细胞的变形性和聚集性的影响。方法 :以红细胞变形仪测量红细胞的变形指数 ( DI Value)和取向指数 ( OI Value)以及聚集指数。结果与结论 :阿魏酸、洋川芎内酯 H和洋川芎内酯 I均不同程度的减轻 Con A引起的红细胞的变形性损伤 。

洋川芎内酯I通过STAT3信号通路对胆汁淤积性肝损伤的影响

目的探讨洋川芎内酯I通过信号传导及转录激活因子3(STAT3)信号通路对胆汁淤积性肝损伤的作用机制。方法将30只小鼠分为正常组、胆汁淤积性肝损伤模型组和洋川芎内酯I组。模型组小鼠喂食含0.1%3,5-二乙氧基羰基-1,4-二氢-2,4,6-三甲基吡啶(DDC)的饮食,洋川芎内酯I组在此基础上每天给予100 mg/kg洋川芎内酯I灌胃。实验持续4周,采集血样,检测血清天冬氨酸氨基转移酶(AST)和丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平。处死小鼠,将肝组织进行苏木精-伊红染色,采用Western blot和RT-qPCR检测相关蛋白和核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素氧合酶-1(HO-1)、超氧化物歧化酶(SOD)mRNA水平。将HepG2细胞分为正常组、模型组和洋川芎内酯I组,后者加入100μmol/L洋川芎内酯I处理24 h后进行细胞凋亡实验,检测非受体型酪氨酸蛋白激酶(JAK2)和STAT3等蛋白及mRNA水平。结果与正常组比较,模型组小鼠血清AST和ALT水平显著升高(P<0.01);与模型组比较,洋川芎内酯I组AST和ALT水平显著降低(P<0.01)。与正常组比较,模型组小鼠肝SOD和过氧化氢酶(CAT)活性下降,丙二醛(MDA)水平升高(P<0.01);与模型组比较,洋川芎内酯I组SOD和CAT活性升高,MDA水平降低(P<0.01)。与正常组比较,模型组肝组织中STAT3磷酸化水平升高(P<0.05);与模型组比较,洋川芎内酯I组STAT3磷酸化水平降低(P<0.05)。细胞实验显示,与正常组比较,模型组肝细胞凋亡率增加;与模型组比较,洋川芎内酯I组细胞凋亡率降低,SOD和还原型谷胱甘肽(GSH)活性增加,MDA水平降低(P<0.01),Nrf2、HO-1和SOD的mRNA表达上调(P<0.05),抗氧化能力增强,JAK2和STAT3磷酸化水平降低(P<0.05),肝细胞损伤减轻。结论洋川芎内酯I通过调控STAT3信号通路,减轻胆汁淤积性肝损伤,抑制氧化应激,提高抗氧化酶活性,减少肝细胞凋亡。

一测多评法测定中成药中洋川芎内酯A和藁本内酯

目的以丁苯酞为内标一测多评法测定都梁滴丸、白带丸、血府逐瘀胶囊中洋川芎内酯A和藁本内酯。方法待测药物以甲醇提取,HPLC分析采用的色谱柱为Agilent Eclipse XDB-C18(4.6 mm×150 mm,5μm),流动相为甲醇-水(52∶48)。测定洋川芎内酯A和藁本内酯的相对校正因子,考察其校正因子的重现性,并与外标法进行比较。结果都梁滴丸和血府逐瘀胶囊能同时检测出洋川芎内酯A和藁本内酯,而白带丸仅检测出藁本内酯。在Agilent Eclipse XDB-C18、Phenomenex Luna C18和Agilent Zorbax SB-C18色谱柱上测定的相对校正因子重现性好,与外标法实测值无显著差异。结论本法可用于川芎、当归的质量控制,解决了洋川芎内酯A和藁本内酯对照品不稳定的难题。

反相高效液相色谱法制备洋川芎内酯Ⅰ

建立了一种快速、高效制备洋川芎内酯Ⅰ的工艺路线。以醋酸铵为改性剂,利用台阶梯度洗脱和MCI树脂柱脱盐的方式,通过反相高效液相色谱法制备,从川芎的95%(体积分数)乙醇提取物中快速分离到目标产物洋川芎内酯Ⅰ和副产物阿魏酸。经检测,二者的纯度均达到98%以上。该方法操作简便,能够排除由样品中阿魏酸所引起的峰交叉干扰,上样量大,适合于洋川芎内酯Ⅰ的大量制备。

HPLC法同时测定大鼠血浆中川芎成分洋川芎内酯Ⅰ、藁本内酯和阿魏酸

目的建立以HPLC法同时测定大鼠血浆中洋川芎内酯Ⅰ、藁本内酯和阿魏酸质量浓度的方法。方法含药血浆进行3种提取方法对比。色谱条件为:Agilent 5TC-C18(2)(250mm×4.6mm,5μm);柱温为室温(25℃);流动相为甲醇-2mL·L^(-1)甲酸水梯度洗脱;流速为0.6mL·min^(-1);检测波长为280nm。结果以乙酸乙酯和正己烷为萃取溶剂的血样处理方法效果最佳;洋川芎内酯Ⅰ、藁本内酯和阿魏酸质量浓度分别在2.5~250,2.0~200和1.25~125μg·mL^(-1)范围内线性良好。平均回收率均大于85%,日内和日间RSD值均小于4%。结论该方法的血浆萃取效果较理想,检测方法简便、快速、灵敏、可靠,可应用于血浆中川芎主要成分的血药质量浓度分析。

冰片对川芎注射液中洋川芎内酯Ⅰ不同脑区脑内药动学的影响

目的研究冰片对川芎注射液中洋川芎内酯Ⅰ不同脑区脑内药动学的影响。方法将大鼠分为川芎组和川芎冰片配伍组。川芎组仅尾静脉注射川芎注射液1.0 g·kg^-1(生药量);川芎冰片配伍组灌胃冰片0.08 g·kg^-1,同时尾静脉注射川芎注射液1.0 g·kg^-1。在给药后不同时间点取血和皮层、海马、下丘脑、纹状体4个脑区组织。样本前处理后采用HPLC法测定洋川芎内酯Ⅰ的浓度。结果洋川芎内酯Ⅰ在血浆和4个脑组织中线性关系良好,提取回收率为97.5%~101.3%,日内、日间精密度(RSD)均小于4.77%,稳定性考察为94%~103%。与川芎组比较,川芎冰片配伍组在降低血浆洋川芎内酯ⅠAUC的同时,增加皮层和海马的AUC和Cmax、纹状体的AUC(0-∞)和下丘脑的Cmax。各脑区的相对生物利用度和药物靶向指数(DTⅠ)比较,均为皮层>海马>下丘脑>纹状体。结论冰片可增加川芎注射液中洋川芎内酯Ⅰ在皮层、海马、下丘脑、纹状体组织中的分布。

川芎中洋川芎内酯A和Z-蒿本内酯的HPLC法测定

建立了HPLC法测定川芎药材中的洋川芎内酯A和Z-蒿本内酯。采用ZorbaxSB-C18色谱柱,以乙腈-1%乙酸为流动相,梯度洗脱,检测波长280nm。洋川芎内酯A和Z-蒿本内酯在0.0488～2.44mg/ml和0.0409～2.05mg/ml浓度范围内线性关系良好。回收率为98.77%和99.05%,RSD为0.83%和1.10%。

冠心宁注射液中洋川芎内酯Ⅰ的快速鉴定

目的:鉴定冠心宁注射液(丹参、川芎)指纹图谱中-未知成分。方法:采用液相制备,气质联用和液相色谱/PDA/MS联用技术鉴定结果。结果:未知成分可能为洋川芎内酯Ⅰ。结论:只需要少量样品,通过各种色谱质谱联用技术可以较快速地对已知成分进行结构确证。

HPLC法测定当归芍药散中芍药苷、白芍苷、阿魏酸、洋川芎内酯I的含量

目的:建立测定当归芍药散中芍药苷、白芍苷、阿魏酸和洋川芎内酯I含量的RP-HPLC方法。方法:采用HPLC-PDA联用法,YMC C18色谱柱(4.6mm×150mm,5μm),以乙腈-水(0.1%v/v甲酸)为流动相,流速1.0mL.min-1,柱温23.5℃,检测波长200～400nm,数据处理选择最大吸收波长分别为232nm(芍药苷、白芍苷)、322nm(阿魏酸)、280nm(洋川芎内酯I)。结果:4种成分的线性范围分别为:芍药苷99.5～348μg.mL-1,白芍苷46.4～162μg.mL-1,阿魏酸1.03～30.8μg.mL-1,洋川芎内酯I 1.01～50.6μg.mL-1,相关系数R2均>0.999,方法精密度、回收率均符合要求。结论:该方法简便,结果准确可靠,重复性好,组方中其他组分均不干扰测定,适用于当归芍药散及单味药中芍药苷、白芍苷、阿魏酸和洋川芎内酯I的含量测定。

洋川芎内酯A联合表柔比星干预膀胱癌5637细胞的作用机制研究

目的:研究洋川芎内酯A(SEA)联合表柔比星(EPI)干预膀胱癌5637细胞的作用机制,探讨SEA对EPI敏感性的影响。方法:采用CCK-8试剂盒检测人输尿管上皮永生化细胞SV-HUC-1和人膀胱癌细胞5637的细胞活力,选用人膀胱癌细胞5637进行后续实验,计算半数抑制浓度(IC50值)。将细胞随机分为对照组、SEA低剂量组(SEA10组)、SEA中剂量组(SEA20组)、SEA高剂量组(SEA40组)、EPI单独处理组(EPI组)和联合处理组(SEA40+EPI组)。流式细胞仪检测细胞凋亡;CCK-8试剂盒检测细胞光密度(OD)值;免疫蛋白质印迹法(Western blot)检测多药耐药关联蛋白1(MRP1)、肺耐药蛋白(LRP)、拓扑异构酶-Ⅱ(Topo-Ⅱ)蛋白水平。建立裸鼠移植瘤模型,随机分为对照组、SEA药物组、EPI药物组和SEA+EPI组,并采用相应药物灌胃进行干预。检测肿瘤体积;Western blot检测裸鼠移植瘤模型MRP1、增殖细胞核抗原(PCNA)、裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(cleaved caspase-3)蛋白水平。结果:体外实验结果表明,与对照组比较,SEA20组、SEA40组和EPI组细胞凋亡率升高,OD值降低,MRP1、LRP蛋白水平降低,Topo-Ⅱ蛋白水平升高,差异均有统计学意义(P<0.05);与EPI组比较,SEA40+EPI组细胞凋亡率升高,OD值降低,MRP1、LRP蛋白水平降低,Topo-Ⅱ蛋白水平升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。体内实验结果表明,与对照组比较,SEA药物组和EPI药物组裸鼠肿瘤体积缩小,PCNA蛋白水平降低、cleaved caspase-3蛋白水平升高,SEA药物组MRP1水平降低,EPI药物组MRP1水平升高,差异均有统计学意义(P<0.05);与EPI药物组比较,SEA+EPI组裸鼠肿瘤体积缩小,MRP1、PCNA蛋白水平降低,cleaved caspase-3蛋白水平升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:SEA可通过抑制膀胱癌5637细胞增殖,诱导细胞凋亡,下调MRP1、LRP蛋白表达,上调Topo-Ⅱ蛋白表达,抑制裸鼠移植瘤肿瘤生长,从而增强对EPI的敏感性。

洋川芎内酯A对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用研究

目的:探讨洋川芎内酯A对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用及其机制。方法:将60只雄性健康SD大鼠随机分为4组,分别为:假手术组(Sham,n=15),模型组(CTL,n=15),洋川芎内酯A低剂量组(ASE-L,n=15)和洋川芎内酯A高剂量组(ASE-H,n=15),大鼠脑缺血90min后恢复血流,于大脑中动脉阻断(MCAO)后24h将大鼠处死,对各组脑组织中IL-1β、IL-6、MDA水平以及SOD活性进行测定,并对各组的缺血侧脑水肿指数、脑梗死体积以及神经功能评分进行比较。结果:与CTL组比较,给药组大鼠的脑水肿指数、脑梗死体积以及神经功能评分明显改善,高剂量组(ASE-H)明显优于低剂量组(ASE-L),差异均具有统计学意义(P<0.05);同时,给药组大鼠脑组织中IL-1β、IL-6、MDA水平明显降低,SOD活性明显提高,差异也具有统计学意义(P<0.05)。结论:围术期采用洋川芎内酯A预处理可明显减轻脑组织的氧化应激反应,抑制促炎因子释放,对于脑缺血再灌注引起的中枢神经系统损伤具有明显保护作用。

血必净注射液中洋川芎内酯Ⅰ的降解动力学研究

[目的]研究洋川芎内酯I（Sen I）在血必净注射液及水溶液中,不同p H缓冲液、不同温度下降解的动力学规律,为血必净注射液及洋川芎内酯I的提取、贮藏及使用条件提供依据。[方法]建立高效液相色谱分析方法,考察不同p H（1~13）和温度（65、75、85、95℃）对Sen I稳定性的影响,利用速率方程、化学反应动力学模型及Arrhenius公式分析Sen I在不同条件下的降解规律并计算相关降解反应动力学参数。[结果]Sen I在碱性条件下降解较快,符合一级动力学规律,并随碱性增强,降解速度明显加快。温度对降解速度影响较大,温度升高,降解明显加快。经计算得,Sen I在水溶液和血必净注射液中降解活化能分别为177.94 k J/mol和194.86 k J/mol。[结论]在碱性和高温条件下,洋川芎内酯I更易降解。同样条件下,Sen I在血必净注射液中的稳定性都要高于其水溶液。

HPLC法测定川芎中洋川芎内酯I和H的含量

目的建立同时测定川芎中洋川芎内酯I和洋川芎内酯H含量的HPLC方法。方法采用反相高效液相色谱法，使用AglientZorbaxSB—C18（4．6mm×250mm，5μl）色谱柱，流动相为甲醇-0．5％乙酸水溶液，进行二元梯度洗脱，柱温30℃．流速0．8ml·min^-1，检测波长280nm。结果洋川芎内酯I在0．021mg／ml-0．211mg／ml范围内线性良好，回归方程为Y=5731821X-11224（R=0．9996），平均回收率为103．3％；洋川芎内酯H在0．015mg／ml～0．151mg／ml范围内线性良好，回归方程为Y=3350213X＋1709（IZ=0．9998），平均回收率为101．9％。结论该方法为川芎中洋川芎内酯I和洋川芎内酯H的定量提供了准确的方法。

洋川芎内酯类化合物药理作用研究进展

洋川芎内酯是从中药当归、川芎等伞形科植物中提取的一种苯酞类物质。现代药理学研究表明洋川芎内酯类化合物具有抗氧化损伤、抗炎、抗凝等广泛药理作用。深入研究洋川芎内酯类化合物的药理作用及在机体的药代动力学特征至关重要。以近年来国内外关于洋川芎内酯类化合物的研究进展为基础,对洋川芎内酯类化合物的药理作用及药代动力学研究现状进行归纳,以期为此类化合物的深度开发与临床应用提供参考。

洋川芎内酯类化合物药理活性研究进展

洋川芎内酯类化合物广泛存在于川芎等伞形科植物中,为一组苯酞类物质。川芎作为传统中药常用来治疗冠心病、偏头痛和风湿,现代药理学研究表明川芎中洋川芎内酯具有抗炎镇痛及心血管保护作用。近年来多项研究发现洋川芎内酯类化合物还具有抗菌、抗骨质疏松和抗纤维化等新药理作用,提示该类化合物生物学活性丰富。此外,多种洋川芎内酯生物利用度高且易于透过血脑屏障,包括洋川芎内酯I在内的一系列化合物可能用于治疗脑部疾病。洋川芎内酯的作用机制可能包括其对toll样受体4/核因子-κB、细胞外信号调节激酶、p38丝裂源活化蛋白激酶和c-Jun N-末端激酶等多条信号通路的调控作用。本综述回顾了洋川芎内酯药代动力学及药理活性的近期研究进展。该类化合物有望作为候选药物用于治疗多种疾病,具有重要临床价值。

大孔树脂富集川芎中洋川芎内酯Ⅰ的工艺优选

目的 优选大孔树脂富集川芎中的苯酞类活性成分洋川芎内酯Ⅰ（Senkyunolide Ⅰ，SⅠ）的工艺条件。方法 综合静态和动态吸附及解吸试验，筛选合适的大孔树脂；以产物回收率、纯度等为指标，优化树脂对SⅠ富集的工艺参数。结果 筛选的6 种大孔树脂中，HPD100 树脂对SⅠ有较好富集作用。具体工艺参数为：上样浓度1 g 原药材/mL，上样量3 mL/g 湿树脂，静态吸附时间2 h，树脂床径高比1∶6，以水洗脱至洗脱液近无色后，进而用6 倍树脂床体积的40%乙醇（V/V）进行解吸附，洗脱流速为2～4 倍树脂床体积/h，收集洗脱液。在优选的工艺条件下，所得产物中SⅠ含量可达8.0%，比处理前提高了13.3 倍，回收率为72%。结论 本研究建立的大孔树脂法对SⅠ有较理想的富集效果，为其进一步分离、制备奠定了良好基础。

洋川芎内酯Ⅰ与血浆蛋白结合率的测定

目的:研究洋川芎内酯Ⅰ与大鼠和人血浆蛋白结合情况。方法:采用平衡透析法测定洋川芎内酯Ⅰ与大鼠和人血浆蛋白结合率,以液相质谱联用法测定透析内外液中洋川芎内酯Ⅰ的浓度,计算其血浆蛋白结合率。结果:血浆中其他成分对测定无干扰,洋川芎内酯Ⅰ在0.05~10μM浓度范围内线性关系均良好,精密度及稳定性结果均符合方法学要求;实验选择紫杉醇为阳性对照,孵育8 h后,紫杉醇与大鼠和人血浆蛋白结合分别为92.3%~94.5%和93.8%~97.2%,与文献报道的范围88%~98%一致。孵育8 h后,洋川芎内酯Ⅰ与大鼠血浆蛋白结合率为83.5%~86.5%;与人血浆蛋白结合率为82.1%~83.9%。结论:该方法操作简便、快速,灵敏度高,能满足生物样品的分析要求。洋川芎内酯Ⅰ与大鼠和人血浆蛋白结合较强(>80%)。